SEA对PML-RARα多肽体外诱导外周血单个核细胞TCRζ链表达的作用

目的:了解金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA)联合PML-RARα融合多肽体外诱导正常人外周血T细胞活化TCRζ链基因表达情况。方法:利用T细胞液体培养法分别与正常人外周血淋巴细胞加入PML-RARα融合多肽、SEA和SEA联合PML-RARα多肽诱导培养T细胞,其中SEA刺激包括培养初始或培养第5天加入SEA两组(PS、PSI),并设空白对照组(不加多肽及SEA)。分别收集各组培养20 d后细胞提取mRNA并合成cDNA,采用SYBR G reenⅠ荧光定量PCR和相对定量检测TCRζ链在不同组别T淋巴细胞中的表达情况,以β2微球蛋白基因(β2M)作为内参,根据相对定量公式:2-△△C t分析TCRζ链表达差异。结果:与空白组相比,联合诱导组在培养初始加入SEA及第5天加入SEA的培养T细胞中TCRζ链表达上升,而单独SEA诱导组的TCRζ链表达下降。结论:超抗原SEA联合PML-RARα多肽体外诱导T细胞可使TCRζ链基因表达水平升高,有望为研制急性早幼粒细胞白血病疫苗提供新的切入点。

SEA联合K562细胞体外诱导正常人脐带血单核细胞TCRζ链表达的作用

目的:研究金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA)对K562细胞体外诱导脐血T细胞活化TCRζ链基因表达情况。方法:常规分离4例脐带血单核细胞,分别与抗CD3单克隆抗体、单纯K562细胞、SEA以及SEA联合K562细胞共培养,诱导T细胞活化增殖,并设空白对照组。刺激培养48 h后收集各组细胞提取mRNA并合成cD-NA,采用SYBR GreenⅠ荧光定量PCR和相对定量检测TCRζ链在不同组别T淋巴细胞中的表达情况,以β2微球蛋白基因(β2M)作为内参,根据相对定量公式:2-ΔΔCt计算TCRζ链表达差异倍数。结果:抗CD3单抗组、K562细胞组、SEA组、SEA联合K562细胞组诱导培养T细胞中TCRζ链表达差异倍数分别是(4.52±0.96)、(1.65±0.26)、(1.43±0.44)、(3.41±0.30),表明各组均有活化T细胞的作用,但各组TCRζ链表达水平有差异,其中SEA联合k562细胞组的T细胞ζ链基因表达均明显高于单纯k562组及单纯SEA组(P<0.01)。结论:超抗原SEA有助于增强K562细胞体外诱导T细胞活化作用。

利用T淋巴细胞受体ζ链的变化预测肿瘤坏死因子拮抗剂治疗类风湿关节炎的疗效

目的探讨ζ链呈低水平表达T淋巴细胞（TCRζmT淋巴细胞）在预测类风湿关节炎（RA）患者对肿瘤坏死因子（TNF）拮抗剂疗效反应中的意义，寻找早期预测患者对生物制剂疗效反应的指标。方法12例血清学阳性的活动性（DAS28〉5．1）RA患者接受了标准方案的英夫利西单抗治疗，在第14周和第30周时根据欧洲抗风湿联盟（EULAR）临床疗效反应标准对患者的疗效进行评价，并将患者分为疗效显著、疗效中等、疗效不住3组。每例患者在英夫利西单抗治疗前以及治疗第14周和第30周时采集外周血，采用流式细胞仪的方法对系列标本中不同细胞亚群、TCRζ的表达水平进行研究，并对TCRζdmT淋巴细胞的移动能力进行分析，并将疗效与TCRζdmT淋巴细胞的变化进行相关分析。结果TCRζdmT淋巴细胞具有很强的移动能力，它们选择性地由外周血向炎症部位移动，导致RA滑液中TCRζdmT淋巴细胞的数量明显多于相应的外周血（P〈0．05）。12例患者中3例疗效显著，6例疗效中等，3例疗效不佳。用药至第30周时临床反应判定为良好的患者，在第14周时外周血中均有CD4＋TCRζdmT淋巴细胞的聚集；而疗效不佳的患者外周血中这群细胞数量反而下降；14周时TCRζdmT淋巴细胞变化的百分数与30周时DAS28评分之间密切相关（r2=0．6835，P〈0．01）。结论TNF拮抗剂是治疗RA有效的药物，用药至第14周时外周血中TCRζdmT淋巴细胞数量的变化可以预测用药至第30周时的疗效，阻止TCRζdmT效应T淋巴细胞由外周血向关节腔的移动是TNF拮抗剂在RA中发挥作用的重要机制。

外周血IL-38、CD247蛋白及CD247mRNA表达对类风湿关节炎患者疾病发展的评估价值

目的探讨外周血白细胞介素-38(IL-38)、T细胞受体CD3ζ链(CD247)蛋白及CD247信使RNA(mRNA)的表达对类风湿关节炎(RA)患者疾病发展的评估价值。方法选取健康志愿者(HC组,n=12)、RA患者(RA组,n=56)及其他风湿免疫性疾病患者(非RA组,n=23)为研究对象,收集3组受检者年龄、性别、体质量指数(BMI)及RA组患者的病程,抽取RA及HC组受检者空腹静脉血检测C反应蛋白(CRP)和血沉(ESR),抽取RA患者治疗前后、非RA组治疗前及HC组被检者空腹静脉血,采用ELISA法检测血清IL-38、CD247蛋白的表达,采用RT-qPCR法检测RA组和HC组外周血单个核细胞(PBMC)中CD247 mRNA的表达,采用28个关节疾病活动性评分(DAS28)评估RA组患者疾病活动度的缓解期及活动期(低、中、高疾病活动度),采用斯皮尔曼相关评估RA患者疾病活动度与外周血IL-38、CD247蛋白及CD247 mRNA表达的相关性,采用受试者工作特征曲线(ROC)评估RA组患者IL-38、CD247蛋白及mRNA单独和联合诊断RA的效能。结果RA组患者血清IL-38表达高于非RA组和HC组受检者(P<0.05),且随疾病活动度升高而增高(P<0.05),治疗后IL-38表达降低(P<0.05);RA组缓解期患者与HC组比较,差异无统计学意义(P>0.05);与中低疾病活动度RA组、缓解组及HC组相比,高疾病活动度组RA患者外周血中CD247蛋白和mRNA表达降低(P<0.05),治疗后CD247表达升高(P<0.05),RA组缓解期患者CD247蛋白及mRNA表达与HC组比较差异均无统计学意义(P>0.05);RA患者疾病活动度程度与IL-38表达呈正相关、与CD247蛋白及mRNA呈负相关(P<0.01),IL-38与CRP、ESR呈正相关(P<0.05),CD247蛋白表达与CRP呈负相关(P<0.05);单指标分析显示IL-38诊断效能最佳曲线下面积(AUC)为0.841,联合分析显示IL-38+CD247 mRNA的AUC可达0.882。结论外周血IL-38、CD247蛋白及mRNA与RA患者疾病的发生发展有关,IL-38可能是RA疾病诊断的潜在生物标志物。