EZH2抑制剂对恶性淋巴瘤细胞放疗抵抗、Th细胞分化及PD1/PD-L1表达的作用机制

目的探究Zeste基因增强子同源物(EZH)2抑制剂对恶性淋巴瘤细胞放疗抵抗、Th细胞分化及程序性死亡(PD)1/PD1配体(PD-L1)表达的作用机制。方法取对数生长恶性淋巴瘤放疗抵抗细胞株将其分为恶性淋巴瘤(A)组、多柔比星(B)组、EZH2抑制剂(C)组、EZH2抑制剂联合PD1/PD-L1抑制剂(D)组,酶联免疫吸附试验(ELISA)及流式细胞仪检测Th细胞分化相关因子,Western印迹检测PD1/PD-L1蛋白表达,Hoechst33258染色法、噻唑蓝(MTT)法及小室法检测恶性淋巴瘤细胞活性。结果与A组相比,B、C、D组细胞凋亡率、干扰素(INF)-γ水平明显升高,细胞增殖率、侵袭数量、白细胞介素(IL)-4水平、PD1、PD-L1蛋白表达明显降低(P<0.05),且C组比B组变化更明显,D组比C组变化更明显(P<0.05)。结论EZH2抑制剂可显著抑制恶性淋巴瘤细胞放疗抵抗,有效调控Th细胞分化,并抑制PD1/PD-L1蛋白表达。

不同麻醉和镇痛方法对食管癌开胸手术患者外周血Th细胞分化的影响

目的:观察不同麻醉和镇痛方法对食管癌开胸手术患者外周静脉血辅助性T细胞分化的影响。方法:60例ASAⅠ～Ⅱ级择期食管癌开胸手术患者随机均分为3组:Ⅰ组采用全凭静脉麻醉,术后行患者自控静脉镇痛(PCIA);Ⅱ组采用胸段硬膜外阻滞复合静脉全麻,术后行PCIA;Ⅲ组麻醉方法同Ⅱ组,术后行患者自控硬膜外镇痛(PCEA)。3组分别于麻醉前(T0),切皮后2h(T1),术后4h(T2),术后24h(T3),术后48h(T4)抽取肘静脉血,用流式细胞检测技术测定Th1、Th2细胞胞内因子γ-干扰素(IFN-γ)、IL-4的水平,用CD3+CD8-IFN-γ+标识Th1细胞,用CD3+CD8-IL-4+标识Th2细胞,通过计算IFN-γ+%/IL-4+%来测Thl/Th2值。结果:与T0时比较,Ⅰ组Thl/Th2值在T2时明显降低(P<0.05),Ⅱ、Ⅲ组在T3时Thl/Th2值均明显降低(P<0.05)。组间比较,Ⅱ、Ⅲ组Thl/Th2值在T2时高于Ⅰ组,Ⅲ组Thl/Th2值在T3和T4时均高于Ⅱ组。结论:食管癌开胸手术患者术后皆出现Thl/Th2值的降低;硬膜外阻滞复合静脉全麻辅以术后硬膜外镇痛能够抑制Th0细胞向Th2细胞的过度分化。

Th细胞分化特异性转录因子在低体质量先天性心脏病患儿肺血流异常发病机制中的作用

目的观察Th细胞分化特异性转录因子在低体质量先天性心脏病(CHD)患儿肺血流异常发病机制中的作用。方法回顾分析2016年4月—2018年10月河北省儿童医院心脏外科收治的低体质量先天性心脏病患儿100例的临床资料,根据患儿肺充血情况,分为肺充血组(n=62)和肺缺血组(n=38),另取同期在医院治疗的其他疾病低体质量患儿50例作为对照组。比较各组患儿外周血淋巴细胞转录因子T-bet和GATA-3 mRNA表达,血浆IL-4和IFN-γ水平及外周血淋巴细胞亚群Th1/Th2细胞百分率的变化,通过Pearson法分析T-bet、GATA-3 mRNA表达量与Th1/Th2、血浆IL-4、IFN-γ水平的相关性。结果与对照组比较,肺充血组和肺缺血组患儿T-bet、GATA-3 mRNA表达,血浆IFN-γ、Th1细胞百分率、Th1/Th2水平均明显降低,血浆IL-4、Th2细胞百分率水平明显升高,且肺充血组患儿上述指标变化较肺缺血组更为显著(F/P=6.547/<0.001,9.254/<0.001,2.196/<0.001,65.254/<0.001,39.875/<0.001,3.026/<0.001,26.598/<0.001)。CHD患儿T-bet mRNA表达与血浆IFN-γ水平、Th1百分率呈正相关,与血浆IL-4水平、Th2百分率呈负相关(r/P=0.513/0.005,0.685/0.027,-0.764/0.000,-0.985/0.002),GATA-3 mRNA表达与血浆IL-4水平、Th2百分率呈正相关,与血浆IFN-γ水平、Th1百分率呈负相关(r/P=0.784/0.015,0.793/0.011,-0.525/0.032,-0.652/0.025)。结论 GATA-3和T-bet表达的平衡失调对Th1/Th2细胞的平衡偏移具有重要的调控作用,从而影响血浆IFN-γ、IL-4水平,在CHD的发病机制中起着重要作用。

TIM家族成员对Th细胞分化的调节作用

TIM(T-cell immunoglobulin mucin,TIM)是新近发现的一个基因家族,其中TIM-3、TIM-1分别选择性的表达于Th1与Th2细胞,TIM家族在Th细胞分化过程中扮演了重要的角色,其在免疫调节中的作用初见端倪。

复方连翘对Th细胞分化信号蛋白钙调神经磷酸酶转录表达的影响

【目的】观察中药复方连翘对T淋巴细胞活化信号蛋白CaN转录表达变化,探讨其免疫调控机制。【方法】用含药血清培养鸡脾T淋巴细胞并以OVA和ConA体外干预诱导;利用半定量RT-PCR和Western-blotting技术检测CaN mRNA及其蛋白的表达。【结果】发现信号蛋白CaN转录、表达在0.1%OVA的情况下无血清组和正常血清组高于其它实验组,与10%OVA相比差异显著(P<0.05)。0.1%OVA浓度下,抗病毒口服液与复方连翘血清组的CaN表达均有明显降低,但两者之间降低程度无显著差别;复方连翘血清组在10%OVA条件下的CaN转录表达,与无血清组比较,有显著升高(P<0.05)。【结论】复方连翘可能通过调节信号转导通路第一个接头蛋白CaN的转录表达来影响Th的分化进而实现对机体的免疫调控,同时也表明复方连翘通过双向调节、多环节、多途径实现的对机体免疫调节作用。

红细胞分化调节因子1对小鼠玫瑰痤疮模型Th1/Th2细胞分化的作用及影响

目的探讨红细胞分化调节因子1(Erdr1)对小鼠玫瑰痤疮模型中辅助性T细胞1(Th1)/Th2分化的作用。方法建立玫瑰痤疮模型,随机分为模型组、重组Erdr1(rErdr1)低、高剂量组,另设对照组。评估各组小鼠皮损红斑评分,比较血清免疫球蛋白、外周血T细胞亚群水平,比较各组皮损组织中干扰素-γ(IFN-γ)、白细胞介素-10(IL-10)、IFN-γ/IL-10水平,比较各组皮损组织中Erdr1蛋白表达。结果与模型组比较,rErdr1低剂量组、rErdr1高剂量组皮损红斑评分,血清IgM、IgA、IgG,CD4^(+)T细胞百分率,皮损组织中IFN-γ、IFN-γ/IL-10水平均降低,CD8^(+)T细胞百分率、皮损组织中IL-10水平及Erdr1蛋白相对表达量均升高(P<0.05);rErdr1高剂量组上述指标改变较低剂量组更明显(P<0.05)。结论rErdr1可有效改善玫瑰痤疮小鼠皮损红斑症状,减轻炎性反应,其可能通过抑制获得性免疫应答能力及调节Th1/Th2细胞分化平衡发挥作用。

寻常型银屑病患者三大基本中医证型外周血Th细胞分化与JAK/STAT信号通路的关系

目的:研究寻常型银屑病血热、血瘀、血燥证形成与Th分化、JAK/STAT信号通路关系。方法:收集寻常型银屑病患者33例(血热证15例、血瘀证10例、血燥证8例),正常组健康人10名,运用流式细胞术检测各组受试者外周血Th1、Th17细胞的分化比例差异,运用Western bolt法检测pSTAT4/STAT4、pSTAT3/STAT3表达差异,运用qPCR法检测T-bet、ROR-γt表达差异。结果:受试者外周血Th1、pSTAT4/STAT4、T-bet表达及Th17、pSTAT3/STAT3、ROR-γt表达互为正相关(P<0.01,P<0.05);血热证患者外周血Th1、Th17、pSTAT4/STAT4、pSTAT3/STAT3、T-bet、ROR-γt显著高于正常组(P<0.01),Th1血热证高于血燥证(P<0.05),Th17、pSTAT4/STAT4、pSTAT3/STAT3、T-bet、ROR-γt血热证高于血瘀证、血燥证(P<0.05,P<0.01)。结论:在Th细胞异常分化过程中,JAK/STAT信号转导通路的异常活跃可能是银屑病血热证形成的物质基础,且JAK/STAT信号通路可能与血热证向血瘀、血燥证转变的过程相关。

SIRT2在结肠癌微环境CD4^(+)T细胞向Th17细胞分化中的作用及对HIF-1α的影响

目的:探讨沉默信息调节因子2(SIRT2)过表达在结肠癌微环境CD4^(+)T细胞向Th17细胞分化中的作用及对缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)的影响。方法:小鼠结肠癌细胞CT26过表达SIRT2,构建稳定SIRT2过表达的CT26细胞株(CT26/SIRT2),qRT-PCR、Western blot检测SIRT2、HIF-1α水平;CCK-8验证SIRT2过表达对CT26细胞增殖能力的影响;24只健康C57BL/6小鼠随机分为CT26组、CT26/SIRT2组,分别接种CT26细胞、CT26/SIRT2细胞,28 d后处死小鼠,Ki67染色、TUNEL染色分别观察小鼠肿瘤组织细胞增殖与凋亡,并测定组织匀浆上清液中IL-17、IL-6水平;利用流式细胞术分离Th17细胞,qRT-PCR、Western blot检测Th17细胞中SIRT2、HIF-1α水平。结果:与CT26细胞相比,CT26/SIRT2细胞SIRT2 mRNA、蛋白水平升高,HIF-1αmRNA与蛋白水平降低(P<0.05);CT26、CT26/SIRT2细胞的增殖抑制率差异无统计学意义(P>0.05);与CT26小鼠相比,CT26/SIRT2小鼠剥离瘤体体积与重量、Ki67阳性表达,小鼠肿瘤组织Th17细胞比例、组织匀浆上清液中IL-17、IL-6水平、Th17细胞HIF-1αmRNA与蛋白水平均降低(P<0.05);肿瘤组织细胞凋亡率、Th17细胞SIRT2 mRNA和蛋白水平升高(P<0.05)。结论:SIRT2可抑制结肠癌微环境CD4^(+)T细胞向Th17细胞分化,并下调HIF-1α表达。

不同麻醉方法对胸腰段脊柱结核病灶清除术患者T淋巴细胞亚群和Th细胞分化的影响

目的:观察不同麻醉方法对胸腰段脊柱结核病灶清除术患者T淋巴细胞亚群和Th细胞分化的影响。方法:根据美国麻醉医师协会(ASA)Ⅰ~Ⅱ级60例择期行胸腰段脊柱结核病灶清除术患者,随机均分为3组:A组采用连续硬膜外麻醉、B组采用静脉复合全麻、C组采用连续硬膜外复合静脉全麻。流式细胞术检测麻醉前30 min(T0)、术后2 h(T1)、术后4 h(T2)、术后24 h(T3)时点的患者外周血CD4+T淋巴细胞、CD8+T淋巴细胞、CD3+CD8-IFN-γ+T淋巴细胞、CD3+CD8-IL-4+T淋巴细胞的百分比,计算CD4+/CD8+比值。用CD3+CD8-IFN-γ+T淋巴细胞、CD3+CD8-IL-4+T淋巴细胞分别代表Th1和Th2细胞,计算Th1/Th2比值。结果:与麻醉前比较,CD4+%、CD4+/CD8+比值A组T2、T3时点和B组T1~T3时点下降,差异有统计学意义(P<0.05),C组差异无统计学意义(P>0.05);组间比较C组T2、T3时点CD4+%、CD4+/CD8+比值明显高于A、B组(P<0.05)。Th1%各组T2、T3时点均较麻醉前下降,C组T2、T3时点较A、B组升高(P<0.05)。Th2%A、B组T2、T3时点及C组T3时点较麻醉前明显升高,T2时点C组与B组有差异(P<0.05)。Th1/Th2比值在T3时点与麻醉前相比各组均下降,C组高于A、B组,差异有统计学意义。结论:胸腰段脊柱结核病灶清除术患者术中、术后免疫功能受到抑制,连续硬膜外复合静脉全麻能减缓患者术中、术后外周血CD4+T淋巴细胞百分比和CD4+/CD8+比值的下降,并能减轻术后Th0细胞向Th2细胞的过度分化,减轻术中术后细胞免疫抑制的程度。

miRNA调控Th细胞分化的研究进展

未致敏的CD4+T细胞通过接受TCR抗原识别信号和共刺激信号,活化为不同的细胞亚群,如Th1、Th2、Th17、Treg、Tfh,参与宿主的适应性免疫应答。多种因素包括miRNA参与了Th细胞的发育过程,免疫异常调控会引起一系列的过敏及自身免疫性疾病等病理效应。本文就miRNA所涉及的调控网络对Th细胞的分化水平的影响进行了综述。

树突状细胞和Th细胞分化的关系

树突状细胞 (dendriticcells ,DC )根据其来源、表型及分泌的细胞因子不同可分为髓系DC (DC1)和淋巴系DC (DC2 )。DC1诱导Th1细胞应答 ,DC2诱导Th2细胞应答。本文就DC和Th细胞分化的关系作一简要综述 。

健脾、舒肝方药对Th细胞分化信号蛋白钙神经素转录表达的影响

目的 观察中药复方柴胡疏肝散、四君子汤对CD4+ T细胞活化信号蛋白CaN转录表达变化 ,探讨健脾益气、疏肝理气方药免疫调节机制。方法 采用Ova作为抗原诱导 ,制备中药含药血清 ,干预体外培养的Th细胞 ,RT -PCR、Westernblotting检测CaN的转录和表达。结果 发现CaN转录表达在CD4+ T细胞活化后明显增强 ,柴胡疏肝散、四君子汤血清均可以使其有意义的降低 ,而柴胡疏肝散尚可使表达不足的CaN增加。结论 益气、理气中药复方通过影响CD4+ T细胞活化分化过程中不同的信号蛋白转录表达调节Th1/Th2平衡 ,对Th2介导的免疫性疾病 ,理气方药优于益气方药。

IL-18对慢性乙型肝炎患者Th1/Th2细胞分化的影响

目的 :观察IL 18对慢性乙肝患者Th1/Th2细胞分化的影响。方法 :分离 4 0例慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞 (peripheralbloodmonoclearcells,PBMC) ,分别与植物血凝素 (PHA ,10 0mg/L)、HBcAg(1mg/L)、HBeAg(1mg/L)单独或联合IL 18(10 μg/L)体外培养 4 8h ,ELISA法检测培养液中IL 2、IFN γ、IL 4、IL 10水平。 2 0例健康人群作对照。结果 :IL 18对健康人群PBMC产生的Th1/Th2类细胞因子无明显影响 ,但对慢性乙肝患者在IL 18和HBcAg或IL 18和HBeAg联合诱导下则显著增强PBMC产生的Th1类细胞因子IL 2和IFN γ ,但对Th2类细胞因子IL 4和IL 10无明显影响。结论 :IL 18增强慢性乙肝患者Th1类细胞因子的优势表达 ,从而促进Th1细胞的优势分化 。

TNF-α通过NF-κB增强Th9细胞分化抑制肺癌细胞生长

目的研究TNF-α通过NF-κB增强Th9细胞分化抑制肺癌细胞生长的功能并对其相关机制进行初步探讨。方法分离野生型小鼠脾脏CD4^(+)T细胞,体外诱导Th9细胞分化。荧光定量PCR检测IL-9、IL-5和IL-13表达,ELISA检测Th细胞分泌IL-9变化。荧光定量PCR检测TNF-α在不同时间点对Th9细胞中IL-9表达的影响;TNF-α刺激分化的Th9细胞,免疫印迹检测NF-κB通路相关蛋白p-IKKα/β和IkB-α表达。使用NF-κB通路阻断剂,荧光定量PCR检测IL-9、IL-5和IL-13的表达。将体外TNF-α刺激诱导分化的Th9淋巴细胞通过尾静脉注射入肺癌小鼠体内,荧光定量PCR检测小鼠脾脏中IL-9、IL-5和IL-13的表达,免疫印迹检测小鼠肺癌组织中凋亡蛋白Bax/Bcl2表达,免疫荧光染色检测小鼠肺癌组织细胞增殖情况。结果荧光定量PCR显示,TNF-α联合Th9极化细胞因子TGF-β和IL-4增加Th细胞中IL-9、IL-5和IL-13的表达;ELISA实验结果显示,Th细胞分泌IL-9明显增多;荧光定量PCR显示,TNF-α处理后的Th9细胞中IL-9的表达在第2天或第3天达到最高水平;免疫印迹实验显示,TNF-α刺激NF-κB通路相关蛋白p-IKKα/β和IkB-α表达;荧光定量PCR显示,NF-κB通路阻断剂可消除TNF-α诱导的IL-9、IL-5和IL-13的表达。最后,荧光定量PCR显示,Th9淋巴细胞通过尾静脉注射入肺癌小鼠体内后,小鼠脾脏中IL-9、IL-5和IL-13的表达明显升高,免疫印迹显示小鼠肺癌组织中凋亡蛋白Bax/Bcl2表达升高,免疫荧光染色发现细胞增殖减少。结论TNF-α可以通过NF-κB信号通路增强Th9细胞分化增强肺癌细胞凋亡,抑制肺癌细胞增殖。

新型Th9细胞分化及功能调控的研究进展

Th9细胞是近年来新定义的一类辅助性T细胞亚群,主要由转化生长因子β(TGF-β)和白细胞介素4(IL-4共同诱导初始CD4^+T细胞分化而来。本文较详尽综述了Th9细胞分化过程中的分子调控机制及其在抗肿瘤免疫、炎症性肠病和过敏性疾病等热点研究中的最新研究进展和重要作用。深入研究Th9细胞分化及功能调控将对阐明多种重要免疫相关疾病的致病机理和防治策略提供依据。

蛋白激酶C-θ在吗啡诱导Th2细胞分化中的作用

目的探讨蛋白激酶C-θ(PKC-θ)在吗啡诱导初始T细胞分化模型中的作用及潜在机制。方法取小鼠脾脏,制备单细胞悬液,使用分离试剂盒获得初始T细胞。将提纯的初始T细胞分为六组:对照组、吗啡组、纳洛酮(吗啡拮抗剂)组、AEB071(PKC-θ抑制剂)组、吗啡+纳洛酮组和吗啡+AEB071组。按组别加入不同刺激物培养,收取细胞,采用流式细胞仪检测Th1和Th2细胞数量,采用ELISA法检测细胞因子IL-4和IFN-γ浓度,采用Western blot法检测PKC-θS676、T538两个位点的磷酸化水平,采用实时荧光定量PCR(qPCR)检测GATA3 mRNA表达量,采用凝胶迁移实验(EMSA)检测GATA3转录活性。结果与对照组比较,吗啡组Th2细胞数量明显增多,IL-4浓度明显升高,PKC-θS676、T538两个位点的磷酸化水平明显升高,GATA3 mRNA表达量及转录活性均明显升高(P<0.01)。与吗啡组比较,吗啡+纳洛酮组和吗啡+AEB071组Th2细胞数量明显减少,IL-4浓度明显降低,PKC-θS676、T538两个位点的磷酸化水平明显降低,GATA3 mRNA表达量及转录活性均明显降低(P<0.01)。六组Th1细胞数量和IFN-γ浓度差异无统计学意义。结论吗啡通过μ受体激活PKC-θ调控Th2细胞分化,PKC-θ可能作为逆转吗啡免疫抑制功能的一个干预靶点。

Notch配体Jagged1通过促进Th2型细胞分化促进食物过敏的发生

通过体外细胞实验和动物模型实验,研究在食物过敏发生中发挥作用的Notch配体,并进一步明确其重要作用。结果表明:细胞模型中,鸡蛋过敏原卵清白蛋白显著增强了骨髓源树突状细胞上Notch配体Jagged1的表达,Jagged1通过上调Gata-3的表达促进Th2型细胞分化。小鼠过敏模型中,Jagged1-Fc融合蛋白显著增强了小鼠体内Th2型细胞因子分泌,增强了Th2型免疫反应,进而加重小鼠的过敏反应。因此,Notch配体Jagged1通过诱导Th2型免疫反应促进食物过敏的发生。

VitD3对Th细胞极化的调节作用研究

目的研究VitD3对Th细胞分化的影响及可能的机制。方法无菌分离BALB/c小鼠细胞脾细胞,2.5μg/ml的ConA 加入刺激脾细胞,在不同时间段加入不同剂量的VitD3,72h后收集细胞,3H-TdR掺入法测定淋巴细胞增殖活性,RT-PCR方法检测参与Th细胞分化的细胞因子的mRNA表达水平。结果VitD3呈剂量依赖抑制ConA诱导的淋巴细胞的活化,10-5mol/L的VitD3对ConA诱导的淋巴细胞活化的抑抑制作用最强;该抑制作用与作用时间的长短呈相关性,ConA活化淋巴细胞24h后加入VitD3对淋巴细胞活化的抑制作用最显著,并且淋巴细胞的活化程度越低,VitD3对其抑制作用越强。VitD3可增强经ConA活化的淋巴细胞Th2型细胞因子(IL-4、IL-6)mRNA的表达水平,而Th1型细胞因子(IFN-γ、TNF-α)的mRNA的表达水平显著性下降(P<0.05)。结论VitD3可抑制ConA刺激的淋巴细胞增殖活性,但亦可增强Th2细胞的分化。

强直性脊柱炎患者H3K27me3表达水平及其调控Th17细胞分化的表观遗传机制

目的 探讨强直性脊柱炎(ankylosing spondylitis, AS)中组蛋白H3K27me3甲基化及其调节酶JMJD3和EZH2在Th17细胞分化中的作用,以揭示其在AS发病机制中的潜在作用。通过分析H3K27me3的甲基化状态及其与Th17相关因子之间的相互作用,为AS的临床治疗提供新的策略和靶点。方法 采集84名AS的患者(活跃期、稳定期各42例)和84名健康志愿者(对照组)血液样本,ELISA检测Th17细胞及相关细胞因子(IL-21、IL-22和IL-17),RT-PCR分析Th分化关键信号通路RORc、JAK2、STAT3基因的表达,蛋白质印迹法检测RORc、JAK2/STAT3通路蛋白、H3K27me3及相关蛋白酶EZH2、JMJD3的表达。对活动期AS患者H3K27me3、EZH2、JMJD3与Th分化关键信号通路分子的关联性进行Pearson相关分析。结果 RORc、JAK2、STAT3 mRNA表达,活动期组>稳定期组,差异有统计学意义(P<0.05)。H3K27me3、EZH2的表达量,活动期组<稳定期组<对照组,差异有统计学意义(P<0.05);JMJD3、RORc、JAK2、pJAK2、STAT3、pSTAT3的表达量,活动期组>稳定期组>对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。活动期组Th17比例及其炎性因子的表达水平高于其他两组(P<0.05)。H3K27me3与RORc、JAK2、STAT3、IL-17负相关,JMJD3与JAK2、STAT3、IL-17正相关,而EZH2与JAK2、STAT3、IL-17负相关(P<0.05)。结论 AS中H3K27me3的低表达受到基因位点JMJD3和EZH2的影响,可以调节Th17细胞的分化,从而在AS的发病和进展中发挥作用。