Identification of Antigens Common to Streptococcus suis Serotypes 2 and 9 by Immunoproteomic Analysis

Streptococcus suis is a Gram-positive pathogen that causes serious diseases in pigs. In addition to S. suis serotype 2 （SS2）, S. suis serotype 9 （SS9） is another prevalent serotype, which is frequently isolated from the organs of diseased pigs in China. An immunoproteomic-based approach was developed to identify antigens common to SS2 and SS9 for vaccine development. Cell wall proteins extracted from SS2 strain HA9801 were screened by two-dimensional Western blot using anti-SS2 sera, anti-SS9 sera, or pre-immune sera pooled from specific pathogen free （SPF） mice. Protein spots on preparative gels were excised and identified by matrix-assisted laser desorption ionization time-of-flight mass spectrometry, which led to the identification of four shared immunogenic proteins （arginine deiminase, translation elongation factor-Ts, o-acetylserine lyase, and 1-phosphofructokinase）. The genes encoding these four proteins from SS9 strain GZ0565 were cloned and their proteins were overexpressed in Escherichia coli BL21. Western blot analysis of these recombinant proteins using the convalescent serum of an SPF mini-pig inoculated with the SS2 strain, anti-SS2 sera, and anti-SS9 sera pooled from SPF mice further confirmed the immunogenicity of these proteins. These immunogenic proteins, which are encoded by genes that are reasonably conserved among SS2 and SS9 strains, could be developed as vaccine candidates.

抗Sa抗体、抗环瓜氨酸肽抗体、葡萄糖6-磷酸异构酶抗原和类风湿因子联合检测对类风湿关节炎的诊断意义

目的探讨抗sa抗体、抗环瓜氨酸肽（CCP）抗体、葡萄糖6一磷酸异构酶（GPI）抗原及类风湿因子（RF）联合检测对类风湿关节炎（RA）诊断的意义。方法采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测抗sa抗体、抗CCP抗体及RF亚型RF—IgA、RF—IgG、RF—IgM，免疫比浊法检测RF。结果抗sa抗体、抗CCP抗体、GPI抗原、RF对RA诊断的特异性和敏感性分别为95．69％和59．79％、98．28％和90．72％、76．14％和78．35％、67．24％和91．75％。RF—IgA、RF—IgG、RF—IgM对于RA诊断的特异性和敏感性分别为89．66％和58．76％、90．52％和68．04％、79．31％和79．38％。两项指标联合检测对RA诊断的特异性和敏感性为92．24％～100．00％和47．42％-86．60％；3项指标联合检测对RA诊断的特异性和敏感性为99．14％～100％和46．39％-71．13％；4项指标联合检测对RA诊断的特异性和敏感性为100．00％和46．39％。抗sa抗体阳性组患者C反应蛋白水平高于阴性组（P〈0．05）。结论两项及两项以上指标联合检测可以显著提高RA诊断的特异性，有利于RA的早期诊断及治疗。

唾液SA、CEA测定在口腔鳞状细胞癌诊断中的意义

目的 通过对唾液中癌胚抗原 (CEA)和唾液酸 (SA)含量的测定和分析 ,探讨唾液中CEA和SA含量在口腔颌面部鳞状细胞癌诊断中的意义。方法 分别采用ELLISA法酶法 ,检测了 2 2例口腔鳞状细胞癌患者、2 2例口腔良性肿瘤患者、4 0例正常人唾液中的CEA和SA含量。结果 经过对测定数据进行统计学处理 ,SA含量在正常人组与良性肿瘤组对比 ,P >0 .0 5 ;正常人与鳞状细胞癌组对比 ,P <0 .0 1。良性肿瘤与鳞状细胞癌组对比 ,P >0 .0 5 ;CEA含量在正常人组与良性肿瘤和鳞状细胞癌组对比 ,P <0 .0 1,而鳞状细胞癌和良性组对比P >0 .0 5。结论 联合检测口腔颌面部鳞状细胞癌唾液CEA和SA含量明显高于正常人和良性肿瘤患者 ,口腔科临床开展唾液CEA和SA的测定 。

乳腺癌患者手术前后血清CA15-3、SA和SIL-2R检测的临床意义

目的:探讨乳腺癌患者手术前后血清CA15-3、SA和SIL-2R水平的变化及临床意义。方法:应用放射免疫分析、分光光度法和酶联法对31例乳腺癌患者进行手术前后血清CA15-3、SA和SIL-2R检测,并与35例正常人作比较。结果:乳腺癌患者在手术前血清CA15-3、SA和SIL-2R水平均非常显著地高于正常人组(P<0.01),手术3个月后则与正常人组比较无显著性差异(P>0.05)。结论:乳腺癌患者血清CA15-3、SA和SIL-2R含量的变化与疾病的发生和发展密切相关。

HLA-DR4与抗CCP抗体、抗Sa抗体联合检测对类风湿性关节炎的诊断价值

目的探讨人类白细胞抗原(HLA)-DR4、抗环瓜氨酸肽(CCP)抗体和抗Sa抗体对类风湿性关节炎(RA)的临床诊断价值,为RA的发病机制研究提供临床依据。方法选择RA患者148例及体检正常者(正常对照组)50名,采用序列特异引物引导的聚合酶链反应(PCR)检测HLA-DR4,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测抗CCP抗体、抗Sa抗体,对检测结果进行危险因素分析和联合检测分析。结果 RA组HLADR4、抗CCP抗体、抗Sa抗体阳性率明显高于正常对照组,此3项指标是与RA关联性较强的正关联危险因素[比值比(OR)分别为3.28、172.63、34.21]。RA组HLA-DR4、抗CCP抗体和抗Sa抗体诊断RA的敏感性分别为45.95%、78.38%、40.54%,约登指数分别为0.35、0.78、0.41。抗CCP抗体与抗Sa抗体并联、HLA-DR4与抗CCP抗体并联、HLA-DR4与抗Sa抗体并联的约登指数分别为0.87、0.74、0.54。结论 HLA-DR4是RA的正关联危险因素,与RA的发生、发展存在一定联系,与抗CCP抗体和抗Sa抗体联合检测可提高其对RA的诊断价值。

卵巢癌患者手术治疗前后血清CA125、CA19-9、CEA和SA检测的临床评价

目的:探讨了卵巢癌患者手术治疗前后血清CA125、CA19-9、CEA和SA检测的变化及临床意义。方法:应用放射免疫分析和化学法对32例卵巢癌患者进行了手术治疗前后血清CA125、CA19-9、CEA和SA检测,并与35名正常人作比较。结果:卵巢癌患者在治疗前血清CA125、CA19-9、CEA和SA水平非常显著地高于正常人组(P<0.01)。手术治疗6个月后则与正常人组比较无显著性差异(P>0.05)。结论:检测卵巢癌患者血清CA125、CA19-9、CEA和SA水平的变化对了解病情、观察疗效和预后判断均有重要的临床价值。

乙型脑炎病毒SA14-14-2株E蛋白主要抗原片段的高效表达

在本实验室已构建的原核表达载体(含乙脑疫苗株SA14 14 2株E蛋白基因主要抗原片段)的基础上用巴斯德毕赤酵母系统表达,该片段长1113bp,编码371个氨基酸残基,将其亚克隆入酵母表达载体pPICZαA,以电穿孔法转化酵母X 33,用Zeocin平板筛选重组子,经甲醇诱导表达后,SDS PAGE和免疫印迹分析表达产物。由于糖基化不同,所表达产物有两种,其相对分子质量分别为44kDa和50kDa,表达量较高,约为290mg/L,经Western印迹验证,有较好的抗原性。在ELISA试验中,我们直接以PBS透析后的酵母上清包被,能够很明显地区分出乙脑阴阳性血清,与RT PCR检测的相符率达95%,为制备JEV的诊断抗原和基因工程疫苗提供了依据。

血清CA19-9、Hcy、CA50和SA联检对胰腺癌的诊断价值

目的:探讨了肿瘤标志物糖类抗原19-9(CA19-9),同型半胱氨酸(Hcy),糖类抗原50(CA50)和唾液酸(SA)联检对胰腺癌的临床评价。方法:应用放免法、免疫法和生化法对32例胰腺癌患者进行了血清CA19-9、Hcy、CA50和SA检测,并与35名正常健康人作比较。结果:以单一指标阳性作为诊断标准,CA19-9、Hcy、CA50和SA对胰腺癌的敏感性分别为68.8%、59.4%、62.5%和46.9%,特异性分别为84.8%、80.6%、71.4%和67.2%,联检二项或二项以上阳性作为标准,本文患者诊断的灵敏度为96.9%,特异性为98.2%。结论:联检血清CA19-9、Hcy、CA50和SA对胰腺癌的辅助诊断有较高的临床实用价值。

血清CEA、AFP、CA19-9和SA联检对HCC的诊断价值

目的:探讨了肿瘤标志物癌胚抗原(CEA)、甲胎蛋白(AFP)、糖类抗原CA19-9(CA19-9)和唾液酸(SA)联检对原发性肝癌(HCC)的临床评价。方法:应用放免法和生化法对36例HCC患者进行了血清CEA、AFP、CA19-9和SA检测,并与35名正常健康人作比较。结果:以单一指标阳性作为诊断标准,CEA、AFP、CA19-9和SA对HCC的敏感性分别为33.3%、69.4%、58.3%、61.1%,特异性分别为60.4%、81.3%、68.8%、64.6%。联检结果二项或二项以上阳性作为标准。本文患者诊断灵敏度为94.4%、特异性为95.8%。结论:联检血清CEA、AFP、CA19-9和SA对HCC的辅助诊断有较高的临床实用价值。

精子膜抗原SA-30诱导雌性小鼠的体液免疫反应

利用 ELISA方法检测了精子膜抗原 ( sperm antigen-30 ,SA-30 ,从牛精子膜提取的一种糖蛋白 )诱导雌性昆明系小鼠体液免疫反应的情况。结果表明 ,SA-30免疫后 ,无论是妊娠前 (间情期 )还是妊娠后 (妊娠 3d) ,小鼠的血清及子宫分泌物中都有抗 SA-30抗体 Ig G存在 ;与对照组 (用不加 SA-30的佐剂免疫 )比较 ,二者具有极显著性差异 ( P<0 .0 1 ) ,说明 SA-30具有较强的抗原性。本试验结果提示 ,抗体产生可能是

2-型猪链球菌保护性抗原ESA的细胞定位及B细胞表位预测

通过生物信息学方法预测2-型猪链球菌（Streptococcus suis serotype 2,SS2）保护性抗原ESA（epidermal surface antigen,ESA）在SS 2中的分布和B细胞表位,为研究SS2的多表位疫苗奠定基础。以ESA推定的氨基酸序列为基础,通过生物信息学软件对ESA进行信号肽、跨膜序列等分析,然后分别以Kyte-Doolittle法、Emini法和Jameson-Wolf法分析蛋白的亲水性、表面可能性以及抗原指数;辅以Garnier-Robson法、Chou-Fasman法和Karplus-Schulz法分析蛋白二级结构中柔性区域,进而预测ESA的B细胞表位。结果表明,ESA为跨膜蛋白,B细胞表位位于N-端第30~35、59~64、178~185、245~253区域。多参数或多个软件联合使用能预测SS2保护性抗原ESA的B细胞表位和细胞定位,为实验研究提供帮助,大大缩减实验时间。

人胎盘中Sa抗原的制备

目的：探讨从人胎盘中提取和分离Sa抗原的方法及进行性质分析。方法：用DE52离子层析法初步提取人胎盘中可溶性蛋白，再应用SDS-PAGE进行各层析组分分离，确定Sa抗原所在组分；将Sa抗原用酸、碱和蛋白酶K处理后分析其性质。结果：Sa抗原是相对分子量为5000Ar的蛋白抗原，存在于0．20-0．25mol/L NaCl的TBS洗脱组分中，在-20℃下可稳定保存120d。结论：用人胎盘来制备Sa抗原其性质稳定、来源方便、方法较简单，适用于免疫印迹法检测抗Sa抗体。

Sa抗原的提取和纯化

目的：提取和纯化Ｓａ抗原。方法：应用ＤＥ５２离子层析法。结果：Ｓａ抗原的分子量是５０ＫＤ，存在于０．２０ｍｏｌ／Ｌ Ｎａｃｌ ＴＢＳ洗脱组分中，在－２０℃保存期为１２０天。结论：分离和纯化的Ｓａ抗原可应用于免疫印迹检测抗Ｓａ抗体。

食管癌患者手术切除前后SA、CEA和SCP检测的临床意义

目的 探讨食管癌患者手术切除前后血清 SA、CEA、SCP水平的变化。方法 应用放免法测定 4 3例食管癌患者血清 CEA含量 ,化学法测定 SA和 SCP含量 ,并以 35名正常健康人作对照。结果 食管癌患者在手术切除前血清 SA、CEA、SCP水平非常显著地高于正常人组 (P<0 .0 1) ,手术切除后 6个月转移者血清 SA、CEA、SCP水平持续异常 ,未转移者血清 SA、CEA、SCP在正常水平。结论 血清 SA、CEA、SCP含量测定的变化与食管癌患者的病情和预后密切相关 。

变形链球菌185-SA表面蛋白抗原的提取与鉴定

变形链球菌Ｃ血清型的１８５ＫＤ表面蛋白抗原，是变链的重要抗原。本文自变链ＭＴ６Ｒ（Ｃ血清型）的培养上清液中，用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析电泳、制备电泳和透析电泳的方法，提取了变链１８５ＫＤ表面蛋白抗原（１８５－ＳＡ）。这种抗原与标准抗体（兔抗变链ＳＡⅠ／Ⅱ抗体）具有免疫反应性。

联合检测HLA-DR4、抗CCP抗体和抗Sa抗体在类风湿关节炎诊断中应用价值

目的探讨联合检测HLA-DR4、抗CCP抗体和抗Sa抗体在类风湿关节炎诊断中应用价值。方法在2014年10月至2017年1月期间,选取我院就诊的109例RA患者作为研究对象,选取同期我院收治的94例非RA患者和90例健康体检者作为对照组。比较三组患者血清HLA-DR4、抗CCP抗体和抗Sa抗体的阳性率、三项指标联合检测对RA诊断学指标。结果 RA组患者血清HLA-DR4、抗CCP抗体和抗Sa抗体阳性率显著高于非RA组和对照组(P<0.05)。在HLADR4、抗CCP抗体和抗Sa抗体三个指标中,抗CCP抗体的灵敏度和特异性最高(P<0.05)。在联合检测中,HLA-DR4、抗CCP抗体和抗Sa抗体联合检测的灵敏度和特异性最高(P<0.05)。结论 HLA-DR4、抗CCP抗体和抗Sa抗体联合检测可以提高对类风湿关节炎的诊断准确率,可作为临床辅助诊断手段。

基于响应面分析的高抗原活性猪链球菌2型疫苗培养基的研制与效果评价研究

试验旨在研制具有高抗原活性的猪链球菌2型(Streptococcus suis type 2,SS2)疫苗培养基。研究以SS2 CVCC60615株为试验对象,通过单因素试验、Plackett-Burman试验、最陡爬坡试验和响应面分析得到SS2疫苗培养基。培养基发酵验证结果显示,SS2疫苗培养基菌液最大活菌数为1.09×10^(9) CFU/mL,是TSB培养基最大活菌数的2.41倍。测定SS2不同时间点的抗原活性发现,在SS2发酵培养过程中当活菌数达到最大值后的1~3 h内细菌的抗原活性最高。小鼠感染试验表明,SS2抗原活性最高时制备的灭活疫苗与商品化灭活疫苗相比具有更高的免疫球蛋白G(IgG)抗体效价和疫苗保护率。研究表明,采用研制得到的高抗原活性SS2疫苗培养基制备的灭活疫苗具有IgG抗体效价高、免疫保护力强的优点。

变形链球菌表面蛋白和葡糖基转移酶基因疫苗免疫防龋实验研究:唾液和血清抗体水平测定

目的 将基因疫苗pcDNA3_pac和pcDNA3_gtfB经腺周注射免疫定菌大鼠 ,观察唾液和血清抗体的变化 ,证实基因疫苗的免疫原性。方法 36只Wistar大鼠分为 6个免疫组 :pcDNA3_pac ,pcDNA3_gtfB ,pcDNA3_pac联合pcDNA3_gtfB ,阳性对照灭活变形链球菌 ,阴性对照pcDNA3及PBS液组。建立龋攻击定菌鼠模型 3个月 ,各组大鼠均以 10 0 μg剂量免疫定菌鼠 3次 ,ELISA法检测唾液SIgA和血清IgG水平。 结果 疫苗组在首次免疫后第 33天(第 5周 )都出现较高水平的唾液SIgA ,在第 75天 (第 11周 )后达最高水平 ,并持续至实验结束。成组单因素方差分析唾液SIgA水平在总体上各实验组间存在差异 (P <0 0 1或P <0 0 5 ) ,q检验分析在联合免疫组和全菌细胞组最高 ,单基因疫苗免疫组次之 ,pcDNA3与PBS组最低 ;血清IgG水平在 4个免疫组之间没有差异 (P >0 0 5 ) ,但都高于空白及阴性对照组 (P <0 0 5 )。结论 pcDNA3_pac和pcDNA3_gtfB腺周途径免疫定菌Wistar大鼠 ,能有效诱导唾液SIgA和血清IgG抗体产生 。

瑞士乳杆菌、丁二酮乳链球菌混合培养制作酮香型酸奶的研究

选用瑞士乳杆菌与丁二酮乳链球菌混合培养制作酮香型酸奶,利用统计分析系统—SAS正交实验设计优化乳酸菌混合培养条件,并考察发酵过程中和经4℃,24h冷藏后的酸乳活菌数、pH值、滴定酸度和黏度,利用气相色谱法对酸奶的典型风味物质乙醛、乙酸乙酯、双乙酰进行分析。结果表明,当乳固体质量分数为12%,瑞士乳杆菌与丁二酮乳链球菌的比例为2∶1,接种量为4%,培养温度为38℃时所制得的发酵乳活菌数为最高,测得其中乙醛含量为10.67mg/kg,乙酸乙酯7.64mg/kg,丁二酮34.19mg/kg。经感官评定,凝乳组织状态均匀细腻,香气浓郁纯正、酸度适口,品质最佳。

豚链球菌和停乳链球菌类M蛋白及其抗原性分析

分别用热酸抽提法、碱抽提法和胃蛋白酶消化法分离豚链球菌NUF849的类M蛋白,通过SDS-PAGE和Western-blotting印迹法分析比较三种方法所提类M蛋白的组成和抗原性差异。结果表明,热酸抽提法分离制备的类M蛋白得率和纯度都较其它两种方法高,蛋白的抗原性保持较好。采用热酸抽提法提取5株豚链球菌NUF633、NUF693、NUF701、NUF812、NUF849和2株停乳链球菌SD和L2的类M蛋白,其SDS-PAGE图谱明显不同,种间差异明显,豚链球菌主要类M蛋白的分子量分别为60、48、37、30、27、24和15ku,停乳链球菌主要类M蛋白的分子量分别为68、48、42、37、29、26、23、21、19、17、15、14和11ku。Western-blotting结果显示,兔抗豚链球菌血清可与豚链球菌的两条类M蛋白带结合,分子量分别为60和37ku;与停乳链球菌的两条类M蛋白带结合,分子量为68和37ku。两种链球菌主要类M蛋白组成及其抗原性差异明显。