期刊文献+
共找到11篇文章
< 1 >
每页显示 20 50 100
基于线性荧光探针对T4 DNA连接酶的活性分析 被引量:3
1
作者 刘斌 羊小海 +1 位作者 王柯敏 谭蔚泓 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2010年第3期463-467,共5页
利用线性荧光探针作为核酸连接反应的模板和信号分子,通过实时监测荧光信号的降低来表征连接产物的生成过程,从而建立了一种连续、简单且特异性高的T4 DNA连接酶活性分析的新方法,检出限可达1.2 U/mL;同时,该方法还可用于快速考察金属... 利用线性荧光探针作为核酸连接反应的模板和信号分子,通过实时监测荧光信号的降低来表征连接产物的生成过程,从而建立了一种连续、简单且特异性高的T4 DNA连接酶活性分析的新方法,检出限可达1.2 U/mL;同时,该方法还可用于快速考察金属离子和化学药物对酶促反应的影响.实验结果表明,该法不仅为灵敏、实时监测核酸连接反应提供了一种简便快捷的非同位素分析方法,也为开展核酸连接酶活性分析、反应动力学机制探讨和药物快速筛选提供了一种新技术. 展开更多
关键词 线性荧光探针 t4dna连接酶 实时监测
下载PDF
T_4 DNA连接酶介导的5’RACE法克隆大鼠Nor 1全长cDNA 被引量:2
2
作者 银巍 黄奕俊 +3 位作者 苏兴文 赵灵芝 邱鹏新 颜光美 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期317-321,共5页
目的:克隆75AEST全长cDNA序列。方法:抽提在25mmol/L KCl条件下培养7d的大鼠小脑颗粒神经元的总RNA后,用DNA连接酶介导的5’RACE法克隆75A表达序列标签(EST)cDNA5’端未知序列,其产物亚克隆到pGEM-Teasy后进行序列测定以及同源性分性。... 目的:克隆75AEST全长cDNA序列。方法:抽提在25mmol/L KCl条件下培养7d的大鼠小脑颗粒神经元的总RNA后,用DNA连接酶介导的5’RACE法克隆75A表达序列标签(EST)cDNA5’端未知序列,其产物亚克隆到pGEM-Teasy后进行序列测定以及同源性分性。结果:首轮5’RACE扩增出2.5kb序列后,75A EST鉴定为神经来源孤儿受体1(Nor1)基因的部分序列;再经过二次轮5’RACE,我们首次克隆Nor-1的全长cDNA序列。结论:T_4DNA连接酶介导的5’RACE是一种效率较高的克隆mRNA5’端未知序列的好方法,为进一步研究Nor1在小脑颗粒神经元存活或分化过程中的作用奠定基础。 展开更多
关键词 t4dna连接酶 5’cdna末端快速扩增法 Nor1 小脑 神经元
下载PDF
融合蛋白Trx-T4 DL可溶性表达、纯化与其生物活性应用 被引量:2
3
作者 付大伟 陈启蒙 徐伟 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2018年第7期83-89,96,共8页
构建含SUMO、IF2、GST、Nus A、Msy B、Trx和MBP融合标签的重组表达载体,转化到大肠杆菌E.coli Transetta(DE3)中进行自诱导(auto-induction,AI)表达,以提高T4 DNA连接酶(T4 DL)的表达产量。通过磁珠法检测融合蛋白的可溶性表达情况,10%... 构建含SUMO、IF2、GST、Nus A、Msy B、Trx和MBP融合标签的重组表达载体,转化到大肠杆菌E.coli Transetta(DE3)中进行自诱导(auto-induction,AI)表达,以提高T4 DNA连接酶(T4 DL)的表达产量。通过磁珠法检测融合蛋白的可溶性表达情况,10%SDS-PAGE电泳结果显示,重组菌Transetta(DE3)(p NBEVII-T4 DL)诱导表达的可溶性融合蛋白Trx-T4 DL的产量最多,经诱导培养条件优化后,Trx-T4 DL的可溶性大幅度提高,确定了最佳诱导条件为30℃、装瓶量50 m L/250 m L、接种量2‰、p H7。分别用镍柱和Mag Ni磁珠纯化重组菌破碎后上清中的融合蛋白Trx-T4 DL,结果显示后者纯化效率更高,最终获得的融合蛋白浓度为1700.462 mg/L。与其他公司T4 DL活性进行比较,检测其酶活性约为500 U/μL,并使其成功应用于低背景重组克隆载体构建中,为融合蛋白Trx-T4 DL的生产及应用提供理论基础。 展开更多
关键词 t4dna连接酶 融合标签 自诱导 磁珠法 纯化 低背景克隆载体 连接
下载PDF
条纹斑竹鲨鱼再生肝组织cDNA质粒文库的构建和鉴定 被引量:6
4
作者 赵艳景 胡亚楠 +5 位作者 刘睿 王颖 余江河 叶波平 王旻 吴梧桐 《高技术通讯》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期82-86,共5页
建立了鲨鱼肝脏的部分切除模型,获得了再生24h的鲨鱼肝组织,分离了再生肝组织的总RNA,纯化了mRNA,利用含BamHI酶切位点的Oligo(dT)16为引物合成cDNA第一链,通过末端转移酶在cDNA第一链3'末端加入Oligo(dC)尾,进而以Oligo(dT)16和含H... 建立了鲨鱼肝脏的部分切除模型,获得了再生24h的鲨鱼肝组织,分离了再生肝组织的总RNA,纯化了mRNA,利用含BamHI酶切位点的Oligo(dT)16为引物合成cDNA第一链,通过末端转移酶在cDNA第一链3'末端加入Oligo(dC)尾,进而以Oligo(dT)16和含HindIII酶切位点的Oligo(dG)10为引物,通过LD-PCR (long- distance-PCR)方法合成双链cDNA,将双链cDNA经BamHI和HindIII双酶切,通过T4DNA连接酶连接到经相同酶切的pUC19载体后构建成cDNA文库.对文库质量的分析结果表明,通过本方法构建的鲨鱼再生肝组织cDNA文库容量至少为4.92×105个/μg dscDNA,重组率达96.7%.对随机提取30个克隆的质粒进行分析,获得了其中25个插入片段的序列,未见重复序列,经与GenBank和dbEST数据库比对分析发现新基因在其中占较大的比例(76%).鲨鱼再生肝组织cDNA文库的成功构建为进一步通过差异显示技术筛选、克隆肝再生过程中差异表达的相关功能基因奠定了一个良好的基础. 展开更多
关键词 肝组织 鲨鱼 构建 质粒文库 cdna第一链 t4dna连接酶 cdna文库 GENBANK 鉴定 斑竹 条纹 ESt数据库 差异显示技术 酶切位点 末端转移酶 总RNA mRNA 分析结果 重复序列 比对分析 功能基因 差异表达 再生过程 双酶切 库容量
下载PDF
二(2-苯并咪唑亚甲基)胺合锰(Ⅱ)配合物水解切割DNA 被引量:5
5
作者 周庆华 杨频 《无机化学学报》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2005年第7期960-964,共5页
本文合成并表征了二(2鄄苯并咪唑亚甲基)胺合锰髤配合物。我们利用凝胶电泳实验研究,发现该配合物在近生理条件下,能有效地切割双链pBR322DNA。通过采用在反应体系中加入自由基清除剂,无氧操作实验,脱水丙二醛产物分析,以及T4DNA连接酶... 本文合成并表征了二(2鄄苯并咪唑亚甲基)胺合锰髤配合物。我们利用凝胶电泳实验研究,发现该配合物在近生理条件下,能有效地切割双链pBR322DNA。通过采用在反应体系中加入自由基清除剂,无氧操作实验,脱水丙二醛产物分析,以及T4DNA连接酶连接实验等方法,确认该切割反应是通过水解途径进行的。进一步地,我们对切割反应进行了较详细的动力学研究,求出其催化速率常数Kcat为0.72±0.02h-1(pH=8,37℃)。 展开更多
关键词 二(2-苯并咪唑亚甲基)胺 锰(Ⅱ)配合物 水解 pBR322dna t4dna连接酶 自由基清除剂 催化速率常数 切割反应 动力学研究 实验研究 凝胶电泳 生理条件 反应体系 操作实验 产物分析 丙二醛
下载PDF
C_(60)/Cu^(2+)影响质粒DNA构象的复合效应研究
6
作者 李佳 林燕 +2 位作者 李准洁 李正 梁勇 《江汉大学学报(自然科学版)》 2012年第5期80-84,共5页
碳纳米材料的毒性效应日益受到广泛关注,通过比较研究多种非光催化条件下,富勒烯(C60)/Cu2+共存时对质粒DNA构象影响的复合作用,借以评估碳纳米材料的毒性效应。实验结果显示在非光催化条件下,C60/Cu2+可显著诱导DNA构象从超螺旋DNA转... 碳纳米材料的毒性效应日益受到广泛关注,通过比较研究多种非光催化条件下,富勒烯(C60)/Cu2+共存时对质粒DNA构象影响的复合作用,借以评估碳纳米材料的毒性效应。实验结果显示在非光催化条件下,C60/Cu2+可显著诱导DNA构象从超螺旋DNA转变成开环DNA,并且这种剪切效应随C60和Cu2+浓度的升高而增强;断裂后的DNA片段可重新被T4DNA连接酶连接成环状DNA,这说明C60/Cu2+的剪切位点为磷酸二酯键。另外,多种活性氧捕获剂均不能有效消除C60/Cu2+对DNA的剪切作用,这与Cu2+在DNA裂解中起主要作用相关。上述研究结果表明在非光催化条件下,C60/Cu2+可有效诱导DNA断裂,具有明显的复合效应,其潜在的基因毒性值得关注。 展开更多
关键词 CU2+ C60 t4dna连接酶 ROS
下载PDF
Construction of Vectors to Express Foreign Protein within Potato Starch Grains 被引量:11
7
作者 李珺 马力通 姚新灵 《Agricultural Science & Technology》 CAS 2009年第4期72-74,共3页
[Objective] The aim is to study the construction of vectors expressing foreign protein in potato starch grains specifically, and provide some reference for solving industrialized core problem of high cost and low expr... [Objective] The aim is to study the construction of vectors expressing foreign protein in potato starch grains specifically, and provide some reference for solving industrialized core problem of high cost and low expression level of foreign protein. [Method] By using molecular biological techniques of RT-PCR and nested PCR, plant expression vector for the foreign protein locating in the potato starch grains was constructed. [ Result] Coding sequence ( GC20 ) of potato starch grains that was located and expressed by GBSSI promoter was cloned. Plant expression vector was screened out through connection, transformation and enzyme digestion identification. [ Conclusion] This result laid a foundation for further screening the foreign protein on the potato starch grains. 展开更多
关键词 Foreign protein Plant bioreactor GBSSI GC20 Starch grains
下载PDF
Construction and Identification of siRNA Expression Vector Targeting Nucleocapsid Protein N gene of PRRSV 被引量:1
8
作者 曹素芳 李明 +4 位作者 王岩 朱赞梅 刘长斗 唐桂芬 肖松云 《Agricultural Science & Technology》 CAS 2009年第4期171-174,共4页
[ Objective] The aim of this study was to investigate the construction and identification of siRNA expression vector targeting nucleocapsid protein N gone of PRRSV. [Method] Three siRNA oligonucleotides targeting nucl... [ Objective] The aim of this study was to investigate the construction and identification of siRNA expression vector targeting nucleocapsid protein N gone of PRRSV. [Method] Three siRNA oligonucleotides targeting nucleocapsid protein N gone sequence of PRRSV were designed or synthesized, and then inserted into CMV promoter downstream to clone into pSilencer 4,1 -CMV eukaryotic expression vector. The recombinant expression vector was identified by enzyme digestion and DNA sequencing. [ Result] The results showed that the siRNA interference recombinant plasmid vector pSilencer-N targeting nucleocapsid protein gone expression had been successfully constructed. [ Conclusion] This study lays a foundation for studies on the controlling PRRSV by RNA interference technique . 展开更多
关键词 PRRSV Nucleocapsid protein N SIRNA Expression vector
下载PDF
抗人膀胱癌单克隆抗体重链可变区基因的克隆及其原核表达载体的构建
9
作者 温儒民 张俊杰 +4 位作者 陈家存 薛松 胡书群 孙亚峰 裴冬生 《世界肿瘤杂志》 2005年第1期21-23,共3页
目的 克隆抗人膀胱癌单克隆抗体重链可变区基因(VH),并构建其原核表达载体。方法从能分泌抗人膀胱癌单克隆抗体的杂交瘤细胞BDI-1中提取总RNA,通过RT-PCR扩增出VHcDNA。用HindⅢ和XhoⅠ酶切纯化的RT-PCR产物和原核表达载体pET28a(+),... 目的 克隆抗人膀胱癌单克隆抗体重链可变区基因(VH),并构建其原核表达载体。方法从能分泌抗人膀胱癌单克隆抗体的杂交瘤细胞BDI-1中提取总RNA,通过RT-PCR扩增出VHcDNA。用HindⅢ和XhoⅠ酶切纯化的RT-PCR产物和原核表达载体pET28a(+),在T4DNA连接酶作用下室温连接。重组质粒经酶切鉴定,阳性克隆测序并进行序列分析。结果扩增出VHcDNA片段,大小约为370bp,重组质粒的酶切鉴定结果与预期一致。VH基因序列长度为366bp,编码122个氨基酸。VH基因属于鼠免疫球蛋白重链11亚类。结论成功克隆出抗人膀胱癌单克隆抗体重链可变区基因,并成功构建其原核表达载体。 展开更多
关键词 重链可变区基因 原核表达载体 单克隆抗体 人膀胱癌 Rt-PCR扩增 t4dna连接酶 免疫球蛋白重链 cdna片段 重组质粒 BDI-1 杂交瘤细胞 PCR产物 HindⅢ 总RNA 酶切鉴定 序列分析 克隆测序 鉴定结果 序列长度 H基因 氨基酸
下载PDF
分子信标用于核酸连接过程的实时监测 被引量:9
10
作者 唐志文 王柯敏 +7 位作者 谭蔚泓 李军 刘凌凤 郭秋平 孟祥贤 黄杉生 李杜 罗维方 《科学通报》 EI CAS CSCD 北大核心 2003年第6期567-570,共4页
建立了一种新的核酸连接实时监测方法, 利用分子信标作为核酸连接反应的DNA模板和检测分子, 在核酸分子连接的同时检测荧光信号. 实时、准确地获取核酸连接过程信息, 为核酸连接酶分析、核酸连接动力学过程研究提供全新、有效的手段, ... 建立了一种新的核酸连接实时监测方法, 利用分子信标作为核酸连接反应的DNA模板和检测分子, 在核酸分子连接的同时检测荧光信号. 实时、准确地获取核酸连接过程信息, 为核酸连接酶分析、核酸连接动力学过程研究提供全新、有效的手段, 也为深入研究核酸连接酶与核酸分子间的相互作用提供了新的思路与技术. 在此基础上建立了T4 DNA连接酶分析方法, 其线性响应范围为2.3(10-4 ~ 0.23 U/mL, 检测下限为2.3(10-4 U/mL. 展开更多
关键词 分子信标 核酸连接 实时监测 t4dna连接酶
原文传递
CD147 siRNA表达载体的构建与鉴定 被引量:4
11
作者 陈翔 颜克香 +1 位作者 谢红付 李吉 《中华皮肤科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期368-370,共3页
目的构建CD147siRNA表达载体,分析CD147在皮肤肿瘤浸润和转移中的作用机制。方法根据基因库上的CD147cDNA序列,设计并合成两端含有酶切位点的64个碱基的寡核苷酸链。寡核苷酸链退火后用T4DNA连接酶连接到线性化的pSUPER质粒中,并对重组... 目的构建CD147siRNA表达载体,分析CD147在皮肤肿瘤浸润和转移中的作用机制。方法根据基因库上的CD147cDNA序列,设计并合成两端含有酶切位点的64个碱基的寡核苷酸链。寡核苷酸链退火后用T4DNA连接酶连接到线性化的pSUPER质粒中,并对重组质粒(命名为pSUPER/CD147siRNA)进行酶切、PCR及测序鉴定。结果PCR扩增片段与预期结果相符,双酶切证实CD147siRNA表达载体克隆构建成功,插入片段测序结果与合成的siRNA结果一致。结论成功构建CD147siRNA表达载体,CD147可为治疗肿瘤开辟新途径。 展开更多
关键词 CD147 siRNA 表达载体 鉴定 t4dna连接酶 PCR扩增片段 Cdna序列 寡核苷酸 浸润和转移 作用机制 皮肤肿瘤 重组质粒 插入片段 基因库 酶切 R质粒 线性化 合成 测序
原文传递
上一页 1 下一页 到第
使用帮助 返回顶部