急性肺损伤模型中Sdr9c7基因的作用研究

检测了经鼻腔滴注脂多糖(LPS)溶液诱导的急性肺损伤模型小鼠肺组织Sdr9c7基因表达变化,并探讨其在急性肺损伤的作用。取9只雌性C57BL/6小鼠随机分为空白组、第3天组和第7天组,每组3只。第3天组和第7天组小鼠用LPS诱导急性肺损伤模型,第3天组于LPS诱导的第3天终止实验,第7天组于LPS诱导的第7天终止实验,经鼻腔滴注PBS溶液作对照空白组。转染SDR9C7-siRNA至A549细胞并检测敲低表达的效果。采用苏木精-伊红(HE)染色观察小鼠肺组织形态学,并评估病理评分;用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测各组肺组织和细胞的IL-1β、TNF-α、IL-6和Sdr9c7基因相对表达量。与空白组比较,第3天组和第7天组肺水肿评分、炎症评分、总病理评分以及Sdr9c7、IL-1β、TNF-α和IL-6基因相对表达量均升高(均P<0.05);与第3天组比较,第7天组炎症评分、总病理评分以及Sdr9c7、IL-1β、TNF-α基因相对表达量降低(均P<0.05)。小鼠肺组织Sdr9c7基因相对表达量与病理评分呈正相关(r=0.964,P<0.01)。敲低Sdr9c7基因实验中,SDR9C7-siRNA3效果更明显。SDR9C7-siRNA3敲低Sdr9c7基因对LPS诱导A549细胞影响实验中,RT-qPCR检测IL-1β、TNF-α、IL-6、Sdr9c7基因相对表达量,与对照组比较,诱导组升高(均P<0.05),敲低组和联合组下降(均P<0.05),且敲低组低于联合组(均P<0.05)。结果表明,急性肺损伤模型小鼠肺组织Sdr9c7基因的异常表达与肺损伤病理评分呈正相关,肺损伤机制可能与Sdr9c7基因高表达促进炎症反应作用相关。

Sdr9c7+/-小鼠的生长及高脂饲喂条件下血液生理生化指标分析

以野生型(Sdr9c7+/+)和杂合子型(Sdr9c7+/-)雄性小鼠为实验动物分析普通饲料和高脂饲料饲喂条件下Sdr9c7基因对小鼠生长发育的影响,并检测高脂饲喂条件下小鼠血液生理生化指标及肝脏脂肪变性情况。结果表明:(1)与Sdr9c7+/+小鼠相比,Sdr9c7+/-小鼠发育正常,二者生长曲线无显著差异;(2)高脂饲料喂养至15周龄时,两组间小鼠血液的葡萄糖(GLU)、血清总胆固醇(TCHO)、甘油三酯(TG)、低密度胆固醇(LDL)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、尿素(BUN)、肌酐(CREA)含量等无差异;至28周龄时,杂合子组小鼠血清的AST和ALT含量显著升高(P<0.05),推测Sdr9c7与肝炎症相关。但肝脏系数和肝脏石蜡组织切片中细胞空泡面积无明显差异,说明Sdr9c7基因对肝脏脂肪变性没有影响。

条件敲除Sdr9c 7基因小鼠的构建及表型研究

利用在Sdr9c7基因第2外显子两侧的内含子区域重组添加有loxP位点的小鼠与上皮细胞特异性表达Cre重组酶的K14Cre小鼠交配产生的子代再进行杂交,获得基因型为Sdr9c7^(fl/fl)K14Cre^(+)的小鼠(上皮细胞Sdr9c7基因特异性敲除小鼠)。在体式镜下观察小鼠表型,用显微镜观察皮肤组织HE染色石蜡切片,拍照观察小鼠皮肤的组织形态结构,利用甲苯胺蓝渗透法检测小鼠皮肤的屏障功能。结果发现:Sdr9c7^(fl/fl)K14Cre^(+)小鼠皮肤发绀,在出生后6~8 h内死亡;HE染色结果表明Sdr9c7^(fl/fl)K14Cre^(+)基因型小鼠的皮肤角质层结构异常,堆积紧密。甲苯胺蓝染液渗透实验中Sdr9c7^(fl/fl)K14Cre^(+)基因型小鼠的皮肤可被染液透过而染成深色,表明其表皮屏障功能不全。