虎杖苷通过抑制TGF-β/Smad信号通路改善动脉粥样硬化大鼠动脉粥样硬化斑块和内皮炎症反应

目的:探讨虎杖苷通过抑制转化生长因子β(TGF-β)/Smad信号通路对动脉粥样硬化(AS)大鼠AS斑块和内皮炎症反应的改善作用。方法:将60只大鼠随机分成空白对照组、模型对照组、虎杖苷低、中、高剂量组和阳性对照组,每组10只。正常对照组大鼠用普通饲料喂养,其余各组大鼠采用高脂饲料喂养与维生素D3腹腔注射联合的方法制备AS大鼠模型。虎杖苷低、中、高剂量组大鼠每天灌胃虎杖苷40、80、160 mg/kg,阳性对照组大鼠每天灌胃辛伐他汀5 mg/kg,模型对照组和空白对照组大鼠每天灌胃等量生理盐水。给药结束后,油红O染色观察大鼠主动脉AS斑块形成情况;全自动生化分析仪检测大鼠三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平;酶联免疫吸附法检测大鼠血清中肿瘤坏死因子(TNF)-α、IL-6、IL-8、C反应蛋白(CRP)、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、同型半胱氨酸(Hcy)、细胞间黏附分子1(ICAM-1)、内皮素-1(ET-1)含量;蛋白免疫印迹法检测大鼠TGF-β1、Smad2/3、p-Smad2/3蛋白表达水平。结果:与空白对照组相比,模型对照组大鼠主动脉内壁出现大量AS斑块,血清中TG、TC、LDL-C水平及TNF-α、IL-6、IL-8、CRP、MCP-1、Hcy、ICAM、ET-1含量明显升高,HDL-C水平明显降低,主动脉组织中TGF-β1蛋白表达、p-Smad2/3/Smad2/3显著升高(P<0.05)。虎杖苷干预后AS大鼠主动脉内壁斑块面积明显减小,血清中TG、TC、LDL-C水平及TNF-α、IL-6、IL-8、CRP、MCP-1、Hcy、ICAM、ET-1含量显著降低,HDL-C水平显著升高,主动脉组织中TGF-β1蛋白表达、p-Smad2/3/Smad2/3明显减小(P<0.05),以上指标变化均呈剂量依赖性(P<0.05)。阳性对照组TC、LDL-C、HDL-C水平与虎杖苷高剂量组无明显差异(P>0.05),其余指标均比虎杖苷高剂量组更低(P<0.05)。结论:虎杖苷通过调节血脂、降低细胞炎症因子的表达,从而减少AS斑块的形成,改善AS大鼠体内的炎症反应,其机制与抑制TGF-β/Smad信号通路激活有关。

METTL3调控miR-126介导TGF-β/Smad信号通路影响糖尿病肾病的机制研究

目的:建立糖尿病肾病(Diabetes Kidney Disease,DKD)大鼠模型,探讨METTL3调控糖尿病肾病的作用机制。方法:将SD大鼠适应性喂养7d后,按照随机数字法分为4组,正常对照组(Control组)、糖尿病肾病模型组(DKD组)、糖尿病肾病模型+METTL3干扰对照组(DKD+NC组)和糖尿病肾病模型+METTL3干扰组(DKD+siMETTL3组),每组8只。造模结束后收集大鼠血液标本及肾脏组织,采用全自动生化分析仪分析空腹血糖(Fasting blood glucose,FBG)、尿素氮(Blood urea nitrogen,BUN)、24h尿蛋白(Uridine triphosphate,UTP)的表达水平,RT-qPCR法检测miR-126的基因表达,ELISA检测TGF-β1的表达,Western blotting检测METTL3、smad2、smad3、smad7的蛋白水平。结果:与Control组相比,DKD组的FBG、BUN、UTP、TGF-β1、METTL3、smad2、smad3显著升高(P<0.05),体质量、miR-126、smad7显著降低(P<0.05);与DKD组比较,DKD+siMETTL3组的FBG、BUN、UTP、TGF-β1、METTL3、smad2、smad3显著降低(P<0.05),体质量、miR-126、smad7显著升高(P<0.05)。结论:METTL3可以通过调控miR-126及TGF-β/smad通路,介导DKD的进展。

扶正化瘀方调控TGF-β/Smad信号通路对博来霉素诱导小鼠肺纤维化的影响

目的探讨扶正化瘀方对博来霉素诱导肺纤维化小鼠的作用。方法将小鼠随机分为模型组、扶正化瘀方组(5.6 g/kg)和尼达尼布组(60 mg/kg),每组15只,采用无创气管插管经气道滴注博来霉素(2.5 mg/kg)复制小鼠肺纤维化模型;另取10只正常小鼠予气道滴注等体积生理盐水,作为正常组。造模7 d后,各组灌胃相应剂量药物,连续给药14 d。末次给药24 h后,使用肺功能仪测定小鼠气道狭窄指数、呼吸频率和潮气量,试剂盒检测血清羟脯氨酸(Hyp)水平,苏木素-伊红和Masson染色分别观察肺组织炎症和胶原沉积水平,ELISA法检测肺泡灌洗液中TNF-α、IL-6水平,免疫组化观察肺组织α-SMA表达,蛋白印迹法检测小鼠肺组织α-SMA、TGF-β1、Smad2/3、p-Smad2、p-Smad3蛋白表达。结果与正常组比较,模型组小鼠呼吸急促,体质量降低(P<0.01),Penh值增加(P<0.01),f、TV减少(P<0.01),肺组织大量炎性细胞浸润和大量胶原纤维沉积并有纤维节结生成,血清Hyp、IL-6、TNF-α水平升高(P<0.01),肺组织α-SMA、TGF-β1、Smad2/3、p-Smad2、p-Smad3蛋白表达升高(P<0.01);与模型组比较,扶正化瘀方组和尼达尼布组小鼠呼吸平稳,Penh值降低(P<0.01),f、TV增加(P<0.01),肺组织炎性细胞浸润和胶原纤维沉积减少(P<0.01),血清Hyp、IL-6、TNF-α水平降低(P<0.01),肺组织α-SMA、TGF-β1、Smad2/3、p-Smad2、p-Smad3蛋白表达降低(P<0.01)。结论扶正化瘀方可抑制博来霉素诱导的小鼠实验性肺纤维化,其作用机制可能与调控TGF-β/Smad信号通路有关。

甘草甜素调节TGF-β/Smad信号通路对肺癌荷瘤小鼠放射性肺损伤的影响

目的 研究甘草甜素(GL)是否可以通过调节TGF-β/Smad信号通路对肺癌荷瘤小鼠放射性肺损伤(RILI)产生影响。方法 取48只小鼠,先随机选出12只小鼠作为NC组,其余小鼠构建肺癌荷瘤小鼠模型并采用X射线照射全胸建立RILI模型,再将小鼠随机分为照射+Model组、照射+GL组(10 mg/kg)、照射+GL+SRI-011381组(10 mg/kg+30 mg/kg TGF-β激动剂)。使用酶联免疫吸附(ELISA)法检测小鼠血清中白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的水平;HE染色法检测小鼠肺组织病理损伤;试剂盒检测小鼠肺组织中羟脯氨酸(HYP)、髓过氧化物酶(MPO)含量;免疫组化法(IHC)检测肺组织中TGF-β、α-SMA表达;Western Blot检测小鼠肺组织中TGF-β1、p-Smad2/3、Smad7蛋白表达。结果 与NC组比较,照射+Model组小鼠血清中IL-6、TNF-α水平、HYP、MPO、TGF-β和α-SMA表达、TGF-β1、p-Smad2/3蛋白表达升高,肺组织病理损伤加重,Smad7蛋白表达降低(P<0.05);与照射+Model组比较,照射+GL组小鼠血清中IL-6、TNF-α水平、HYP、MPO、TGF-β和α-SMA表达、TGF-β1、p-Smad2/3蛋白表达减少,肺组织病理损伤减轻,Smad7蛋白表达增加(P<0.05);照射+GL+SRI-011381组中实验检测结果则与照射+GL组结果趋势相反,表明SRI-011381干预后减弱了GL对肺癌荷瘤小鼠RILI的改善作用。结论 甘草甜素可以通过抑制TGF-β/Smad信号通路对肺癌荷瘤小鼠放射性肺损伤进行修护改善。

黄精多糖对妊娠期高血压模型大鼠胎盘组织TGF-β/Smad信号通路的作用研究

[目的]探讨黄精多糖对妊娠期高血压模型大鼠胎盘功能的影响与机制。[方法]受孕雌性大鼠随机分为对照组、模型组、黄精多糖(低、中、高)剂量组(100、200、400 mg/kg)和硫酸镁组(100 mg/kg),每组10只。除对照组外,其余组大鼠皮下注射L-精氨酸甲酯构建妊娠期高血压模型。检测血压、24 h蛋白尿、胎鼠体质量、胎盘质量;苏木素-伊红(HE)检测胎盘组织病理学;酶联免疫吸附实验(ELISA)检测胎盘组织白介素(IL)-6、IL-10、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量;Western Blot检测胎盘组织紧密连接蛋白-1(ZO-1)、封闭蛋白(OCLN)、血管内皮生长因子(VEGF)、转化生长因子-β1(TGF-β1)、p-Smad3、Smad3蛋白表达。[结果]与对照组比较,模型组大鼠血压、24 h尿蛋白、IL-6、TNF-α含量及TGF-β1、p-Smad3蛋白表达显著升高,胎鼠体质量、胎盘质量、IL-10含量及ZO-1、OCLN、VEGF蛋白表达显著降低(P<0.05),且胎盘组织出现病理学损伤。与模型组比较,各给药组大鼠血压、24 h尿蛋白、IL-6、TNF-α含量及TGF-β1、p-Smad3蛋白表达显著降低,胎鼠体质量、胎盘质量、IL-10含量及ZO-1、OCLN、VEGF蛋白表达显著升高(P<0.05),同时胎盘组织病理学损伤减轻。[结论]黄精多糖可抑制妊娠期高血压模型大鼠胎盘中TGF-β/Smad信号通路激活,改善胎盘功能障碍。

TGF-β/Smad信号通路在肝硬化中的作用及其机制的研究进展

肝硬化是一种或多种原因引起的慢性肝病发展到肝细胞弥漫性变性坏死、纤维组织增生和肝细胞结节状再生的病理阶段。肝纤维化是肝硬化的必然历经阶段和重要步骤,通过破坏正常的肝脏组织和细胞功能进而导致肝硬化。转化生长因子-β(transforming growth factor beta,TGF-β)是一种分泌性多肽信号分子,具有调节细胞生长和分化、修复损伤组织、调节免疫功能等作用,可影响肝纤维化、肝硬化的生物学过程。而TGF-β/果蝇母本抗生存因子蛋白(smallmother againstdecapentaplegic,Smad)信号通路在肝硬化的发生、发展及靶向治疗中尤为关键。探讨TGF-β/Smad信号通路在肝硬化中的作用及其机制的研究进展对预防、治疗肝硬化具有重要现实意义。本文对TGF-β/Smad信号通路在肝硬化中的作用及其机制的研究进展作一综述。

miR-335-5p调控TGF-β/Smad信号通路抑制胃癌细胞EMT及侵袭和迁移

目的:基于TGF-β/Smad信号通路探讨上调微小RNA(miR)-335-5p对胃癌细胞侵袭、迁移及EMT分子表达的影响。方法:使用miR-335-5p慢病毒载体感染胃癌细胞,通过嘌呤霉素筛选构建稳转细胞株,采用划痕和Transwell实验观察上调miR-335-5p对胃癌细胞侵袭和迁移能力的影响。用RT-qPCR实验和Western-blot实验检测上调miR-335-5p对胃癌细胞TGF-β信号通路中关键基因和上皮间质转化(EMT)相关基因的mRNA和蛋白表达量的影响。结果:划痕结果显示,与阴性对照组相比,上调miR-335-5p后,两株胃癌细胞的愈合率明显降低(P<0.05,P<0.01)。Transwell迁移和侵袭实验结果显示,两株胃癌细胞miR-335-5p过表达组穿过小室的细胞数相对于阴性对照组明显降低(P<0.05,P<0.01)。RT-qPCR和Western-blot实验结果显示,两株胃癌细胞miR-335-5p过表达组的TGF-β1、TGF-β2、TGF-βR2、p-Smad2、p-Smad3和Smad4蛋白表达量明显低于阴性对照组(P<0.05,P<0.01)。miR-335-5p过表达后,两株胃癌细胞的α-平滑肌肌动蛋白(α-SmA)、I型胶原(Collagen 1)、N-钙黏着蛋白(N-cadherin)、细胞角蛋白(Cytokeratin18)、Claudin7蛋白(Claudin7)、闭锁小带蛋白-1(ZO-1)、波形蛋白(Vimentin)、锌指转录因子1(Snail1)、锌指转录因子2(Snail2)、纤连蛋白1(FN1)、Twist相关蛋白2基因(Twist2)的mRNA和蛋白表达量明显低于阴性对照组(P<0.05,P<0.01),E-钙黏着蛋白(E-cadherin)的mRNA和蛋白表达量高于阴性对照组(P<0.05,P<0.01)。结论:过表达miR-335-5p通过TGF-β/Smad信号通路调控胃癌细胞的EMT,从而抑制胃癌细胞的侵袭和迁移。

TGF-β/SMAD信号通路在哺乳动物卵巢发育调控中的作用研究进展

TGF-β/SMAD信号转导通路是典型的跨膜转导通路,该通路通过一组配体与受体结合,将细胞外的信号转导入细胞内,激活下游的SMAD蛋白、转录调节靶基因,从而介导配体对细胞的生物学作用。在卵母细胞成熟过程受到多种因子调控,其中一些细胞外信号通过TGF-β/SMAD信号通路发挥调控作用。TGF-β/SMAD信号通路主要通过不同的下游信号分子SMADs以自分泌/旁分泌途径方式发出信号,调控颗粒细胞增殖和卵母细胞生长,影响着卵巢发育。近年来,TGF-β/SMAD信号通路对卵巢发育的调控机制已成为生殖生理学领域研究热点之一,本文综述了TGF-β/SMAD蛋白的受体、TGF-β/SMAD信号通路,并分别从配体、调控因子以及与其他通路的作用关系的角度阐述了不同家畜TGF-β/SMAD通路在卵巢发育中的调控作用,为卵巢发育的调控机制研究提供思路,同时为畜牧业生产提供理论基础。

石蒜碱调控G3BP1/TGF-β/Smad信号通路抑制食管癌细胞增殖

目的:探讨石蒜碱对食管癌细胞增殖的影响,并分析其机制。方法:细胞计数8(cell counting kit-8,CCK-8)法分析细胞增殖抑制率,Western blot法分析GTP酶激活蛋白-Src同源结构域3-结合蛋白1[GTPase activating protein(SH3 domain)binding protein 1,G3BP1]、转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、p-Smad2/Smad2、p-Smad3/Smad3水平。敲低或过表达G3BP1,观察其对细胞增殖抑制率以及G3BP1、TGF-β1、p-Smad2/Smad2水平的影响。裸鼠成瘤实验验证石蒜碱对裸鼠体内瘤体的瘤重、瘤体积及G3BP1、TGF-β1、p-Smad2/Smad2水平的影响。结果:2~64μmol/L石蒜碱抑制ECA109细胞增殖,石蒜碱48 h IC50为(16.21±2.35)μmol/L。4、8、16μmol/L的石蒜碱能下调G3BP1、TGF-β1、p-Smad2/Smad2、p-Smad3/Smad3的水平。敲低G3BP1的表达能明显提高石蒜碱对ECA109细胞增殖的抑制作用,促进石蒜碱降低G3BP1、TGF-β1、p-Smad2/Smad2水平(P<0.05);上调G3BP的表达能明显下调石蒜碱对ECA109细胞增殖的抑制作用,抑制石蒜碱降低G3BP1、TGF-β1、p-Smad2/Smad2水平(P<0.05)。体内实验显示,与模型对照组比较,25、50、100 mg/kg石蒜碱能降低瘤体体积、瘤体质量,下调瘤体G3BP1、TGF-β1、p-Smad2/Smad2水平(P<0.05)。结论:石蒜碱能抑制ECA109细胞的增殖,对裸鼠体内ECA109细胞移植瘤抑瘤效果明显,其机制与调控G3BP1/TGF-β/Smad信号通路有关。

石蒜碱通过TGF-β/Smad信号通路调控自噬抑制食管癌细胞增殖

目的:探讨石蒜碱对食管癌细胞增殖的影响,并分析其机制。方法:细胞计数8(CCK-8)法分析细胞增殖抑制率,MDC染色法检测自噬泡,Western blot法分析LC3II/LC3I、Beclin-1、转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)、p-Smad2/Smad2水平,观察3-MA对石蒜碱调控自噬和凋亡的影响。裸鼠成瘤实验验证石蒜碱对裸鼠体内瘤体的瘤重、瘤体积及自噬、p-Smad2/Smad2水平的影响。结果:2、4、8、16、32、64μmol/L的石蒜碱抑制ECA109细胞增殖(F=22.412,P<0.05),IC50值为(15.56±2.16)μmol/L。4、8、16μmol/L石蒜碱促进自噬泡的产生,增加LC3II/LC3I、Beclin-1水平,降低TGF-β1、p-Smad2/Smad2水平(P<0.05);3-MA可以逆转石蒜碱对自噬、凋亡及TGF-β/Smad信号通路和Bcl-2/Bax信号通路的影响;体内实验显示,100 mg/kg石蒜碱能降低瘤体体积、瘤体质量,下调p-Smad2/Smad2水平,上调LC3II/LC3I水平(P<0.05)。3-MA可以逆转石蒜碱对瘤体体积、瘤体质量及LC3II/LC3I、p-Smad2/Smad2水平的影响。结论:石蒜碱能抑制ECA109细胞的增殖,促进细胞凋亡,对体内ECA109细胞移植瘤抑瘤效果明显,其机制与调控TGF-β/Smad信号通路激活自噬有关。

基于TGF-β/Smad信号通路调控PTPRZ1对口腔黏膜下纤维性变的干预效果

目的 基于转化生长因子(TGF)-β/Smad信号通路调控酪氨酸磷酸酶Z1型受体(PTPRZ1)对口腔黏膜下纤维性变的干预效果。方法 选取65只大鼠,10只为空白组,其余55只建立口腔黏膜下纤维性变模型,最终有45只建模成功,分为模型组、上调组(转染10μl PTPRZ1过表达慢病毒悬液)、下调组(转染10μl PTPRZ1沉默慢病毒悬液)各15只,7 d后观察大鼠变化。结果 与空白组相比,模型组、下调组、上调组PTPRZ1表达量、颊黏膜评分、Ⅰ、Ⅲ型胶原水平及TGF-β1、Smad2、Smad3 mRNA和蛋白表达量明显上升,张口度水平明显下降(P<0.05);与模型组相比,上调组PTPRZ1表达量、颊黏膜评分、Ⅰ、Ⅲ型胶原水平、TGF-β1、Smad2、Smad3 mRNA及蛋白表达量明显上升,张口度水平明显下降(P<0.05);下调组PTPRZ1表达量、颊黏膜评分、Ⅰ、Ⅲ型胶原水平、TGF-β1、Smad2、Smad3 mRNA及蛋白表达量明显下降,张口度水平明显上升(P<0.05);与上调组相比,下调组PTPRZ1表达量、颊黏膜评分、Ⅰ、Ⅲ型胶原水平、TGF-β1、Smad2、Smad3 mRNA及蛋白表达量明显下降,张口度水平明显上升(P<0.05)。结论 下调PTPRZ1可改善口腔黏膜下纤维性变大鼠临床症状,调节胶原水平,其机制可能与TGF-β/Smad信号通路被抑制有关。

TGF-β/Smad信号通路在类风湿性关节炎相关的间质性肺纤维化小鼠中的作用

目的研究TGF-β/Smad信号通路在类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)相关的间质性后肺纤维化小鼠中的作用。方法通过小鼠尾根部皮下给药完全弗氏佐剂(complete Freund′s adjuvant,CFA)与鸡Ⅱ型胶原蛋白(chickenⅡcollagen,Col-Ⅱ),构建RA小鼠模型。空白组给等量蒸馏水,对照组给等量冰醋酸(溶媒)。监测小鼠足趾肿胀程度(关节肿胀度与关节炎指数)评价小鼠建模情况;通过HE、Masson染色观察小鼠肺组织病理变化;免疫组化法观察肺间质细胞的胞质中TGF-β表达;采用化学发光法测量肺组织中羟脯氨酸水平;Western blot检测肺组织中Smad2、Smad3及p-Smad2、p-Smad3蛋白表达。结果与空白组、溶媒组相比,模型组小鼠关节肿胀、关节炎指数明显升高;给药21 d后,HE染色显示模型组肺间质有炎性改变,Masson染色显示模型组小鼠肺间质胶原纤维沉积,免疫组化染色显示模型组小鼠肺间质细胞的胞质中TGF-β表达升高,呈棕黄色;同时,与空白组、溶媒组相比,模型组肺组织匀浆显示羟脯氨酸表达明显升高;且进一步Western blot研究发现,与空白组、溶媒组相比,p-Smad2与p-Smad3在模型组中表达明显升高(P<0.05,P<0.01)。结论RA可导致肺组织纤维化,p-Smad2与p-Smad3表达上调,在肺纤维化和RA相关的间质性后肺纤维化中起重要作用。

五灵胶囊联合富马酸丙酚替诺福韦治疗CHB患者的效果及对TGF-β/Smad信号通路的调节作用

目的 探究五灵胶囊联合富马酸丙酚替诺福韦(TAF)治疗慢性乙型肝炎(CHB)患者的效果及对TGF-β/Smad信号通路的调节作用。方法 选取2021年4月至2022年8月新乡市传染病医院收治的200例CHB患者,按照随机数字表法分为观察组(100例)、对照组(100例)。给予对照组TAF,给予观察组五灵胶囊联合TAF,比较治疗前后肝功能指标[谷丙转氨酶(GPT)、谷草转氨酶(GOT)、总胆红素(TBIL)]、肝纤维化指标[透明质酸(HA)、人类软骨糖蛋白39(YKL-40)]、TGF-β/Smad信号通路相关指标[转化生长因子-β_(1)(TGF-β_(1))、Smad2、Smad7、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)],比较两组临床疗效及乙肝病毒e抗原(HBeAg)、HBV-DNA转阴率。结果 观察组总有效率高于对照组(P<0.05)。治疗1、3、6个月后观察组TBIL、GPT、GOT、HA、YKL-40、TGF-β_(1)、Smad2、p38 MAPK均低于对照组,Smad7高于对照组(P<0.05);观察组HBeAg转阴率、HBV-DNA转阴率均高于对照组(P<0.05)。结论 五灵胶囊及TAF联合治疗CHB,可有效提升患者肝功能,改善肝纤维化,促进HBV-DNA转阴,其作用机制与TGF-β/Smad信号通路的调节作用相关。

TGFβR 1介导TGF-β/Smad信号通路对绵羊颗粒细胞功能的影响

旨在探究TGFβR1介导TGF-β/Smad信号通路调控绵羊颗粒细胞功能的机制。本试验收集绵羊卵巢颗粒细胞,通过构建pcDNA3.1(+)-TGFβR1和pcDNA3.1(+)-SMAD4过表达质粒载体及shRNA-TGFβR1和shRNA-SMAD4干扰表达质粒载体,对绵羊颗粒细胞中TGFβR1和SMAD4基因分别进行过表达和干扰,利用CCK-8细胞增殖检测、流式细胞术、Annexin-V FITC/PI双染技术检测绵羊颗粒细胞增殖、细胞周期及凋亡功能,并结合Real-Time PCR及Western blot检测TGFβR1、SMAD4的mRNA水平和细胞凋亡相关蛋白BAX、BCL2、Caspase3的表达水平及TGF-β/Smad信号通路中TGFβR1、TGFβR2、SMAD2/3的磷酸化水平。结果显示,过表达TGFβR1和SMAD4均极显著促进颗粒细胞从G0/G1期进入S期的能力(P<0.01)、颗粒细胞增殖及抗凋亡蛋白BCL2的表达(P<0.01),抑制凋亡蛋白BAX和Caspase3表达(P<0.01)。干扰TGFβR1和SMAD4均极显著促进颗粒细胞凋亡及凋亡蛋白BAX和Caspase3的表达(P<0.01),抑制抗凋亡蛋白BCL2的表达(P<0.01)。进一步研究发现,过表达TGFβR1可促进TGF-β/Smad信号通路中TGFβR1、TGFβR2及SMAD2/3磷酸化水平(P<0.01),并极显著促进SMAD4的蛋白表达水平(P<0.01);干扰TGFβR1则显著抑制TGFβR1、TGFβR2(P<0.01)及SMAD2/3的磷酸化水平(P<0.05),并抑制SMAD4的蛋白表达(P<0.01);过表达SMAD4则会显著促进TGFβR1蛋白的表达(P<0.01)。研究表明,TGFβR1促进绵羊颗粒细胞的增殖及周期进程,抑制颗粒细胞凋亡,通过介导TGF-β/Smad信号通路中SMAD2/3及SMAD4的表达正向调控绵羊颗粒细胞的增殖与周期,并负向调控其凋亡。

基于TGF-β/Smad信号通路研究NF-κB在电针抗慢性疲劳综合征中的作用及机制

目的 观察电针干预对慢性疲劳综合征(CFS)大鼠核转录因子(NF)-κB表达的影响,探索电针治疗CFS的作用机制。方法 清洁级SD雄性大鼠36只,随机将大鼠分为对照组、模型组、电针组各12只,采用负重强迫游泳联合慢性应激刺激造模建立CFS动物模型,电针组选取双侧感觉区、百会、宁神进行治疗,检测各组大鼠行为学指标(鼠尾悬挂实验,力竭游泳实验,水迷宫实验);酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血浆褪黑素含量;免疫组化法(IHC)检测NF-κB p65蛋白表达;实时荧光定量PCR(qPCR)技术检测大鼠转化生长因子(TGF)-β1、Smad4 mRNA表达;Western印迹检测大鼠TGF-β1、Smad4蛋白的表达。结果 与对照组比较,模型组鼠尾悬挂实验挣扎次数减少,静止时间明显延长,力竭游泳时间明显缩短,水迷宫用时明显延长,有效区停留时间明显缩短;褪黑素含量昼夜波动程度减弱,变化趋势与对照组不同,海马区NF-κB p65阳性表达细胞数量增多,颜色较深,TGF-β1、Smad4 mRNA及蛋白表达明显增加(P<0.05);与模型组比较,电针组鼠尾悬挂实验静止时间明显缩短,挣扎次数明显增加,力竭游泳时间明显延长,水迷宫用时明显缩短,有效区停留时间明显延长(P<0.05);褪黑素含量昼夜波动程度明显增强,变化趋势与对照组相似,海马区NF-κB p65阳性表达细胞数量明显减少,颜色较浅,TGF-β1、Smad4的mRNA及蛋白表达明显降低(P<0.05)。结论 电针治疗可明显改善CFS大鼠的疲劳状态和学习能力,降低海马区NF-κB蛋白表达,可能是通过调控TGF-β/Smad通路实现的。

TGF-β/Smad信号通路及Smad4、p15在结直肠癌中的研究进展

结直肠癌是消化系统常见肿瘤之一,其发病率和病死率较高。转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)/Smad(small mothers against decapentaplegic)信号通路可调控肿瘤细胞的增殖、分化、浸润、迁移,与结直肠癌的发生发展过程相关。研究表明,Smad4和p15是TGF-β/Smad信号通路的关键效应因子,与肿瘤的侵袭、进展及预后密切相关。本文对TGF-β/Smad信号通路及Smad4、p15在结直肠癌中的最新研究进展进行综述。

沉默HSF1基因诱导TGF-β/Smad信号通路对口腔癌细胞放疗抵抗的作用机制

目的探讨沉默热休克因子(HSF)1基因诱导转化生长因子(TGF)-β/Smad信号通路对口腔癌细胞放疗抵抗的作用机制。方法构建放疗抵抗细胞株SCC-9R,将细胞分为空白组、阳性慢病毒(NC)组和HSF1组。比较HOEC细胞和SCC-9细胞中HSF1表达[实时荧光定量-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测]、细胞克隆细胞数、侵袭能力(Transwell小室法检测)、凋亡能力(流式细胞仪检测)及细胞中TGF-β1和Smad7蛋白表达(Western印迹检测)。结果HSF1在正常人口腔上皮细胞HOEC中表达较低,和HOEC细胞相比,人口腔鳞状细胞癌SCC-9细胞和抵抗细胞SCC-9R细中HSF1表达显著增加,且抵抗细胞SCC-9R中HSF1表达明显高于SCC-9细胞(P<0.05)。HSF1组CC-9/SCC-9R细胞中HSF1表达均明显少于空白组和NC组,且沉默HSF1可降低CC-9/SCC-9R细胞中HSF1表达(P<0.05)。克隆实验结果显示,空白组和NC组SCC-9和SCC-9R细胞克隆形成数均无明显差异(均P>0.05);HSF1组SCC-9和SCC-9R细胞克隆形成数较空白组和NC组显著减少(P<0.05)。细胞侵袭实验结果显示,空白组和NC组SCC-9和SCC-9R细胞侵袭能力无显著差异(P>0.05);HSF1组细胞侵袭能力较空白组和NC组明显降低(P<0.05)。细胞凋亡结果显示,空白组和NC组SCC-9和SCC-9R细胞凋亡能力无显著差异(P>0.05);HSF1组SCC-9和SCC-9R细胞的凋亡能力较空白组和NC组细胞明显增加(P<0.05)。HSF1组CC-9/SCC-9R细胞中TGF-β1、Smad7蛋白表达明显低于空白组和NC组(P<0.05)。结论沉默HSF1可抑制口腔鳞状细胞癌中TGF-β1、Smad7表达,可逆转放疗抵抗口腔癌细胞对放疗的抵抗作用。

骨痹散通过调节TGF-β/Smad信号通路减轻兔膝骨关节炎损伤

目的探讨骨痹散对骨关节炎的治疗效果及其机制。方法将新西兰大白兔分为空白组、模型组、阳性组(双氯芬酸钾凝胶)与骨痹散组,每组6只,使用改良Hulth法构建兔膝骨关节炎模型,造模8周后给药4周。对软骨组织进行甲苯胺蓝染色后测量软骨厚度,番红-O染色后进行Mankin评分;使用Tunel荧光染色法检测软骨组织中软骨细胞的凋亡情况;使用免疫组织化学法检测软骨组织中ColⅡ与Col X蛋白的表达水平;使用Western blot法检测软骨组织中Bax、cleaved-caspase-3、p-ERK、p-p38、p-Smad2、p-Smad3、TGF-β1的蛋白表达水平。结果与空白组相比,模型组软骨组织厚度减少,Mankin评分升高,软骨细胞凋亡率升高,ColⅡ、p-Smad2、p-Smad3、TGF-β1蛋白表达水平减低,Col X、Bax、cleaved-caspase-3、p-ERK、p-p38蛋白表达升高。与模型组相比,阳性组与骨痹散组软骨组织厚度增加,Mankin评分降低,软骨细胞凋亡率降低,ColⅡ、p-Smad2、p-Smad3、TGF-β1蛋白表达水平升高,Col X、Bax、cleaved-caspase-3、p-ERK、p-p38蛋白表达降低。结论骨痹散对骨关节炎具有良好的治疗效果,能通过减少软骨细胞凋亡,稳定软骨组织结构,促进软骨组织损伤后再生与修复,其机制可能与抑制ERK/P38通路、激活TGF-β/Smad通路有关。

干预TGF-β/Smad信号通路预防腰椎术后神经周围瘢痕形成的研究进展

转化生长因子-β(TGF-β)/Smad信号通路在机体内参与了许多细胞过程,包括多种细胞的生长、分化及凋亡,同时也是调节瘢痕形成的关键。TGF-β/Smad信号通路的失调是组织纤维化和瘢痕形成的一个主要因素。而腰椎术后神经周围纤维瘢痕形成是导致术后效果差、产生新的压迫症状甚至出现腰椎术后综合征的重要因素。这一问题的出现,极大地增加了患者的痛苦与治疗费用。因此,如何通过药物、生物材料等有效的临床治疗手段干预TGF-β/Smad信号通路预防或减少纤维瘢痕组织的形成并提高手术治疗的疗效,是目前临床研究的重点以及面临的挑战。

化痰祛瘀法对腹膜纤维化大鼠TGF-β/Smad信号通路的影响

【目的】探讨化痰祛瘀法对腹膜纤维化大鼠转化生长因子-β(TGF-β)/Smad信号通路的影响。【方法】选用健康SD雄性大鼠60只,随机分为5组,每组12只,分别为:空白组、模型组、西药组、中药高剂量组、中药低剂量组。复制大鼠腹膜纤维化模型后,即实验第5周开始,中药高、低剂量组分别给予化痰祛瘀中药50、25 mg.kg-1.d-1,西药组给予贝那普利5 mg.kg-1.d-1,模型组及空白组灌服注射用水,每天1次,共4周。实验第8周结束后留取腹膜组织,采用免疫组化法测定脏层腹膜p-Smad2/3、Smad7和TGF-β1表达情况。【结果】中药高剂量组、中药低剂量组、西药组Smad7表达均显著增加,与模型组比较差异均有统计学意义(P<0.05);中药高剂量组Smad2/3、TGF-β1表达显著降低,与中药低剂量组、西药组比较差异均有统计学意义(P<0.05);中药高剂量组Smad7表达显著升高,与中药低剂量组、西药组比较差异有统计学意义(P<0.05)。【结论】化痰祛瘀中药防治腹膜纤维化的作用与其能上调TGF-β抑制性信号蛋白Smad7的表达,抑制TGF-β受体调控信号蛋白Smad2/3表达有关。