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TRAP染色与免疫组化套染技术在骨组织损伤修复染色中的应用 被引量:4
1
作者 李丽 陈菲 +2 位作者 包春娟 周琪琪 包骥 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第5期622-623,共2页
抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resistant acid phosphase,TRAP)是破骨细胞的特异性标志酶,TRAP染色显示破骨细胞胞质中TRAP的活性,是破骨细胞的特异性染色[1]。本文首次采用TRAP染色与免疫组化套染技术,帮助研究者实现在同一张脱钙骨组... 抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resistant acid phosphase,TRAP)是破骨细胞的特异性标志酶,TRAP染色显示破骨细胞胞质中TRAP的活性,是破骨细胞的特异性染色[1]。本文首次采用TRAP染色与免疫组化套染技术,帮助研究者实现在同一张脱钙骨组织石蜡切片上观察破骨细胞与血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)共表达情况,该套染技术在国内外尚未见报道。脱钙骨组织制片比软组织制片过程繁琐且易出现脱片、染色背景深等问题,作者经反复摸索优化实验步骤,现将该套染技术介绍如下。 展开更多
关键词 trap染色 VEGF 破骨细胞
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TRAP-SYBR-Green染色法检测大鼠睾丸组织内端粒酶活性的实验研究
2
作者 叶哲伟 陈晓春 +3 位作者 杨述华 陈江 谷龙杰 鲁功成 《华中科技大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期494-497,共4页
目的 研究不同年龄SD大鼠睾丸组织内端粒酶活性表达及其意义。方法 应用TRAP SYBR Green染色法 ,对各年龄组健康雄性SD大鼠睾丸组织中端粒酶活性进行了检测 ,并结合光镜、电镜观察对端粒酶活性在不同年龄SD大鼠睾丸组织内的表达状况... 目的 研究不同年龄SD大鼠睾丸组织内端粒酶活性表达及其意义。方法 应用TRAP SYBR Green染色法 ,对各年龄组健康雄性SD大鼠睾丸组织中端粒酶活性进行了检测 ,并结合光镜、电镜观察对端粒酶活性在不同年龄SD大鼠睾丸组织内的表达状况进行了研究。结果 从出生后第 1d直到第 2 7个月 ,各年龄组雄性SD大鼠的睾丸组织中均可检测到端粒酶活性的表达 (阳性率 10 0 % )。出生后第 9~ 39dSD大鼠睾丸中可检测到高水平的端粒酶活性。A型精原细胞表达高水平的端粒酶活性。结论 SD大鼠睾丸组织中终生表达端粒酶活性 ,A型精原细胞作为雄性生殖系统的干细胞 。 展开更多
关键词 trap—SYBR—Green染色 检测 大鼠 睾丸组织 端粒酶 活性 实验研究
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破骨细胞酸性磷酸酶染色后快速半定量分析 被引量:1
3
作者 何友华 童国军 +3 位作者 李明翰 李威 许伏龙 杨德鸿 《广东医学》 CAS 2018年第12期1765-1768,共4页
目的寻求合适的溶剂,溶解破骨细胞的抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色产物,筛选溶液的最适检测波长,检测溶液吸光度值。比较该方法与TRAP活性检测试剂盒法相关性,并评价该快速半定量分析法的稳定性与可靠性。方法提取C57BL/6小鼠骨髓来源... 目的寻求合适的溶剂,溶解破骨细胞的抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色产物,筛选溶液的最适检测波长,检测溶液吸光度值。比较该方法与TRAP活性检测试剂盒法相关性,并评价该快速半定量分析法的稳定性与可靠性。方法提取C57BL/6小鼠骨髓来源巨噬细胞(BMMs),以1×10~4·mL^(-1)均匀种入胶原I包被处理24孔板,随机分为4组:10 nmoL/L PTH(1-34),100 nmoL/L PTH(1-34),1μmoL/L PTH(1-34),10μmoL/L PTH(1-34),给予甲状旁腺素[PTH(1-34)]刺激4 h后换成含10%胎牛血清完全培养基培养44 h,以4 h/44 h为1个周期,培养8 d后,进行常规破骨细胞TRAP染色,筛选合适的溶剂溶解,最终使用冰醋酸溶解TRAP原位染色产物,超声粉碎取上清,选取合适的波长检测吸光度(OD)值,此为冰醋酸溶解定量法。另一检测手段为目前常规使用的酶活性检测试剂盒法,试比较冰醋酸溶解定量法与酶活性检测试剂盒法两者的相关性。结果常规破骨细胞原位TRAP染色后,筛选出冰醋酸的溶解效果最优。溶解后测定波长在550 nm左右吸收峰理想,并排除溶剂冰醋酸本身的干扰。随着PTH(1-34)浓度增高,表现出破骨效应的增加,TRAP的活性增加,两者的OD值相应增加。冰醋酸溶解定量法与酶活性检测试剂盒法存在显著正相关,Pearson相关系数r=0.986(P<0.05)。结论采用冰醋酸溶解定量法,并用550 nm波长测定OD值,可实现破骨细胞TRAP染色后的快速半定量分析。 展开更多
关键词 trap原位染色 冰醋酸 半定量分析 破骨细胞 甲状旁腺素
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强直性脊柱炎滑膜细胞破骨表型及分化因素的研究 被引量:5
4
作者 钱奕铭 初同伟 +3 位作者 周跃 张峡 刘玉刚 李建明 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第23期2207-2210,共4页
目的通过检测破骨细胞(osteoclast,OC)在强直性脊柱炎(ankylosing spondylitis,AS)骶髂关节及髋关节滑膜组织中的表达及分化因素的研究,探讨AS骨与软骨破坏机制。方法酶组织化学染色技术(TRAP染色)检测滑膜细胞破骨表型,原位杂交技术检... 目的通过检测破骨细胞(osteoclast,OC)在强直性脊柱炎(ankylosing spondylitis,AS)骶髂关节及髋关节滑膜组织中的表达及分化因素的研究,探讨AS骨与软骨破坏机制。方法酶组织化学染色技术(TRAP染色)检测滑膜细胞破骨表型,原位杂交技术检测滑膜组织中TNF-α mRNA、VEGF mRNA、MMP-3 mRNA的表达;培养正常滑膜成纤维细胞,加入TNF-α、VEGF,培养AS滑膜成纤维细胞,加入抗TNF-α、抗VEGF,钙钴法检测碱性磷酸酶(ALP)表达,放射免疫法检测骨钙素(bone gla protein,BGP)含量,分析其在AS滑膜成纤维细胞成骨中的作用。结果经TRAP染色,TNF-α mRNA、VEGF mRNA和MMP-3 mRNA在AS滑膜组织中阳性表达,而对照组阴性表达,两组比较有统计学差异(P<0.01);AS组滑膜TRAP染色阳性细胞同时表达MMP-3;AS组滑膜成纤维细胞培养ALP染色阳性数、BGP分泌增加值与正常对照组比较有统计学差异(P<0.01);TNF-α、VEGF单克隆抗体可以抑制滑膜成纤维细胞骨钙素的分泌。结论AS滑膜组织中表达TNF-α、VEGF,两种因子可以诱导滑膜成纤维细胞分化为成骨细胞(osteoblast,OB),在这种OB存在的条件下,滑膜组织内破骨细胞前体可以分化为成熟的OC并表达MMP-3。 展开更多
关键词 强直性脊柱炎 滑膜细胞 破骨细胞 原位杂交技术 细胞因子 trap染色
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川楝子抑制破骨细胞活性组份的研究 被引量:11
5
作者 周英 郭东贵 +1 位作者 王慧娟 黄赤夫 《中药材》 CAS CSCD 北大核心 2009年第9期1433-1435,共3页
目的:探讨川楝子抑制破骨细胞的活性部位及活性组份。方法:以活性为导向,利用TRAP染色法测定川楝子提取物各部位及各组份抑制破骨细胞的活性。结果:川楝子活性部位及活性组份对RANKL诱导的破骨细胞有很强的抑制活性,抑制率>95%。结论... 目的:探讨川楝子抑制破骨细胞的活性部位及活性组份。方法:以活性为导向,利用TRAP染色法测定川楝子提取物各部位及各组份抑制破骨细胞的活性。结果:川楝子活性部位及活性组份对RANKL诱导的破骨细胞有很强的抑制活性,抑制率>95%。结论:川楝子活性部位及活性组份有很好的抑制破骨细胞的活性。 展开更多
关键词 川楝子 破骨细胞 trap染色 抑制活性
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小鼠破骨细胞骨髓诱导模型的建立及功能观察 被引量:3
6
作者 鲁秀敏 苏楠 +2 位作者 李福兵 赵玲 陈林 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期521-524,共4页
目的获得大量高质量小鼠破骨细胞,为体外研究破骨细胞骨吸收功能提供丰富的细胞来源。方法采用巨噬细胞集落刺激因子(macrophage colony stimulating factor,M-CSF)和破骨细胞分化因子(receptor activator of nuclear factor-κB ligand... 目的获得大量高质量小鼠破骨细胞,为体外研究破骨细胞骨吸收功能提供丰富的细胞来源。方法采用巨噬细胞集落刺激因子(macrophage colony stimulating factor,M-CSF)和破骨细胞分化因子(receptor activator of nuclear factor-κB ligand,RANKL)诱导小鼠骨髓单核细胞分化为破骨细胞,并通过抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resistant acid phos-phatase,TRAP)染色和骨吸收实验来鉴定破骨细胞及其噬骨能力。结果诱导3d后可见TRAP(+)多核细胞出现,诱导5d后骨片上可见蓝紫色的吸收陷窝。随着培养时间的延长,TRAP(+)多核细胞数目和吸收陷窝呈现时间依赖性增长趋势(P<0·05)。结论M-CSF和RANKL诱导小鼠骨髓单核细胞可产生大量的具有活跃噬骨能力的破骨细胞。 展开更多
关键词 破骨细胞 trap染色 骨吸收
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人破骨细胞的体外培养及鉴定 被引量:4
7
作者 刘水涛 雷鸣 +3 位作者 安佰京 杨军 张鹏礼 邢更彦 《武警医学》 CAS 2011年第5期381-384,共4页
目的探索人破骨细胞的体外培养及鉴定方法 ,为各类试验研究提供大量高活性破骨细胞。方法分离骨髓血得到单个核细胞,用不同培养液、诱导剂在不同浓度下培养破骨细胞,通过TRAP染色鉴定破骨细胞形态,ELISA法检测特异性蛋白表达水平,扫描... 目的探索人破骨细胞的体外培养及鉴定方法 ,为各类试验研究提供大量高活性破骨细胞。方法分离骨髓血得到单个核细胞,用不同培养液、诱导剂在不同浓度下培养破骨细胞,通过TRAP染色鉴定破骨细胞形态,ELISA法检测特异性蛋白表达水平,扫描电镜分析骨片骨陷窝面积。结果用α-MEM培养液,10^(-7)mmol/L浓度的1,25(OH)_2VD_3或50ng/ml浓度的RANKL和30ng/ml的M-CSF作为诱导剂,所培养的破骨细胞多核、特异性蛋白表达水平高、蚀骨能力强。结论 用DMEM培养液和α-MEM培养液培养均是一种能在体外诱导生成大量人破骨细胞的方法。同时,建议采用1,25(OH)_2VD_3作为诱导剂。 展开更多
关键词 人破骨细胞 细胞培养 trap染色
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低能量激光对大鼠牙移动后保持过程中破骨细胞和胶原纤维改建的影响 被引量:5
8
作者 苗倩 彭朋 +2 位作者 董晓曦 马遥 张锡忠 《口腔疾病防治》 2020年第12期776-780,共5页
目的探讨低能量激光(low level laser,LLL)对大鼠牙移动后保持过程中破骨细胞和胶原纤维改建的影响,为临床应用提供实验依据。方法8周龄Wistar大鼠20只,随机选取5只为基线组:不施加正畸力,作为空白对照。其余15只建立上颌第一磨牙近中... 目的探讨低能量激光(low level laser,LLL)对大鼠牙移动后保持过程中破骨细胞和胶原纤维改建的影响,为临床应用提供实验依据。方法8周龄Wistar大鼠20只,随机选取5只为基线组:不施加正畸力,作为空白对照。其余15只建立上颌第一磨牙近中移动模型,加力结束去除加力装置后随机3组,每组各5只。对照组:即刻拆除加力装置后,不采用任何保持措施;保持组:拆除口内装置后,结扎丝拧成麻花状作为固定保持,维持大鼠第一磨牙与切牙之间的距离;保持+激光组:加力结束拆除口内装置后,结扎丝拧成麻花状作为固定保持,并在去除加力装置后的第0天、第3天、第6天、第9天、第12天应用LLL照射。2周后处死所有大鼠,取第一磨牙组织块,用HE染色、TRAP染色、Masson染色法观察破骨细胞以及胶原纤维的分布,分析牙槽骨及胶原纤维改建的过程。结果去除加力装置后2周,基线组牙根两侧可见胶原纤维沉积,牙根远中侧未见明显破骨样细胞;对照组牙根两侧未见明显胶原纤维沉积,远中侧破骨细胞活动活跃;保持组牙根两侧可见胶原纤维沉积,远中侧亦可见破骨细胞活动,但不如对照组活跃;保持+激光组牙根两侧胶原纤维合成明显,未见明显破骨细胞分布,且保持+激光组与其余各组差异具有统计学意义(P<0.05)。结论固定保持同时进行低能量激光照射能有效促进大鼠牙移动后保持阶段内胶原纤维的合成,抑制破骨细胞活动,从而减少磨牙复发的可能性。 展开更多
关键词 大鼠 正畸 牙移动 低能量激光 破骨细胞 胶原纤维 MASSON染色 trap染色
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牙周膜牵张快速牙移动牙周组织中破骨活性的实验研究 被引量:3
9
作者 钱慧芳 康娜 +2 位作者 宋少华 庞煊奈 何进安 《广西医科大学学报》 CAS 2013年第1期11-15,共5页
目的:探讨牙周膜牵张快速牙移动过程中破骨活动的变化规律。方法:以犬为实验对象,实验侧牙列应用牙周膜快速牙移动方法,对照侧牙应用传统牙移动方法,通过TRAP酶组织化学染色的方法,观察牙齿移动过程中牙周膜及牙槽骨张力侧和压力侧的破... 目的:探讨牙周膜牵张快速牙移动过程中破骨活动的变化规律。方法:以犬为实验对象,实验侧牙列应用牙周膜快速牙移动方法,对照侧牙应用传统牙移动方法,通过TRAP酶组织化学染色的方法,观察牙齿移动过程中牙周膜及牙槽骨张力侧和压力侧的破骨细胞的数量、分布及活性。结果:在4周主动加力阶段,对照侧随加力时间延长,1,2,4周移动牙牙周膜压力侧内破骨细胞数量、阳性率及活性逐渐增强,4周达到高峰;骨吸收方式最初为潜行性骨吸收,逐渐发展到直接骨吸收和潜行性骨吸收并存。在实验侧,1,2,4周移动牙牙周膜压力侧内破骨细胞数量、阳性率及活性一直处于较高水平,破骨活动明显较对照侧活跃;骨吸收方式为直接骨吸收和潜行性骨吸收并存。停止加力一段时间后原受压侧牙周膜内均少见破骨细胞。结论:牙周膜牵张快速牙移动过程中,移动牙压力侧牙周膜及牙槽骨内破骨细胞的数量及活性均高于传统牙移动。 展开更多
关键词 牙周膜牵张 快速牙移动 trap染色 破骨细胞
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外源性β-NGF调节骨改建过程中的可能作用机制 被引量:2
10
作者 茅传青 卓丽莉 +3 位作者 王锦 王承勇 卢萌 陈伟辉 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期59-64,共6页
目的探讨外源性的β-NGF在骨缺损愈合过程中对骨改建可能作用机制。方法利用外科手术方法切取SD大鼠颅骨顶部左右两侧的骨质,建立配对大鼠颅骨标准骨缺损局部持续灌注β-NGF给药模型。通过免疫组织化学技术检测骨缺损区组织中BMP-2的表... 目的探讨外源性的β-NGF在骨缺损愈合过程中对骨改建可能作用机制。方法利用外科手术方法切取SD大鼠颅骨顶部左右两侧的骨质,建立配对大鼠颅骨标准骨缺损局部持续灌注β-NGF给药模型。通过免疫组织化学技术检测骨缺损区组织中BMP-2的表达水平以及特殊染色技术(TRAP染色)检测骨缺损区组织中抗酒石酸碱性磷酸酶的表达水平,通过图像处理软件IPP6.0分别测定两者积分光密度值(IOD),以探讨BMP-2与破骨细胞活性在β-NGF调节新骨形成和改建过程中的可能作用机制。结果实验组BMP-2免疫组化染色阳性表达水平在14 d时IOD值明显高于对照组,且差异有显著性(P<0.05);TRAP染色结果显示:实验组骨吸收的活性在第7,21,28天三个时间点上明显低于对照组,且差异有显著性(P<0.05)。结论外源性的β-NGF在骨缺损修复过程中具有重要的调节作用,其可能是通过促进BMP-2表达和抑制破骨细胞的活性以抑制骨吸收。 展开更多
关键词 骨形态蛋白2 trap染色 骨改建 破骨细胞 大鼠
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Tim-3对单核细胞诱导破骨样细胞生成和骨吸收功能的影响 被引量:1
11
作者 戴晓莉 范银银 +3 位作者 张宏 茅挺 宋红蕾 杜鸿 《临床检验杂志》 CAS 2019年第5期353-357,共5页
目的探讨T细胞免疫球蛋白及粘蛋白结构域3(T cells immunoglobulin domain and mucin domain 3,Tim-3)对单核细胞诱导破骨样细胞生成和骨吸收功能的影响。方法流式细胞术检测RA患者和体检健康者外周血单核细胞上Tim-3的表达水平;利用人... 目的探讨T细胞免疫球蛋白及粘蛋白结构域3(T cells immunoglobulin domain and mucin domain 3,Tim-3)对单核细胞诱导破骨样细胞生成和骨吸收功能的影响。方法流式细胞术检测RA患者和体检健康者外周血单核细胞上Tim-3的表达水平;利用人外周血单核细胞体外诱导破骨样细胞;实时定量PCR法检测破骨样细胞形成过程中RANK、CTSK和MMP9 mRNA表达水平;瑞氏染色和肌动蛋白染色观察细胞形态,TRAP染色计数细胞形成数量;采用骨吸收功能试验检测破骨样细胞骨吸收陷窝的数量和面积。结果 RA患者外周血单核细胞上Tim-3表达水平[(77.31±10.66)%]明显高于健康人对照组[(51.72±16.69)%],差异有统计学意义(t=7.593,P<0.01),不同Tim-3水平的单核细胞在诱导为破骨样细胞时, Tim-3高水平组骨吸收陷窝面积[(1.054±0.085)S/mm^2]明显低于中间水平组[(1.889±0.053)S/mm^2]和低水平组[(2.763±0.066)S/mm^2],差异有统计学意义(F=9.318,P<0.05)。结论 Tim-3可能对破骨样细胞的骨吸收功能具有负向调控作用。 展开更多
关键词 T细胞免疫球蛋白及粘蛋白结构域3 类风湿关节炎 破骨样细胞 trap染色 骨吸收功能
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Hey1基因过表达对小鼠单核细胞RAW264.7向破骨细胞分化的影响
12
作者 许波 殷霄 +4 位作者 张安生 柴雪 王蕾 孙汉堂 张亚庆 《牙体牙髓牙周病学杂志》 CAS 北大核心 2013年第5期291-293,共3页
目的:观察Hey1基因过表达对小鼠单核细胞RAW264.7向破骨细胞分化的影响。方法:用Lipofectamine 2000将Hey1表达质粒转染RAW264.7细胞系;10μg/mL Blasticidin筛选稳定转染的细胞克隆,RT-PCR检测Hey1基因表达水平;用RANKL诱导RAW264.7细... 目的:观察Hey1基因过表达对小鼠单核细胞RAW264.7向破骨细胞分化的影响。方法:用Lipofectamine 2000将Hey1表达质粒转染RAW264.7细胞系;10μg/mL Blasticidin筛选稳定转染的细胞克隆,RT-PCR检测Hey1基因表达水平;用RANKL诱导RAW264.7细胞向破骨细胞分化,抗酒石酸磷酸酶(TRAP)染色后进行破骨细胞计数。结果:Blasticidin筛选出的细胞株Hey1 mRNA表达水平显著高于正常RAW264.7细胞;在50 ng/mL RANKL诱导条件下,Hey1过表达的RAW264.7细胞分化形成的破骨细胞数显著低于正常RAW264.7细胞(P<0.05)。结论:Hey1具有抑制小鼠单核细胞RAW264.7向破骨细胞分化的作用。 展开更多
关键词 Hey1 RAW264 7 破骨细胞 trap染色
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骨髓单核细胞和RAW264.7细胞诱导培养破骨细胞的条件研究 被引量:2
13
作者 杨佛 杨文龙 +3 位作者 李明慧 李威 刘璞 杨凤云 《江西中医药大学学报》 2020年第6期95-99,共5页
目的:研究骨髓单核细胞(BMMs)和RAW264.7细胞诱导培养破骨细胞(OC)的条件。方法:采用巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)和核因子κB受体活化因子配体(RANKL)共同诱导骨髓单核细胞和RAW264.7细胞,2 d换液一次,镜下见大量体积较大的OC时行抗酒... 目的:研究骨髓单核细胞(BMMs)和RAW264.7细胞诱导培养破骨细胞(OC)的条件。方法:采用巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)和核因子κB受体活化因子配体(RANKL)共同诱导骨髓单核细胞和RAW264.7细胞,2 d换液一次,镜下见大量体积较大的OC时行抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色鉴定。结果:骨髓单核细胞和RAW264.7细胞加入M-CSF和RANKL诱导培养4 d后见体积较小的OC形成,5 d时体积增大,数量增多,7 d时数量减少。TRAP染色见大量体积较大的OC,核呈深染,细胞核数量可达数十个。结论:骨髓单核细胞和RAW264.7细胞在M-CSF(50ng/mL)、RANKL(100 ng/mL)的诱导培养下5 d可见体积大且TRAP染色阳性的成熟OC,RAW264.7细胞诱导形成的OC较多。 展开更多
关键词 骨髓单核细胞 RAW264.7细胞 诱导培养 trap染色
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PCR-EIA法检测端粒酶活性及其临床应用 被引量:1
14
作者 陈卫群 陈和明 胡元佳 《湖南医科大学学报》 CSCD 北大核心 2002年第3期221-223,共3页
目的 :探讨用PCR EIA法检测人端粒酶活性及其临床应用。方法 :利用kim法处理细胞和组织标本及扩增端粒酶产物 ,引物TS用生物素标记 ,CX用地高辛标记 ,PCR产物与包被有链亲和素的酶标板结合 ,并与酶标抗地高辛抗体反应 ,用TMB显色。结果 ... 目的 :探讨用PCR EIA法检测人端粒酶活性及其临床应用。方法 :利用kim法处理细胞和组织标本及扩增端粒酶产物 ,引物TS用生物素标记 ,CX用地高辛标记 ,PCR产物与包被有链亲和素的酶标板结合 ,并与酶标抗地高辛抗体反应 ,用TMB显色。结果 :PCR EIA法与TRAP 银染色法有很好的相关性 ,批内变异系数CV为 4 .138% ,在 30例各种恶性肿瘤组织中端粒酶活性检出率为 90 % ,2 8例癌旁组织中为 7.1%。结论 :该法具有较好的灵敏度与重复性 ,无同位素污染 ,较银染色法更为简便、快速 ,检测成本低 ,无需特殊仪器 ,适合于各级医院推广。 展开更多
关键词 PCR-EIA法 端粒酶活性 临床应用 trap染色
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小鼠破骨细胞分离培养及鉴定 被引量:1
15
作者 王玉瑾 李永勖 《现代农业科技》 2013年第18期251-253,共3页
选择小鼠为试验对象,观察体外培养破骨细胞的形态学和生物学特征。采用小鼠共培养试验,结合倒置相差显微镜、抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色和扫描电镜(SEM)对其形态和功能进行观察鉴定。结果表明:利用小鼠共培养试验方法得到的破骨细胞... 选择小鼠为试验对象,观察体外培养破骨细胞的形态学和生物学特征。采用小鼠共培养试验,结合倒置相差显微镜、抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色和扫描电镜(SEM)对其形态和功能进行观察鉴定。结果表明:利用小鼠共培养试验方法得到的破骨细胞具有典型的破骨细胞的形态特点:属多核大细胞,TRAP染色阳性,能在骨片表面形成吸收陷窝。提示小鼠共培养试验能够得到一定数量具有骨吸收活性的破骨细胞。 展开更多
关键词 破骨细胞 trap染色 骨吸收陷窝 小鼠
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四种小鼠破骨细胞体外诱导培养方法的比较 被引量:1
16
作者 刘华清 李冰燕 张增利 《环境与职业医学》 CAS 北大核心 2011年第9期556-560,共5页
[目的]比较不同的破骨细胞体外诱导培养方法,为研究外源性因素对骨代谢影响提供方法学基础。[方法]采用骨髓基质细胞和骨髓单核细胞三维共育、骨髓基质细胞培养液转移刺激骨髓单核细胞、重组核因子-κB受体激活物配基(RANKL)诱导骨... [目的]比较不同的破骨细胞体外诱导培养方法,为研究外源性因素对骨代谢影响提供方法学基础。[方法]采用骨髓基质细胞和骨髓单核细胞三维共育、骨髓基质细胞培养液转移刺激骨髓单核细胞、重组核因子-κB受体激活物配基(RANKL)诱导骨髓单核细胞和RANKL诱导单核巨噬细胞株RAW264.7四种方法体外诱导破骨细胞。活细胞示踪剂CM-DiI标记RAW264.7后,用激光共聚焦显微镜扫描观察破骨细胞形成过程;抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色法染色破骨细胞。[结果]四种方法均成功地诱导培养出由多个细胞互相融合的TRAP阳性多核破骨细胞。加入RANKL的方法诱导出的破骨细胞较大,数量也较多,方法简单。正常骨髓基质细胞诱导形成的破骨细胞形态较小,数量也相对较少,过程复杂,但可以用来研究干预因素作用于骨髓基质细胞后对破骨细胞分化的间接影响。在对照组及诱导培养体系中均可观察到一类不互相融合的TRAP阳性细胞,含1~3个核,TRAP染色多集中在胞核周围,此类细胞可能是尚未分化的破骨细胞前体。而互相融合的破骨细胞TRAP染色见于整个胞浆。[结论]各种破骨细胞体外诱导培养方法各有优势,应根据不同的实验目的选用不同的破骨细胞诱导培养方法。 展开更多
关键词 破骨细胞 抗酒石酸盐磷酸酶(trap)染色 核因子-κB受体配基(RANKL) 骨髓基质细胞 小鼠单核巨噬细胞白血病细胞(RAW264.7)
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Effect of osteoprotegerin in combination with interleukin-6 on inhibition of osteoclast differentiation 被引量:8
17
作者 WANG Xin LUO Yan +2 位作者 LIAO Wen-bo ZHANG Jian CHEN Ting-mei 《Chinese Journal of Traumatology》 CAS CSCD 2013年第5期277-280,共4页
Objective: To observe the effect of recombinant interleukin-6 (IL-6) and osteoprotegerin (OPG) on inhibiting bone absorption induced by receptor activa- tor for nuclear factor- rB ligand (RANKL) in murine osteo... Objective: To observe the effect of recombinant interleukin-6 (IL-6) and osteoprotegerin (OPG) on inhibiting bone absorption induced by receptor activa- tor for nuclear factor- rB ligand (RANKL) in murine osteo- clast precursor cells (OCPs) model. Methods: RAW 264.7 cells were solely treated with 50 ng/ml RANKL for 1 day, and then they were divided into three groups: RANKL (control group), RANKL+IL-6 (IL-6 group) and RANKL+IL-6+OPG (combination group). These cells were harvested and investigated by means of HE stain- ing under light microscope after consecutive 9 days. Furthermore, staining tartrate-resistant acid phosphatase (TRAP)-positive multinucleated cells were detected by in- verted phase contrast microscope. The absorption pits of bone slices were observed under scanning electron microscope. Results: The number of mature osteoclast cells in control group was more than that in IL-6 alone or IL-6 com- bined with OPG group (P〈0.05). Interestingly, this experi- ment has also demonstrated that there was a large number of TRAP-positive multinucleated osteoclasts (more than 3 nuclei) and several bone absorption formation in the con- trol group, whereas the outcome was completely different in both IL-6 group and IL-6+OPG group (P〈0.05). Conclusion: IL-6 can suppress the differentiation of mature osteoclasts as directly adding it into the RAW 264.7 cells induced by 50 ng/ml RANKL, and further the effect of osteolysis is remarkably reduced. When treatment with IL- 6 combined with OPG, a more effective strategy for the treat- ment of osteoporosis is reached. 展开更多
关键词 OSTEOCLASTS OSTEOPOROSIS Osteopro- tegerin RANK ligand INTERLEUKIN-6
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