链霉菌Streptomyces sp.P325的化学成分研究

对Streptomyces sp.P325的化学成分进行研究。采用正相硅胶柱色谱、ODS反相柱色谱、凝胶柱色谱及半制备高效液相色谱等分离技术对Streptomyces sp.P325发酵产物的乙酸乙酯萃取部分进行分离纯化。从中共分离得到6个化合物,通过波谱数据分析和文献比对鉴定其结构,其中包括2个新化合物:四羟基十八碳二酸I(1)和四羟基十六碳二酸I(2),以及4个已知化合物:iso-frenolicin B(3)、(R)-7-acetyl-3,6-dihydroxy-8-propyl-3,4-dihydronaphthalen-1(2H)-one(4)、对羟基苯甲酸甲酯(5)和isonicotinaldehyde(6)。对分离得到的化合物1~6进行细胞毒活性评价。结果显示,化合物3对HepG2细胞系表现出显著的抑制活性(IC50为13.11μmol/L),对HeLa细胞的抑制活性为中等(IC50为25.04μmol/L)。

金枪鱼共附生菌Streptomyces sp.TUN21的次级代谢产物研究

海洋动物共附生微生物次级代谢产物是海洋药物的重要来源。该文从金枪鱼共附生菌Streptomyces sp.TUN21的次级代谢产物中分离得到3个化合物,分别为campechic acid B(1),5-(3’-aminophenyl)-2,4-pentadienoic acid(2)和benzenemethanol(3)。其中化合物1对PC-3和HCT-116的抑制活性的IC_(50)值分别为(1.3±0.2)μmol和(0.64±0.1)μmol,而化合物2是首次从该属中分离得到的天然产物。化合物1~3在50μg/mL的浓度下对耐甲氧金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和白色念珠菌无抑制活性。

南极钩虾Gammarussp.肠道共附生菌的分离及StreptomycesxiamenensisYF008的化学成分研究

南极极端生境中蕴含着发掘特殊生物活性天然产物的巨大潜力。对采自南极海域水深6000m海区钩虾(Gammarussp.)的肠道共附生微生物进行分离,并对一株有价值菌株的代谢产物进行研究。采用稀释涂布法进行菌株分离,利用形态学观察及16SrRNA测序进行菌株种属鉴定;综合运用薄层色谱、正相硅胶柱色谱、凝胶柱色谱、反相ODS柱色谱和半制备高效液相(HPLC)等色谱手段分离纯化得到单体化合物,采用波谱学和质谱技术鉴定其化学结构。从钩虾中分离得到17株菌,并将其从分类学角度归属于9个属,其中细菌11株,放线菌6株。从放线菌StreptomycesxiamenensisYF008的发酵产物中分离得到8个单体化合物,分别鉴定为:1(10)E,5E-germacradiene-2,11-diol(1),N-[2-(4-hydroxyphenyl)]ethylacetamide(2),环(L-苯丙氨酸-甘氨酸)(3),环(L-苯丙氨酸-L-丙氨酸)(4),环(D-苯丙氨酸-L-异亮氨酸)(5),环(L-羟脯氨酸-L-苯丙氨酸)(6),环(D-亮氨酸-L-脯氨酸)(7),环(L-苯丙氨酸-L-脯氨酸)(8)。化合物1、3~6系首次从该菌中分离得到,且化合物1为特殊的十元环germacrane型倍半萜类化合物。

海洋放线菌Streptomyces sp. 124092中的细胞毒活性成分

对海洋放线菌Streptomyces sp.发酵液的提取物进行柱层析分离,得到5个化合物.经MS,NMR,^1H-^1HCOSY,HSQC和HMBC等数据鉴定,其结构分别为3-氨基-丙酸对甲苯酯（1）、6-Amino-3-（4-hydroxy-benzyl）-1,4-diazonane-2,5-dione（2）、正丁基-α-D-吡喃甘露糖苷（3）、大豆苷元（4）和1H-3-吲哚甲酸（5）.其中化合物1和2为新化合物,细胞毒活性测试结果表明,化合物1～4对人肝癌细胞（SMMC-7721）具有不同程度的生长抑制活性.

海洋放线菌Streptomyces sp.V5产生的一个新的八元环内酯

海洋放线菌Streptomyces sp.V5分离自南中国海红树根部土壤,从其培养液分离获得一个新的八元环内酯octalactin C(A),以及四个已知化合物2-甲基-3-呋喃甲酸(B)、环(脯-亮)二肽(C)、环(丙-缬)二肽(D)和尿嘧啶(E).通过完整的波谱数据解析了它们的结构.

海洋放线菌Streptomyces sp.(#195-02)的代谢产物研究

从一株南海海洋链霉菌属放线菌195-02中分离得到8个化合物,利用波谱技术确定其结构分别为对羟基苯腈（1）、2-甲基-3-呋喃甲酸（2）、2-呋喃甲酸（3）、环（苯丙-苯丙）二肽（4）、环（亮-异亮）二肽（5）、烟酸（6）、吲哚-3-乙酸（7）和邻苯二甲酸二（2-乙基己基）酯（8）。化合物1、3、8为首次从链霉菌属中分离得到,化合物4～7为首次从海洋放线菌中分离得到。活性测试表明化合物4和5在浓度为50μg/ml时,对喉癌细胞hep2抑制率分别为51%和47%,对肝癌细胞hepG2抑制率分别为40%和31%。

海洋放线菌Streptomyces sp.大片段DNA基因组文库的构建

目的:构建稀有海洋放线菌Streptomyces sp.基因组文库。方法:以稀有海洋放线菌Streptomyces sp.为实验材料,随机剪切提取的总DNA,5'-磷酸末端补平回收40kb左右的DNA片段,与pWEBTM载体连接,经包装蛋白包装成噬菌体后侵染宿主细胞E.coliEPI100,构建该菌株的基因组文库,并对该文库进行质量鉴定。结果:成功构建了稀有海洋放线菌Streptomyces sp.的基因组文库,效价达9.0×104CFU/mL,得到4000个阳性克隆子,远远大于按覆盖率为99%计算至少所需的837个阳性克隆子数,且平均插入片段长度为36kb,重组率100%。阳性克隆子保存于96孔板中,-80℃保存。结论:所构建文库的各项指标均达到要求,为了进一步评估Streptomyces sp.所能合成的所有潜在天然产物,还需要进一步检测该文库中包含有生物合成基因簇的大肠杆菌的表达情况。

土壤链霉菌Streptomyces sp.的抑菌成分

为从放线菌次生代谢产物中寻找结构新颖的活性先导分子,通过抗菌活性筛选,发现一株土壤链霉菌Streptomyces sp.的发酵提取物具有抑菌活性.对该菌进行大规模发酵,利用正相、反相硅胶柱层析和半制备高效液相色谱法,从其发酵产物中分离得到化合物1—11,利用高分辨质谱、一维和二维核磁共振技术,分别将其结构鉴定为(E)-3-甲硫基丙烯酸(1)、(E)-3-甲硫基丙烯酰胺(2)、反式肉桂酸(3)、(E)-4-苯基-3-丁烯酸(4)、3-羟基-4-甲氧基肉桂酰胺(5)、3-indoleketol(6)、N-乙酰基-β-氧色胺(7)、2-乙酰基大黄素(8)、7-羟基-2-(2-羟丙基)-5-甲基色酮(9)、环(苯丙-脯)(10)和环(3-羟基酪-脯)(11).其中,化合物4—6、8、9和11是首次从链霉菌中发现,并且首次报道了化合物2的13C核磁数据.体外对化合物2—4、6、8和9进行了抗菌活性测试,结果表明,化合物3和6对枯草芽孢杆菌和耻垢分支杆菌具有弱抑菌活性,化合物8对枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌和耻垢分支杆菌也具有弱抑菌活性.

抗生素Bagremycin生产菌Streptomyces sp. Tü4128接合转移系统的建立

基于噬菌体φC31 att/int系统,采用属间接合将来自大肠杆菌的DNA有效地导入菌株Tü4128的孢子中。通过条件优化,当融合温度为37℃时,在含80mmol/L MgCl2的ISP4培养基上使每个受体细胞的接合频率显著提高到7.3×10-3。Southern blot分析显示在受体菌染色体上存在单一的染色体附着位点(attB位点)。整合位点的DNA序列测序显示为保守。采用优化的方法建立了大肠杆菌和菌株Tü4128间高效的属间接合系统。

海洋链霉菌Streptomyces sp. SCSIO 1672及其代谢产物水杨酸的分离鉴定

从南海海洋沉积物中分离得到1株海洋放线菌,鉴定为链霉菌Streptomyces sp. SCSIO 1672。通过优化发酵条件,采用海虾生物致死活性和高效液相色谱追踪,利用有机溶剂萃取、正相硅胶、反相硅胶等各种色谱层析方法分离出活性化合物,通过波谱数据解析出海洋放线菌SCSIO 1672次级代谢产物中的该活性化合物为水杨酸。

Streptomyces sp.WJS-825产谷氨酰胺转胺酶发酵条件优化及中试

应用五因子二次正交旋转回归试验设计,建立了微生物谷氨酰胺转胺酶 (TG)发酵生产过程中以酶活力和菌体细胞生长量作为目标函数的数学模型,并以此模型对链霉菌 (Streptomycessp. )WJS-825菌株发酵生产TG的培养条件进行优化,确定了影响TG生产的主要因子及其最适取值为多价胨 2. 1%、可溶性淀粉 1. 5%、初始pH 7. 0及培养温度 30℃.以该优化工艺条件进行了 5L发酵罐小试和 200L发酵规模的中试生产.结果表明,在中试发酵生产中使用以豆饼粉部分替代多价胨的经济性发酵优化培养基,以及发酵过程中在线监控pH、溶氧系数等多项发酵调控参数,并分段控制pH、温度、通气量和搅拌转速以及进行适时的流加补充碳源,该菌株生长繁殖能力强、产酶效果好,TG活性达 3. 2u/mL,而且连续重复的中试发酵生产试验的TG产量均稳定在 3. 2u/mL以上. 图 2表 3参

滑桃树种子内生菌Streptomyces sp.WXC抗菌化合物的分离和结构鉴定

本文对分离自滑桃树种仁的内生菌WXC进行初步的分类研究,其形态特征和系统发育分析表明该菌属于链霉菌属(Streptomyces sp.)。其发酵产物具有抗菌活性,以抗菌活性为指导,采用硅胶层析、凝胶层析和反相中压柱层析对Streptomyces sp.WXC发酵代谢产物进行分离纯化,得到2个吡喃萘醌类化合物,通过核磁共振、质谱等波谱技术确定它们分别为frenolicin B(1)和deoxyfrenolicin(2)。

铜绿金龟子肠道链霉菌Streptomyces sp.BCa1菌体的抗菌成分研究

为从昆虫来源的放线菌次级代谢产物中寻找药物先导分子,对铜绿金龟子幼虫肠道链霉菌Streptomyces sp.BCa1菌丝体化学成分进行了研究。通过活性跟踪,从其菌丝体的氯仿甲醇萃取物中分离得到主要成分1。利用高分辨质谱、一维和二维核磁波谱技术,将该主要成分1鉴定为具有双重旋转对称结构的不饱和大环内酯类抗生素阿扎霉素(elaiophylin),具有显著的抗金黄色葡萄球菌活性。该类化合物为首次从昆虫来源的放线菌中发现。

海洋链球菌次级代谢产物Streptochlorin对金黄色葡萄球菌诱发乳腺细胞氧化应激的保护作用

[目的]本试验旨在探讨Streptochlorin对金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)感染引起小鼠乳腺上皮细胞氧化应激的影响及机制。[方法]采用海洋链球菌次级代谢产物Streptochlorin预处理小鼠乳腺上皮细胞指标检测(EpH4-Ev)2 h,适时加入S.aureus(MOI=10)共孵育4 h,收集样品;通过细胞活性检测、倒置荧光显微镜观察、生化指标检测、Western blot、RT-PCR等方法检测相关指标,并辅以计算机分子对接技术,明确Streptochlorin对S.aureus诱发乳腺上皮细胞氧化应激的影响及潜在机制。[结果]20μmol·L-1 Streptochlorin预处理能够明显改善S.aureus侵袭导致的乳腺上皮细胞排列紊乱、皱缩等形态改变,降低细胞损伤标志物乳酸脱氢酶(LDH)、N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAGase)的分泌以及肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)和白细胞介素6(IL-6)等炎性细胞因子的基因表达(P<0.05)。Streptochlorin预处理能显著降低乳腺上皮细胞胞内活性氧(ROS)水平,提高细胞总抗氧化能力(T-AOC)水平,减少丙二醛(MDA)水平(P<0.05)。Western blot检测以及分子对接结果显示,Streptochlorin可能通过Keap1-Nrf2信号通路促进下游分子血红素加氧酶1(HO-1)、NAD(P)H∶醌氧化还原酶1(NQO1)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽-S-转移酶(GST)的基因表达发挥抗氧化作用(P<0.05)。[结论]Streptochlorin对S.aureus感染小鼠乳腺上皮细胞诱发的氧化应激和炎症反应具有显著的保护作用,这可能与Keap1-Nrf2信号通路的激活有关。

Streptomyces sp. 4353中3-氨基-5-羟基-苯甲酸(AHBA)合酶基因的克隆及其在大肠埃希菌中的表达

目的克隆Streptomyces sp.4353中的3-氨基-5-羟基-苯甲酸(AHBA)合酶基因,并将其在大肠埃希菌中表达。方法参与AHBA生物合成的5个基因,即氨基奎尼酸脱水酶基因、氨基奎尼酸/莽草酸脱氢酶基因、AHBA合酶基因、氧化还原酶基因和磷酸酶基因通常连锁,形成一个AHBA生物合成基因簇。本文通过分析、比较已知AHBA生物合成基因簇的基因组织结构特点和序列保守性,设计引物,以Streptomyces sp.4353的总DNA为模板,在已知737bp AHBA合酶基因部分序列的基础上,通过PCR扩增其上、下游DNA序列,克隆至pMDl8-T载体上,测序、拼接并进行生物信息学分析。以pET24a(+)为表达载体,对克隆得到的AHBA合酶基因在大肠埃希菌BL21-Codon Plus(DE3)-RIL中进行表达和SDS-PAGE检测。结果从Streptomyces sp.4353中得到了一段2872bp大小的DNA片段(NCBI GenBank接受号EU734184),其中含有AHBA生物合成基因簇中的AHBA合酶基因、氧化还原酶基因和磷酸酶基因(部分);AHBA合酶基因在大肠埃希菌中得到了成功表达,在SDS-PAGE上可见到清晰的、与预计大小(42.7ku)一致的蛋白表达特异条带。结论Streptomyces sp.4353中的AHBA合酶基因的克隆以及在大肠埃希菌中的表达为进一步研究该基因的功能奠定了基础。本研究克隆得到的2872bp DNA片段还有可能用于AHBA的杂合/异源生物合成,以及安莎类抗生素的组合生物合成。

新型Streptomyces sp. N2代谢粗提物的抑菌活性及其水果保鲜初探

【目的】为明确新型广谱拮抗链霉菌N2的抗菌谱,开发安全高效的生物防腐剂。【方法】采用菌丝生长速率法和杯碟法,初步评价了N2粗提物对酵母菌、13种植物病原真菌、3种G+和3种G-细菌的抑菌效果。【结果】N2粗提物具有广谱、高效的拮抗特性,尤以对葡萄座腔菌、意大利青霉、烟草黑胫病菌、枯草芽孢杆菌(G+)和水稻黄单胞菌(G-)的抑制作用最为明显。通过建立毒力回归方程发现N2粗提物对辣椒疫病菌、葡萄座腔菌、西瓜枯萎病菌、棉花枯萎病菌、烟草黑胫病菌、水稻纹枯病菌、莴苣菌核病菌和稻瘟病菌的EC50分别为0.45、1.02、3.39、1.70、1.49、1.18、1.12和0.68μg·m L^(-1)。同时,离体水果的生物防效与保鲜试验的结果表明,N2粗提物中的有效抗菌物质能显著提高猕猴桃的相对防效,抑制水果表面有害病菌的生长,减缓水果的水分散失,提高水果的贮藏品质。【结论】综上可知,链霉菌N2拥有广谱拮抗特性,有望在食品保鲜领域发挥重要作用。

链霉菌FJS31-2外分泌物的挖掘及活性分析

通过培养基优化、核糖体工程对链霉菌(Streptomyces sp.)FJS31-2外分泌物产生条件进行了优化,利用高分辨质谱(HRMS)技术对其主要活性产物的成分进行了初步分析,采用磺酰罗丹明B(SRB)比色法测定了外分泌物对肝癌细胞MHCC97H的抑制活性。结果表明,经链霉素多代胁迫结合培养基优化诱导链霉菌FJS31-2产生了分子式为C 28 H 40 O 2的四环萜类化合物,该化合物可抑制肝癌细胞MHCC97H的生长,并呈浓度依赖性。为从链霉菌FJS31-2获取新型抗生素奠定了技术和物质基础。

铜绿金龟子肠道链霉菌(Streptomycessp.BCa1)的次生代谢产物研究(英文)

对一株分离自昆虫铜绿金龟子幼虫肠道的链霉菌Streptomyces sp.BCa1的次生代谢产物进行化学研究。采用摇瓶发酵,并用柱色谱技术对该链霉菌的次生代谢产物进行分离纯化和利用光谱分析进行结构鉴定。结果从菌株Streptomyces sp.BCa1的发酵液中分离获得1个具有Hsp90蛋白抑制活性的格尔德霉素(geldanamycin)以及2个萘醌型大环内酯类化合物。所有化合物均为首次从昆虫来源的链霉菌中发现,且格尔德霉素为其主要产物,表明昆虫来源的放线菌具有良好的开发前景。

羽毛降解菌株Streptomyces sp.DJ产生的蛋白酶酶学性质

从羽毛废弃物堆的土壤中采集样品,通过富集培养、初筛和复筛分离出一株高效降解羽毛的DJ菌株;对该菌株的形态学观察和基于16S rDNA序列的系统进化分析,初步鉴定为链霉菌Streptomyces sp.DJ。该菌株在32℃摇床培养10 d后,对天然羽毛的降解率高达50%,且羽毛水解产物中含有多种自由氨基酸。该菌株产生的蛋白酶最适反应温度为45℃,最适反应pH为10.0;对羽毛的降解能力高于商品化的碱性蛋白酶和木瓜蛋白酶,对疏水性或亲水性的自然底物也具有较强的水解能力。以上结果表明:DJ菌株及其产生的蛋白酶具有良好的应用潜力。

Streptomyces sp.DJ菌株产生的角蛋白酶的序列分析

【目的】解析Streptomyces sp.DJ菌株编码的3种角蛋白酶的氨基酸序列、二级结构、三级结构及其功能的关系。【方法】基于DJ菌株全基因组测序结果,利用Bio-edit、DNAMAN、Discovery Studio2.5等软件、https://swissmodel.expasy.org/等网站对其3种角蛋白酶的序列和结构进行了分析和预测。【结果】DJ菌株胞外分泌3种角蛋白酶(K1、K2和K3)均属于S8家族的丝氨酸蛋白酶,信号肽、前导肽和成熟肽在氨基酸残基的组成、极性和长度等方面较一致。3种酶均能以5WSL.1.A为模板进行同源建模,每种酶的3-D结构中均含有6个α螺旋、2个3_(10)α螺旋和15个β折叠的二级结构;其中K1酶含有2个二硫键,1Ca和2Ca位点,K2和K3各有1个二硫键,1Ca位点;3种酶的Pro270残基位于loop环,而仅有K2的Pro242残基位于loop环中。3种酶底物结合区域主要由疏水性残基构成,偏向于疏水性强的底物。3种酶的底物结合区域比较而言,S1和S2对底物特异性起关键作用;由于3种酶的S1和S2中重要位点残基的不保守性,使其底物特异性具有差异。【结论】DJ菌株中3种角蛋白酶在氨基酸、二硫键、脯氨酸和钙结合等的不同致使酶稳定性的不同;并且由于其表面电荷分布、底物结合区域的差异构成对羽毛水解位点的互补性,这可能是DJ菌株高效降解羽毛的重要原因。