小鼠TIM1,TIM2和TIM3基因的克隆与序列分析

目的:克隆小鼠TIM1、TIM2及TIM3基因全长编码区cDNA,同时对其进行序列分析。方法:采用RT-PCR方法,从小鼠活化淋巴细胞中获取TIM1、TIM2及TIM3基因cDNA全长,克隆至pMD18-T载体,选择阳性克隆进行序列测定。结果:扩增得到小鼠TIM1、TIM2及TIM3基因编码区cDNA全长分别是918bp、918bp和846bp,分别编码306、306和282个氨基酸残基,与GeneBank中发表的序列完全一致。结论:获得小鼠TIM1、TIM2及TIM3基因的全长克隆,为进一步研究其生物学功能奠定了基础。

TIM2基因修饰的H22细胞体内成瘤作用的研究

目的观察小鼠TIM2基因修饰的H22肝癌细胞在小鼠体内的成瘤作用,初步研究TIM2基因在肿瘤生物治疗中的作用。方法构建TIM2基因的真核表达载体pIRES2-EGFP-TIM2,脂质体法转染H22细胞,体外筛选得到稳定表达TIM2基因的阳性单克隆H22细胞株,用以建立小鼠肝癌移植瘤模型,同时以转染了pIRES2-EGFP空载体的H22-EGFP细胞和H22细胞做为对照,观察不同处理的H22细胞对小鼠的成瘤情况。结果重组真核表达载体pIRES2-EGFP-TIM2转染H22细胞后,经体外筛选和鉴定,得到稳定表达EGFP和TIM2基因的阳性单克隆细胞株H22-TIM2,免疫接种小鼠后可明显抑制小鼠肿瘤的发生和发展,小鼠肿瘤组织块的体积明显小于接种H22-EGFP细胞和H22细胞组。此外,接种H22-TIM2细胞组小鼠的生长情况也明显好于其他各组。结论TIM2基因转染H22细胞后可显著降低小鼠H22肝癌细胞的成瘤性,抑制小鼠体内肿瘤的生长。本研究为进一步探讨TIM2在肿瘤生物治疗中的作用提供了初步的实验依据。

苦参碱对TIM2转基因小鼠肝癌细胞的作用研究

目的:观察苦参碱对TIM2转基因修饰小鼠H22肝癌细胞瘤苗的体内作用。方法:构建小鼠TIM2基因真核表达载体并用以转染H22细胞,经体外稳定筛选后获得TIM2转基因H22肝癌细胞全细胞瘤苗(H22-TIM2),用以建立小鼠肝癌移植瘤模型,观察该瘤苗在小鼠体内的成瘤性和免疫原性;加用药物苦参碱(matrine,M)治疗后,观察苦参碱对其体内抗癌活性的影响。结果:筛选得到的TIM2转基因H22肝癌细胞瘤苗有TIM2 mR-NA及EGFP的稳定表达,此瘤苗接种后,在小鼠体内的成瘤率为41%,远低于H22对照组和H22-EGFP空载体组(H22-EGFP)(后两者成瘤率在92%以上),对小鼠肿瘤的抑制率为69.2%,明显高于苦参碱治疗组(67.5%)和其他各组。同时苦参碱可进一步增强H22-TIM2瘤苗的肿瘤抑制率。H22-TIM2组小鼠的脾指数,CD4+T细胞亚群和CD4/CD8较其他实验组明显增高。结论:TIM2基因修饰H22细胞瘤苗可显著降低H22肝癌细胞在小鼠体内的致瘤性,在体内具有一定的免疫原性,苦参碱可明显改善其体内抗癌活性,为进一步研究TIM2基因在肿瘤免疫中的作用及苦参碱的抗癌机制奠定了基础。

TIM2转基因细胞瘤苗对小鼠作用的初步研究

目的观察小鼠TIM2转基因H22肝癌细胞瘤苗在小鼠体内的成瘤作用,初步研究其免疫原性。方法构建TIM2基因真核表达载体pIRES2-EGFP-TIM2,脂质体法转染H22细胞,制备得到TIM2基因修饰的H22细胞瘤苗,建立小鼠肝癌移植瘤模型,观察其在小鼠体内的成瘤作用。结果成功得到TIM2基因修饰的H22细胞瘤苗,免疫接种小鼠后,可明显抑制小鼠体内肿瘤的发生和发展;给予H22-TIM2接种的小鼠CD4亚群、CD4/CD8比值显著高于H22-EGFP细胞接种组、荷瘤对照组和正常对照组。结论TIM2基因修饰H22细胞后,可显著降低H22细胞的体内成瘤性,抑制小鼠肿瘤生长,同时。在体内具有一定的免疫原性,为进一步探讨TIM2在肿瘤生物治疗中的作用提供了初步的实验依据。

TIM2基因修饰对H22细胞的抑制作用及苦参碱的增强作用

目的观察苦参碱对TIM2基因修饰小鼠H22肝癌细胞瘤苗的体内作用。方法以携带小鼠TIM2基因的真核表达载体脂质体法转染H22细胞，经体外稳定筛选获得TIM2转基因H22细胞瘤苗。建立小鼠肝癌移植瘤模型，接种TIM2转基因H22细胞瘤苗（H22-TIM2组），观察成瘤情况，并设空载体转染的H22细胞稳定表达株和H22细胞作为对照（H22-EGFP组和H22组）；同时，分别加用药物苦参碱治疗，观察苦参碱对不同处理组小鼠肿瘤生长情况的影响。结果成功得到TIM2转基因修饰H22细胞，鉴定有TIM2基因mRNA及EGFP的稳定表达。免疫接种小鼠后，在小鼠体内的成瘤率为41．6％，明显低于H22组和H22-EGFP组（后两者成瘤率在91．6％以上）（P〈0．01），小鼠肿瘤的生长速率也较其他各组明显缓慢，实验结束时H22-TIM2组小鼠肿瘤平均体积为（31．344-9．21）mm^3，明显小于H22-EGFP组和H22组[（98．25±25．23）mm^3和（114．08±36．45）mm^3；P〈0．01]。接种H22-TIM2细胞对小鼠肿瘤的抑制率为69．2％，加用苦参碱后，抑瘤率达90．6％，明显高于单用苦参碱组（67．5％）及H22-EGFP和苦参碱联用组（70．8％）。结论TIM2基因修饰H22细胞可显著降低H22肝癌细胞在小鼠体内的致瘤性，抑制小鼠体内H22移植瘤的发生和发展，而苦参碱可明显改善其体内抗癌活性。

掺杂Nb_2O_5对RHP合成Al_2O_3-TiAl复合材料的影响

采用反应热压(RHP)工艺,利用Ti、Al、TiO2及Nb2O5之间的放热反应,在较低温度下制备了Nb2O5强化Al2O3/TiAl复合材料。借助XRD、OM及SEM等手段,考察了Nb2O5对Al2O3/TiAl复合材料的相分布及组织结构的影响。结果表明:材料产物由γ-TiAl、α2-Ti3Al、Al2O3和NbAl3相构成,Al2O3颗粒分布于基体交界处,存在一定的偏聚。Nb2O5的引入,使得γ-TiAl相含量减少,α2-Ti3Al相含量增大;基体晶粒有所细化,且分布逐渐趋于均匀。当Nb2O5的引入量(质量分数)为6%时,组织主要由α2-Ti3Al/γ-TiAl层片状晶团组成,出现了较完整的γ-TiAl晶粒,属于近片层(NL)组织结构,层片状晶团的尺寸小于50μm,γ晶粒尺寸小于5μm。力学性能测试表明,当Nb2O5的引入量(质量分数)为6%时,材料的抗弯强度达到最大值,约为593MPa,硬度为4·77GPa;断裂韧度达到最大值,为8·93MPa·m1/2,具有可接受的力学性能。