circ_0000502靶向miR-1231调控甲状腺乳头状癌TPC-1细胞增殖和凋亡

目的探讨circ_0000502对甲状腺乳头状癌TPC-1细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响。方法选取26例甲状腺乳头状癌组织及相应癌旁组织。将TPC-1细胞分为NC组、si-NC组、si-circ_0000502组、miR-NC组、miR-1231组、si-circ_0000502+anti-miR-NC组、si-circ_0000502+anti-miR-1231组。qRT-PCR检测circ_0000502和miR-1231的表达水平;MTT检测细胞活性;Transwell、流式细胞术检测细胞的迁移、侵袭和细胞凋亡情况;Western blotting检测增殖细胞核抗原(PCNA)、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达;双荧光素酶报告基因实验检测circ_0000502和miR-1231的靶向关系。结果甲状腺乳头状癌组织和细胞中circ_0000502呈高表达,miR-1231呈低表达。沉默circ_0000502或过表达miR-1231降低了TPC-1细胞增殖活力、迁移、侵袭细胞数,抑制PCNA、MMP-2、MMP-9、Bcl-2蛋白表达,促进细胞凋亡和Bax蛋白表达(P<0.05)。circ_0000502靶向调控miR-1231表达(P<0.05),下调miR-1231表达逆转了沉默circ_0000502对TPC-1细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响(P<0.05)。结论沉默circ_0000502通过靶向上调miR-1231调控TPC-1细胞的增殖、迁移、侵袭和凋亡。

仑伐替尼对甲状腺癌TPC-1细胞生物学行为的影响

目的:探讨仑伐替尼对甲状腺癌TPC-1细胞生物学行为的影响。方法:TPC-1细胞分为阴性对照组(不处理)与仑伐替尼组(20μmol/L仑伐替尼处理),采用克隆形成实验和Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞克隆和凋亡情况;TPC-1细胞分为阴性对照组(不处理)与仑伐替尼组(40μmol/L仑伐替尼处理),应用Transwell小室检测细胞转移和侵袭情况;TPC-1细胞分为阴性对照组(不处理)与20、40μmol/L仑伐替尼组,应用Western blot法检测细胞Cleaved Caspase-9、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、磷酸化的蛋白激酶B(p-AKT)、LC3Ⅱ、LC3Ⅰ、P62蛋白表达;TPC-1细胞分为阴性对照组(不处理)、仑伐替尼组(20μmol/L仑伐替尼处理)、3-甲基腺嘌呤(3-MA)组(5 mmol/L 3-MA处理)、仑伐替尼+3-MA组,采用Western blot法检测LC3Ⅰ、LC3Ⅱ蛋白的表达,采用CCK-8法检测细胞增殖情况,采用Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡情况。10只裸鼠于右侧腋下接种约1×10^(7)个TPC-1细胞建立移植瘤模型,待肿瘤生长至平均体积100 mm^(3)时分为对照组(胃内灌注PBS)和仑伐替尼组[胃内灌注仑伐替尼25 mg/(kg·d)],比较3周后瘤体体积和质量。结果:与阴性对照组比较,仑伐替尼组细胞克隆数减少、凋亡率增加、侵袭和转移能力减弱;仑伐替尼组TPC-1细胞Cleaved Caspase-9蛋白表达水平和LC3Ⅱ/LC 3Ⅰ比值升高,MMP-2、p-AKT、P62蛋白表达水平降低(P<0.05)。仑伐替尼联合3-MA增强TPC-1细胞的生长抑制和凋亡(P<0.05)。仑伐替尼组裸鼠移植瘤体积及质量较对照组降低(P<0.05)。结论:仑伐替尼抑制TPC-1细胞生长及转移、诱导凋亡及自噬,可能与p-AKT/Cleaved Caspase-9/MMP-2通路有关。

白毛藤多糖通过抑制JNK信号通路活性促进人甲状腺乳头状癌TPC-1细胞凋亡及机制的初步探讨

目的探索白毛藤多糖对人甲状腺乳头状癌TPC-1细胞的影响及其调控机制.方法在体外用不同浓度(0、0.4、0.8、1.6 mg/ml)的白毛藤多糖处理人甲状腺乳头状癌TPC-1细胞,白毛藤多糖对TPC-1细胞增殖活性的影响采用MTT法检测,对TPC-1细胞凋亡的影响采用Hoechest 33258染色法检测,同时通过Western印迹检测白毛藤多糖对TPC-1细胞JNK蛋白表达及JNK磷酸化的影响.结果MTT结果显示,与空白组相比,不同浓度白毛藤多糖处理后TPC-1细胞增殖抑制率显著升高,差异有统计学意义(P<0.05);且白毛藤多糖浓度越高、处理时间越长,对TPC-1细胞增殖活性的抑制作用越明显(P<0.05).Hoechest 33258染色结果显示,与空白组相比,不同浓度白毛藤多糖处理后TPC-1细胞凋亡率显著升高,且呈浓度依赖(P<0.05);同时,Western印迹结果表明,与空白组相比,不同浓度白毛藤多糖处理后TPC-1细胞中Bcl-2/Bax比率凋亡率显著降低,且呈浓度依赖(P<0.05).经不同浓度白毛藤多糖处理后TPC-1细胞中,JNK及p-JNK蛋白表达均显著降低,且随着白毛藤多糖浓度的增加,其对JNK及p-JNK蛋白表达的抑制逐渐增强(P<0.05);此外,白毛藤多糖对p-JNK的抑制更为显著,随着白毛藤多糖浓度的增加,p-JNK/JNK比值逐渐下降(P<0.05).结论白毛藤多糖对人甲状腺乳头状癌TPC-1细胞的增殖具有抑制作用,其机制可能与凋亡通路中活化Bax蛋白、抑制Bcl-2蛋白及抑制JNK磷酸化有关.

siRNA干扰膜联蛋白A1基因对甲状腺乳头状癌TPC-1细胞增殖的影响

目的通过小干扰RNA(siRNA)干扰膜联蛋白(ANX)A1基因在甲状腺乳头状癌TPC-1细胞中的表达,探讨ANXA1对甲状腺乳头状癌细胞生物学特性的影响。方法设计并筛选使用高效的siRNA在甲状腺乳头状癌TPC-1细胞株中特异性干扰ANXA1的表达,然后用CCK8法观察ANXA1干扰后对TPC-1细胞增殖能力的影响。结果筛选的siRNA可高效沉默ANXA1在TPC-1细胞中的表达,显著抑制甲状腺乳头状癌的增殖。结论 siRNA干扰ANXA1表达,可抑制甲状腺乳头状癌的增殖,提示ANXA1可能是甲状腺乳头状癌治疗的一个重要的生物学靶标。

熊果酸对甲状腺癌TPC-1细胞增殖的抑制作用

目的目前关于熊果酸对甲状腺癌细胞增殖抑制作用的研究相对较少,文章拟探讨熊果酸对甲状腺乳头状癌TPC-1细胞的增殖抑制作用及机制。方法待TPC-1细胞贴壁后弃原培养基,分别加入不含胎牛血清的熊果酸培养基(浓度分别为0、2、4、8、16、32μmol/L,其中以0μmol/L为对照),再以不含细胞的培养基为空白对照组。在不同时间(24 h、48 h)采用CCK8试剂对TPC-1细胞增殖抑制率进行检测;采用流式细胞术检测细胞凋亡率;JC-1试剂盒检测熊果酸作用于TPC-1细胞后其线粒体膜电位变化情况;利用荧光探针DCFH-DA对熊果酸干预后的TPC-1细胞进行活性氧检测;采用流式细胞仪检测细胞中存活素及血管内皮生长因子(VEGF)的蛋白表达情况;qRT-PCR实验检测不同浓度的熊果酸对TPC-1细胞进行干预后细胞中存活素及VEGF mRNA的表达情况。结果2、4、8、16、32μmol/L熊果酸对TPC-1细胞抑制率较0μmol/L明显升高(P<0.01),48 h熊果酸对TPC-1细胞抑制率较24 h明显升高(P<0.05)。TPC-1细胞抑制率与熊果酸浓度及时间呈正相关(P<0.05)。0、4、8μmol/L熊果酸的细胞凋亡率分别为(4.13±0.61)%、(6.53±0.65)%、(13.13±1.59)%,随熊果酸药物浓度的增加,TPC-1细胞凋亡率逐渐增加(P<0.05)。4、8μmol/L熊果酸存活素、VEGF的蛋白及mRNA相对表达量较0μmol/L熊果酸明显降低(P<0.05),8μmol/L熊果酸较4μmol/L熊果酸明显降低(P<0.05)。结论熊果酸可有效抑制TPC-1细胞的增值并诱导其凋亡,其抑制诱导途径考虑与细胞中存活素、VEGF的表达相关。

盐酸石蒜碱对TPC-1细胞增殖和周期的影响

目的:探讨盐酸石蒜碱(LH)对甲状腺乳头状癌TPC-1细胞增殖和周期的影响及其机制。方法:体外培养TPC-1细胞,用不同浓度(1.25、2.5、5、10、20、40、60、80和100μmol/L)的LH处理TPC-1细胞48 h,CCK-8法检测LH作用TPC-1细胞的IC;。参照IC_(50),将对数生长期TPC-1细胞随机分为7组:空白对照(control)组、溶剂对照(DMSO)组、1μmol/L LH组、2μmol/L LH组、4μmol/L LH组、NAC(3 mmol/L)组和LH(4μmol/L)+NAC(3 mmol/L)组。用CCK-8法、平板集落、EdU实验检测LH对细胞增殖的影响;透射电子显微镜观察细胞线粒体超微结构;流式细胞术检测细胞周期、活性氧(ROS)水平及线粒体膜电位变化;Western blot法检测MAPK家族蛋白(p38 MAPK、ERK1/2、JNK、p-p38 MAPK、p-ERK1/2和p-JNK)的水平;免疫荧光检测p-p38 MAPK、p-JNK和p-ERK1/2在细胞内的定位。结果:(1)LH抑制TPC-1细胞增殖,抑制率与LH浓度及作用时间呈正比,LH作用48 h的IC;为2.314μmol/L;(2)4μmol/L LH处理后TPC-1细胞线粒体超微结构发生变化,LH呈浓度依赖性地使线粒体膜电位去极化(P<0.05);(3)LH处理后TPC-1细胞S期比例显著升高,G;/G;期比例显著降低(P<0.05);(4)LH处理后的TPC-1细胞ROS水平相较对照组显著升高(P<0.01);(5)LH处理后TPC-1细胞p38 MAPK、ERK1/2、JNK、p-p38 MAPK、p-ERK1/2和p-JNK蛋白水平均显著升高,尤以磷酸化蛋白升高显著,具有一定的药物浓度依赖性,且p-p38 MAPK和pERK1/2在TPC-1细胞中都出现不同程度的入核现象;(6)NAC能抑制部分MAPK通路的激活。结论:LH在体外能抑制TPC-1细胞的增殖,诱导细胞线粒体超微结构受损、线粒体膜电位去极化、细胞S期阻滞和细胞ROS水平升高,其作用机制可能是通过ROS累积诱导激活部分MAPK通路而发挥作用。

抑制FoxM1基因表达对甲状腺乳头状癌TPC-1细胞糖酵解途径的影响

目的探讨抑制FoxM1基因表达对甲状腺乳头状癌(PTC)细胞葡萄糖摄取和乳酸产量的影响及FoxM1与PTC细胞糖酵解途径的相关性。方法用慢病毒rLv-hFoxM1转染PTC TPC-1细胞,检测转染后的TPC-1细胞中Fox M1 mRNA及蛋白表达水平的变化;应用噻唑蓝(MTT)比色法检测抑制FoxM1基因对TPC-1细胞活性的影响;检测转染慢病毒rLv-hFoxM1后的TPC-1细胞在葡萄糖摄取量和乳酸产量方面的变化以及糖酵解途径关键酶己糖激酶1(HK1)、己糖激酶2(HK2),葡萄糖转运体蛋白1(Glut1)含量的变化。结果在TPC-1细胞中,慢病毒rLv-hFoxM1转染可明显抑制TPC-1细胞中FoxM1基因mRNA及蛋白水平的表达,且转染慢病毒rLv-hFoxM1后TPC-1细胞的活性明显下降(P<0.05),随着FoxM1基因表达降低,TPC-1细胞的葡萄糖摄取量及乳酸产量均明显下降(P<0.01),抑制FoxM1基因后,其葡萄糖转运蛋白(Glut1)、己糖激酶1(HK1)和己糖激酶(HK2)含量明显降低。结论抑制FoxM1基因的表达能降低PTC细胞的糖酵解水平。

TFF3基因沉默对甲状腺乳头状癌TPC-1细胞增殖和侵袭的影响

目的探讨三叶因子3(TFF3)基因沉默对甲状腺乳头状癌TPC-1细胞增殖和侵袭的影响。方法人甲状腺乳头状癌TPC-1细胞分为空白对照组、阴性对照组、研究组,研究组将TFF3-shRNA重组慢病毒质粒转染至TPC-1细胞,阴性对照组将NC-shRNA重组慢病毒质粒转染至TPC-1细胞,空白对照组不转染任何序列。采用qRTPCR检测各组TPC-1细胞中TFF3 mRNA表达量,采用CCK8法检测各组TPC-1细胞增殖能力,通过Transwell小室侵袭实验检测各组TPC-1细胞侵袭能力。结果研究组TPC-1细胞中TFF3 mRNA表达量明显低于空白对照组、阴性对照组(P<0.05);6 h、12 h、24 h、36 h、48 h时,研究组TPC-1细胞生长抑制率明显高于空白对照组、阴性对照组(P<0.05);研究组穿过小室膜的TPC-1细胞数明显低于空白对照组、阴性对照组(P<0.05);空白对照组、阴性对照组TPC-1细胞TFF3 mRNA表达量、增殖能力、侵袭能力差异无统计学意义(P>0.05)。结论沉默TFF3基因表达能够抑制甲状腺乳头状癌TPC-1细胞增殖及侵袭,TFF3可能是甲状腺乳头状癌潜在的治疗靶点。

IGF/IGFR通过PI3K/AKT/mTOR通路对甲状腺乳头状癌TPC-1细胞的生物学行为的影响

目的探讨胰岛素样生长因子(IGF)/胰岛素样生长因子受体(IGFR)通过磷脂酰肌醇-3-激酶/丝苏氨酸蛋白激酶(PI3K/AKT)/mTOR通路对甲状腺乳头状癌TPC-1细胞的生物学行为的影响。方法回顾性选取2021年3月至2021年12月入复旦大学附属中山医院青浦分院甲状腺乳腺外科接受手术治疗的20例患者,术中采集甲状腺癌组织及癌旁正常组织,qRT-PCR检测组织中IGF和IGFIR的表达。将TPC-1细胞随机分为IGF干扰组/IGFR干扰组、阴性对照组和空白组,IGF干扰组转染IGF基因RNAi重组干扰质粒,IGFR干扰组转染IGFIR基因RNAi重组干扰质粒,阴性对照组转染阴性对照的siRNA,空白组不做任何处理。CCK-8检测TPC-1细胞增殖能力,克隆形成实验检测TPC-1细胞克隆形成能力,细胞划痕实验检测TPC-1细胞迁移,Transwell小室实验检测TPC-1细胞侵袭,流式细胞仪检测TPC-1细胞凋亡,蛋白质印迹法检测上皮间质间转化(EMT)和PI3K/AKT/mTOR通路相关蛋白。结果甲状腺癌组织中IGF和IGFR基因的相对表达量分别为1.86±0.25、1.94±0.32,均明显高于癌旁组织(0.27±0.08、0.39±0.11),差异均有统计学意义(P<0.05)。IGF和IGFR干扰组的细胞增殖、克隆形成能力、细胞愈合率和迁移数量均明显低于阴性对照组和空白组,差异均有统计学意义(P<0.05)。IGF和IGFR干扰组的细胞凋亡能力明显高于阴性对照组和空白组,差异均有统计学意义(P<0.05)。IGF和IGFR干扰组的E-cadherin蛋白表达明显高于阴性对照组和空白组,N-cadherin和vimentin蛋白表达明显低于阴性对照组和空白组,差异均有统计学意义(P<0.05)。IGF和IGFR干扰组的p-PI3K、p-AKT、p-mTOR表达明显低于阴性对照组和空白组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论IGF和IGFR在甲状腺乳头状癌中高表达,干扰IGF和IGFR可以抑制甲状腺乳头状癌TPC-1细胞增殖、侵袭和迁移,抑制其凋亡和EMT,其主要机制可能与PI3K/AKT/mTOR信号通路有关。

大黄酚对EGF诱导的甲状腺乳头状癌TPC-1细胞增殖、迁移、侵袭和EMT抑制作用的影响

目的探究大黄酚对EGF诱导的甲状腺乳头状癌TPC-1细胞增殖、迁移、侵袭和EMT的抑制作用,并探讨其可能机制。方法TPC-1细胞分为对照组、EGF组、大黄酚低剂量组、大黄酚中剂量组和大黄酚高剂量组。采用CCK-8法测定细胞增殖活性,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力,Western blot测定细胞EMT相关蛋白N-cadherin和Vimentin以及Claudin 1蛋白表达及EGFR磷酸化水平。结果EGF处理增加TPC-1细胞增殖、迁移和侵袭能力,上调细胞中N-cadherin、Vimentin、p-EGFR和Claudin 1蛋白表达水平。大黄酚处理剂量依赖的抑制TPC-1细胞增殖、迁移和侵袭能力,降低细胞中N-cadherin、Vimentin、p-EGFR和Claudin 1蛋白表达水平。结论大黄酚抑制了EGF诱导的PTC细胞增殖、迁移、侵袭和EMT,其机制可能与抑制EGFR激活并下调Claudin 1表达有关。

敲低长链非编码RNA AFAP1-AS1抑制TPC-1甲状腺乳头状癌细胞上皮间质转化及其侵袭和迁移

目的检测甲状腺乳头状癌组织长链非编码RNA(lncRNA)肌动蛋白丝相关蛋白1反义RNA1(AFAP1-AS1)的表达,敲低TPC-1甲状腺乳头状癌细胞AFAP1-AS1,研究其对TPC-1细胞上皮间质转化(EMT)的影响及相关分子机制。方法采用实时定量PCR检测60例甲状腺乳头状癌组织lncRNA AFAP1-AS1表达;利用RNA干扰技术(RNAi)敲低TPC-1甲状腺乳头状癌细胞AFAP1-AS1,设置AFAP1-AS1敲低(shAFAP1-AS1)组和阴性对照RNA(shNC)组及未转染的TPC-1细胞为对照组。通过集落形成实验检测TPC-1细胞集落形成能力、 TranswellTM侵袭实验检测细胞侵袭能力,划痕愈合实验检测细胞的迁移能力;通过实时定量PCR检测敲低AFAP1-AS1后,细胞上皮钙黏素(E-cadherin)、波形蛋白(vimentin)、β联蛋白(β-catenin)、锌指转录因子snail2的mRNA水平, Western blot法检测其蛋白水平。结果与癌旁组比较,甲状腺乳头状癌组中AFAP1-AS1 mRNA表达水平显著增加;敲低AFAP1-AS1后, TPC-1细胞的集落形成能力、侵袭和迁移能力均显著降低;与shNC组和对照组相比,敲低AFAP1-AS1后,细胞snail2、 vimentin和β-catenin的mRNA和蛋白表达显著降低,而E-cadherin的mRNA和蛋白表达显著增加。结论 lncRNA AFAP1-AS1在甲状腺乳头状癌组织高表达,敲低TPC-1细胞AFAP1-AS1后,癌细胞的集落形成能力、侵袭和迁移能力显著下调,可能与抑制细胞EMT过程有关。

微小RNA-1243直接靶向丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶1和丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶2调节甲状腺乳头状癌TPC-1细胞迁移

目的观察微小RNA（miRNA，miR）-1243调节丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶1（Akt1）和丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶2（Akt2）在人甲状腺乳头状癌细胞TPC-1中的表达及对细胞迁移的影响。方法利用TargetScan和miRanda对人甲状腺乳头状癌TPC-1细胞株的miR-1243靶基因进行预测，采用双荧光素酶报告基因验证miR-1243对靶基因的直接调控。Western blot检测miR-1243对Akt1和Akt2蛋白表达的调节。迁移小室（Transwell）检测1×10^5个对数生长期的TPC-1细胞的迁移能力。结果TargetScan和miRanda软件预测显示Akt1和Akt2基因是miR-1243的潜在靶基因。双荧光报告基因的相对荧光值显示，与空载体组和突变组比较，分别共转染miR-1243模拟物的Akt1或Akt2野生型组荧光素酶活性显著下降（t=3.595，P=0.009），而空载体组和突变组的荧光素酶活性差异无统计学意义（t=1.655，P=0.213）。与对照处理组比较，miR-1243模拟物处理组显著抑制而miR-1243抑制物处理组促进TPC-1细胞Akt1和Akt2蛋白水平的表达（t=4.810，P=0.018），而内参基因蛋白水平均无明显变化（P=0.235）。Transwell实验结果显示，miR-1243模拟物转染组迁移细胞数[（9.83±3.51）个]低于对照模拟物处理组[（18.67±4.24）个]，差异均有统计学意义（t=2.692，P=0.039）。与对照抑制物处理组比较[（21.33±5.35）个]，miR-1243抑制物转染组迁移细胞数[（37.17±7.33）个]显著增加（t=2.472，P=0.022）。结论miR-1243通过靶向抑制Akt1和Akt2的表达进而调节TPC-1细胞迁移。

siRNA干扰膜联蛋白AI表达对甲状腺乳头状癌TPC-1细胞凋亡的影响

目的通过小干扰RNAs(siRNA)干扰膜联蛋白A1(ANX A1)在甲状腺乳头状癌(PTC)细胞中的表达,探讨ANX A1对PTC细胞的生物学特性的影响。方法设计并筛选使用高效的siRNA在PTC TPC-1细胞株特异性干扰ANX A1的表达,然后用流式细胞术观察ANX A1干扰后对PTC细胞TPC-1凋亡的影响。结果筛选的siRNA可高效沉默ANX A1在PTC细胞中的表达,促进PTC细胞的凋亡。结论 siRNA干扰ANX A1表达,可促进PTC细胞的凋亡,提示ANX A1可能是PTC治疗的一个重要的生物学靶标。

大黄素对人甲状腺乳头状癌TPC-1细胞增殖、侵袭、迁移的影响及可能机制

目的 探讨大黄素对人甲状腺乳头状癌细胞株TPC-1增殖、侵袭、迁移的影响及可能机制。方法体外培养人甲状腺乳头状癌TPC-1细胞,分别以20、40、80μmol/L大黄素处理细胞,对照组细胞以DMSO溶剂处理。给药24 h后,MTT实验检测TPC-1细胞增殖能力;Transwell实验检测TPC-1细胞侵袭能力;划痕实验检测TPC-1细胞迁移能力;流式细胞术检测TPC-1细胞凋亡率;Western blot检测TPC-1细胞p-ERK1/2、PKM2、P53的表达。结果 与对照组相比,大黄素能够抑制TPC-1细胞增殖、迁移与侵袭,促进凋亡,且呈浓度依赖性(P<0.05)。不同浓度大黄素均能下调TPC-1细胞p-ERK1/2与PKM2的表达、上调P53的表达(P<0.05)。结论大黄素抑制人甲状腺乳头状癌TPC-1细胞增殖、侵袭及迁移,促进凋亡,其作用机制可能与抑制ERK1/2-PKM2通路有关。

T_(3)对甲状腺乳头状癌细胞TPC-1增殖的影响及机制研究

目的探讨三碘甲腺原氨酸(T_(3))对甲状腺乳头状癌细胞TPC-1增殖的影响及其机制。方法将TPC-1细胞分为对照组(0 ng/ml T_(3)处理组)、12.5 ng/ml T_(3)处理组和50 ng/ml T_(3)处理组,分别用对应T_(3)浓度处理细胞,实时无标记细胞功能分析技术(RTCA)和克隆形成实验检测细胞的增殖能力,Western blot检测细胞中PDZK1表达水平。利用慢病毒转染的方法将TPC-1细胞分为敲减PDZK1(shPDZK1)组、敲减对照(shNC)组、过表达PDZK1(PDZK1)组、过表达对照(Vector)组,采用Western blot检测TPC-1细胞中PDZK1表达水平,同时用不同浓度的T_(3)(0、12.5、50 ng/ml)处理各组细胞,利用克隆形成实验检测细胞的克隆形成能力。结果12.5及50 ng/ml T_(3)处理组TPC-1的细胞指数及克隆形成数明显高于对照组,差异均有高度统计学意义(P<0.01)。12.5及50 ng/ml T_(3)处理组细胞中PDZK1表达量明显高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。与shNC组比较,shPDZK1组细胞中PDZK1的表达量明显较低,差异有统计学意义(P<0.05)。与Vector组比较,PDZK1组细胞PDZK1的表达量明显升高,差异有高度统计学意义(P<0.01)。在0、12.5、50 ng/ml T_(3)处理下,与shNC组比较,shPDZK1组细胞的克隆形成数均明显减少,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。在0、12.5、50 ng/ml T_(3)处理下,与Vector组比较,PDZK1组细胞的克隆形成数均明显增加,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论T_(3)可能通过上调TPC-1细胞PDZK1的表达调控细胞增殖。

昆布多糖对人乳头状甲状腺癌细胞TPC-1生长信号转导的影响

目的探讨昆布多糖对人乳头状甲状腺癌细胞TPC-1生长信号转导影响研究。方法选用TPC-1人乳头状甲状腺癌细胞株,分别采用相应药物进行处理。采用噻唑兰(MTT)染色法检测昆布多糖对TPC-1细胞生长的抑制作用,采用流式细胞术分析昆布多糖对TPC-1细胞凋亡及细胞周期比例的影响,采用蛋白免疫印迹(Western Blot)法检测各组TPC-1细胞促甲状腺素受体(TSHR)、磷脂酶C-β3(PLC-β3)、蛋白激酶Cα(PKCα)蛋白表达水平。结果干预24h、48h、72h后,与对照组比较,昆布多糖0.4 g/L、0.8 g/L、1.6 g/L、2.0 g/L组TPC-1细胞生长抑制率较高,且昆布多糖0.4 g/L组<0.8 g/L组<1.6 g/L组及2.0 g/L组,差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,昆布多糖0.4 g/L、0.8 g/L、1.6 g/L组TPC-1细胞凋亡率较高,G2/M期细胞比例较高,且昆布多糖0.4 g/L组<0.8 g/L组<1.6 g/L组,差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,昆布多糖0.4 g/L、0.8 g/L、1.6 g/L组TSHR、PLC-β3、PKCα蛋白表达水平较低,且昆布多糖0.4 g/L组>0.8 g/L组>1.6 g/L组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论昆布多糖能剂量依赖性抑制人乳头状甲状腺癌细胞TPC-1生长,使细胞阻滞于G2期,促进细胞凋亡,其作用可能与抑制TSHR-PLC-β3-PKCα生长信号通路转导有关。

lncRNA-CASC2对甲状腺癌细胞增殖及侵袭转移的作用

目的探讨癌易感性候选基因2(CASC2)对甲状腺癌细胞(TPC-1)增殖及侵袭转移的影响。方法收集2020年1月-2022年12月于我院行手术治疗的83例甲状腺癌患者,取甲状腺癌组织及癌旁组织进行石蜡标本制作,并采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)对其癌组织和癌旁组织中CASC2mRNA和miR-155-5p RNA的表达水平进行检测。将TPC-1细胞随机分为质粒组、空载组及空白组,质粒组使用脂质体转染试剂转染CASC2a;而空载组转染空载质粒,空白组不做处理。采用CCK-8法检测细胞增殖情况,Transwell侵袭实验检测细胞迁移和侵袭情况。结果癌组织中lncRNA-CASC2的表达(1.23±0.08)明显低于癌旁组织(2.16±0.11);但miR-155-5p的表达(2.18±0.16)却明显高于癌旁组织(1.46±0.10)(P<0.05),3组细胞48 h的A450(分别为0.32±0.03、0.40±0.04、0.42±0.06)、72 h(分别为0.65±0.08、0.73±0.10、0.77±0.11)及96 h(分别为0.97±0.12、1.24±0.14、1.35±0.15)间的差异均有统计学意义(P<0.05),且随着时间的增加,3组细胞的A450值均有所增大。比较3组细胞迁移和侵袭能力发现,质粒组细胞的迁移数(54.63±8.95)和侵袭数(33.58±6.63)均明显低于空载组(分别为89.37±10.04、72.37±9.72)和空白组细胞(分别为93.21±10.22、75.82±9.62)(P<0.05);而空载组和空白组细胞的迁移数和侵袭数差异无统计学意义(P>0.05)。结论LncRNA-CASC2在甲状腺癌组织中呈现低表达,而miR-150-5p在癌组织中呈高表达,两种因子均为参与甲状腺癌的发生发展的关键;且lncRNA-CASC2在细胞水平上可抑制TPC-1细胞的增殖及迁移能力,但其抑癌作用的关键点及调控机制等需进一步探索。

银杏叶提取物对甲状腺癌细胞PI3K/Akt信号通路的影响及意义

目的探讨银杏叶提取物对甲状腺癌TPC-1细胞株磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路相关蛋白表达的影响及意义。方法培养甲状腺癌TPC-1细胞株,用96孔和6孔培养板将其分为空白组、银杏叶低、中、高剂量组(5、10、20μmol/L),实验分为3个时间点:培养24 h、48 h和72 h。通过噻唑蓝(MTT)实验、免疫组织化学法和实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测甲状腺癌TPC-1细胞株的增殖活性、PI3K/Akt信号通路相关蛋白PI3K、Akt、磷酸化(p)-Akt和凋亡蛋白半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)-3的蛋白含量及mRNA水平。结果银杏叶提取物能够抑制甲状腺癌TPC-1细胞株的增殖,且随时间延长和剂量的增加效果更为显著,各时间点间、各剂量组间均差异显著(P<0.05);与空白组比较,银杏叶低、中、高剂量组PI3K和p-Akt的蛋白含量及mRNA水平均显著降低且随剂量增加效果更显著(P<0.05),银杏叶低、中、高剂量组caspase-3的蛋白含量及mRNA水平均显著升高且随剂量增加效果更显著(P<0.05),银杏叶低、中、高剂量组Akt蛋白含量及mRNA水平未见显著差异(P>0.05)。结论银杏叶提取物抑制甲状腺癌TPC-1细胞株的增殖,可能与调控PI3K/Akt信号通路和促进细胞凋亡密切相关,且可见浓度依赖趋势。

miR-32-5p通过p53/SLC7A11信号通路介导的铁死亡对甲状腺癌细胞增殖的作用机制

目的探讨miR-32-5p能否通过调节p53/SLC7A11信号通路介导的铁死亡影响甲状腺细胞增殖。方法将TPC-1细胞随机分为Control组、miR-NC组、miR-32-5p组、miR-32-5p+Fer-1组、miR-32-5p+si-p53组、miR-32-5p+Fer-1+si-p53组。RT-PCR检测细胞中miR-32-5p相对表达量;CCK-8法检测细胞增殖;检测细胞中Fe^(2+)、MDA、SOD、GSH及ROS的含量;JC-1法检测细胞中线粒体膜电位水平;蛋白质印迹检测细胞中p53、GPX4、SLC7A11蛋白表达。结果甲状腺癌细胞系BCPAP、TPC-1、SW1736细胞中miR-32-5p相对表达量均低于人正常甲状腺细胞系HT-ori3细胞(P<0.01)。和Control组相比,miR-32-5p组细胞中miR-32-5p相对表达量、细胞中MDA含量、Fe^(2+)含量和ROS荧光强度及细胞中p53蛋白表达明显增加,细胞存活率、细胞中GSH含量和SOD活性、线粒体膜电位水平及细胞中GPX4、SLC7A11蛋白表达明显降低(P<0.01);和miR-32-5p组相比,miR-32-5p+Fer-1组、miR-32-5p+si-p53组和miR-32-5p+Fer-1+si-p53组细胞中miR-32-5p相对表达量、细胞中MDA含量、Fe^(2+)含量和ROS荧光强度及细胞中p53蛋白表达均明显降低,细胞存活率、细胞中GSH含量和SOD活性、线粒体膜电位水平及细胞中GPX4、SLC7A11蛋白表达明显增加(P<0.01);且miR-32-5p+Fer-1+si-p53组细胞中miR-32-5p相对表达量、细胞中MDA含量、Fe^(2+)含量和ROS荧光强度及细胞中p53蛋白表达明显低于miR-32-5p+Fer-1组,细胞存活率、细胞中GSH含量和SOD活性、线粒体膜电位水平及细胞中GPX4、SLC7A11蛋白表达高于miR-32-5p+Fer-1组(P<0.05)。结论过表达miR-32-5p可通过促进铁死亡抑制甲状腺癌何丽琼细胞增殖,其可能和调控p53//SLC7A11信号通路有关。

Torin2对人甲状腺乳头状癌细胞株生物学行为影响的研究

目的探索一种新的二代哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)抑制剂9-(6-氨基-3-吡啶基)-1-[3-(三氟甲基)苯基]苯并[H]-1,6-萘啶-2(1H)-酮(Torin2)对人甲状腺乳头状癌(PTC)细胞生物学行为的影响,以期为临床靶向治疗PTC提供新的理论依据。方法对人PCT的TPC-1细胞株和正常甲状腺Nthy-ori-3细胞株运用不同浓度Torin2,分别采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞增殖能力,流式细胞仪分析细胞周期、凋亡情况,划痕愈合实验分析细胞迁移能力。结果 (1)与用药前相比,Nthy-ori-3细胞株均无明显变化;(2)各浓度(100、200、400 nmol/L)Torin2作用于TPC-1细胞24、48、72 h后,细胞增殖抑制率上升,差异有统计学意义(P<0.001),且随作用时间延长(24、48、72 h)和浓度增加,对细胞增殖抑制作用增强;(3)各浓度(100、200、400 nmol/L)Torin2作用于TPC-1细胞24、48 h后,G1期细胞比例逐渐增加,S期细胞比例逐渐下降,且具有时间和浓度依赖性,差异有统计学意义(P<0.001);(4)各浓度(100、200、400 nmol/L)Torin2作用于TPC-1细胞24、48 h后,细胞的凋亡率亦上升,呈现浓度依赖效应,差异有统计学意义(P<0.001);(5)各浓度(100、200、400 nmol/L)Torin2均可抑制TPC-1细胞的迁移,且随浓度的增加抑制能力越强,差异有统计学意义(P<0.001)。结论 Torin2可抑制TPC-1细胞的增殖及迁移、阻滞细胞周期、诱导细胞凋亡,并随着Torin2浓度的增加和作用时间延长而增强。