OX40-OX40L信号通过活化T细胞核因子c1调控ApoE^(-/-)小鼠动脉粥样斑块形成

目的:探讨OX40-OX40L信号是否通过活化T细胞核因子c1(nuclear factor of activated T cells c1,NFATc1)调控动脉粥样硬化斑块的形成。方法:选取18只载脂蛋白基因敲除(Apo E^(-/-))小鼠,随机均分为3组(n=6):对照组(慢病毒对照预处理后腹腔注射Ig G2b 200μg)、OX40激动组(慢病毒对照预处理后腹腔注射激动型OX40抗体200μg)、沉默NFATc1组(si NFATc1慢病毒处理后腹腔注射激动型OX40抗体200μg),采用颈动脉硅胶圈快速置入法构建动脉粥样硬化斑块模型;HE及Masson染色检测动脉血管内膜病理改变;免疫组织化学和蛋白质印迹法检测动脉粥样硬化斑块内NFATc1表达。结果:HE及Masson染色结果显示,与对照组相比,OX40激动组小鼠颈动脉斑块面积增加,内膜增生明显,斑块内胶原纤维增生明显;沉默NFATc1组颈动脉斑块面积明显减少,内膜增生程度明显降低,斑块内胶原纤维增生减弱。免疫组织化学结果显示,与对照组比较,OX40激动组颈动脉斑块中NFATc1表达明显增加(t=9.896,P<0.01),而沉默NFATc1组表达明显减少(t=-3.167,P<0.05)。蛋白质印迹结果显示,OX40激动组颈动脉斑块中NFATc1表达较对照组明显增高(t=17.648,P<0.01),沉默NFATc1组颈动脉斑块中NFATc1蛋白表达量较OX40激动组表达明显减少(t=-4.747,P<0.05)。结论:OX40-OX40L信号通过NFATc1调控动脉粥样硬化斑块的形成。

活化T细胞核因子c1检测联合血管内超声在冠心病风险评价中的作用

目的以血管内超声(IVUS)分析为参照,探讨活化T细胞核因子c1(NFATc1)对不稳定性斑块的预测意义。方法 183例冠心病患者根据IVUS结果分为不稳定性斑块组(98例)和稳定性斑块组(85例),另选46例冠状动脉造影结果阴性患者为对照组。流式细胞术检测淋巴细胞内NFATc1表达水平,通过受试者工作曲线(ROC)分析其对不稳定性斑块的诊断意义。结果冠心病患者NFATc1水平明显高于对照组,其中不稳定性斑块组NFATc1水平高于稳定性斑块组,NFATc1受试者工作曲线下面积为0.796,P=0.01,最佳界值平均荧光强度为17.5。结论 NFATc1是不稳定性斑块的活动性指标,能够评价冠心病风险,从而进一步预测急性冠状动脉事件的发生。

微小RNA-30b通过下调活化T细胞核因子c1抑制大鼠血管平滑肌细胞钙化

目的观察微小RNA(microRNA,miRNA)-30b通过调控活化T细胞核因子c1(nuclear factor of activated T-cell c1,NFATc1)对血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)钙化的作用及机制。方法大鼠体外原代培养VSMCs,并分为正常组和高磷组。采用ELISA法测定各组VSMCs碱性磷酸酶(ALP)的活性;采用茜素红染色及钙含量检测各组VSMCs的钙化;采用实时荧光定量PCR测定各组VSMCs miR-30b及NFATc1和Runx2表达,Western blot检测NFATc1、Runx2的蛋白表达。为进一步验证miR-30b对VSMCs的作用,给予miR-30b的类似物mimic-30b和抑制物inhibitor-30b,检测VSMCs的钙化及NFATc1、Runx2的表达和ALP的活性变化。结果与正常组比较,高磷诱导的VSMCs钙化增加(t=-13.324,P<0.001);NFATc1的RNA和蛋白表达量升高(t值分别为-4.621、-4.684,P值分别为0.010、0.009);Runx2的RNA和蛋白表达量升高(t值分别为-4.340、-3.860,P值分别为0.005、0.018);ALP活性升高(t=-12.636,P<0.001);miR-30b的表达降低(t=3.822,P=0.019)。转染inhibitor-30b后,inhibitor-30b组较未转染组、inhibitor-NC组的钙含量升高(F=606.554,P<0.001);NFATc1的RNA和蛋白表达量升高(F值分别为36.427、22.512,P值分别为<0.001、0.002);Runx2的RNA和蛋白表达量升高(F值分别为44.225、42.832,P值分别为<0.001、<0.001);ALP活性升高(F=347.356,P<0.001)。转染mimic-30b后,钙化降低(F=93.341,P<0.001);NFATc1的RNA和蛋白表达量降低(F值分别为69.841、6.090,P值分别为<0.001、0.036);Runx2的RNA和蛋白表达量降低(F值分别为44.780、841.081,P值分别为0.005、<0.001);ALP活性降低(F=197.829,P<0.001)。结论miRNA-30b可抑制VSMCs钙化,可能是通过下调NFATc1,进而下调Runx2表达,从而使VSMCs表型转化减少实现的。

CD137信号通过外泌体传递活化T细胞核因子c1介导小鼠血管平滑肌细胞钙化

目的探讨外泌体在CD137信号诱导的小鼠血管平滑肌细胞(VSMC)钙化中的作用。方法组织贴壁法提取小鼠胸主动脉VSMC,将细胞分为2组,即对照组和CD137激动组,用试剂盒提取外泌体,并用透射电镜、纳米颗粒跟踪分析法及Western blot鉴定和分析,荧光显微镜观察VSMC摄取外泌体。构建活化T细胞核因子c1(sh-NFATc1)慢病毒载体并感染VSMC。实验分为3组:对照组外泌体处理组、CD137激动组外泌体处理组、沉默NFATc1+CD137激动组外泌体处理组。采用Western blot检测α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、骨形成蛋白2(BMP-2)、Runt相关转录因子2(Runx-2)蛋白表达量。Von Kossa染色检测VSMC内钙盐沉积情况。结果Western blot结果显示,2组微囊泡均表达外泌体表面标记蛋白CD9、CD81;电镜下外泌体成圆形和杯托状,直径在30~100nm;CD137激动组外泌体中NFATc1蛋白表达显著增多。与对照组外泌体处理组比较,CD137激动组外泌体处理组钙化相关指标BMP-2、Runx-2蛋白表达显著增高,同时α-SMA表达显著下降;与CD137激动组外泌体处理组比较,沉默NFATc1+CD137激动组外泌体处理组BMP-2、Runx-2蛋白表达显著减少,α-SMA表达显著增高。Von Kossa染色结果显示,CD137激动组外泌体处理组VSMC钙盐沉积多于对照组外泌体处理组,而沉默NFATc1+CD137激动组外泌体处理组钙盐沉积比CD137激动组外泌体处理组显著降低。结论CD137信号通路通过外泌体转运NFATc1介导VSMC钙化。

CD137-CD137L信号通过TRAF6/JNK/AP-1通路调控小鼠血管平滑肌细胞活化T细胞核因子c1表达

目的探讨CD137-CD137L信号是否通过肿瘤坏死因子受体相关因子6/c-Jun氨基末端激酶/活化蛋白1(TRAF6/JNK/AP-1)途径调控小鼠血管平滑肌细胞(VSMC)活化T细胞核因子c1(NFATc1)的表达。方法采用组织块原代培养小鼠VSMC,第3~5代细胞用于实验。VSMC分为6组:对照组、CD137刺激组、CD137抑制组、siTRAF6干预组、siJNK干预组、siAP-1干预组。Western blot检测各组TRAF6、磷酸化JNK(p-JNK)、磷酸化AP-1(p-AP-1)、NFATc1蛋白表达水平。免疫荧光法检测各组TRAF6、p-JNK、p-AP-1、NFATc1荧光表达。结果 (1)与对照组相比,CD137刺激组(CD137-CD137L信号激活)TRAF6、p-JNK、p-AP-1、NFATc1蛋白表达水平明显升高(P<0.05);与CD137刺激组相比,CD137抑制组(CD137-CD137L信号抑制)TRAF6、p-JNK、p-AP-1、NFATc1蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。(2)采用siRNA技术分别沉默TRAF6、JNK、AP-1后,与CD137刺激组相比,siTRAF6干预组TRAF6、p-JNK、p-AP-1、NFATc1表达明显减少(P<0.05);siJNK干预组TRAF6表达无改变,而p-JNK、p-AP-1、NFATc1表达明显减少(P<0.05);siAP-1干预组TRAF6、p-JNK表达无明显改变,而p-AP-1、NFATc1表达明显减少(P<0.05)。(3)免疫荧光检测显示:CD137刺激组TRAF6、p-JNK、p-AP-1、NFATc1荧光表达量升高(P<0.05);CD137抑制组TRAF6、p-JNK、p-AP-1、NFATc1荧光表达量明显降低(P<0.05);siTRAF6干预组、siJNK干预组、siAP-1干预组TRAF6、p-JNK、p-AP-1、NFATc1荧光表达量与上述蛋白表达结果一致。结论 CD137-CD137L信号可通过TRAF6/JNK/AP-1通路影响NFATc1的表达。

二十二碳六烯酸对肺动脉高压大鼠活化T细胞核因子c1表达的影响

目的观察二十二碳六烯酸(DHA)对野百合碱(MCT)致肺动脉高压(PH)大鼠肺血管重构及活化T细胞核因子c1(NFATc1)表达的影响。方法 24只SD大鼠随机分为正常对照组(n=7)、DHA干预组(n=7)及MCT模型组(n=10)。肺动脉高压模型采用MCT诱导法,HE染色观察大鼠肺小动脉形态学改变,免疫组织化学、Western blot和qRT-PCR检测大鼠肺动脉NFATc1蛋白和mRNA的表达。结果 DHA能明显减轻模型大鼠的肺血管重构;与正常对照组相比,MCT模型组肺动脉NFATc1蛋白和mRNA的表达明显增强(P<0.05);与MCT模型组相比,DHA干预组肺动脉NFATc1蛋白和mRNA的表达减弱(P<0.05)。结论 DHA对MCT所致肺动脉高压具有较好的抑制作用,其作用机制可能与其抑制NFATc1表达有关。

microRNA-124-2在CD137-CD137L信号通路调控小鼠血管平滑肌细胞活化T细胞核因子C1表达中的作用

目的探讨micro RNA-124-2在CD137-CD137L信号通路调控小鼠血管平滑肌细胞(VSMC)活化T细胞核因子C1(NFATc1)表达中的作用。方法小鼠血管平滑肌细胞采用组织贴块法原代培养,细胞中micro RNA-124-2表达采用RT-PCR法检测;应用脂质体转染技术将micro RNA-124-2的模拟物(mimic)和抑制物(inhibitor)转染至小鼠VSMC内,细胞中NFATc1 m RNA及蛋白表达采用实时荧光定量PCR及Western blot方法检测;应用双荧光素酶报告检测micro RNA-124-2对NFATc1-3'UTR的作用。结果 anti-CD137特异性刺激CD137-CD137L轴后,平滑肌细胞micro RNA-124-2表达较对照组降低(0.29±0.13比1.00±0.00,P<0.05),而anti-CD137L特异性阻断CD137-CD137L轴后,细胞中micro RNA-124-2表达较对照组增加(3.42±0.17比1.00±0.00,P<0.05);与阴性对照组相比,升高或下调micro RNA-124-2的表达均可逆转CD137-CD137L轴对NFATc1的作用;双荧光素酶报告系统显示micro RNA-124-2对NFATc1-3'UTR有抑制作用(0.283±0.011比1.294±0.143,P<0.001)。结论 CD137-CD137L受体-配体轴可以通过调控micro RNA-124-2进而影响NFATc1的表达。

活化T细胞核因子c1在糖尿病血管钙化进展中的作用

目的探究活化T细胞核因子c1(NFATc1)在糖尿病血管钙化中的作用。方法纳入行糖尿病足截肢的患者15例,收集其血清及胫前动脉标本,根据胫前动脉钙含量分为低钙化组和高钙化组;检测患者血清和胫前动脉中NFATc1水平,分别将其与胫前动脉钙含量进行相关性分析。借助小鼠主动脉平滑肌细胞(MASMC)构建糖尿病血管钙化体外模型,检测高糖环境下MASMC的表型转分化及钙盐沉积情况。进一步利用siRNA沉默NFATc1,检测NFATc1对MASMC表型转分化和钙盐沉积的影响。结果高钙化组患者血清和胫前动脉NFATc1水平均显著高于低钙化组,且相关性分析显示血清和胫前动脉中的NFATc1都与钙含量呈正相关。在MASMC体外模型中,高糖明显减弱了MASMC收缩表型,促进其成骨表型转分化,且显著加重MASMC的钙盐沉积。高糖的促MASMC表型转分化和促钙化作用与高渗无关。在用siRNA沉默NFATc1后,MASMC的成骨样分化明显受到抑制,且钙盐沉积也显著减少。结论NFATc1可促进血管平滑肌细胞向成骨表型转分化,加速糖尿病血管钙化进展。

血清血小板活化因子、活化T细胞核因子c1水平与冠心病、冠状动脉病变严重程度及冠心病类型的关系研究

背景血清血小板活化因子(PAF)、活化T细胞核因子c1(NFATc1)水平与冠心病(CHD)患者不稳定斑块有关,但其与冠状动脉病变严重程度、CHD类型的关系尚不明确。目的探讨血清PAF、NFATc1水平与CHD、冠状动脉病变严重程度及CHD类型的关系。方法选取2015年12月—2017年12月在内蒙古医科大学附属医院住院并行冠状动脉造影(CAG)检查的患者195例,根据CAG检查结果分为非CHD组51例和CHD组144例。根据冠状动脉病变严重程度将CHD患者分为轻度组36例、中度组68例、重度组40例;根据CHD类型将CHD患者分为稳定型心绞痛(SAP)组69例和急性冠脉综合征(ACS)组75例。比较CHD组与非CHD组患者一般资料、血脂指标及血清肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、PAF、NFATc1水平,并分别比较非CHD组、轻度组、中度组、重度组及非CHD组、SAP组、ACS组患者血清CK、CK-MB、PAF、NFATc1水平;绘制ROC曲线以评价血清PAF、NFATc1、PAF+NFATc1水平对CHD的诊断价值及血清PAF、NFATc1、PAF+NFATc1、CK、CK-MB水平对ACS的诊断价值。结果 (1)CHD组与非CHD组患者年龄≥65岁者所占比例、心率、收缩压、舒张压比较,差异无统计学意义(P>0.05);CHD组患者男性比例,有吸烟史、饮酒史、糖尿病病史、高血压病史、高脂血症病史、脑血管疾病病史者所占比例及血清总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、CK、CKMB、PAF、NFATc1水平高于非CHD组,血清高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平低于非CHD组(P<0.05)。(2)轻度组、中度组、重度组患者血清CK、CK-MB、PAF、NFATc1水平高于非CHD组,中度组、重度组患者血清CK、CK-MB、PAF、NFATc1水平高于轻度组,重度组患者血清CK、CK-MB、PAF、NFATc1水平高于中度组(P<0.05)。(3)SAP组、ACS组患者血清CK、CK-MB、PAF、NFATc1水平高于非CHD组,ACS组患者血清CK、CK-MB、PAF、NFATc1水平高于SAP组(P<0.05)。(4)绘制ROC曲线发现,血清PAF、NFATc1、PAF+NFATc1水平诊断CHD的曲线下面积(AUC)分别为0.821、0.755、0.871,血清PAF+NFATc1水平诊断CHD的AUC大于血清PAF、NFATc1水平(P<0.05);血清PAF、NFATc1、PAF+NFATc1、CK、CK-MB水平诊断ACS的AUC分别为0.936、0.834、0.979、0.753、0.760,血清PAF、NFATc1水平诊断ACS的AUC大于血清CK、CK-MB水平,血清PAF+NFATc1水平诊断ACS的AUC大于血清PAF、NFATc1水平(P<0.05)。结论血清PAF、NFATc1水平与CHD、冠状动脉病变严重程度及CHD类型有关;血清PAF、NFATc1水平对CHD及ACS均具有一定诊断价值,且二者联合对CHD及ACS的诊断价值较高。

川崎病患儿血清CaN、NFATc1水平与免疫球蛋白治疗反应的相关性

目的探讨川崎病患儿血清钙调神经磷酸酶(CaN)、活化T细胞核因子c1(NFATc1)水平与免疫球蛋白(IVIG)治疗反应的相关性,以期为临床改善治疗效果提供理论参考。方法采用前瞻性研究,选取平顶山市第一人民医院2018年1月至2023年1月100例川崎病患儿作为研究对象,检测入院时患儿的血清CaN、NFATc1水平,同时收集患儿的一般资料,根据IVIG治疗反应情况分为IVIG治疗敏感组与IVIG治疗无反应组。比较两组患儿的血清CaN、NFATc1水平及一般资料,采用点二列相关性检验血清CaN、NFATc1水平与IVIG治疗反应之间的关系,并采用logistic回归性检验二者对IVIG治疗反应的影响。结果100例患儿中有20例为IVIG治疗无反应,占比为20%(20/100)。IVIG治疗无反应组患儿入院时血清CaN、NFATc1及C反应蛋白(CRP)水平高于IVIG治疗敏感组(P<0.05)。经点二列相关性检验显示血清CaN、NFATc1水平与川崎病患儿IVIG治疗无反应存在正相关关系(r>0,P<0.05)。经logistic回归性分析检验显示高水平血清CaN、血清NFATc1是导致患儿IVIG治疗无反应的影响因素(P<0.05)。结论川崎病患儿IVIG治疗无反应发生风险较高,且与血清CaN、血清NFATc1存在关系,二者的高水平表达是导致IVIG治疗无反应的影响因素。

miR-124靶向抑制NFATc1调控小鼠C3H10T1/2细胞软骨分化的研究

目的研究miR-124是否通过调控预测的靶基因活化T细胞核因子c1(NFATc1)表达调节小鼠C3H10T1/2细胞的软骨分化。方法培养C3H10T1/2细胞,行软骨诱导分化,采用实时定量PCR和蛋白免疫印迹法检测NFATc1和软骨标记基因Aggrecan、CollagenⅡ、Collagen X mRNA及蛋白的表达水平。使用在线靶基因预测软件预测NFATc1 mRNA的3’端非翻译区(3’UTR)结合位点,构建NFATc1 3’UTR野生型及突变型的荧光素酶报告载体,检测双荧光素酶报告基因,观察miR-124对NFATc1 3’UTR荧光素酶活性的影响。转染miR-124模拟物或抑制物并进行软骨诱导,观察miR-124对NFATc1的调控作用。结果与诱导前比较,成软骨诱导组软骨分化相关基因Aggrecan、Col2a1和Col10a1 mRNA表达水平升高(P均<0.01);Sox 9和NFATc1 mRNA表达水平随着软骨分化进展而增加(P均<0.001);Col2a1、Sox 9和NFATc1蛋白呈逐渐增强表达,而肥厚性标记Col10a1蛋白显示较稳定表达。NFATc1 mRNA的3’UTR与miR-124的种子区存在理论上的互补碱基配对序列。转染NFATc1野生型质粒的C3H10T1/2细胞中,加入miR-124模拟物者的荧光素酶活性低于加入miR-124抑制物者,加入miR-124抑制物者的蛋白表达强于加入miR-124模拟物者(P均<0.05);转染NFATc1突变型质粒的C3H10T1/2细胞中,加入miR-124模拟物与加入miR-124抑制物的荧光素酶活性无变化(P>0.05)。蛋白免疫印迹法与实时定量PCR结果均显示,转染miR-124组与si-NFATc1组的NFATc1表达水平低于Control组(P均<0.01),miR-124组与si-NFATc1组的NFATc1表达水平相近(P>0.05)。过表达miR-124后,NFATc1大约降低了60%,而这种降低可被miR-124抑制物逆转。转染NFATc1野生型质粒的miR-124模拟物组的NFATc1荧光素酶活性减低(P均<0.05),转染NFATc1突变型质粒的miR-124模拟物组NFATc1荧光素酶活性无变化(P均>0.05)。结论 miR-124通过抑制靶基因NFATc1的表达调控C3H10T1/2细胞软骨分化。

CD137-CD137L信号通过CaM-CaN通路调控小鼠血管平滑肌细胞NFATc1表达

目的:探讨CD137-CD137L信号是否通过钙调蛋白-钙调神经磷酸酶(Calmodlin-Calcineurin,CaM-CaN)通路调控小鼠血管平滑肌细胞活化T细胞核因子c1(nuclear factor of activated T cells c1,NFATc1)的表达。方法:采用改良组织贴块法原代培养小鼠血管平滑肌细胞。实验分两部分,第一部分细胞分组:对照组、CD137刺激组(激动型CD137抗体10μg/m L)和CD137抑制组(抑制型CD137抗体10μg/m L预孵30 min后+激动型CD137抗体10μg/m L);第2部分细胞分组:对照组、CD137刺激组(激动型CD137抗体10μg/m L)、si CaM组(si-CaM+CD137刺激组)和si CaN组(si-CaN+CD137刺激组)。分别采用蛋白质印迹和RT-PCR检测平滑肌细胞CaM、CaN及NFATc1的蛋白和mRNA表达水平。结果:(1)蛋白质印迹和RT-PCR结果显示,与对照组相比,CD137刺激组小鼠平滑肌细胞CaM、CaN及NFATc1表达明显升高(P<0.05);与CD137刺激组相比,CD137抑制组CaM、CaN及NFATc1表达显著降低(P<0.05)。(2)通过si-RNA技术分别沉默CaM和CaN后,与CD137刺激组相比,si CaM组CaM、CaN及NFATc1表达水平明显降低(P<0.05);si CaN组的CaM无明显改变(P>0.05),而CaN及NFATc1表达明显降低(P<0.05)。结论:CD137-CD137L信号可能通过CaM-CaN通路调控NFATc1的表达。

血清ANGPTL3、NFATc1水平与脑梗死患者病情严重程度、预后的关系

目的探究血管生成素样蛋白-3(ANGPTL3)、活化T细胞核因子c1(NFATc1)在脑梗死患者血清中的表达以及与脑梗死患者病情严重程度、预后的关系。方法收集唐山工人医院2021年1月至2023年1月期间进行治疗的180例脑梗死患者(脑梗死组)作为研究对象;根据NIHSS评分将患者分为轻度组(n=68),中度组(n=76),重度组(n=36);根据患mRS评分将患者分为预后良好组(n=117)和预后不良组(n=63);另选取180例同期门诊健康体检者作为对照组。比较各组血清ANGPTL3、NFATc1水平;多因素logistic回归分析脑梗死患者预后的影响因素;ROC曲线分析血清ANGPTL3、NFATc1对脑梗死患者预后的预测价值。结果脑梗死组血清ANGPTL3、NFATc1水平高于对照组(P<0.05);轻度组、中度组、重度组血清ANGPTL3、NFATc1水平依次显著升高(P<0.05);预后不良组脑梗死患者脑梗死体积、白细胞计数、ANGPTL3、NFATc1水平显著高于预后良好组(P<0.05)。回归分析显示脑梗死体积、白细胞计数、ANGPTL3、NFATc1是脑梗死患者预后的影响因素(P<0.05)。ANGPTL3、NFATc1二者联合预测脑梗死患者预后效能优于各自单独预测(Z联合检测-ANGPTL3=3.345、Z联合检测-NFATc1=2.898,P=0.001、0.004)。结论脑梗死患者血清ANGPTL3、NFATc1水平显著升高,且随着病情严重程度的增加而显著升高,二者联合对脑梗死患者预后有较高的预测价值。

唑来膦酸抑制破骨细胞分化中TRPV5、NFATc1的表达

目的研究唑来磷酸(ZOL)对破骨细胞分化中瞬时性受体电位通道(TRPV)5和活化T细胞核因子c1(NFATc1)基因表达的影响。方法小鼠单核巨噬细胞株RAW264.7细胞分为A、B两组:两组均用核因子-κB受体激活因子配体(RANKL)诱导5 d,B组在最后2 d应用10-6mol/L ZOL处理。检测破骨细胞生成及TRPV5、NFATc1基因表达情况。结果 B组新生多核破骨细胞数、吸收陷窝数目及面积分别为29.0±2.4、24.8±1.1、2 030.0±165.7μm2,均显著低于A组的56.5±4.5、49.3±0.9、3 946.7±367.5μm2(P<0.01)。B组TRPV5、NFATc1的荧光强度也显著低于A组(P<0.01)。B组TRPV5 mRNA及蛋白水平较A组分别降低了50.4%和37.8%(P<0.01);而NFATc1则分别下降了68.0%和48.4%(P<0.01)。结论 ZOL可显著抑制破骨细胞生成和骨吸收,并下调TRPV5、NFATc1基因表达;ZOL对破骨细胞的抑制可能与其诱发的TRPV5、NFATc1表达抑制有关。

姜黄素对类风湿关节炎破骨细胞分化中NF-κB p65和NFATc1表达的影响

目的研究姜黄素(curcumin,Cur)对类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)破骨细胞(osteoclast,OC)分化中核因子-κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)p65、活化T细胞核因子c1(nuclear factor of activated T cells cytoplasmic 1,NFATc1)表达的影响。方法密度梯度离心法分离RA患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC),经核因子κB受体活化因子配体(receptor activator of nuclear factor-κB ligand,RANKL)和巨噬细胞集落刺激因子(macrophage colony-stimulating factor,M-CSF)诱导培养为OC,通过抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resistant acid phosphatase,TRAP)染色及骨吸收功能检测鉴定OC,分别用不同浓度(0、2.5、5及10μmol/L)的Cur进行干预。采用CCK-8法进行Cur细胞毒性检测;计数TRAP染色阳性细胞数;Western-blotting检测NF-κB p65、NFATc1蛋白的表达;免疫荧光染色检测NF-κB p65核易位。结果 CCK-8结果示,Cur2.5、5和10μmol/L的浓度对PBMC未产生细胞毒性;TRAP染色结果示,Cur抑制RANKL诱导的RA-OC分化;Westernblotting结果示,经不同浓度Cur干预后,NF-κB p65在细胞浆中的表达明显升高,在细胞核中的表达明显降低,NFATc1的蛋白表达明显降低;免疫荧光染色结果示Cur抑制NF-κB p65核易位。结论 Cur能明显抑制NF-κB的入核表达,降低NFATc1的表达,从而抑制RA-OC的分化。

黄芩素通过Nrf2/NF-κB/NFATc1信号通路对牙周病大鼠破骨细胞形成和牙槽骨吸收的影响

目的探讨黄芩素通过核因子E2相关因子(Nrf2)/核因子κB(NF-κB)/活化T细胞核因子c1(NFATc1)信号通路对牙周病大鼠破骨细胞形成和牙槽骨吸收的影响。方法将40只SD雄性大鼠随机分为对照组、模型组、黄芩素低剂量组、黄芩素高剂量组,各10只。除对照组外,其他组制备牙周病大鼠模型。造模1周后,于黄芩素低剂量组、黄芩素高剂量组大鼠创伤处分别注射2.5 mg/(kg·d)、5.0 mg/(kg·d)的黄芩素,于模型组和对照组大鼠相同部位注射等量生理盐水。连续给药7 d后,检测大鼠牙槽骨吸收情况,观察大鼠牙周组织病理变化,计数大鼠牙周组织的破骨细胞数量,并检测大鼠血清白细胞介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平、超氧化物歧化酶(SOD)和活性氧活性、谷胱甘肽和丙二醛水平,以及牙周组织Nrf2、NF-κB、NFATc1蛋白表达水平。结果与对照组相比,其他组大鼠牙周组织上皮增生,胶原纤维排列紊乱,有大量炎症细胞浸润,牙槽骨吸收度、牙周组织破骨细胞数、牙周组织NF-κB和NFATc1蛋白表达水平、血清IL-1β、TNF-α水平以及活性氧活性升高,血清谷胱甘肽水平及SOD活性、牙周组织Nrf2蛋白表达水平降低,模型组和黄芩素低剂量组大鼠血清IL-6、丙二醛水平升高(均P<0.05)。模型组、黄芩素低剂量组、黄芩素高剂量组牙槽骨吸收度、牙周组织破骨细胞数、牙周组织NF-κB和NFATc1蛋白表达水平、血清IL-1β、IL-6、TNF-α、丙二醛水平及活性氧活性依次降低,血清SOD活性、牙周组织Nrf2蛋白表达水平依次升高,且黄芩素低剂量组与黄芩素高剂量组的血清谷胱甘肽水平均高于模型组(均P<0.05)。结论黄芩素可能通过调节Nrf2/NF-κB/NFATc1信号通路抑制机体炎症和氧化应激反应,从而减少破骨细胞形成,进而减少牙槽骨吸收。

CaMKⅡγ基因沉默对破骨细胞分化中NFATc1、TRAP、c-Src基因表达的影响

目的研究钙调蛋白依赖性激酶Ⅱ(Calmodulin-dependent kinase Ⅱ,CaMKⅡ)γ基因沉默对破骨细胞分化过程中活化T-细胞核因子c1(Nuclear factor of activated T-cells cytoplasmic 1,NFATc1)、非受体酪氨酸激酶(Cell-sarcoma receptor coactivator,c-Src)、抗酒石酸酸性磷酸酶(Tartrate resistant acid phosphatase,TRAP)基因表达的影响,探讨CaMKⅡγ在破骨细胞分化中的作用和分子机制。方法用慢病毒构建CaMKⅡγRNA干扰载体,转染RAW264.7细胞,实验分为A、B、C三组,分别为对照组、阴性载体组和干扰载体组;三组细胞转染12 h后,用50 ng RANKL诱导向破骨细胞分化;诱导5 d后收获细胞,采用实时荧光定量PCR、Western blot、免疫荧光化学检测三组细胞中NFATc1、TRAP、c-Src基因表达情况。结果 C组中NFATc1、TRAP、c-Src mRNA水平较A组分别下降了49.86%、43.65%和53.57%(P<0.001),蛋白水平分别下降了54.22%、46.75%和45.86%(P<0.001);而B组与A组比较无统计学差异(P>0.05)。免疫荧光化学检测C组上述基因荧光强度明显弱于A、B组,且破骨细胞生成明显少于A、B组。结论 CaMKⅡγRNA干扰显著抑制了NFATc1、TRAP、c-Src基因表达,提示CaMKⅡγ在破骨细胞分化中起着关键调控作用。

OX40-OX40L相互作用对NFATc1表达及斑块形成的影响

目的探讨OX40-OX40L相互作用对活化T细胞核因子c1(NFATc1)及动脉粥样硬化斑块形成的影响。方法选取33只载脂蛋白(Apo)E-/-小鼠,分为对照组、OX40刺激组、OX40刺激+沉默NFATc1组,采用颈动脉硅胶圈置入法建立斑块模型;Masson染色检测斑块组成;采用免疫组化检测斑块内NFATc1和CD68分布。细胞实验以小鼠脑微静脉内皮细胞为对象,分为对照组、OX40刺激组和OX40抑制组。斑块及细胞表达NFATc1采用qRT-PCR和Western blot方法检测。结果细胞实验显示,OX40刺激组小鼠内皮细胞NFATc1蛋白及mRNA表达明显高于对照组(P<0.05),而OX40抑制组小鼠内皮细胞NFATc1蛋白及mRNA表达低于OX40刺激组(P<0.05)。动物实验显示,OX40刺激组Apo E-/-小鼠斑块中NFATc1蛋白及mRNA表达高于对照组(P<0.05),而OX40刺激+沉默NFATc1组Apo E-/-小鼠斑块中NFATc1蛋白及mRNA表达低于OX40刺激组(P<0.05)。OX40刺激组斑块面积与对照组相比显著增加,斑块内纤维增生明显,而OX40刺激+沉默NFATc1组较刺激组斑块面积明显减少,纤维增生程度减弱。OX40刺激组Apo E-/-小鼠斑块内NFATc1及CD68表达高于对照组,而OX40刺激+NFATc1沉默组小鼠斑块内NFATc1及CD68表达低于OX40刺激组。结论 OX40-OX40L信号调控NFATc1表达并影响动脉粥样硬化斑块的形成。

NFATc1过表达对唑来膦酸诱发的破骨细胞生成抑制的影响

目的研究活化T细胞核因子蛋白c1(NFATc1)过表达对唑来膦酸诱发的破骨细胞生成抑制的挽救效应。方法小鼠NFATc1重组慢病毒转染RAW264.7细胞,验证NFATc1蛋白表达。细胞分为A、B两组,分别转染空白载体和NFATc1重组载体。两组细胞均用50 ng/mL核因子κB受体激活蛋白配体(RANKL)诱导5 d,并在第2天加入1×10^(-6)mmol/mL唑来膦酸作用2 d。第6天收获细胞,检测破骨细胞的生成和功能及NFATc1、抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)、酪氨酸激酶(c-Src)基因的表达情况。结果 NFATc1蛋白在细胞中均有表达。B组TRAP阳性破骨细胞数、牙本质吸收陷窝数目和面积显著高于A组(P<0.01)。B组NFATc1、TRAP、c-Src的蛋白水平显著高于A组(P<0.01);B组3个基因mRNA水平显著高于A组(P<0.01)。免疫荧光细胞化学检测也得到相似的结果。结论 NFATc1过表达对唑来膦酸诱发的破骨细胞生成及NFATc1、TRAP、c-Src基因表达的抑制具有挽救效应;NFATc1作为Ca^(2+)信号的关键分子,在唑来膦酸诱发的破骨细胞生成抑制中起着关键作用。

NFATc1、MAPK及CTGF在心房颤动病人外周血中的表达及临床意义

目的:探讨活化T细胞核因子c1(NFATc1)、丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)及结缔组织生长因子(CTGF)在心房颤动病人外周血中的表达及其临床意义。方法:选取心房颤动病人139例作为心房颤动组(房颤组),选取同期窦性心律的健康体检者105名作为对照组。采用酶联免疫吸附试验检测2组血清中NFATc1、MAPK水平,Western blotting检测外周血单个核细胞中CTGF的表达。比较2组受试者血生化指标及心脏彩超检查指标。分析NFATc1、MAPK与左心室射血分数(LVEF)、左心房内径(LAD)的相关性,探讨心房颤动发病的危险因素。结果:房颤组丙氨酸氨基转移酶、天门冬氨酸氨基转移酶、NFATc1、MAPK、CTGF水平及LAD均高于对照组(P<0.05~P<0.01),LVEF明显低于对照组(P<0.01)。Pearson相关分析显示,血清NFATc1、MAPK水平与LVEF均呈明显负相关关系(r=-0.195、-0.189,P<0.01),与LAD呈明显正相关关系(r=0.288、0.244,P<0.01)。二元logistics回归分析结果显示,NFATc1、MAPK水平升高及LAD增大均为心房颤动发病的危险因素(P<0.01)。结论:心房颤动病人血清中NFATc1、MAPK、CTGF水平的升高可能与心肌纤维化有关。