TLR9 mRNA在巨细胞病毒感染儿童外周血中的表达

目的 探讨HCMV感染患儿外周血中TLR9 mRNA的表达。方法 选择2019年1月-2019年12月江西省儿童医院收治HCMV感染88例为研究对象,其中未给予更昔洛韦治疗23例为治疗前组,给予更昔洛韦治疗27例为治疗后组;同期未感染HCMV健康儿童38例为正常组。采用RT-PCR检测TLR9 mRNA表达,以2^(-△△Ct)方法对mRNA表达进行相对定量,对比分析各组指标的变化。结果 HCMV感染组和正常组外周血中TLR9 mRNA表达量平均值分别为1.986±0.306和3.001±0.543,2组间差异无统计学意义(t=1.724,P=0.088)。HCMV感染治疗前组和治疗后组外周血中TLR9 mRNA表达量平均值分别为1.778±0.312和2.163±0.504,2组间差异无统计学意义(t=0.624,P=0.536)。结论 TLR9 mRNA在HCMV感染儿童外周血中的表达降低,但其表达水平与不同治疗时期无相关性。

鸦胆子苦醇通过TLR9-MyD88信号通路调控Hela细胞凋亡的机制研究

目的探究鸦胆子苦醇(Brusatol,BRU)通过TLR9-MyD88信号通路调控Hela细胞凋亡的分子机制。方法针对本实验室保存的Hela细胞,使用不同浓度(0、5.0、10.0、20.0、40.0、80.0 nmol·L^(-1))的鸦胆子苦醇处理细胞。并将Hela细胞分为Control组(正常培养的Hela细胞)、BRU-L组(使用10.0 nmol·L^(-1)的鸦胆子苦醇处理细胞)BRU-H组(使用20.0 nmol·L^(-1)的鸦胆子苦醇处理细胞)、BRU+pcDNA-NC组(转染pcDNANC+20.0 nmol·L^(-1)的鸦胆子苦醇)、BRU-H+pcDNA-TLR9组(转染pcDNA-TLR9+20.0 nmol·L^(-1)的鸦胆子苦醇)。使用细胞计数试剂盒(CCK-8)法和EdU法检测各组细胞增殖情况;TUNNEL染色法,经流式细胞仪检测细胞凋亡;蛋白免疫印迹(Western blot)检测各组细胞TLR9、MyD88、Bax、Bcl-2、Cleaved Caspase-3和Cleaved Caspase-9蛋白表达水平;流式细胞术检测细胞凋亡和线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1)情况、ELISA检测各组细胞三磷酸腺苷(ATP)和活性氧基团(ROS)含量。结果与0 nmol·L^(-1)组比较,10 nmol·L^(-1)组细胞活存活率、IC50值开始显著降低(P<0.05)。不同浓度的BRU刺激细胞后,细胞增殖能力显著降低,且呈剂量依赖(P<0.05)。。与Control组比较,BRU-L、BRU-H组、BRU-H+pcDNA-NC组细胞5-乙炔基-2′-脱氧尿嘧啶核苷(EDU)阳性细胞率、缺口末端标记法(TUNEL)阳性细胞率、细胞凋亡率、细胞Bcl-2蛋白均显著降低,TLR9和MyD88蛋白、Bax、Bax/Bcl-2、Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9蛋白水平均明显增加(P<0.05);Control组、BRU-L、BRU-H组/BRU-H+pcDNA-NC呈持续递减/递减趋势(P<0.05);与BRU-H+pcDNA-NC组比较,BRU-H+pcDNA-TLR9组EDU阳性细胞率、TUNEL阳性细胞率、细胞凋亡率、细胞Bcl-2蛋白均显著升高,TLR9和MyD88蛋白、Bax、Bax/Bcl-2、Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9蛋白水平均明显降低(P<0.05)。与Control组比较,BRU-L、BRU-H组、BRU-H+pcDNA-NC组细胞JC-1水平和ATP含量显著降低,而ROC含量、mitotracker染色阳性细胞水平显著增加(P<0.05);与BRU-L组比较,BRU-H组、BRU-H+pcDNANC组JC-1水平和ATP含量进一步降低,而ROC含量、mitotracker染色阳性细胞水平进一步增加(P<0.05);与BRU-H+pcDNA-NC组比较,BRU-H+pcDNA-TLR9组细胞JC-1水平和ATP含量增加,而ROC含量、mitotracker染色阳性细胞水平降低(P<0.05)。结论鸦胆子苦醇可通过调控TLR9-MyD88信号通路制Hela细胞增殖。

TLR2/TLR9激动剂对鲍曼不动杆菌肺部感染的保护作用

目的评价toll-like receptor(TLR)2/TLR9激动剂对肺部感染鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii,Ab)小鼠的保护作用。方法将6~8周龄雌性C57小鼠分为PBS组、Pam_(2)CSK_(4)(Pam)组、CpG ODN(CpG)组和Pam+CpG组,以不同剂量滴鼻免疫后24 h进行Ab肺部致死性感染,观察小鼠生存率。构建亚致死剂量Ab肺部感染模型,测定感染后小鼠血液、肺脏、肝脏、肾脏和脾脏的细菌定植量,并取小鼠肺脏和肾脏进行HE染色,分析病理损伤程度。探索免疫1、3、7 d后对小鼠Ab感染的保护作用,明确保护时间窗。Pam+CpG体外刺激A549上皮细胞和RAW264.7细胞,考察两种细胞对Ab的杀伤或吞噬作用。结果与PBS组比较,Pam+CpG组能显著提高Ab致死感染小鼠的生存率(P<0.05,P<0.01),降低亚致死感染后小鼠血液(P<0.01)、肺脏(P<0.01)、肝脏(P<0.05)、肾脏(P<0.01)和脾脏(P<0.01)的细菌定植量,减轻感染导致的病理损伤;在感染之前1 d或3 d免疫均可显著提高小鼠的生存率(P<0.05),其中免疫后3 d保护效果最好。与PBS、Pam、CpG组比较,Pam+CpG组可以显著促进A549上皮细胞和R AW264.7细胞对Ab的杀伤或吞噬作用(P<0.01)。结论TLR2/TLR9激动剂合用对Ab致死和亚致死感染均具有显著的保护作用,可能的机制是其促进了肺上皮细胞和巨噬细胞对Ab的杀伤或吞噬作用。

过敏性鼻炎和哮喘患者外周血及致敏小鼠血液或肺组织B细胞中TLR9的表达研究

目的探究过敏性鼻炎(allergy rhinitis,AR)、过敏性哮喘(allergy asthma,AA)、AR合并AA(AR combined with AA,ARA)患者外周血和致敏小鼠血液或肺组织B淋巴细胞(B细胞)中Toll样受体9(Toll-like receptor 9,TLR9)的表达及过敏原对其表达的影响。方法招募来自锦州医科大学附属第一医院门诊和发作急性期住院的100例志愿者,包括点刺实验阴性的19例健康对照(health control,HC)志愿者、点刺实验阳性的40例AR患者、26例AA患者、15例ARA患者。流式分析仪检测经屋尘螨过敏原提取物(home dust mite allergen extract,HDME)、大籽蒿过敏原提取物(Artemisia sieversiana wild allergen extract,ASWE)、梧桐过敏原提取物(Platanus pollen allergen extract,PPE)刺激前后患者外周血B细胞中TLR9的表达;并采用野生(WT)小鼠和FcεRI基因敲除(FcεRI-KO)小鼠建立AR和AA致敏模型,检测过敏原以及FcεRI对B细胞中TLR9表达的影响。结果AR、AA、ARA患者外周血B细胞中TLR9的表达和平均荧光强度(mean fluorescence intensity,MFI)均较HC组有所增高;过敏原激发后,AR、AA患者血液B细胞中TLR9的表达和MFI升高(P<0.05)。WT小鼠和FcεRI-KO小鼠与NS对照组相比,过敏原激发后,AR、AA小鼠外周血B细胞TLR9^(+)高表达,但差异无统计学意义,而几乎每组MFI均升高;与NS对照组相比,过敏原激发后FcεRI基因敲除的AA小鼠肺组织中TLR9^(+)B细胞表达差异无统计学意义,但其MFI升高。FcεRI-KO小鼠与WT小鼠相比,过敏原激发后B细胞中TLR9^(+)MFI较低。结论B细胞中TLR9可能参与AR、AA的发生,检测B细胞中TLR9的表达可能成为诊断AR、AA的新方向。

试论免疫细胞表面的TLR9及其免疫调节作用

Toll样受体9(TLR9)是Toll样受体家族的成员之一,其可被病原体来源的非甲基化磷酸胞苷鸟苷DNA(CpG DNA)或人工合成的含非甲基化CpG的寡核苷酸(CpG ODN)激活,并通过其下游信号传导直接或间接启动固有免疫反应,从而抵抗病原体的入侵。长期以来,TLR9一直被认为是位于内溶酶体中的细胞内DNA传感器。然而,随着研究的深入,发现TLR9也可以在细胞膜表面表达,如中性粒细胞、B细胞甚至红细胞,被称为表面TLR9(sTLR9)。此外,细胞免疫反应的激活可以在细胞内外的这两个TLR9位点启动,TLR9在细胞膜上的定位有助于激活内体TLR9(eTLR9)介导的信号通路。sTLR9的存在可能有利于某些细胞类型或组织中的宿主反应,如红细胞可以通过sTLR9介导巨噬细胞等先天免疫细胞的激活,从而在炎症状态下加速自身的清除。因此,深入了解sTLR9的结构特征、sTLR9与CpG DNA的关系,以及sTLR9在免疫细胞中的免疫调节作用,将为TLR9激动剂的临床应用提供理论参考。

玉屏风颗粒通过调控TLR9/AP-1信号通路对过敏性鼻炎大鼠鼻黏膜重塑、白三烯水平及免疫调节的作用

目的 探究玉屏风颗粒通过调控Toll样受体(TLR)9/激活蛋白(AP)-1信号通路对过敏性鼻炎大鼠鼻黏膜重塑、白三烯水平及免疫调节的作用。方法 选取大鼠60只,除健康10只外其余建立过敏性鼻炎模型,所有大鼠分为健康(A)组、模型(B)组、玉屏风颗粒低剂量(C低)组、玉屏风颗粒中剂量(C中)组、玉屏风颗粒高剂量(C高)组、氯雷他定(D)组,各10只。分组后给予相应药物干预。其中,C高、中、低组用5.40、2.70、1.35 g/kg灌胃,D组以0.90 mg/kg灌胃,A、B组每天进行等体积生理盐水灌胃,均连续干预30 d。经酶联免疫吸附试验(ELISA)检测白细胞介素(IL)-4、组织胺(HIS)、血清肿瘤坏死因子(TNF)-α、免疫球蛋白(Ig)E,苏木素-伊红(HE)染色观察组织形态,对鼻黏膜中嗜酸性粒细胞(EOS)检测,Western印迹检测细胞癌基因fos蛋白(C-Fos)、原癌基因蛋白(C-Jun),反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测白三烯受体(CysLT1-R)和CysLT2-R基因mRNA表达。结果 与A组比较,B组血清中IL-4、TNF-α、IgE、HIS表达、鼻黏膜组织中EOS细胞及CysLT1和CysLT2 mRNA表达、C-Fos、C-Jun蛋白水平明显增加(P<0.05);与B组相比,C中组血清中IL-4、TNF-α、IgE、HIS表达、鼻黏膜组织中EOS细胞及CysLT1和CysLT2 mRNA表达、C-Fos、C-Jun蛋白表达明显降低(P<0.05);与C中组比较,C高组血清中IL-4、TNF-α、IgE、HIS表达、鼻黏膜组织中EOS细胞及CysLT1和CysLT2 mRNA表达、C-Fos、C-Jun蛋白表达明显降低(P<0.05);与C高组比较,D组血清中IL-4、TNF-α、IgE、HIS表达、鼻黏膜组织中EOS细胞及CysLT1和CysLT2 mRNA表达、C-Fos、C-Jun蛋白表达明显升高(P<0.05);且B组与C低组比较无明显差异(P>0.05),C中组与D组比较无明显差异(P>0.05)。A组鼻腔内黏膜组织良好,无EOS浸润、充血;B组与C低组鼻腔内黏膜组织损坏严重,大量EOS浸润产生及黏膜上皮脱落,黏膜下腺体增生和血管扩张充血;C中组与D组鼻黏膜仍有部分肿胀及嗜酸性粒细胞,仍有炎性浸润现象;C高组鼻腔黏膜中仍有少量水肿和轻度血管扩张现象,EOS浸润明显降低。结论 过敏性鼻炎大鼠经玉屏风颗粒治疗后,白三烯表达降低,黏膜病理及免疫功能改善,机制可能与调节TLR9/AP-1信号通路相关。

枸杞多糖通过调控TLR9/AP-1信号通路对变应性鼻炎大鼠Th1/Th2细胞因子及鼻黏膜中嗜酸性粒细胞炎症的影响

目的探究枸杞多糖通过调控Toll样受体9/激活蛋白-1(TLR9/AP-1)信号通路对变应性鼻炎大鼠Th1/Th2细胞因子、鼻黏膜中嗜酸性粒细胞炎症的影响。方法选取60只SPF级SD雄性大鼠,随机分为正常(A)组,模型(B)组,糠酸莫米松(C)组,枸杞多糖(D)组,TLR9/AP-1信号通路抑制剂(E)组,TLR9/AP-1信号通路抑制剂联合枸杞多糖(F)组,每组各10只,对B、C、D、E、F组采用卵清蛋白致敏法建立变应性鼻炎模型,A组不建立该模型。建模成功后,对C组给予1喷/侧的糠酸莫米松喷鼻治疗,对D组灌胃100 mg/kg的枸杞多糖,对E组灌胃20 mg/kg AP-1抑制剂SP100030,对F组给予SP100030联合枸杞多糖,A、B组同期给予灌胃同体积生理盐水,对大鼠鼻部症状进行评分,HE染色法检测鼻黏膜组织病理形态及嗜酸性粒细胞并计数,ELISA法检测大鼠血清中Th1/Th2细胞因子水平,免疫印迹法检测鼻黏膜组织中TLR9/AP-1信号通路相关蛋白表达。结果与A组相比,B组鼻部症状评分、鼻黏膜中嗜酸性粒细胞数目、血清IL-4含量显著升高(P<0.05),血清中INF-γ含量显著降低(P<0.05);与B组比较,C、D两组鼻部症状评分、鼻黏膜中嗜酸性粒细胞数目、血清IL-4含量显著降低(P<0.05),血清中INF-γ含量显著升高(P<0.05),且D组比C组变化显著(P<0.05);A组大鼠鼻黏膜组织结构完整,B组鼻黏膜上皮结构紊乱且不完整,出血及嗜酸性粒细胞等炎性细胞浸润;与B组相比,C、D组病理状态明显改善,嗜酸性粒细胞明显减少;与A组比较,B组鼻黏膜组织中TLR9、AP-1蛋白表达显著升高(P<0.05),与B组比较,C、D组鼻黏膜组织中TLR9、AP-1蛋白表达显著降低(P<0.05),且D组比C组变化显著(P<0.05),而E组与D组相比无明显差异(P>0.05),F组比E组降低明显(P<0.05)。结论枸杞多糖可有效调控变应性鼻炎大鼠Th1/Th2细胞因子水平、减轻鼻黏膜中嗜酸性粒细胞炎症,其机制可能与抑制TLR9/AP-1信号通路有关。

TLR9启动子区基因多态性与柯萨奇病毒 A16感染手足口病患儿的相关性研究

手足口病(hand,footand mouth disease,HFMD)是一类肠道病毒(enterovirus,EVs)感染引起的传染性疾病,儿童是该病的易感人群,引发手足口病的肠道病毒有多种(型),其中以肠道病毒71型(EV71)和柯萨奇病毒A16型(Cox A16)最为常见。随着近几年EV71型灭活疫苗的接种,EV71感染的儿童手足口病占比减少。虽然CoxA16病毒感染后大部分患儿临床症状较轻,但是发病率较高,引起越来越多的关注[1-2]。CoxA16感染的患儿临床表现轻重不一,轻症者仅为发热、皮疹、口腔黏膜散在疱疹等,重症者可出现中枢神经系统损害、心肺功能衰竭等[3-4],CoxA16病毒感染的发病机制至今没有完全阐明,可能与其感染导致的异常免疫反应有关[5-6]。

FoxP3、CD4^+CD25^+调节性T细胞、TLR2和TLR9在儿童传染性单核细胞增多症中的变化

本研究旨在探讨TLR2(Toll-like receptors,TLRs)、TLR9和CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)及其转录因子FoxP3在儿童传染性单核细胞增多症(infectious mononucleosis,IM)发病中的作用。2010年4月至2011年1月我院儿科诊治的初次发病的急性期IM患儿35例(IM急性期组),IM恢复期组35例以及健康对照儿童35例(对照组)纳入研究。采用SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法检测外周血单个核细胞TLR2、TLR9、FoxP3mRNA的表达,运用流式细胞术检测外周血中T淋巴细胞亚群CD4+CD25+的表达。结果显示:IM急性期组TLR2mRNA(4.03±0.56)、TLR9 mRNA(8.88±1.56)相对表达水平显著高于对照组TLR2 mRNA(2.22±0.57)、TLR9mRNA(3.63±1.30)及恢复期组TLR2 mRNA(2.76±0.83)、TLR9 mRNA(5.34±1.60)相对表达水平(P<0.01)。IM急性期组FoxP3 mRNA(2.82±0.90)、CD4+CD25+(2.38±1.32%)表达水平显著低于对照组FoxP3mRNA(4.65±1.23)、CD4+CD25+(7.85±1.97%)及恢复期组FoxP3 mRNA(4.11±1.37)、CD4+CD25+(6.81±1.84%)(P<0.01),IM恢复期组FoxP3 mRNA、CD4+CD25+表达水平与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:IM急性期存在CD4+CD25+Treg数量降低及其特异性转录因子FoxP3表达下调,而TLR2和TLR9在IM急性期表达上调。

TLR9在初发和复发尖锐湿疣皮损及外周血T细胞亚群中的表达

目的检测初发和复发尖锐湿疣(CA)患者皮损及外周血T细胞亚群中TLR9的表达情况,并探讨TLR9在HPV感染和CA复发机制中的作用。方法分别选用30例初发CA和27例复发CA患者皮损,并以28例正常人皮肤石蜡切片作为正常对照组。采用双色免疫荧光抗体染色流式细胞术检测入选者外周血T细胞中TLR9的表达。结果初发CA组和复发CA组皮损颗粒层和棘层TLR9表达(1.38±0.72和2.06±0.84)和外周血CD3+CD4+T细胞内TLR9表达[(11.4±3.2)%和(14.6±2.4)%]显著高于正常对照组[0.97±0.43和(6.2±2.1)%];另外,复发CA患者外周血CD3+CD4+T细胞内TLR9的表达也显著高于初发CA组;以上差异均有统计学意义(P均<0.05)。但是该两组患者的外周血CD3+CD8+T细胞内TLR9的表达与正常对照组差异不显著(P>0.05)。结论 CA皮损及外周血CD3+CD4+T细胞内TLR9表达上调可能是HPV病毒感染的识别受体,并参与机体的抗HPV免疫应答。TLR9可能在CA复发机制中发挥着重要的作用。

TLR2、TLR9及T细胞亚群在传染性单核细胞增多症患儿中的变化及意义

目的本研究旨在探讨Toll样受体(TLR)2、TLR9及T细胞亚群在传染性单核细胞增多症(IM)患儿中的变化及意义。方法研究对象为2010年4月-2011年1月我院儿科初治急性期IM患儿35例(IM急性期组),IM恢复期组35例以及健康对照儿童35例(对照组)。采用SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法检测外周血单个核细胞TLR2 mRNA、TLR9 mRNA的表达,运用流式细胞术检测外周血中CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD4+CD25+T细胞的阳性表达率。结果 (1)IM急性期组TLR2mRNA(4.03±0.56)、TLR9mRNA(8.88±1.56)相对表达水平显著高于对照组TLR2mRNA(2.22±0.57),TLR9mRNA(3.63±1.30)及恢复期组TLR2mRNA(2.76±0.83),TLR9mRNA(5.34±1.60)(P<0.01)。(2)IM急性期组CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD4+/CD8+、CD4+CD25+细胞百分比分别为(80.66±4.88)%、(16.53±5.55)%、(62.71±8.76)%、0.26±0.12、(2.38±1.32)%,对照组分别为(63.04±5.51)%、(37.98±4.20)%、(27.71±6.52)%、1.37±0.45、(7.85±1.97)%,二者之间差异有显著性(P<0.01);IM恢复期组儿童CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD4+/CD8+、CD4+CD25+细胞百分比分别为(74.25±7.33)%、(29.89±6.03)%、(42.25±7.33)%、0.71±0.19、(6.81±1.84)%,与IM急性期组比较差异有显著性(P<0.01),IM恢复期组CD4+CD25+细胞百分比与对照组[(7.85±1.97)%]比较差异无显著性(P>0.05)。结论 (1)IM急性期TLR2mRNA、TLR9mRNA表达相对上调,而IM恢复期二者表达相对下调;(2)IM急性期存在明显的免疫失衡,即CD3+CD8+明显增高,CD3+CD4+、CD4+/CD8+及CD4+CD25+Treg明显降低。提示在IM病程不同时期TLR2与TLR9的改变可能通过对T细胞的调节参与了IM发病。

草鱼TLR9基因全长cDNA的克隆及特征分析

采用同源克隆及快速扩增cDNA末端技术,从草鱼鳃组织中克隆了Toll样受体9(Toll-like receptor 9,TLR9)基因的cDNA全长。序列分析表明,草鱼TLR9 cDNA全长3 468 bp,编码1 058个氨基酸,其中包括18个氨基酸组成的信号肽、16个富含亮氨酸重复结构域(leucinerich repeat,LRR)、1个跨膜区和1个TIR结构域(Toll/IL-1 receptor)。该蛋白的分子量为121 921 u,等电点为8.80。氨基酸序列的同源性分析显示,草鱼TLR9与鲤TLR9的同源性最高(85%),依次为斑马鱼(82%)、大西洋鲑(55%)、虹鳟(55%)。在系统发生树上,草鱼TLR9首先与鲤科的鲤和斑马鱼聚类。通过半定量RT-PCR检测可知,草鱼TLR9在被检测的15个组织中都有表达,其中在鳃中的表达最高,其次为血、头肾等。这些结果为进一步深入研究TLR9的功能及开发草鱼免疫增强剂奠定基础。

溃疡性结肠炎小鼠结肠中TLR2、TLR3、TLR5和TLR9的表达

目的通过研究溃疡性结肠炎(UC)模型小鼠结肠组织中TLR2、TLR3、TLR5和TLR9的表达随时间变化的关系,探讨Toll样受体家族在UC致病机制中的作用。方法 60只BALB/c小鼠随机分为3组,第1组不予处理,第2组予5%葡聚糖硫酸钠(DSS)溶液自由饮用7 d造模,第3组予5%DSS溶液自由饮用14 d造模。取各组小鼠的结肠标本,用RT-PCR和Western blotting的方法半定量检测TLR2、TLR3、TLR5、TLR9的表达。结果①正常小鼠结肠中无TLR2、TLR3、TLR5和TLR9表达;②造模7 d小鼠结肠中无TLR3和TLR5表达,而TLR2和TLR9出现明显表达;③造模14 d小鼠结肠中仍然无TLR3和TLR5表达,而TLR2和TLR9的表达则继续增加。结论 TLR2和TLR9可能参与了溃疡性结肠炎的致病机制,而TLR3和TLR5可能未参与UC的致病机制。

TLR9基因多态性与肺癌易感性的关系

[目的]研究TLR9基因多态性与肺癌易感性的关系。[方法]采用病例一对照研究，使用PCR—SSCP（single strand conformation polymorphism）方法检测了82例非小细胞性肺癌（病例组）和82例健康对照人群（对照组）的TLR9基因-1486、-1237、1174、2848位点的单核苷酸多态性（SNP）。[结果]在164例中国湖北人群样本包括82例非小细胞性肺癌和82例正常对照中，TLR9基因-1486、1174、2848位点多态性频率在对照组和病例组的比例分别为0％和1.2％、1．2％和7．3％、0％和3．7％；-1237位点在对照组和病例组中均未发现多态性。综合分析后发现，在病例组中出现上述4个位点多态性任意一个的比例为6．7％，在对照组中为1．2％，P=0．0092，OR=11．25，95％CI1．41～90．05。164例的4个位点SNP在中国人群中的发生率分别为0．6％、0％、4.3％、1．8％，均明显低于欧裔、非裔和西班牙裔美国人的发生率。[结论]TLR9多态性在湖北人群中与肺癌有一定的关系，基因突变可能导致肺癌危险度增加。但这种联系仅仅具有边缘性的统计学显著性，且是通过多因素统计分析发现的，还需要运用更大样本量和独立因素分析的研究来探讨TLR9基因多态性与肺癌易感之间的联系。

骨髓间充质干细胞下调类风湿性关节炎小鼠脾脏单个核细胞TLR8及TLR9的表达

背景:间充质干细胞能够缓解类风湿性关节炎小鼠的症状,但是其机制还不清楚。目的:观察骨髓间充质干细胞对类风湿性关节炎小鼠脾脏单个核细胞表达TLR8及TLR9等的影响。方法:DBA/1J小鼠随机分3组,非造模组不造模,阳性对照组和实验组制备Ⅱ型胶原诱导的小鼠类风湿性关节炎模型。实验组尾静脉注射移植大鼠骨髓间充质干细胞。结果与结论:与阳性对照组比较,实验组小鼠关节直径明显减小,关节炎症细胞浸润程度明显降低,但比非造模组略高;小鼠脾脏单个核细胞表达TLR8、TLR9和白细胞介素1β的水平较阳性对照组明显降低(P<0.01或P<0.05);阳性对照组与实验组中TLR8与TLR9的表达均无明显相关性(P>0.05)。说明骨髓间充质干细胞下调了类风湿关节炎小鼠脾脏单个核细胞表达TLR8及TLR9的水平,但TLR8与TLR9的表达无相关性。

TLR2、TLR4、TLR5和TLR9在小鼠Hp感染模型中的表达

目的:研究BALB/c小鼠在幽门螺杆菌(Hp)感染前后和用抗生素治疗后胃黏膜组织中Toll样受体(TLR)2、TLR4、TLR5、TLR9、IL-1β的表达,探讨Toll样受体家族在Hp感染机制中的作用。方法:60只BALB/c小鼠随机分为3组,第1组不予处理(正常组),第2组予感染Hp(Hp感染组),第3组感染Hp后予抗生素治疗(抗生素治疗组)。RT-PCR和Western blotting法半定量检测小鼠胃内TLR2、TLR4、TLR5、TLR9、IL-1β的表达,Giemsa染色切片计数Hp定植数量,HE染色切片判断黏膜炎症水平。结果:(1)TLR5、TLR9在各组小鼠胃黏膜组织中均无表达。(2)TLR2在Hp感染组胃黏膜组织中表达(PCR:0.13±0.025;Western:1.32±0.27)高于抗生素治疗组(PCR:0.04±0.011;Western:0.43±0.08),正常组无表达。(3)TLR4在Hp感染组胃黏膜组织中表达(PCR:0.22±0.051;Western:0.72±0.17)高于抗生素治疗组(PCR:0.06±0.009;Western:0.21±0.04),正常组无表达。(4)IL-1β在Hp感染组胃黏膜组织中有表达(PCR:0.27±0.038;Western:0.58±0.14),抗生素治疗组和正常组无表达。结论:TLR2、TLR4可能参与了Hp的致病机制,TLR5、TLR9可能未参与Hp的致病机制。

鲫TLR9基因克隆及生殖因素对其在肠道表达的影响

为揭示Toll样受体家族基因TLR9在鲫(Carassius auratus L.,缩写为Ca)免疫过程中的作用,本研究利用RT-PCR和RACE技术克隆获得了鲫TLR9(CaTLR9)基因cDNA,并就注射外源性人绒毛膜促性激素(hCG)和不同性腺周期对该基因在鲫肠道表达的影响进行了分析。结果表明,CaTLR9 cDNA全长3 509 bp,包含3 195 bp的开放阅读框(ORF)、72 bp的5′非编码区和242 bp的3′非编码区。ORF编码1 064个氨基酸组成的蛋白质。该蛋白包含19个氨基酸组成的信号肽,15个富含亮氨酸的重复结构域(LRR),1个跨膜区和1个TIR结构域。系统进化分析表明,CaTLR9与其他鲤科鱼类同源性较高,与鲤(Cyprinus carpio)相似度为92%,其次是草鱼(Ctenopharyngodon idella)和斑马鱼(Danio rerio),分别为83%和79%。实时荧光定量PCR结果表明,CaTLR9在鲫脾中表达量最高,其次为肾和鳃,其他组织的表达量均较低。鲫肠道TLR9在非繁殖期的表达水平明显低于繁殖期,注射适当剂量的外源hCG可显著上调鲫肠道TLR9的表达。本研究对揭示鲫非特异性免疫能力调节机制,提高鲫健康养殖水平具有一定参考价值。

HBV转基因小鼠脾脏DC的TLR2、TLR9和T细胞Elispot检测分析

目的:进一步研究HBV转基因小鼠免疫状态。方法:应用流式细胞仪和Elispot方法分别对转基因鼠脾脏树突状细胞(DC)的Toll样受体TLR2、TLR9和分泌γ干扰素T细胞功能进行检测。结果:与正常同种鼠比较,HBV转基因小鼠脾树突状细胞表达CD11c及TLR2、TLR9无明显差异,但分泌IFN γ的T细胞对HBsAg特异性刺激产生的斑点数存在显著差异(P<0 0 5 )。结论:提示HBV转基因小鼠的先天和后天免疫状态是正常的。

TLR9激动剂诱导建立小鼠子痫前期动物模型的研究

目的:明确TLR9激动剂能否诱导妊娠期小鼠发生子痫前期。方法:给妊娠期小鼠腹腔注射TLR9激动剂ODN1826,构建子痫前期小鼠模型,观察孕鼠血压、尿蛋白及胎鼠体重等变化情况,检测小鼠胎盘和肾脏TLR9表达水平。结果:实验组孕鼠的血压与尿蛋白均高于对照组,而胎鼠体重低于对照组。实验组小鼠胎盘和肾脏中TLR9表达升高。结论:TLR9激动剂能使TLR9表达升高并诱发妊娠期小鼠产生子痫前期样症状,提示TLR9可能参与子痫前期的发病机制。

TLR9参与巨噬细胞吞噬马尔尼菲青霉的作用研究

目的探讨TLR9在巨噬细胞吞噬马尔尼菲青霉中所起的作用。方法半定量RT-PCR检测马尔尼菲青霉及其基因组DNA对RAW264.7细胞TLR9基因转录的影响;CFU检测TLR9对RAW264.7细胞吞噬马尔尼菲青霉能力的影响。结果马尔尼菲青霉菌丝相和酵母相、基因组DNA及人工合成CpG-ODN均可使RAW264.7细胞TLR9基因转录上调,且其上调作用均可被氯喹阻断。TLR9可增强RAW264.7细胞对马尔尼菲青霉分生孢子的吞噬能力但不能增强其对酵母细胞的吞噬能力。结论表明巨噬细胞TLR9参与对马尔尼菲青霉分生孢子的吞噬过程。