荷斯坦母牛TLR1基因多态性及其与体细胞评分关系

【目的】阐明Toll-like receptor 1(TLR1)基因多态性与荷斯坦母牛乳房炎抗性之间的关系,为奶牛乳房炎抗性的标记辅助选择提供依据。【方法】采用PCR-SSCP和PCR-RFLP检测208头荷斯坦母牛TLR1基因多态性,用最小二乘法分析基因多态性与荷斯坦母牛体细胞评分(somaticcell score,SCS)的关系。【结果】TLR1基因mRNA序列中存在G1409A、A1475C、G1550A和G1596A突变位点,其中G1596A突变使异亮氨酸变为缬氨酸;G1409A突变位点经BsiYⅠ酶切产生2种基因型AA和AB,频率分别为0.375和0.625,χ2检验表明荷斯坦母牛在该位点偏离Hardy-Weinberg平衡;AA和AB基因型SCS最小二乘均值差异不显著(P>0.05);A1475C突变位点经BstXⅠ酶切产生2种基因型CC和CD,频率分别为0.178和0.822,荷斯坦母牛在该位点偏离了Hardy-Weinberg平衡;CC和CD基因型SCS最小二乘均值差异不显著(P>0.05);G1550A突变位点经BsiYⅠ酶切产生3种基因型EE、EF和FF,频率分别为0.236、0.370和0.394,荷斯坦母牛在该位点偏离了Hardy-Weinberg平衡;EE、EF和FF基因型SCS最小二乘均值差异均不显著(P>0.05);G1596A突变位点经BclⅠ酶切产生3种基因型GG、GH和HH,频率分别为0.260、0.567和0.173,荷斯坦母牛在该位点处于Hardy-Weinberg平衡;HH基因型SCS最小二乘均值极显著低于GH基因型所对应的值(P<0.01),极显著低于GG基因型所对应的值(P<0.0001);GH基因型SCS最小二乘均值极显著低于GG基因型所对应的值(P<0.01)。【结论】对奶牛乳房炎抗性,HH是最有利基因型,GG是最不利基因型,初步证明TLR1基因G1596A多态位点的H等位基因是提高奶牛乳房炎抗性的一个潜在的DNA标记。

麦洼牦牛TLR1～10基因克隆及分子生物学特征分析

本研究克隆了麦洼牦牛天然免疫受体1~10基因的编码区,利用生物信息学工具分析基因特点,荧光定量PCR测定TLRs基因在不同组织中的表达量。序列比较分析结果表明,麦洼牦牛TLR基因与其他物种在核苷酸水平及氨基酸水平上均表现出很高的保守性。遗传进化方面,麦洼牦牛TLRs与牛和绵羊TLRs遗传进化距离最近,并与人、马、鼠TLRs等形成哺乳动物的一个分支,与鸡则形成遗传距离较远的一个分支。同时我们在进行系统发育分析时发现,TLR1、TLR6先聚为一小支,再与TLR10又聚为更紧密的一支,然后TLR1、2、6、10和TLR7、8、9分别聚集在两个单个的分支上,TLR其他成员各自成为一支。荧光定量结果表明,TLRs在麦洼牦牛各组织均有表达,但不同成员在不同组织的表达存在较大的差异。其中TLR2、TLR4和TLR6在脾表达量最高,在卵巢、小肠、肾、肝中有高表达,TLR1、TLR5、TLR7、TLR8、TLR9和TLR10在肾表达量最高,在肝、肾、脾等组织中高表达。综上所述,本研究的开展能为以后揭示TLRs在牦牛等高原模式动物分子免疫机制以及牦牛抗病育种奠定基础。

麦洼牦牛TLR1基因组织表达分析

【目的】建立一种牦牛TLR1基因表达量的荧光定量PCR检测方法,并分析TLR1基因在牦牛不同组织中的表达差异。【方法】参考牦牛TLR1基因序列,在其保守区设计特异性引物,并以牦牛β-actin基因为内参基因建立荧光定量方法;基于该荧光定量方法分析TLR1基因在牦牛心、肝、脾、肺、肾、大肠、小肠、胃、乳腺、肌肉、卵巢11种组织中的表达水平。【结果】TLR1基因和β-actin基因扩增产物电泳结果呈现单一条带,其产物熔解曲线均为特异的单峰,表明引物具有较高的特异性。组织表达结果显示,TLR1基因在所检测的牦牛11个组织样本中均有表达,其中在肾、肝、脾、肺、卵巢、小肠中表达量较高,在胃、乳腺、心、大肠、肌肉组织中表达量较低。【结论】TLR1基因在牦牛各组织中转录水平差异较大,这可能与各组织对病原体的识别和抵抗能力有关。

TLR1/2信号促CD8^+T细胞功能及其机制

目的:探讨Toll受体1/2(Toll like receptor1/2,TLR1/2)信号对荷瘤小鼠来源的CD8^+T细胞功能的影响及其可能机制。方法:利用小鼠Lewis肺癌细胞株3LL建立小鼠肺癌荷瘤模型,MACS分选小鼠脾CD8^+T细胞;体外经PBS或TLR1/2激动剂BLP刺激后,Real-time PCR和流式细胞术分别从基因和蛋白水平检测CD8^+T细胞的TLR分子表达;用ELISA和流式细胞术检测经PBS或BLP刺激后的CD8^+T细胞分泌细胞因子和增殖的能力,并用关键信号分子抑制剂分析可能的分子机制。结果:与PBS对照组相比,TLR1/2激动剂BLP不但有效上调荷瘤机体CD8^+T细胞TLR1和TLR2分子的基因水平[TLR1:(0.353±0.015)vs(0.101±0.017),P<0.01;TLR2:(0.232±0.031)vs(0.080±0.004),P<0.05]及蛋白水平(P<0.05),而且显著促进CD8^+T细胞分泌功能性细胞因子[IFN-γ:(2 375±305)vs(850±50),P<0.05;IL-2:(1 600±200)vs(350±50),P<0.05]和增殖的能力(P<0.05),这一效应依赖于NF-KB和P38通路。结论:TLR1/2信号直接作用于荷瘤小鼠的CD8^+T细胞并促进其功能,该研究既丰富了TLR的作用范围,也为基于TLR激动剂的肿瘤生物治疗提供了实验依据。

不同鸡种TLR1和TLR2基因SNP检测分析

本研究利用DNA直接测序技术对9个地方鸡种(北京油鸡、白耳鸡、溧阳鸡、河南斗鸡、泰和乌骨鸡、大骨鸡、狼山鸡、仙居鸡、茶花鸡)和1个引进品种(白来航蛋鸡)鸡Toll样受体1(chTLR1-1、chTLR1-2)、Toll样受体2(chTLR2-1、chTLR2-2)基因的全部外显子、部分内含子及5′调控区的序列进行单核苷酸多态性(SNPs)检测。结果共发现了27个SNP位点,96%的SNPs位于编码区,其中33%的SNPs为错义突变。chTLR2-1基因在所有品种中均未发现SNP位点,chTLR1-1、chTLR1-2和chTLR2-2基因在9个地方品种中突变位点较为丰富,且不同品种间SNP数量差别较大,但在白来航蛋鸡中均未发现SNPs位点。本试验为进一步开展地方鸡种chTLR1和chTLR2基因多态性与抗病研究提供了理论依据。

THP-1细胞中A20蛋白对TLR1和TLR2诱导免疫反应影响的研究

目的研究A20蛋白与Toll样受体1(TLR1)和Toll样受体2(TLR2)信号通路产生炎症因子的关系,探讨A20蛋白在TLR1和TLR2信号通路中的分子机制,为细菌性感染疾病的抗炎和基因治疗提供基础理论依据。方法预先用Pam3CSK4处理的THP-1细胞,用Pam3CSK4再刺激,分析Pam3CSK4预处理对Pam3CSK4诱导的细胞因子产生的影响;RT-PCR和Western blot检测Pam3CSK4处理后TLR1和TLR2及My D88的表达水平;采用siRNA转染抑制A20表达,验证A20在Pam3CSK4诱导免疫耐受中的作用。结果 Pam3CSK4预处理可下调Pam3CSK4再刺激所诱导的细胞因子表达水平,包括IL-1β、TNF-α及IL-8,同时Pam3csk4预处理下调Pam3csk4所诱导的JNK、p38及NF-κB的信号传导;另外Pam3CSK4显著上调A20的表达水平,且有剂量及时间依赖性;A20过表达细胞中,Pam3csk4诱导的促炎症细胞因子的表达被逆转。结论 A20是诱导Pam3csk4耐受的重要调节因子,对Pam3csk4诱导的炎症反应具有负调控作用。

人TLR1胞外段原核表达载体的构建、蛋白表达及纯化

目的:克隆、原核表达人Toll-like receptor1(TLR1)胞外段基因,获得人TLR1胞外段蛋白。方法:RT-PCR扩增人TLR1胞外段基因,构建pET30(a)+/TLR1表达质粒,转染大肠杆菌BL21,在BL21细胞中表达TLR1胞外段蛋白,并进行纯化和Western blot鉴定。结果:PCR扩增及重组质粒测序结果表明成功地构建了pET30(a)+/TLR1胞外段原核表达质粒,PCR扩增的目的基因大小为1700bp左右。表达的包涵体蛋白经溶解及变性后上镍亲和柱纯化,SDS-PAGE分析纯化产物在Mr为68kD处有明显蛋白条带;Western blot及ELISA结果显示,其表达纯化的蛋白为TLR1蛋白。结论:TLR1胞外段在大肠杆菌BL21中正确表达,为TLR1识别机制及信号转导机制研究奠定了基础。

中国荷斯坦牛TLR1基因SNPs快速筛查及蛋白功能预测

为探究中国荷斯坦牛Toll样受体1(TLR1)基因与中国荷斯坦牛乳房炎抗性的关联性,以中国荷斯坦牛为试验对象,构建DNA混合池,采用PCR扩增和直接测序法对中国荷斯坦牛TLR1基因进行单核苷酸多态性(SNP)检测,从而筛选出对中国荷斯坦牛免疫方面有显著影响的SNPs位点,同时应用在线软件对中国荷斯坦牛TLR1基因编码的蛋白质进行功能预测。结果表明,中国荷斯坦牛TLR1基因编码727个氨基酸,组成了一种不稳定的水溶性蛋白,蛋白质二、三级结构均以α-螺旋为主;PCR扩增后,在扩增片段处共发现8个SNPs位点,分别为A61T-TLR1、C632A-TLR1、C1408T-TLR1、C1451T-TLR1、A1461G-TLR1、A1475C-TLR1、G1550A-TLR1、G1596A-TLR1,其中A61T-TLR1、C632A-TLR1、C1408T-TLR1、A1461G-TLR1、G1596A-TLR1属错义突变,分别由原来的赖氨酸(Lys)、苯丙氨酸(Phe)、丙氨酸(Ala)、异亮氨酸(Ile)、缬氨酸(Val)突变为甲硫氨酸(Met)、亮氨酸(Leu)、缬氨酸(Val)、缬氨酸(Val)、异亮氨酸(Ile),SNPs位点的等位基因频率在突变前后均存在差异。DNA池结合直接测序技术检测到TLR1基因8个SNPs位点,可作为中国荷斯坦牛乳房炎的遗传标记进行深入研究;蛋白质功能预测结果表明,有多种与免疫相关的因子几率较高。本研究结果为中国荷斯坦牛在分子领域的抗病育种提供了理论依据。

鸡TLR1A基因正选择nsSNP与沙门氏菌易感性的关联性研究

为探究鸡TLR1A基因正选择nsSNP位点与沙门氏菌易感性的关联,挖掘其潜在的功能性位点,本研究利用多种生物信息学方法对ChTLR1A的21个nsSNP位点及基因的选择压力进行综合分析,筛选ChTLR1A正选择nsSNP功能性位点,深入分析其与鸡沙门氏菌易感性之间的相关性。结果显示,rs739087452(I388L)和rs313678806(C815R)在种上及种内均受到正选择作用,且rs739087452(I388L)位点的变异使其蛋白稳定性降低。rs313678806(C815R)与鸡沙门氏菌的易感性显著相关(P<0.001),C/C基因型为沙门氏菌抵抗型,表明rs313678806(C815R)可能是影响鸡沙门氏菌易感性的重要功能性SNP。本实验结果可为TLR1A基因标记在鸡抗病育种中的利用提供参考依据。

迟缓型爱德华氏菌(Edwardsiella tarda)诱导牙鲆(Paralichthys olivaceus)TLR1及TLR2基因的表达分析

Toll样受体是一类重要的蛋白质分子,参与固有免疫系统,在哺乳动物在受到细菌感染的时候,TLR1和TLR2基因可以形成异源二聚体,进而启动宿主的固有免疫。本文应用实时荧光定量PCR的技术,检测了TLR1和TLR2基因在牙鲆健康组织以及牙鲆腹腔注射迟缓型爱德华氏菌(Edwardsiella tarda)后各组织中的表达变化,并探讨了它们与牙鲆(Paralichthys olivaceus)固有免疫反应的关系。结果表明,TLR1和TLR2基因广泛表达于健康牙鲆的各种组织中,其中,TLR1在脾脏组织中表达量最高,其次是心脏、肌肉;TLR2在小肠组织中表达量最高,其次是肝脏、心脏。免疫刺激实验表明,多数组织在感染病原6h后TLR1基因表达达到峰值,其中脾脏中基因的表达量最大,是0时间点的290倍(P<0.01)。TLR2基因在感染病原1h后在脾脏中表达量最高,为0时间点的17.8倍(P<0.01),在感染病原1d后心脏组织中基因的表达量为对照组的14倍(P<0.01),其余时间点表达变化不明显。结果表明TLR1和TLR2参与了牙鲆对迟缓型爱德华氏菌的免疫应答反应。实验结果还显示,在牙鲆感染迟缓型爱德华氏菌后,MyD88、TNF-α和IL-1基因的表达也都同步上调,暗示迟缓型爱德华氏菌有可能通过TLR1通路上调MyD88的表达,并最终导致炎症因子TNF-α和IL-1的基因表达上调,以应答病原菌的感染。

鲈形目TLR1和TLR9基因的选择压力分析

鲈形目(Perciformes)是鱼类中物种丰富度最高的一个目,分布在多个水域,在渔业经济发展中占据着重要地位.然而,高密度的养殖模式加剧了病原微生物引起的鱼类病害.Toll样受体(Toll-like receptors,TLRs)是先天免疫中的重要蛋白质分子,在病毒以及细菌防御中起重要作用.本文以TLR1和LTR9为候选基因,共下载了鲈形目17个代表物种的同源序列,通过进化分析探讨该目物种先天性免疫的分子进化基础.选择压力分析发现TLR1、TLR9基因中分别有16和8个正选择位点被两种方法同时检测到,且86%的位点位于蛋白质富含亮氨酸重复序列(Leucine rich repeat,LRR)结构域.上述结果提示鲈形目物种面临较高的病原微生物感染的挑战,而这些正选择位点可能导致基因进化出重要的功能改变以抵抗病原体的侵袭.另外,Free-ratio以及Branch-site模型检测发现基因的正选择具有物种特异性,如TLR1在鲷科的最近共同祖先支以及鲈科最近共同祖先支等受到显著正选择,TLR9也在鲷科的最近共同祖先支受到显著正选择,且这些谱系被报道经常受到病原体的威胁,因此,鲈形目多个谱系受到正选择可能是在长期抵抗病原微生物侵袭中进化的结果.以上研究结果表明,在长期抵御病原微生物过程中,鲈形目物种的TLR1、TLR9基因可能发生了适应性功能改变.

哮喘大鼠TLR1、FasL和TRAF2表达及甲基强的松龙干预作用

目的:探讨TLR1、FasL和TRAF2在大鼠哮喘炎症机制中的作用,观察甲基强的松龙对其表达的影响。方法:27只SD大鼠,随机分成哮喘模型组、正常对照组和甲基强的松龙组,每组9只,采用流式细胞术检测血淋巴细胞TLR1和FasL表达,免疫组织化学法检测肺组织TRAF2表达。结果:哮喘组血淋巴细胞TLR1表达水平显著低于甲基强的松龙组(P<0.05),正常对照组血淋巴细胞TLR1表达水平分别与哮喘组及甲基强的松龙组比较,差异无统计学意义(P均>0.05)。哮喘组和甲基强的松龙组血淋巴细胞FasL表达水平均显著高于正常对照组(P均<0.05),而哮喘组血淋巴细胞FasL表达水平与甲基强的松龙组比较差异无统计学意义(P>0.05)。哮喘组TRAF2光密度值显著高于正常对照组和甲基强的松龙组(P均<0.01),甲基强的松龙组TRAF2光密度值与正常对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:哮喘模型大鼠FasL和TRAF2表达增加,而TLR1无变化;甲基强的松龙能下调TRAF2和提升TLR1水平,从而起到抗炎作用。

双峰驼TLR1原核表达体系构建、抗体制备及组织表达分析

本研究运用生物信息学软件分析并通过原核表达系统诱导双峰驼TLR1(Toll‑like receptors 1,TLR1)蛋白表达,制备兔抗双峰驼TLR1多克隆抗体,通过HE染色法和SABC免疫组织化学法检测其在双峰驼心脏、肝脏、脾脏、肺脏和肾脏中的表达。结果表明,得到的目的蛋白大小为62 kDa,与预测结果相符。重组蛋白主要以包涵体的形式表达。通过间接ELISA检测抗体效价为1∶64000,Western blot检测原核表达的重组蛋白TLR1能与对应抗体特异性识别。HE和SABC免疫组化染色结果显示TLR1主要在双峰驼心脏的心肌细胞,肝脏的枯否细胞,脾脏的单核/巨噬细胞,肺脏的呼吸性细支气管上皮细胞、Ⅰ型肺泡细胞和Ⅱ型肺泡细胞,肾脏的远曲小管上皮细胞上呈阳性表达。综上表明,本研究成功制备的兔抗双峰驼TLR1多克隆抗体具有良好的特异反应性并能用于TLR1的免疫组化检测,且为进一步探究TLR1在双峰驼不同组织器官中所扮演的角色奠定了基础。

鸡TLR1A基因2个SNP位点功能分析及与坝上长尾鸡沙门氏菌感染抗性的相关分析

为确定鸡TLR1A基因g.926G>A和g.1076G>C等2个nsSNP位点多态性及其功能意义,采用CRS-PCR-RFLP方法检测了310只坝上长尾鸡(阳性127只,阴性183只)TLR1A基因2个nsSNP位点的多态性、二者与沙门氏菌抗性的关联,并对其进行生物信息学与适应性进化分析。结果表明,g.926G>A(S309N)和g.1076G>C(R359P)与鸡沙门氏菌易感性显著相关(P<0.05)。其中,S309N在种间种内水平均受到正选择压力;R359P在种内受到正选择压力。二者均具有有害性,且后者蛋白稳定性较低。鸡TLR1A基因的g.926G>A和g.1076G>C位点可作为鸡抗病育种中潜在的功能性位点。

人TLR1胞外段的克隆及测序分析

目的构建人Toll样受体1(TLR1)胞外段原核表达质粒。方法采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)从人外周血单个核细胞(PBMC)mRNA中扩增人TLR1胞外区cDNA;将扩增的目的基因与原核表达载体pET30a(+)质粒经NcoⅠ和NotⅠ双酶切后连接,转化E.coli BL21(DE3),筛选转化子,菌落PCR及测序验证克隆序列的正确性。结果测序结果表明,成功构建pET30a(+)-TLR1胞外区基因重组质粒,并转化感受态E.coli BL21(DE3)。结论 TLR1胞外段在大肠杆菌BL21中正确克隆,为TLR1信号通路的进一步研究打下了基础。

miR-485-3p通过靶向TLR1／NF-κB信号通路调节胃癌细胞放射敏感性

目的：研究miR-485-3p是否通过靶向TLR1对胃癌细胞放射敏感性起作用。方法分别用qRT-PCR和蛋白印迹法检测miR-485-3p和TLR1的表达变化，DIANA、TargetScan和miRanda软件预测和双荧光素酶报告实验验证 miR-485-3p 对 TLR1的靶向作用。将 miR-485-3p mimic 或TLR1 siRNA转染到胃癌MGC803细胞中，放射处理细胞，凋亡实验、克隆形成实验和MTT检测细胞放射敏感性的变化。双荧光素酶报告实验检测miR-485-3p上调和TLR1沉默对NF-κB活性的影响。蛋白免疫印迹实验探究miR-485-3p上调和TLR1沉默对NF-κB靶基因的影响。结果放射处理后胃癌细胞miR-485-3p表达下调，TLR1表达上调。靶基因预测软件发现TLR1可能是miR-485-3p的靶基因，双荧光素酶报告实验进一步验证了TLR1是miR-485-3p的直接靶点。 miR-485-3p负调控TLR1的表达。 miR-485-3p的过表达提高了细胞凋亡率，降低了细胞克隆形成和细胞群体增殖能力，增强了细胞的放射敏感性，且TLR1的沉默也具有相同作用。 miR-485-3p上调和TLR1沉默均降低了NF-κB的活性，下调了NF-κB多个靶基因的表达。结论 miR-485-3p可能通过靶向TLR1调控NF-κB信号通路增强胃癌细胞的放射敏感性。

大肠杆菌感染诱导的小尾寒羊外周血白细胞TLR1～5基因差异表达

i小尾寒羊经乳房实验性感染大肠杆菌，利用半定量RTPCR方法检测大肠杆菌感染后不同时间小尾寒羊外周血白细胞中TLR1～5基因mRNA的表达情况。结果显示，大肠杆菌感染后外周血白细胞中TLR1～5基因mRNA的表达均出现先升高后降低的趋势。其中TLR3、TLR4和TLR5基因的相对表达量于大肠杆菌感染后24，36，48h均出现显著或极显著升高，而TLR2和TLR4基因的相对表达量于感染后72h时出现显著降低。结果表明，大肠杆菌感染后，TLR3、TLR4和TLR5受体与细菌的识别、炎症的发生密切相关，为进一步研究TLR1～5基因在绵羊大肠杆菌乳房炎发病过程中的作用机制奠定了基础。

DNA池快速筛查中国荷斯坦牛TLR1~TLR6基因SNPs及等位基因频率估算

Toll样受体(Toll-like receptor,TLRs)是固有免疫系统的重要组成成分,在免疫防御、炎症反应等方面发挥重要的作用,并与乳腺炎抗性显著相关。为筛选出对荷斯坦牛乳腺炎有显著影响的单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms,SNPs)位好点,本研究以中国荷斯坦牛为试验对象,构建DNA混合池,采用PCR扩增和直接测序法对荷斯坦牛TLR1~TLR6基因进行SNPs检测。结果表明,在扩增片段处共发现22个SNPs,其中C^1451T-TLR1、A^1475C-TLR1、G^1550A-TLR1、T^189G-TLR2、C^1632T-TLR7、T^1515C-TLR6、G^1578A-TLR6,T^1620C-TLR6、A^1644C-TLT6和G^1719A-TLR6为同义突变;A61T-TLR1、C632A-TLR1、C^1408T-TLR1、A^1461G-TLR1、G^1596A-TLR1、G^455A-TLR2、G^602A-TLR2、A^631G-TLR2、G^640A-TLR6、C^1577T-TLR6、G^1630A-TLR6为错义突变,导致11个氨基酸发生改变;SNPs突变前后等位基因频率均有明显差异。DNA池结合直接测序技术可快速筛选SNPs位点,检测到TLR1~TLR6基因22个SNPs,可作为荷斯坦奶牛乳腺炎的遗传标记进行深入研究。

针刺对营养性肥胖小鼠肠黏膜TLR1/TLR2基因的良性调控作用

目的:探究针刺对营养性肥胖小鼠肠黏膜TLR1/TLR2基因的良性调控作用。方法:100只C57BL/6小鼠,采用随机数字表随机选取10只为正常组,余下饲养高脂饮食8周,复制营养性肥胖鼠30只,随机均分成模型组、针刺14d组及针刺28d组,针刺组针刺中脘、关元、天枢、足三里,得气后留针10min,观察比较各组小鼠体质量、Lee’s指数、血清脂肪因子[瘦素(LP)、脂联素(ADPN)]、炎性因子[白介素-6(IL-6)、白介素-10(IL-10)及肿瘤坏死因子α(TNF-α)]含量变化及肠黏膜组织中TLR1/TLR2基因的表达差异。结果:模型鼠体质量、Lee’s指数、LP、ADPN、肠组织炎性因子(IL-6、IL-10、TNF-α)及TLR1及TLR2蛋白分布密度及基因表达均显著高于正常组(P<0.01),针刺后显著下降(P<0.05,P<0.01),针刺28d组疗效优于针刺14d组(P<0.05)。结论:针刺治疗肥胖,调整肠黏膜的免疫状态,下调关键炎性调控基因TLR1/TLR2的表达,达到消除慢性炎症治疗肥胖的目的。

基于HMGB1/TLR4/PKR通路探讨松果菊苷对重症急性胰腺炎肠道黏膜屏障损伤的修复机制

目的探讨松果菊苷(ECH)预处理对减轻重症急性胰腺炎(SAP)引起的肠道屏障功能障碍的影响。方法将36只大鼠随机分为Sham组、SAP组和SAP+ECH组,每组12只。采用胰管逆行注射3%牛磺胆酸钠诱导胰腺炎。对实验大鼠胰腺进行组织学检查,判断大鼠胰腺炎模型是否构建成功。通过大鼠肠道病理评分、血清二胺氧化酶(DAO)活性和内毒素水平,以及肠系膜淋巴结细菌易位率检测评估肠屏障功能。采用荧光定量PCR(qPCR)和蛋白质印迹(Western blot)检测紧密连接蛋白ZO-1和occludin的mRNA和蛋白表达水平,通过Western blot检测高迁移率组框1蛋白(HMGB1)、Toll样受体4(TLR4)和蛋白激酶R(PKR)表达水平。结果ECH对胰腺的组织学变化无明显影响,但可改善与SAP相关的肠黏膜屏障损伤和膜通透性。虽然ECH不影响SAP大鼠的回肠组织ZO-1和occludin的mRNA表达水平,但可明显增加ZO-1和occludin蛋白表达水平,并且ECH处理可明显降低SAP大鼠回肠HMGB1、TLR4和PKR蛋白表达水平。结论ECH可以减轻SAP诱导的体内肠道屏障功能障碍,其对肠道屏障功能的影响可能与抑制HMGB1/TLR4/PKR通路有关。