姜黄素对人结直肠癌SW-620细胞抗肿瘤效果的研究

目的:研究姜黄素(Cur)对人结直肠癌SW-620细胞生长、迁移的抑制作用。方法:不同浓度Cur(2、5、10μg/mL)处理SW-620细胞后,采用MTT法检测细胞增殖能力变化,流式细胞仪分别结合Rh123、DCFH-DA、Annexin V-FITC/PI染色检测细胞线粒体膜电位(Δψ_(m))变化、活性氧簇(ROS)生成及细胞凋亡情况,彗星电泳观察细胞DNA损伤情况,荧光显微技术观察细胞凋亡特征,Transwell实验检测细胞迁移能力,扫描电子显微镜观察细胞表面结构变化。结果:与对照组相比,5、10μg/mL Cur处理24、48 h可显著抑制细胞增殖(t=5.28、21.8、18.19、33.19,均P<0.01),半数抑制浓度分别为6.46、3.75μg/mL。药物处理4 h,与对照组相比,2、5、10μg/mL Cur组细胞内ROS生成分别增加至15.8%、30.2%和45%(t=3.64、7.4、13.8,均P<0.05);Δψ_(m)下降的细胞比例分别为22.7%、38.5%和72.7%(t=7.7、11.32、45.26,均P<0.01);药物处理12、24 h,2、5、10μg/mL Cur组凋亡细胞比例分别为6.6%(t=3.79,P=0.11)、32.6%、68.7%(t=21.3、64.39,均P<0.01)和16.9%(t=10.37,P<0.05)、47.2%、78.9%(t=23.46、19.8,均P<0.01);药物处理12 h,2、5、10μg/mL Cur组迁移细胞的数量分别减少至79.66%(t=7.14,P<0.05)、53.36%和39.45%(t=21.91、25.04,均P<0.01)。结论:Cur可抑制人结直肠癌SW-620细胞增殖和迁移。

天花粉蛋白对结肠癌SW-620细胞株增殖、黏附和迁移的实验研究

目的研究天花粉蛋白对结肠癌SW-620细胞株增殖、黏附和迁移的影响。方法采用MTT比色法检测天花粉蛋白对SW-620细胞的增殖影响;Hochest33258观察天花粉蛋白诱导SW-620细胞凋亡;流式细胞术检测天花粉蛋白对细胞周期和细胞凋亡的影响;细胞黏附和划痕实验检测天花粉蛋白作用后细胞黏附和迁移的改变。结果 1.天花粉蛋白对SW-620细胞的生长具有明显的抑制作用,并呈时间和质量浓度依赖性;2.天花粉蛋白可将SW-620细胞阻滞于S期,并能诱导其凋亡;3.天花粉蛋白具有改变SW-620细胞与人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的黏附作用,并使其迁移能力下降。结论天花粉蛋白能抑制SW-620细胞的增殖、诱导其凋亡,并能改变其黏附和迁移能力。

肠癌细胞系SW-620中肿瘤干细胞相关SP亚群分析

背景:在某些恶性肿瘤中,SP细胞具有肿瘤干细胞的特性,如人脑瘤、乳腺癌等肿瘤干细胞的研究就是采用了这种方法。目前关于肠癌干细胞的研究尚处于探索阶段,国内外尚无肠癌干细胞分离、鉴定成功的报道。目的:分析肠癌细胞系SW-620中是否包含肿瘤干细胞相关的SP亚群。方法:制备SW-620细胞悬液,经Hoechst33342和PI染色,实验组加入Hoechst33342至终浓度为5mg/L,维拉帕米组同时加入维拉帕米至终浓度5mg/L,流式细胞仪分析SP亚群,共选取3次实验的结果。结果与结论:通过Hoechest33342蓝光和红光双参图,实验组SP细胞亚群位于左下角两种荧光均阴性或很弱的区域,经3次检测,肠癌细胞株SW620中SP比例分别为0.1%,1.0%和0.5%,经维拉帕米阻断后SP细胞比例均为0。提示人肠癌细胞系SW620中存在SP亚群细胞,即提示肠癌干细胞存在的可能;维拉帕米可抑制染料外从排而明显减少SP细胞的比例。

肠癌SW-620肿瘤细胞SP亚群研究

目的 观察肠癌细胞株SW-620中肿瘤干细胞相关的SP（side population）亚群比例,分选出相关的SP和NSP细胞,并鉴别相关的SP是否具有干细胞某些生物学特性.方法 制备SW-620细胞悬液,经Hoechst33342和PI染色（其中对照组同时加入拮抗剂维拉帕米）,流式细胞仪分析SP亚群.通过流式细胞仪分选出肠癌细胞株SW-620中SP细胞.克隆形成实验和噻唑蓝（MTT）实验检测SP和NSP细胞增殖能力的差异.裸鼠体内成瘤对比实验验证SP细胞和NSP细胞致瘤性.结果 SP亚群占SW-620细胞的1.0%左右,维拉帕米阻断后减少为0.01%左右.流式细胞仪分选出SP细胞7.5×105个,大部分为NSP细胞.克隆形成实验和MTT证实SP细胞和NSP细胞增殖能力有差异.裸鼠体内成瘤实验发现：1×105个SP细胞可以致裸鼠成瘤,1×105个NSP细胞及以下数量级别细胞不能致裸鼠成瘤.结论 人肠癌细胞株SW-620中存在SP亚群细胞,维拉帕米可抑制染料外排而明显减少SP细胞的比例.可以通过流式细胞仪分选出SP细胞,通过克隆形成实验和MTT实验检测SP和NSP细胞增殖能力有差异.裸鼠成瘤对比实验证实SP比NSP细胞更具致瘤性.

曲妥珠单抗对SW-620人结肠癌细胞增殖凋亡的影响及其与奥沙利铂协同作用的研究

目的观察不同浓度曲妥珠单抗单独或联合奥沙利铂对SW-620人结肠癌细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响,并探讨其作用机制。方法体外培养SW-620人结肠癌细胞。(1)细胞增殖实验:将细胞分为2个大组:曲妥珠单抗组和曲妥珠单抗+奥沙利铂组,每个大组内设8个浓度小组(每个小组设5个复孔),曲妥珠单抗组的浓度依次为0、0.001、0.01、0.1、1、10、100及1 000μg/mL,对应的曲妥珠单抗+奥沙利铂组曲妥珠单抗的浓度与前相同,不同之处在于均加入了奥沙利铂(10μmol/L)。采用CCK-8法检测各组细胞的吸光度(A)值。(2)细胞凋亡实验:组别设置同增殖实验,只是曲妥珠单抗的浓度仅包括0、0.1、1及10μg/mL。采用流式细胞仪检测各组细胞的细胞凋亡率及细胞周期分布。(3)人表皮生长因子受体2(her-2)蛋白表达检测:分别以0、100及1 000μg/mL曲妥珠单抗,以及0、1及10μg/mL曲妥珠单抗联合奥沙利铂(10μmol/L)处理SW-620细胞,采用Western blot法检测各组细胞中her-2蛋白的表达。结果 (1)细胞增殖实验:同种浓度下曲妥珠单抗+奥沙利铂组的A值均低于曲妥珠单抗组(P<0.05),且随着曲妥珠单抗浓度的增加,A值在逐渐降低。(2)细胞凋亡实验:同种曲妥珠单抗浓度下,曲妥珠单抗组+奥沙利铂组的细胞凋亡率均较曲妥珠单抗组高(P<0.05)。流式细胞检测:不同浓度曲妥珠单抗+奥沙利铂处理后,随浓度增加,G_1期细胞比例呈下降趋势,S期细胞比例呈上升趋势,且呈剂量依赖性;至1μg/mL和10μg/mL时,与曲妥珠单抗组比较,曲妥珠单抗+奥沙利铂组的G_1期细胞比例较低,S期细胞比例较高(P<0.05);在0.1、1和10μg/mL浓度的曲妥珠单抗条件下,曲妥珠单抗联合奥沙利铂组的G_2期细胞比例较曲妥珠单抗组升高(P<0.01)。(3) her-2蛋白的表达水平:1、100及1 000μg/mL曲妥珠单抗组细胞中her-2蛋白的表达水平逐渐降低,3组间两两比较差异均有统计学意义(P<0.05);0、1及10μg/mL曲妥珠单抗+奥沙利铂组中her-2蛋白的表达水平也逐渐降低,3组间两两比较差异也有统计学意义(P<0.05)。结论高浓度曲妥珠单抗可抑制SW-620人结肠癌细胞的增殖,诱导其凋亡。曲妥珠单抗和奥沙利铂具有协同抑制细胞增殖、促进细胞凋亡的作用。

肝特异性转录因子FOXA2在人结直肠癌肝转移阶梯模型中的表达变化及其意义

目的探究人结直肠癌肝转移阶梯模型中FOXA2的表达变化及相关意义。方法采用Western blot技术和实时荧光定量PCR检测了常见结直肠癌细胞系中FOXA2的表达情况;在高表达细胞系SW-620细胞中转染FOXA2敲低质粒或阴性对照质粒,并用Western blot技术验证转染效果,以及检测上皮间质转化相关蛋白的表达变化。采用体内连续筛选法,通过在裸鼠体内进行SW-620结肠癌细胞株脾脏包膜下种植,经过连续三次肝转移筛选,构建结直肠癌肝转移阶梯模型。采用免疫组织化学染色法检测阶梯模型中肝转移瘤组织FOXA2的表达变化。采用Western blot技术检测模型中肝转移阶梯细胞的FOXA2、E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、p-PI3K、p-Akt、PI3K、Akt相关蛋白的表达变化。采用划痕愈合实验方法分析模型中肝转移阶梯细胞迁移能力的变化。结果SW-620细胞中FOXA2的表达成功被下调后,E-cadherin表达上升,N-cadherin表达下降(P<0.05)。在结直肠癌肝转移阶梯模型中,每一代肝转移瘤的成瘤率,转移灶数量,瘤体积逐渐升高(P<0.05);每一代肝转移瘤组织FOXA2免疫组化染色的阳性率逐渐升高(P<0.05);相对于初始SW-620细胞株,经过体内连续筛选的三代肝转移瘤细胞(CRLMC)中FOXA2表达呈现阶梯状上升趋势(P<0.05),N-cadherin、Vimentin蛋白表达水平明显上升(P<0.05);E-cadherin蛋白表达水平明显下降(P<0.05),p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT蛋白表达之比逐渐升高(P<0.05);划痕愈合实验显示每一代肝转移瘤细胞迁移能力逐渐增强(P<0.05)。结论肝特异性转录因子FOXA2在人结直肠癌肝转移阶梯模型中的表达逐渐上升,促进了肝转移瘤细胞的上皮间质转化.