人类T型钙通道α_(1H)亚单位基因在细胞增殖中的功能研究

将人类T型钙通道α1H 亚单位基因 (CACNA1H)cDNA转染到HEK 2 93(humanembroyonickidney)细胞系得到稳定过量表达的细胞株 ,以此为体外模型来研究T型钙通道在细胞增殖中的直接作用。RT -PCR和标准全细胞膜片钳记录分别从mRNA转录水平和T型钙通道蛋白功能水平验证了α1H 亚单位的过量表达。生长曲线结果表明 ,T型钙通道α1H 亚单位基因的过量表达能显著促进HEK - 2 93细胞增殖 ,将细胞群体倍增时间从对照细胞的 2 2 1± 1.1h缩短到稳定转染细胞的 14 0± 0 .4h ,细胞群体倍增时间缩短了约 8h ;流式细胞分析结果表明 ,在稳定转染细胞处于S期的细胞百分率比对照细胞高 ,相反地处于G1 期的百分率比对照细胞低 ,以上结果证明了过量表达T型钙通道亚单位α1H 基因能促进细胞增殖。Western印迹结果提示 ,T型钙通道α1H 亚单位基因表达产物是通过某种信号途径 ,提高了与细胞周期有关基因 (CDK2、cyclinA和cyclinE)的蛋白质表达水平 ,从而刺激了细胞周期的进程。

人类T型钙通道α_(1G)和α_(1H)亚单位基因在细胞增殖中的功能

已经发现T型钙通道的表达与细胞增殖关系密切，然而T型钙通道的表达是细胞增殖的原因还是结果有待进一步研究。利用过量表达人类T型钙通道α_(1G)和α_(1H)亚单位基因(CACNA1G和CACNA1H)的HEK-293细胞研究了这两种基因在细胞增殖中的直接作用，通过RT-PCR和标准全细胞膜片钳记录分别从mRNA转录水平和T型钙通道蛋白功能水平验证了α_(1G)和α_(1H)亚单位基因的过量表达；从生长曲线分析得到了细胞群体倍增时间，HEKα_(1G)^+细胞为(13．7±0．3)h，HEKα_(1H)^+细胞为(14．0±O．4)h，都短于对照HEK-293细胞的(22．1±1．1)h，流式细胞分析结果表明，在稳定转染细胞处于S期的细胞百分率比对照HEK-293细胞高，相反地处于G_1期的百分率比对照HEK-293细胞低。结果表明，T型钙通道α_(1G)和α_(1H)亚单位基因的过量表达都能显著促进细胞增殖，这一作用可以被T型钙通道特异性阻断剂mibefradiL抑制，Western杂交结果提示了T型钙通道的过量表达是通过提高与细胞周期有关的蛋白质(CDK2，cyclinA和cyclinE)的表达水平刺激了细胞周期的进程从而促进细胞增殖。

T型钙通道α_(1G)亚单位在细胞增殖中的功能研究

利用稳定过表达人类T型钙通道α_(1G)亚单位的HEK-293细胞研究了T型钙通道在细胞增殖中的作用。RT-PCR和标准全细胞膜片钳记录分别从mRNA转录水平和T型钙通道蛋白功能水平验证了α_(1G)单位的过表达的实现。生长曲线表明,T型钙通道α_(1G)亚单位的过表达能显著促进细胞增殖,HEKα_(1G)^+细胞的细胞群体倍增时间(13.7±0.3h)比对照HEK-293细胞的细胞群体倍增时间(22.1±1.1h)缩短了约8h;流式细胞分析结果也与此吻合,在稳定过表达了人类T型钙通道α_(1G)亚单位的细胞处于S期的细胞百分率比对照HEK-293细胞高,相反地处于G_0/G_1期的百分率比对照HEK-293细胞低,以上结果证明过表达T型钙通道α_(1G)亚单位能促进细胞增殖;T型钙通道特异性阻断剂mibefradil抑制HEKα_(1G)^+细胞增殖,IC_(50)为3.5/μmol/L,表明在HEK-293细胞过表达T型钙通道对细胞增殖的促进作用可以被T型钙通道特异性阻断剂mibefradil抑制,这就进一步证明了T型钙通道在促进细胞增殖方面的直接作用。Western杂交结果提示了T型钙通道α_(1G)亚单位的表达是通过某种信号途径提高了与细胞周期有关的蛋白质,cyclin A、cyclin E和CDK2的表达水平,从而刺激了细胞周期的进程。本研究有助于理解细胞增殖的机制并为开发治疗与细胞增殖异常有关疾病的新药提供了理论依据。

T型钙通道α_(1G)亚单位在慢性肾衰竭大鼠左心室心肌中的表达及钙三醇干预的研究

目的 观察慢性肾衰竭 (CRF)大鼠左心室心肌中T型钙通道α1G亚单位的表达与心肌肥厚的关系 ,研究钙三醇对其表达的影响。方法 2 4只雄性清洁级SD大鼠随机分为三组 ,每组 8只 :①CRF组 ;②CRF加钙三醇组 (5 0ng/d灌胃 ) ;③假手术对照组。采用两步法 5 / 6肾大部分切除 (SNx)制备CRF动物模型 ;对照组施行假手术。术后 12周处死大鼠 ,检测各组大鼠心重 /体重比、血清尿素氮 (BUN)、肌酐 (Cr)和甲状旁腺素 (iPTH)水平以及内生肌酐清除率 (Ccr) ,并用逆转录聚合酶链反应 (RT -PCR)两步法观察大鼠左心室心肌中T型钙通道α1G亚单位信使核糖核酸 (mRNA)的表达。结果 与对照组相比 ,术后 12周CRF组血清BUN、SCr、iPTH和心重 /体重比值明显上升 (P <0 .0 1) ,CCr明显降低 (P <0 .0 1) ,且左心室心肌中重新出现α1G亚单位mRNA的表达 (P≤ 0 .0 0 1) ;而钙三醇组 ,除血清iPTH较CRF组明显下降外 (P <0 .0 1) ,其血清BUN、SCr、CCr和心重 /体重比值 ,以及左心室心肌中α1G亚单位mRNA的表达均与CRF组无明显差异 (P >0 .0 5 )。结论 CRF大鼠心肌重量明显增加 ,左心室心肌出现T型钙通道的异常表达 ,提示T型钙通道可能在CRF心肌肥厚中起重要作用 ;但用钙三醇干预后虽iPTH能降低 。

妊娠期高血压患者钙电压门控通道亚单位α1c基因与疾病易感性的关系

目的探究妊娠期高血压患者钙电压门控通道亚单位α1c基因(CACNA1C)多态性与疾病易感性的关系。方法选取2020年1月到2022年6月于海口市妇幼保健院建档的375例妊娠期高血压孕妇和303名正常孕妇,分别作为妊娠期高血压组和对照组,收集两组孕妇孕晚期生化指标检测结果,采用聚合酶链反应-限制性酶切片断长度多态性(PCR-RFLP)法检测两组孕妇CACNA1C基因rs2238032、rs10848683、rs2299661位点等位基因,多因素logistic回归分析CACNA1C基因与妊娠期高血压发生的关系。结果两组CACNA1C rs2238032位点基因型构成比差异具有统计学意义(P<0.05),而rs10848683及rs2299661位点基因型构成比差异无统计学意义(P>0.05)。对照组中rs2238032位点不同基因型患者年龄、体重指数、孕周、孕次、24 h平均收缩压、24 h平均舒张压差异无统计学意义(P>0.05)。妊娠期高血压组中rs2238032位点TT型患者体重指数、24 h平均收缩压、24 h平均舒张压高于GT型、GG型患者(P<0.05)。多因素logistic回归分析显示,rs2238032基因型多态性是影响妊娠期高血压发生的相关因素(P<0.05)。结论妊娠期高血压患者CACNA1C基因rs2238032位点TT型突变与血压水平变化有关,且会增加妊娠期高血压易感性。

鸡CACNA1S基因SNPs及其与部分屠体性状的关联性研究

为了研究L型钙离子通道α1亚单位(CACNA1S)编码基因与动物肌肉收缩和发育的关系,试验采用PCR-SSCP技术,首次对萧山鸡、仙居鸡、灵昆鸡、萧山鸡×仙居鸡杂交F1代、爱拔益加鸡(AA鸡)CACNA1S基因5'-调控区(5'-UTR)和外显子1进行多态性检测,同时结合屠体性状进行关联分析。结果表明:试验群体CACNA1S基因5'-UTR和外显子1存在2个单核苷酸多态性(SNPs)位点与屠体性状关联;SNPs716位点JJ基因型的胸肌率极显著大于KK基因型(P<0.01),SNPs1711位点YY基因型的胸肌率极显著大于XY和XX基因型(P<0.01),YY基因型的半净膛率极显著大于XX基因型(P<0.01)。初步推断CACNA1S基因可能是影响鸡部分屠体性状(全净膛率、半净膛率、胸肌率、腿肌率)的主效基因或与主效基因连锁,并且这些突变位点可能作为分子遗传标记用来选择鸡的屠体性状。