产志贺毒素大肠杆菌的流行病学及致病因子的研究进展

产志贺毒素大肠杆菌(Shiga toxin-producing Escherichia coli,STEC)是一类危害严重的食源性病原菌,能引起人类的严重疾病,如出血性结肠炎、溶血性尿毒症等,牛、羊等反刍动物是引起人类发病的主要宿主来源。作者总结了产志贺毒素大肠杆菌病的流行病学现状,就产志贺毒素大肠杆菌染色体和毒性质粒上的主要毒力因子的研究进展作一综述。

产志贺毒素大肠杆菌流行病学及主要毒力因子研究进展

产志贺毒素大肠杆菌(Shiga toxin-producing Escherichia coli,STEC)是一类能引起包括水样腹泻、出血性结肠炎、尿毒综合症等一系列人体疾病的人畜共患肠道致病菌,其感染在世界范围内包括中国都有过暴发流行。文章阐述了STECO157血清型和非O157血清型的分布特征及流行趋势,同时还对该病的主要毒力因子进行了综述,以期为该病的防控提供科学依据。

产志贺样毒素和肠毒素大肠杆菌分子流行病学(英文)

【目的】人和动物腹泻的主要病原菌为大肠杆菌,本文主要研究贵州省致腹泻大肠杆菌毒力因子的分布类型。【方法】采用PCR技术对各毒力因子的基因分布进行研究。【结果】共分离到333株大肠杆菌,其中产肠毒素大肠杆菌(ETEC)在腹泻的人、猪、牛群中占优势,分别为:人群73(n=112),猪群82(n=106),牛群18(n=115)。在ETEC菌株中检测到热敏肠毒素(lt)和不耐热肠毒素(st)基因,还存在lt/st并存现象。从人、猪、牛群中还检测到产志贺样毒素大肠杆菌(STEC),其中源自猪的STEC的检出率最高。大部分STEC同时携带lt、st或lt和st同时并存。编码F18菌毛的主亚基由fedA基因编码。对所分离大肠杆菌F18菌毛进行的研究结果表明,fedA基因主要与肠毒素基因共存,与stx基因并存的类型较少,25份猪源STEC菌株中仅有4份检测到fedA基因。【结论】贵州省人群、猪群和牛群致腹泻病原菌中以带F18菌毛的ETEC为主,STEC主要分布在腹泻的猪群中。

单克隆抗体S2C4对2型志贺毒素及其亚型毒性的中和作用(英文)

纯化的2型志贺毒素(Shiga toxin2,Stx2)经福尔马林脱毒后免疫BALB/c小鼠制备Stx2单克隆抗体,用体外中和试验对具有中和活性的阳性抗体克隆进行初筛,对所获得的中和抗体的重、轻链同种型及结合特异性进行鉴定,其中和保护作用通过体内、体外中和试验加以验证,最后,中和抗体对Stx2亚型Stx2c和Stx2vha的中和谱用体内中和试验验证.结果显示,12株抗Stx2的阳性抗体克隆中,只有1株具有中和活性,命名为S2C4,其重、轻链同种型为G1/κ,其靶分子为Stx2的A亚单位,与Stx2的B亚单位或Stx1不结合.在体外中和试验中S2C4可有效中和Stx2对Vero细胞的杀伤作用,同样,S2C4可中和致死量的Stx2及其亚型Stx2c和Stx2vha对小鼠的毒性作用.该抗体有望成为治疗产志贺毒素大肠杆菌感染的候选分子.

川西北牦牛产志贺毒素大肠杆菌的流行病学调查

目的:旨在了解我国川西北草原牦牛携带的产志贺毒素大肠杆菌(STEC)的血清型和重要毒力基因的分布.方法:采用玻片凝集法和PCR方法分别检测STEC的血清型和15种重要的毒力基因.结果:在277份样品中分离鉴定出STEC 85株,分离率为30.69%,存在39个不同的O血清型,无优势血清型;牦牛源STEC毒力基因stx1、stx2、cnf1、cnf2、subA、CDT-V的携带率分别为44.71%、76.47%、2.35%、2.35%、61.16%、17.65%,黏附基因eaeA、iha、saa、efa1的携带率分别为1.18%、76.47%、68.24%、2.35%,以及60-MDa毒性质粒上的基因hlyA、espP、Katp的携带率分别为75.29%、43.53%、4.71%,不携带etpD、toxB基因.结论:STEC在我国川西北牦牛中的携带率高,血清型分布广泛,黏附基因iha和saa广泛分布于各种不同血清型的STEC中,大部分STEC携带毒性质粒,公共卫生学意义值得关注.

I型志贺毒素时间分辨荧光免疫分析方法的建立

目的构建基于时间分辨荧光免疫分析技术(TRFIA)的高灵敏性、高特异性的I型志贺毒素(StxI)双抗体夹心免疫检测法,用于产志贺毒素大肠杆菌(STEC)感染的临床快速诊断。方法采用两株针对StxI不同表位的单克隆抗体2F6-F8和8E7-E6,构建双抗体夹心TRFIA,并评价该方法的灵敏度、特异性以及稳定性;以PCR检测stxI基因结果为金标准,以TRFIA、ELISA、Duopath~?Verotoxins免疫胶体金检测试剂盒,检测54例StxI毒素粗提物,比较灵敏度、特异性、阳性预测值、阴性预测值和与PCR法的一致性。结果建立的以StxI为靶向分子的TRFIA,可以在2h内完成对StxI检测,检测最大稀释倍数为1:1 000的StxI阳性菌株毒素粗提物样本,灵敏度比ELISA提高了约2个数量级。Stx I的TRFIA与StxII型无交叉反应,检测结果在1个月内仍保持较高稳定性。与PCR方法相比,TRFIA灵敏度(93.8%)高于ELISA(82.4%)和Duopath~?Verotoxins免疫胶体金(57.1%),差异有统计学意义(P<0.05);其特异性(100.0%)、阳性预测值(100.0%)、阴性预测值(97.4%)均大于等于ELISA(分别为97.2%、93.3%、92.1%)和Duopath~?Verotoxins免疫胶体金(分别为100.0%、100.0%、87.0%);TRFIA检测结果与PCR一致性(Kappa=0.955)高于ELISA(Kappa=0.809)法和Duopath~?Verotoxins免疫胶体金(Kappa=0.664)。结论成功构建StxI-TRFIA快速检测方法检测样品中StxI毒素,为TRFIA在毒素检测方面的推广应用提供了依据。

临床标本中产志贺样毒素大肠埃希菌的检测

目的:了解临床标本中致病性大肠埃希菌的分布,研究从临床标本中分离致病性大肠埃希菌的方法。方法:采用多管PCR技术对1429份临床标本进行致病性大肠埃希菌的11种不同致病基因组进扩增,基因组检测阳性者再进行山梨醇麦康凯培养基分离培养和血清学凝集试验。结果:1429份临床标本中共检测出27株致病性大肠埃希菌,检出率为1.88%,分属于6个不同组。结论:本研究建立的多管PCR技术结合山梨醇麦康凯培养及血清学凝集方法,可敏感、快速地检测致病性大肠埃希菌。

牛源产志贺毒素大肠杆菌分离株的毒力基因分布和遗传进化分析

为了探讨牛源产志贺毒素大肠杆菌(Shiga toxin-producing Escherichia coli,STEC)分离株在毒力基因分布和遗传进化方面与人源EHEC O157菌株之间的关系,本试验选择收集来自江苏某奶牛场的STEC菌株18株以及人源、羊源、猪源、禽源STEC参考菌株9株,参照美国疾病预防控制中心Pulse Net推荐的方法,运用XbaⅠ酶进行酶切并完成脉冲肠凝胶电泳(PFGE)分型和聚类分析;同时对部分STEC菌株进行毒力基因检测。结果表明,经毒力基因检测,不同来源的O157菌株毒力基因分布不尽相同,其中牛源STEC O157与参考株EHEC O157∶H7(EDL933W)的基因排谱最为相近;牛源STEC O18和O26的基因排谱与参考株EHEC O157∶H7(EDL933W)类似,但存在部分基因的缺失。对27株不同来源的STEC分离株进行PFGE,产生了22种不同的酶切图谱。总体来看,不同来源的STEC Dice相似性系数在72%~100%之间。牛源O157分离株与猪源及禽源O157菌株的相似度偏低,而与两株人源O157分离株的相似度偏高,Dice相似性系数在83%~95%之间,牛源O26(克隆群Ⅶ、Ⅷ)与人源O157的相似性系数>82%。显然,从牛群中分离到的部分STEC菌株与人源EHEC O157具有较近的遗传进化关系。

川西北牦牛肉中产志贺毒素大肠杆菌的分离鉴定及stx2基因的序列分析

为了解中国川西北牦牛肉中产志贺毒素大肠杆菌(STEC)的携带情况及stx2的亚型和特征,试验将采集的204份川西北牦牛肉样品(各25g)增菌培养后,每份挑取5个可疑菌落,采用stx1、stx2双重PCR方法检测STEC,对分离株中的stx2分型并克隆测定stx2编码区序列。结果显示,在204份样品中分离出8株STEC,平均分离率为3.9%(8/204);存在4个不同的O血清型,分别为O38(4)、O50(1)、O74(2)、O150(1);在6株含有stx2的菌株中,其中有2株为stx2a型、4株为stx2c型。结果表明牦牛源分离株氨基酸序列与人源和牛源菌株同源性较高;由stx2A、B亚基的氨基酸序列系统进化树可知,牦牛源分离株与人源、牛源菌株聚为一支,表明它们之间遗传距离相对较近,牦牛源stx2各自分布在自己的小分支中,表明牦牛源STEC stx2与人源和牛源stx2相比,尽管亲缘关系较近,但仍存在一定程度的差异。

3株被膜态产志贺毒素大肠杆菌产志贺毒素能力的分析

为了解食源性产志贺毒素大肠杆菌(Shiga toxin-producing Escherichia coli, STEC)的菌株特征及潜在致病性,分析其在被膜状态下产志贺毒素能力的变化情况。采用传统PCR技术扩增stx基因亚型,菌株1携带stx1c+stx2d亚型,菌株2携带stx1+stx2f亚型,菌株3携带stx2e亚型。多位点序列分型(MLST)结果显示3株菌株亲缘关系较远,具有遗传多样性。分别利用结晶紫染色试验和Vero细胞毒性试验探究菌株在4、10、25和37℃下被膜形成能力和产志贺毒素能力。结果表明,温度显著影响被膜形成能力和产志贺毒素能力,37℃时3株菌株的被膜形成能力和产志贺毒素能力最强。Vero细胞毒性试验结果表明,4个温度条件下,菌株2产志贺毒素能力最弱。菌株3在4个温度条件下均表现强被膜形成能力和产志贺毒素能力,尤其在4和10℃时,菌株3较其他2株菌被膜形成能力强。我国市场零售肉存在STEC污染,部分菌株具有潜在致病性,尤其是强被膜形成能力、产志贺毒素能力菌株的发现,应加强对食品加工处理过程中STEC的监测。

猪源产志贺毒素大肠埃希菌耐药性及超广谱β内酰胺酶基因型分析

目的了解我国猪源产志贺毒素大肠埃希菌(Shiga toxin-producing Escherichia coli,STEC)产超广谱β内酰胺酶(Extended-spectrumβ-lactamases,ESBLs)情况及其基因型。方法对22株分离自重庆地区2个规模化养殖场健康猪粪的STEC菌株进行药物敏感性检测、ESBLs表型确证及7种类型(blaSHV,blaLEN,blaOKP,blaTEM,blaCTX-M,blaGES及blaKPC)ESBLs基因型PCR检测和测序分析。结果 22株携带stx2e的STEC菌株中2株对所有23种测试抗生素敏感,其余菌株除对亚胺培南和美罗培南敏感外,对其他抗生素均存在不同程度耐药。10株STEC菌株(占45.45%)产ESBLs酶。PCR检测其中1株为blaCTX-M-1基因型,其余9株为blaCTX-M-9+blaTEM-1基因型。结论重庆地区猪源STEC中存在较高比例的产ESBLs菌株。在加强人和动物STEC感染检测与监测的同时,应进行细菌耐药性监测。

武汉市部分菜场肉类食品中产志贺毒素大肠杆菌污染状况分析

目的对武汉市部分菜场肉类食品中产志贺毒素大肠杆菌(STEC)污染状况进行分析。方法 2011年7月至2012年10月期间,从武汉市汉口30个菜场和超市共采集样品196份,其中猪肉102份,牛肉60份,禽类34份。通过选择性增菌,提取DNA,PCR扩增stx1、stx2、rfb O157、wzy O157基因,分析食品中产志贺毒素大肠杆菌的污染状况。结果猪肉、牛肉、禽类食品中非O157型STEC的阳性检出率分别为18.6%、48.4%和2.9%;O157型STEC的阳性检出率分别为13.6%(猪肉)、6.7%(牛肉)和2.9%(禽类)。菜场样品STEC检出率(35.8%)略高于超市样品(32.4%)。结论武汉市肉类食品中STEC检出率较高,应定期跟踪监测,了解菌株流行和毒力变化状况。

应用双抗体夹心ELISA检测产志贺毒素大肠杆菌Ⅱ型志贺毒素

目的：构建双抗体夹心ELISA检测Ⅱ型志贺毒素（ StxⅡ）,以利于产志贺毒素大肠杆菌（ STEC）感染的临床快速诊断。方法应用业已制备的StxⅡ特异性杂交瘤细胞株,筛选、鉴定最佳抗体配对,构建双抗体夹心ELISA检测体系,对16株STEC临床分离株培养上清中StxⅡ进行检测,并对该体系的特异性和敏感性进行评价。结果从获得的多株单抗分子中,成功筛选出最佳配对抗体S2D8和S2C6,构建基于S2D8/S2C6的双抗体夹心ELISA检测体系,该体系对StxⅡ纯品的检测底限是4 ng/ml,并成功从STEC培养上清中检测出StxⅡ及其变种,而与StxⅠ不结合。其检测效能与商业化胶体金试剂一致,显示出良好的敏感性和特异性。结论 S2 D8/S2 C6单抗的双抗体夹心法ELISA检测试剂的制备为基于毒素分子作为靶分子的STEC 免疫诊断、治疗研究提供基础资料。

第四次欧盟产志贺毒素大肠埃希菌外部质量控制考核结果评价

目的通过参加国际外部质量控制考核,提高实验室检测能力,确保检测结果的准确性、可重复性和可比性。方法于2013年参加了第四次欧盟产志贺毒素大肠埃希菌(shiga toxin-producing Escherichia coli,STEC)和其他致泻性大肠埃希菌(diarrhoeagenic Escherichia coli,DEC)外部质量控制考核。对考核菌株进行了血清分型、表型分型、基因分型及stx/vtx亚分型等检测并上报结果。根据世界卫生组织(world health organization,WHO)大肠埃希菌和克雷伯菌参比实验室反馈结果进行综合评估。结果在15株菌的14个考核项目中,本实验室有12个项目的考核结果远高于WHO全球食源性感染网络(global foodborne infections network,GFN)成员国的平均成绩(其中10个项目共计150个指标全部正确),另2项超广谱β-内酰胺酶(extended-spectrum beta-lactamases,ESBLs)和β-葡萄糖醛酸苷酶试验的考核结果正确率分别为87%和80%。结论通过参加本次国际外部质量考核,提高了本实验室产志贺毒素大肠埃希菌及其他致泻性大肠埃希菌的检测能力,但表型分型能力还需要提高。

利用EHEC琼脂平板从食物中分离检测产志贺毒素大肠杆菌

为利用肠出血性大肠杆菌(EnterohaemorrhagicEscherichiacoli,EHEC)琼脂平板,从食物中分离、检测产志贺毒素大肠杆菌(shigatoxin-producingEscherichiacoli,STEC),采用STEC毒力基因(hlyA基因)检测溶血素的产生,建立了一种利用EHEC琼脂平板快速、准确地从食物中分离、检测STEC的方法。该方法可检测STEC不同血清O157∶H7、O26、O111。

产志贺毒素大肠杆菌志贺毒素Ⅰ型双抗体夹心ELISA检测方法的建立

为建立双抗体夹心ELISA法检测产志贺毒素大肠杆菌(STEC)Ⅰ型志贺毒素(Stx1),利用重组Ⅰ型志贺毒素A亚单位(Stx1A)免疫小鼠,制备单克隆抗体,从中筛选出非竞争性的2株单抗,构建双抗体夹心法ELISA检测方法,并对试验样品中的志贺毒素进行检测。结果显示:共获得4株针对Stx1A的单克隆抗体,分别为1H2-G7、2H1-C12、8E7-E6和2F6-F8。当8E7-E6作为包被抗体,而2F6-F8作为检测抗体时,其检测毒素的OD值最高。对样品中的Stx进行检测,表明该方法只有效识别Stx1,对Stx2不识别。结论:成功建立了用于检测Stx1的双抗体夹心ELISA法,为临床上快速诊断STEC感染奠定了基础。

猪水肿病疫苗的研究进展

水肿病是猪生产中的常见病之一,造成了严重的经济损失。产志贺毒素大肠杆菌(STEC)是引起水肿病的病原菌,F18菌毛和Stx2e毒素是其重要的致病因子。STEC通过菌毛介导的黏附作用,定植于肠上皮细胞并产生毒素,引起微血管的病理学改变,表现出水肿病的临床症状。疫苗免疫仍然是防控水肿病的最佳途径。近年来,随着水肿病致病机制研究的深入,以及菌蜕疫苗、转基因植物疫苗、核酸疫苗等新型疫苗的试验性报道为水肿病的预防带来了新的认识和起点。本文概述了当前致病机制及STEC疫苗的国内外研究进展,对各类疫苗的优劣及试验研究情况进行了梳理,为今后疫苗研发提供参考。