糖尿病患者血液中tau磷酸化和总tau蛋白水平及PP2A活性与糖尿病后认知功能障碍研究

目的探讨糖尿病患者血液中tau磷酸化和总tau蛋白水平及PP2A活性与糖尿病后认知功能障碍的关系。方法选取我院2014年12月至2016年12月的80例糖尿病患者进行研究,作为试验组,另选取神经内科患者20例,作为对照组,取2组的静脉血20m L,通过放射免疫法检测tau磷酸化和总tau蛋白水平,通过免疫共沉淀法检测PP2A活性,并对患者的认知功能障碍进行分析,分析糖尿病患者血液中tau磷酸化和总tau蛋白水平及PP2A活性与糖尿病后认知功能障碍的关系。结果试验组的tau磷酸化和总tau蛋白水平明显高于对照组,PP2A活性水平、认知功能障碍评分明显低于对照组,具有统计学意义(P<0.05);Pearson相关分析显示,tau磷酸化和总tau蛋白水平与认知功能障碍存在正相关(r=0.988,P<0.001;r=0.985,P<0.001),PP2A活性与认知功能障碍存在负相关(r=-0.982,P<0.001)。结论糖尿病患者血液中tau磷酸化和总tau蛋白水平及PP2A活性与糖尿病后认知功能障碍有关,可为进一步治疗提供一定依据。

microRNA⁃9⁃5p通过抑制Tau磷酸化参与阿尔茨海默病的机制

目的探讨microRNA⁃9⁃5p(miR⁃9⁃5p)在阿尔茨海默病(AD)小鼠模型海马和血浆中表达情况及其过表达对Tau磷酸化的影响。方法选择雄性APPswe/PS1dE9(APP/PS1)转基因小鼠和WT C57BL/6(WT)小鼠作为研究对象。将APP/PS1小鼠和WT小鼠各随机分为3组小鼠随机分为3组:Lv⁃WT组、Lv⁃con组和Lv⁃miR⁃9⁃5p组,每组18只。将Lv⁃miR⁃9⁃5p(4×105转导单位[TU])或Lv⁃con(4×105 TU)缓慢注射到Lv⁃miR⁃9⁃5p组和Lv⁃con组的双侧海马中。注射后30 d进行行为测试或电生理实验。通过微阵列和定量实时PCR分析miRNA表达,免疫印迹和免疫荧光分析AT8蛋白表达。结果与Lv⁃con组小鼠相比,Lv⁃miR⁃9⁃5p组小鼠的辨别指数、关联条件恐惧停止、暗示条件恐惧停止、跨平台次数和目标象限时间均显著增加(P<0.05),跨平台时间显著降低(P<0.05)。Lv⁃miR⁃9⁃5p组小鼠海马中的突触棘密度、蘑菇刺的百分比较Lv⁃con组显著增加(P<0.05),并且Lv⁃miR⁃9⁃5p组小鼠表现出更高的长期增强幅度。与Lv⁃WT组相比,Lv⁃con组小鼠海马中AT8水平及AT8和γH2AX共定位数量显著升高(P<0.05)。Lv⁃miR⁃9⁃5p组小鼠海马中AT8较Lv⁃con组显著降低(P<0.05)。结论miR⁃9⁃5p在AD发病机制中发挥有益作用,其保护机制涉及减少异常Tau磷酸化和DNA损伤。

鼠李糖乳杆菌对老年小鼠术后海马区小胶质细胞激活及Tau蛋白磷酸化的影响

【目的】探讨术前益生菌鼠李糖乳杆菌(LGG)灌胃对麻醉手术老年小鼠海马区小胶质细胞及Tau磷酸化的影响。【方法】18月龄C57BL/6J小鼠30只随机分为3组,10只/组:对照组,麻醉手术组,麻醉手术+鼠李糖乳杆菌组。生理盐水/LGG 109CFU 150μL灌胃,每日1次,连续20 d后接受异氟醚麻醉+剖腹探查手术,术后12 h免疫荧光染色检测海马区小胶质细胞激活状态,ELISA检测IL-6的浓度变化,Western blot检测Tau蛋白磷酸化位点Tau-pS202/pT205和total Tau蛋白表达变化。【结果】对照组海马区小胶质细胞呈静息状态,炎症因子IL-6浓度为(82.08±12.07)pg/mL。与对照组相比,麻醉手术组海马区小胶质细胞活化增生,胞体变大,突起缩短变粗,炎症因子IL-6上升至(123.7±5.72)pg/mL(P=0.000),磷酸化Tau-pS202/pT205蛋白表达量也明显增加(P=0.002)。而与麻醉手术组相比,麻醉手术+LGG组海马区小胶质细胞增生肥大不明显,炎症因子IL-6分泌减少至(96.68±9.59)pg/mL(P=0.008),磷酸化Tau-pS202/pT205蛋白表达量明显下降(P=0.002)。而3组total Tau蛋白表达水平差异无统计学意义。【结论】术前服用益生菌鼠李糖乳杆菌减轻麻醉手术导致的老年小鼠海马区小胶质细胞活化、炎症因子分泌增加、以及Tau蛋白磷酸化水平增加。

中药复方金思维含药血清调控PI3K/AKT/GSK-3β信号通路对拟阿尔茨海默病细胞模型tau蛋白磷酸化的影响

目的探讨中药复方金思维含药血清对拟阿尔茨海默病(Alzheimer disease,AD)细胞模型tau蛋白磷酸化的影响及作用机制。方法采用Aβ25-35诱导人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)建立拟AD细胞模型,CCK-8法筛选金思维含药血清、PI3K/AKT/GSK-3β通路抑制剂LY294002最佳作用浓度。将SH-SY5Y细胞分为正常组、模型组、金思维低剂量组、金思维中剂量组、金思维高剂量组以及LY294002组。蛋白免疫印迹法检测金思维含药血清对SH-SY5Y细胞tau蛋白磷酸化以及PI3K/AKT/GSK-3β通路相关蛋白的影响。结果20μmol/L Aβ25-35作用于SH-SY5Y细胞24 h可建立最佳拟AD细胞模型。相对于正常组,模型组P-AKT显著降低(P<0.05),P-tau显著升高(P<0.01)。相对于模型组,金思维低剂量含药血清组PI3K的表达量显著升高(P<0.05),高剂量含药血清组GSK-3β的表达量显著降低(P<0.05),中剂量和高剂量含药血清组P-tau的表达量显著降低(P<0.01、P<0.001)。加入通路抑制剂LY294002后,P-PI3K、PI3K、P-AKT、AKT、GSK-3β、P-tau蛋白的表达量较模型组差异无统计学意义(P>0.05)。结论金思维含药血清可降低拟AD细胞模型tau蛋白磷酸化水平,其机制可能与PI3K/AKT/GSK-3β通路的激活有关。

极长链饱和脂肪酸对人神经母细胞瘤细胞Tau蛋白磷酸化及膜流动性的影响

目的观察极长链饱和脂肪酸对人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y Tau蛋白磷酸化和膜流动性的影响,探讨其在阿尔茨海默病(AD)发病中的作用。方法取对数生长期的人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y,随机分为对照组、C220组、C240组,对照组细胞常规培养,C220组、C240组细胞分别加入含10μmol·L^(-1)极长链饱和脂肪酸C220、C240的培养液,培养24 h后收集细胞,采用Western blot法检测各组细胞中总Tau蛋白、丝氨酸396位点磷酸化Tau蛋白(p-Tau-ser396)、糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)及GSK-3β丝氨酸9位点磷酸化蛋白(p-GSK-3β-Ser9)的表达水平;采用硫代巴比妥酸法测定各组细胞中丙二醛(MDA)水平;并采用荧光漂白恢复技术测定细胞膜荧光恢复率和扩散系数,评价细胞膜流动性。结果3组SH-SY5Y细胞总Tau蛋白水平比较差异无统计学意义(F=1.807,P>0.05)。3组SH-SY5Y细胞p-Tau-ser396水平比较差异有统计学意义(F=18.397,P<0.05);其中C220组和C240组SH-SY5Y细胞p-Tau-ser396水平显著高于对照组(P<0.05),C240组SH-SY5Y细胞p-Tau-ser396水平显著高于C220组(P<0.05)。3组SH-SY5Y细胞GSK-3β蛋白水平比较差异无统计学意义(F=0.351,P>0.05)。3组SH-SY5Y细胞p-GSK-3β-Ser9水平比较差异有统计学意义(F=13.330,P<0.05);其中C220组、C240组SH-SY5Y细胞p-GSK-3β-ser9水平显著低于对照组(P<0.05),C220组与C240组SH-SY5Y细胞p-GSK-3β-ser9水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。C240组SH-SY5Y细胞MDA水平显著高于对照组和C220组(P<0.05);对照组与C220组SH-SY5Y细胞MDA水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。对照组、C220组、C240组SH-SY5Y细胞的荧光恢复率和扩散系数有降低趋势,但3组SH-SY5Y细胞的荧光恢复率和扩散系数比较差异无统计学意义(F=3.891、3.649,P>0.05)。结论极长链饱和脂肪酸C220、C240可促进Tau蛋白过度磷酸化,诱导细胞氧化损伤,对细胞膜流动性也有降低趋势,极长链饱和脂肪酸可能是引起AD发病的因素之一。

临床血清磷酸化Tau蛋白检测结果回顾及试剂盒分析

目的:对南京鼓楼医院检验科所开展的血清磷酸化Tau蛋白(p-Tau)检测结果进行回顾,并分析可能存在的问题,提供对该检测方法更加全面的认识。方法:收集已有的检测数据,对其进行疾病诊断分类,并观察阿尔茨海默病、认知减退、痴呆及其它各类疾病下的p-Tau阳性率。利用细胞与脑组织类参照样品对该方法试剂盒的性能进行初步验证。结果:共包括546例患者数据。其中诊断为阿尔茨海默病的患者p-Tau阳性率为16.7%,诊断为痴呆和认知功能减退的患者阳性率为23.7%、12.1%。试剂盒对梯度稀释于血清中的参照品不能有效显示线性,不能有效检测出细胞与脑组织参照样品中的p-Tau,对手工加入临床血清标本中的参照品也不能提供预期的叠加值,显示较差的回收率。结论:该试剂盒对p-Tau检测的阳性率较低,其准确性仍需要改进并提高。

安神定志方对阿尔茨海默病细胞模型miR-103a-3p及Tau蛋白磷酸化的影响

目的观察安神定志方对阿尔茨海默病细胞模型miR-103a-3p及其介导的Tau蛋白磷酸化的影响,探讨其可能作用机制。方法采用β淀粉样蛋白_(25-35)诱导PC12细胞构建阿尔茨海默病体外模型,将细胞分为空白组、模型组、安神定志方组、过表达组和安神定志方+过表达组(联合组),采用安神定志方含药血清和miR-103a-3p模拟剂进行干预。流式细胞仪检测细胞凋亡,试剂盒检测细胞上清液乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性及丙二醛(MDA)含量,RT-qPCR检测细胞miR-103a-3p mRNA表达,Western blot检测细胞脑源性神经营养因子(BDNF)、酪氨酸激酶受体B(TrkB)、p-TrkB、Tau、p-Tau蛋白表达。结果与空白组比较,模型组PC12细胞各时点细胞活力明显降低,凋亡率明显增加,LDH活性和MDA含量明显增加,SOD和GSH-Px活性明显降低,miR-103a-3p mRNA表达明显升高,p-Tau蛋白表达明显升高,BDNF、p-TrkB蛋白表达明显降低(P<0.01);与模型组比较,安神定志方组和联合组PC12细胞各时点细胞活力明显升高,凋亡率明显降低,LDH活性和MDA含量明显降低,SOD和GSH-Px活性明显增加,miR-103a-3p mRNA表达明显降低,p-Tau蛋白表达明显降低,BDNF、p-TrkB蛋白表达明显升高(P<0.05,P<0.01)。结论安神定志方能通过下调miR-103a-3p表达激活BDNF/TrkB信号通路,从而抑制Tau蛋白磷酸化,发挥对PC12细胞的保护作用。

枸杞多糖对阿尔茨海默病合并2型糖尿病小鼠学习记忆能力及脑内Tau蛋白磷酸化水平的影响

目的探讨枸杞多糖(LBP)对阿尔茨海默病(AD)合并2型糖尿病(T2DM)小鼠学习记忆能力及脑内Tau蛋白磷酸化水平的影响。方法5月龄C57BL/6J小鼠16只随机分为对照组、T2DM组,同月龄APP/PS1小鼠32只随机分为AD组、AD+T2DM组、LBP组(100 mg·kg^(-1))、多奈哌齐组(0.75 mg·kg^(-1)),每组各8只。T2DM组、AD+T2DM组、LBP组、多奈哌齐组小鼠高糖高脂饲料联合腹腔注射链脲佐菌素建立T2DM模型。治疗组以相应剂量药物干预,其余组给予等体积生理盐水。连续给药3个月后,Morris水迷宫实验评价各组小鼠学习记忆能力,HE染色观察各组小鼠脑组织细胞形态变化,Western Blot检测各组小鼠脑内不同位点磷酸化Tau蛋白及GSK3β蛋白的表达水平。结果LBP可缩短AD+T2DM模型小鼠逃避潜伏期、第一次穿越平台时间(P<0.05,P<0.05),增加穿越平台次数及目标象限停留时间(P<0.01,P<0.01),改善大脑皮层神经元形态损伤,降低皮层及海马Tau蛋白Ser404、Ser396及Ser199位点磷酸化水平(P<0.05,P<0.05,P<0.05;P>0.05,P<0.01,P<0.01)和GSK-3β及Tyr216位点磷酸化水平(P>0.05,P<0.01;P<0.01,P<0.01),提高GSK-3β蛋白Ser9位点磷酸化水平(P<0.01,P<0.05)。结论枸杞多糖可改善AD+T2DM模型小鼠的学习记忆能力,降低脑内Tau蛋白的磷酸化水平。

老年2型糖尿病患者血清外泌体中神经元特异性烯醇化酶和磷酸化tau的表达及其与继发轻度认知功能障碍的相关性

目的检测老年2型糖尿病(T2DM)患者血清外泌体神经元特异性烯醇化酶(NSE)和磷酸化tau(P-tau)的表达,并探讨其与患者发生轻度认知功能障碍(MCI)的相关性。方法选取2019年1月至2020年12月于联勤保障部队第921医院就诊的114例老年T2DM患者为研究对象(研究组),另选取同期健康体检者100名为对照组。采用ExoQuick-TC提取研究对象血清源性外泌体。采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测研究对象血清源性外泌体中NSE和P-tau的表达。使用简易认知状态评价量表(MMSE)和蒙特利尔认知评估量表(MoCA)对研究对象进行认知评估。采用SPSS 19.0统计软件进行数据分析。根据数据类型,分别采用t检验或χ^(2)检验进行组间比较。应用Spearman秩相关分析血清外泌体中NSE及P-tau表达水平与认知受损严重程度的相关性。应用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清源性外泌体中NSE和P-tau表达水平对MCI的预测价值。结果研究组老年T2DM患者出现认知受损的比例高于对照组;MMSE和MoCA分值明显低于对照组;发生MCI的比例高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。根据MoCA分值将研究组患者分为MCI组(n=71)和非MCI组(n=43),MCI组血清外泌体中NSE和P-tau表达分别为(13.27±1.61)μg/L和(17.14±2.45)pg/ml,明显高于非MCI组的(10.86±1.43)μg/L和(14.49±2.25)pg/ml(t=5.728,6.154;P<0.05)。相关性分析显示,老年T2DM患者血清外泌体中NSE和P-tau表达水平与MMSE(r=-0.547,-0.562;P<0.05)和MoCA分值(r=-0.583,-0.597;P<0.05)存在负相关。ROC曲线分析结果显示,血清外泌体中NSE表达预测老年T2DM患者发生MCI的曲线下面积(AUC)为0.729,血清外泌体中P-tau表达预测老年T2DM患者发生MCI的AUC为0.741,而两者联合预测老年T2DM患者发生MCI的AUC为0.827,高于NSE和P-tau单个指标的预测价值(t=3.836,3.478;P<0.05)。结论血清外泌体中高表达的NSE和P-tau与老年T2DM患者MCI的发生密切相关,二者联合的预测价值更高。

头顶一颗珠对AD模型大鼠脑海马组织Tau蛋白磷酸化及突触发育的影响

目的 探索头顶一颗珠(TTM)水煎液对激活糖原合酶激酶-3β(GSK-3β)诱导的阿尔茨海默病(AD)模型大鼠脑海马Tau蛋白磷酸化和突触发育的影响。方法 将♂4月龄50只SD大鼠随机均分为5组,分别为假手术组、AD模型组、TTM治疗组(低、中、高剂量组),TTM水煎液大鼠灌胃7d,假手术组和模型组灌饮用水7d,灌胃d2开始Morris水迷宫训练,5d后找出所有d5中能在15s内找到隐藏平台的模型组和治疗组大鼠,侧脑室注射各5μL的GF-109203X(GFX,PKC特异性抑制剂)和渥曼青霉素(wortmannin,WT,PI3K特异性抑制剂),浓度各为100μmol·L^(-1),假手术组同位置注射2%DMSO 10μL。24h后行水迷宫测试。免疫印迹和免疫组化技术检测脑海马中Tau蛋白磷酸化水平,及其相关GSK-3β激酶信号通路各蛋白活性和突触相关蛋白表达水平;尼氏染色法检测海马神经元尼氏小体变化情况;高尔基染色法检测海马神经突触发育、树突棘数量及形态变化。结果 水迷宫检测发现,TTM能改善大鼠空间学习记忆障碍;免疫印迹检测显示,模型组脑海马GSK-3β活性上调,进而升高Tau蛋白多个位点磷酸化水平;而低、中剂量TTM增加PKC和Akt活性,从而抑制下游激酶GSK-3β活性,导致Tau蛋白磷酸化水平下降。免疫组化结果显示,TTM能降低Tau蛋白磷酸化水平。免疫印迹结果还显示,TTM能提高模型大鼠脑海马突触相关蛋白Synapsin-1、Synaptophysin、GluR-1表达水平;尼氏染色提示AD模型鼠脑海马神经元尼氏小体数量减少,用药后明显增多。中、高剂量TTM增加模型组海马神经元树突数量、复杂性及树突棘密度。结论 TTM可有效改善GSK-3β活性升高所引起的大鼠空间认知功能障碍,其机制可能是通过作用于GSK-3β信号通路,下调GSK-3β活性,进而抑制Tau蛋白过度磷酸化,同时促进神经元和突触发育起到保护作用。

雷帕霉素通过抑制mTOR活性降低铝引起的磷酸化tau蛋白沉积

目的研究雷帕霉素是否可以通过抑制mTOR活性降低铝暴露引起的p-tau蛋白的沉积。方法24只SD大鼠随机分为四组:对照组、低剂量麦芽酚铝组、中剂量麦芽酚铝组和高剂量麦芽酚铝组。Morris水迷宫检测大鼠的学习记忆能力;Western blot检测海马组织中p-tau蛋白、p-mTOR和PSD95的变化情况;PC12细胞分为对照组、铝处理组、铝+溶剂对照组、铝+雷帕霉素100 nmol组、铝+雷帕霉素300 nmol组和铝+雷帕霉素500 nmol组,Western blot检测蛋白变化情况。12只大鼠分为铝处理组和铝+雷帕霉素组,Morris水迷宫检测大鼠的学习记忆能力;Western blot检测海马组织中p-tau蛋白、p-mTOR和PSD95的变化情况。结果水迷宫实验中,铝处理组大鼠的逃避潜伏期均比对照组延长,中、高剂量麦芽酚铝组逃避潜伏期明显低于对照组((35.24±4.78)、(25.92±8.80)vs(20.32±6.04),P<0.001);铝处理组大鼠的目标象限停留时间和穿越平台次数均随着铝剂量的升高而减少(P<0.05)。与对照组比较,铝处理组大鼠的海马组织中,p-mTOR/mTOR和p-tau/tau的水平均明显增高(P<0.05);PSD95蛋白明显降低(P<0.05)。在PC12细胞中,与单独铝处理组相比,雷帕霉素干预组的p-mTOR/mTOR和p-tau/tau的表达均有所减少,尤其在雷帕霉素300 nmol和雷帕霉素500 nmol干预组中,p-tau可恢复至正常对照组水平,PSD95也明显回升(P<0.05)。与单独铝处理组大鼠比较,雷帕霉素干预组的大鼠学习记忆能力明显改善,同时海马组织中p-mTOR/mTOR和p-tau/tau的表达均减少,PSD95也明显回升。结论mTOR磷酸化激活参与了铝引起的p-tau蛋白过度沉积,雷帕霉素可以通过抑制mTOR的磷酸化活性降低磷酸化tau蛋白的沉积。

抑制JNK磷酸化参与褪黑素对花萼海绵诱癌素引起的tau蛋白过度磷酸化的保护机制

目的探讨花萼海绵诱癌素(CA)在成神经瘤细胞(N2a)引起tau蛋白过度磷酸化的机制,及褪黑素对其是否具有保护作用。方法小鼠成神经瘤细胞(N2a)给予CA 5 nmol·L-1处理,或同时给予褪黑素50 mol·L-1,或同时给予维生素E(Vit E)50 mol·L-1处理12 h,用免疫印迹技术检测tau蛋白在Ser422位点的磷酸化水平,磷酸化c-jun氨基端激酶(p-JNK)和磷酸化丝裂原活化蛋白激酶激酶(p-MKK4)的含量,免疫荧光检测p-JNK含量和分布,荧光法测定细胞内丙二醛(MDA)含量,32P-特异底物标记技术检测p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)活性。结果 CA在N2a细胞引起tau蛋白Ser422位点磷酸化水平显著升高(1.70±0.19,1.0,P<0.01),褪黑素拮抗CA引起的tau蛋白Ser422位点过度磷酸化(0.98±0.12,1.70±0.19,P<0.01);CA引起细胞内MDA含量升高(μmol·g-1蛋白,0.241±0.006,0.141±0.006,P<0.01),褪黑素和Vit E均可抑制CA引起的细胞内MDA含量升高(μmol·g-1蛋白,0.172±0.004,0.193±0.005,0.241±0.006,P<0.01);CA不改变p38MAPK活性和蛋白水平,但引起p-JNK含量升高(1.91±0.27,1,P<0.01)和p-MKK4(1.81±0.09,P<0.01)含量升高,褪黑素抑制CA引起的p-JNK含量升高(1.11±0.15,1.91±0.27,P<0.01)和p-MKK4(1.14±0.06,1.81±0.09,P<0.01)含量升高;JNK抑制剂SP600125可抑制CA诱导的tau蛋白过度磷酸化,MKK4磷酸化抑制剂地昔帕明可消除CA诱导的JNK磷酸化和tau蛋白过度磷酸化。结论褪黑素抑制JNK磷酸化参与其对CA诱导的tau蛋白Ser422位点过度磷酸化的预防作用。

兴奋性氨基酸受体的激活介导冷水应激诱导的tau蛋白磷酸化(英文)

为探讨兴奋性神经传递系统是否参与冷水应激引起的tau蛋白磷酸化,将小鼠于4℃冷水应激5min.采用免疫印迹和免疫组织化学方法分析应激后脑内c-fos和磷酸化tau蛋白的表达情况;运用HPLC检测冷水应激后小鼠脑内兴奋性或抑制性神经递质的变化;同时分析兴奋性氨基酸受体和L-型钙通道拮抗剂预处理后冷水应激小鼠脑内磷酸化tau蛋白的水平.冷水应激后1h,海马内磷酸化tau蛋白的水平显著升高,同时伴c-fos的染色增加.HPLC检测显示,兴奋性和抑制性神经递质呈现急剧上升而后又下降的趋势.冷水应激后15min,天冬氨酸和甘氨酸水平显著升高,1h后天冬氨酸、谷氨酸、牛磺酸和γ-氨基丁酸显著下降.NMDA受体拮抗剂MK-801(5mg/kg)和AMPA受体拮抗剂DNQX(0.5,5mg/kg)可显著抑制冷水应激引起的磷酸化tau蛋白水平的升高,代谢性谷氨酸受体拮抗剂MAP-4不影响tau蛋白的磷酸化,另外,L-型钙通道阻断剂尼莫地平可抑制冷水应激引起的磷酸化tau蛋白水平的升高.这些结果表明,冷水应激可影响兴奋性神经传递系统,通过离子型兴奋性氨基酸受体和异常神经激活来调节tau蛋白的磷酸化.兴奋性神经传递系统的激活在冷水应激诱导的海马tau蛋白的磷酸化中发挥作用.

葛根素对阿尔茨海默病模型大鼠嗅球内Tau蛋白过度磷酸化的影响

目的观察葛根素对阿尔茨海默病(AD)模型大鼠嗅球内tau蛋白磷酸化水平的影响,并探讨其可能的分子机制。方法 (1)将22只SD雄性大鼠随机分为正常对照组(n=6)、模型对照组A(n=8)、葛根素治疗组(n=8),采用免疫印迹法检测大鼠嗅球内tau-1、PS396和tau-5表达水平;(2)将20只SD雄性大鼠随机分为模型对照组B、葛根素小剂量组(40 mg·kg^(-1)·d^(-1))、葛根素中剂量组(80 mg·kg^(-1)·d^(-1))和葛根素大剂量组(160 mg·kg^(-1)·d^(-1)),每组5只。采用免疫印迹法检测大鼠嗅球内tau-1与PS396表达水平;(3)免疫印迹法检测正常对照组、模型对照组A、葛根素治疗组糖原合酶激酶-3β(GSK-3β)磷酸化水平。结果 (1)免疫印迹检测结果显示,模型对照组A大鼠嗅球内Tau-1相对表达(0.49±0.07)较正常对照组(0.85±0.03)低(P<0.01),葛根素治疗组Tau-1相对水平(0.58±0.03)较模型对照组A高(P<0.05),3组大鼠嗅球内Tau-5及PS396表达水平差异无统计学意义;(2)与模型对照组B(0.39±0.09)比较,葛根素小、中、大剂量组大鼠嗅球内tau-1相对表达[分别为(0.69±0.11),(0.55±0.11),(0.70±0.04)]均明显增强,葛根素小剂量组大鼠嗅球内PS396相对表达(0.36±0.07)明显低于模型对照组B(0.55±0.05),差异有统计学意义(P<0.01);(3)模型对照组A大鼠嗅球内PS396-GSK-3β/t GSK-3β水平(0.51±0.12)明显低于正常对照组(0.96±0.07),葛根素治疗组PS9-GSK-3β/t GSK-3β(0.62±0.03)较模型对照组A高(P<0.01)。结论葛根素可有效减缓AD模型大鼠嗅球内tau蛋白磷酸化水平增加,其作用机制可能与降低GSK-3β活性水平有关。

大鼠外伤性视神经损伤的闪光电生理特性和Tau蛋白及其磷酸化研究

目的:运用闪光视觉诱发电位(FVEP)技术检测外伤性视神经损伤(TON)大鼠视觉通路障碍的变化情况,探究TON大鼠视网膜及视神经中Tau及其磷酸化蛋白的变化。方法:将30只SD大鼠进行FVEP造模,1wk后构建TON模型,左眼进行视神经夹持损伤,右眼进行视神经暴露假手术。TON模型鼠分别于视神经夹持损伤后1、3、7、14、28d进行FVEP检测。FVEP检测完成后处死大鼠,分离左眼视网膜及视神经,并采用Western blot检测其中Tau及其Ser 396/Ser 404位点磷酸化蛋白的表达水平。结果:TON模型大鼠假手术眼出现典型的FVEP波形;相较于假手术眼,手术眼各检测时间点FVEP的N2波发生显著延迟,N2-P2波振幅发生大幅缩减,但视神经夹持损伤后各时间点N2波潜伏期延迟时间和N2-P2振幅缩减差异不明显。TON大鼠手术眼视网膜总Tau含量在夹持损伤1d后急剧下降,7d时短暂恢复后直至28d维持于略低于正常水平;pTau-Ser396/404的变化与总Tau的变化一致,其中Ser 396位点为Tau蛋白主要磷酸化位点。TON大鼠手术眼视神经总Tau含量逐渐增多,夹持损伤14d时达到高峰并维持至28d,pTau-Ser396/404的变化与总Tau的变化类似,7d时出现增长并抵达高峰,其中Ser 404位点为主要磷酸化位点。结论:FVEP的N2及P2相关指标可用于检测TON大鼠视觉功能障碍水平,TON大鼠视网膜与视神经Tau蛋白水平的变化截然不同,不同部位pTau-Ser396/404的变化跟随总Tau含量的变化而变化,但不同部位Tau蛋白主要改变的磷酸化位点不同。

β-淀粉样蛋白25～35和人参皂苷Rb1对神经干细胞分化过程中tau蛋白磷酸化水平的影响

背景:通过调节神经干细胞分化过程中的tau蛋白磷酸化水平可提高神经干细胞移植治疗阿尔茨海默病的效果。目的:观察β-淀粉样蛋白25～35和人参皂苷Rb1对神经干细胞分化过程中tau蛋白磷酸化水平的影响。方法:分离、培养新生大鼠海马神经干细胞,诱导第3代神经干细胞分化1周后,分别采用免疫荧光细胞化学和Western-blot检测Tau[pS396]、Tau[pS262]及GSK-3β[pTyr279,216]表达情况。结果与结论:正常神经干细胞分化过程中有Tau[pS396]和Tau[pS262]的表达,β-淀粉样蛋白25～35可以使Tau[pS396]、Tau[pS262]和GSK-3β[pT279/216]表达上调,而人参皂苷Rb1可以逆转β-淀粉样蛋白25～35的作用。提示β-淀粉样蛋白25～35和人参皂苷Rb1通过调节GSK-3β的活性对tau蛋白的磷酸化水平产生调控作用。

轻度认知障碍患者脑脊液中β-淀粉样蛋白42及磷酸化Tau蛋白的水平检测及意义

目的:探讨轻度认知障碍(MCI)患者脑脊液中β-淀粉样蛋白42(Aβ42)与磷酸化Tau蛋白(P-tau)水平变化及其意义。方法:采用ELISA法检测25例MCI患者和14例认知功能正常者脑脊液标本中Aβ42和P-tau水平,并对MCI患者脑脊液中P-tau和MMSE评分进行相关统计学分析。结果:MCI组脑脊液中Aβ42水平低于对照组,P-tau水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。简单相关分析及校正受教育程度后的偏相关分析显示MCI组脑脊液中P-tau水平与MMSE评分呈负相关(P<0.05)。结论:脑脊液中Aβ42和P-tau水平可能为MCI诊断提供依据。MCI患者中脑脊液P-tau水平可能与认知障碍的严重程度有关。

Tau蛋白过度磷酸化对突触后膜AMPA受体数量及功能的影响

目的 探讨大鼠Tau蛋白过度磷酸化对突触后膜AMPA受体数量及功能的影响.方法 原代培养新生SD大鼠海马神经元,将编码红色荧光蛋白DsRed的质粒（标记树突棘）和绿色荧光蛋白GFP标记的P301L突变的人类Tau蛋白基因共转染到5～7d的原代培养大鼠海马神经元内持续培养,编码DsRed的质粒和野生型GFP-Tau共转染为对照.以神经活细胞实时图像成像分析Tau蛋白易位过程.以免疫组化分别检测各组Tau蛋白的表达及AMPA受体数量改变.结果 野生型GFP-Tau蛋白组只出现在树突上,GFP-P301L突变组Tau蛋白广泛出现于树突棘上;与野生型组相比,GFP-P301L突变组Tau蛋白表达水平显著增加（P＜0.01）,AMPA受体数量显著减少（P＜0.01）.结论 Tau蛋白过度磷酸化可能通过显著减少AMPA受体数量,导致AMPA受体在突触后膜上的运输失常,造成认知功能的障碍.

山茱萸多糖对阿尔茨海默病模型大鼠认知能力和海马磷酸化-tau蛋白表达的影响

目的观察山茱萸多糖对阿尔茨海默病(AD)大鼠认知能力的影响及作用机制。方法 100只Wistar大鼠随机分为青年组、假手术组、模型组、多奈哌齐组、山茱萸多糖组各20只。采用D-半乳糖联合β-淀粉样蛋白(Aβ)1~40注射建立AD模型。水迷宫实验观察大鼠认知能力,免疫组化(SABC)法检测大鼠海马CA4区磷酸化tau(p-tau)蛋白表达量。结果药物干预后,山茱萸多糖组平均逃避潜伏期较模型组明显缩短(P<0.05);120 s穿越原平台次数较模型组明显增加(P<0.05)。山茱萸多糖组海马区p-tau蛋白阳性染色较模型组明显减弱(P<0.05)。结论山茱萸多糖对AD大鼠认知能力有改善,可能与降低海马区p-tau蛋白表达量相关。

安神定志方对阿尔茨海默病大鼠海马组织miR-103a-3p及其介导的Tau蛋白磷酸化的影响

目的观察安神定志方对阿尔茨海默病(AD)大鼠海马组织miR-103a-3p及其介导的Tau蛋白磷酸化的影响,探讨其相关作用机制。方法通过GEO数据库筛选AD海马组织差异表达miRNA。50只SD大鼠随机分为空白组、模型组、miR-103a-3p mimic组、安神定志方组和miR-103a-3p mimic+安神定志方组,每组10只,采用Aβ1-42侧脑室注射制备AD大鼠模型。造模后各给药组给予相应药物干预4周。Morris水迷宫实验检测大鼠学习记忆能力,HE染色观察海马组织形态,RT-PCR检测海马组织miR-103a-3p基因的表达,Western blot和免疫组化检测海马组织脑源性神经营养因子(BDNF)及Tau蛋白的表达。结果通过GEO数据库共筛选出34个差异miRNA,其中17个上调、17个下调。与模型组比较,安神定志方显著增加AD大鼠跨越平台次数和有效停留时间,减少逃避潜伏期,改善海马CA1区组织形态,上调BDNF的表达,抑制miR-103a-3p、p-TauSer396和p-TauThr231的表达,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论安神定志方可能通过抑制海马组织miR-103a-3p的表达进而促进BDNF的表达,调控Tau蛋白的磷酸化水平,从而促进AD大鼠学习记忆能力。