基于TTC染色的水稻种子活力定量分析

为了揭示种子活力与TTC染色之间的定量关系,本研究以水稻种子CY-150为试验材料,经人工加速老化处理和TTC染色后,利用体视镜获取种子胚部纵切面的RGB图像,并用农业农村部植物新品种测试(昆明)分中心建立的图像分析软件分析图像的CIELab值,计算单位面积染色强度。结果表明,发芽率、TTC染色率和活力指数之间呈显著正相关。其中,发芽率和活力指数、发芽率和染色率、染色率和活力指数之间的相关系数分别为0.9976、0.9718和0.9631。此外,CIELab值与发芽率、染色率和活力指数之间显著相关,其中,L^(*)和a^(*)分别呈负相关和正相关,相关系数分别为-0.9749、-0.9761、-0.9721、0.9737、0.9915和0.9678。利用种子活力指数与CIELab值建立了种子活力方程。通过随机选取4个水稻品种对方程进行验证,结果显示,4个品种的活力指数真实值略高于预测值。研究表明,TTC染色不仅可用于水稻种子活力快速定性分析,而且通过种胚RGB图像可以实现种子活力的定量分析,为进一步普及水稻种子活力快速检测提供参考。

老年急性脑梗死患者血清circTTC3和miR-138-5p水平变化及意义

目的探究老年急性脑梗死(ACI)患者血清环状RNA TTC3(circTTC3)和微小RNA-138-5p(miR-138-5p)水平变化及意义。方法选取2021年9月—2023年9月四川大学华西医院老年医学中心/干部医疗科诊治老年ACI患者128例(ACI组),根据美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)分为轻度亚组42例、中度亚组49例和重度亚组37例,同期医院门诊体检的健康人员120例作为健康对照组;采用实时荧光定量PCR法测定血清circTTC3和miR-138-5p表达水平,Pearson法分析老年ACI患者血清circTTC3和miR-138-5p的相关性,Spearman法分析老年ACI患者血清circTTC3和miR-138-5p表达水平与NIHSS评分相关性,受试者工作特征(ROC)曲线分析血清circTTC3和miR-138-5p表达水平对老年ACI患者神经缺损程度的诊断价值。结果与健康对照组比较,ACI组血清circTTC3表达水平升高,miR-138-5p降低(t/P=17.207/<0.001、16.239/<0.001)。血清circTTC3水平比较,轻度亚组<中度亚组<重度亚组,miR-138-5p表达水平比较,轻度亚组>中度亚组>重度亚组(F/P=26.579/<0.001、105.935/<0.001)。老年ACI患者血清circTTC3表达水平与NIHSS评分呈正相关(r=0.521,P<0.001),与大脑中动脉(MCA)、大脑前动脉(ACA)血流速度呈负相关(r=-0.425、-0.392,P均<0.001);miR-138-5p表达水平与NIHSS评分呈负相关(r=-0.785,P<0.001),与MCA、ACA血流速度呈正相关(r=0.571、0.635,P均<0.001)。circTTC3、miR-138-5p及二者联合诊断ACI神经缺损程度的AUC分别为0.817、0.810、0.878,二者联合诊断价值优于单独诊断(Z/P=2.106/0.035、2.406/0.016)。结论老年ACI患者血清circTTC3表达水平升高,miR-138-5p表达水平降低,二者与患者病情的严重程度密切相关,可能作为ACI病情诊断、治疗相关的作用靶点。

四肽重复结构域36(TTC36)通过增强IκBα的表达抑制NF-κB信号通路的激活抑制HK2人肾小管上皮细胞的炎症反应

目的研究四肽重复结构域(TTC36)对HK2人肾小管上皮细胞损伤的影响及潜在的机制。方法采用慢病毒感染法建立过表达TTC36的HK2稳转细胞系,转入空载质粒CMV-Flag作为对照。实时荧光定量PCR检测HK2细胞肿瘤坏死因子α(TNF-α)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、白细胞介素6(IL-6)、CC趋化因子配体2(CCL2)、IL-1β以及核因子κB抑制物α(IκBα)、核因子κB p65(NF-κB p65)的mRNA水平。流式细胞术检测细胞凋亡,CCK-8法检测细胞增殖。Western blot法检测iNOS、TNF-α、胱天蛋白酶3(caspase-3)、裂解型胱天蛋白酶3(c-caspase-3)、Bcl2相关X蛋白(BAX)、增殖细胞核抗原(PCNA)、闭锁小带1(ZO-1)、核因子κB(NF-κB)信号通路中IκBα、NF-κB p65、磷酸化的NF-κB p65(p-NF-κB p65)的蛋白表达。放线菌酮(CHX)、蛋白酶体抑制剂MG132处理细胞后,Western blot法检测IκBα的蛋白表达量。结果与对照组相比,HK2细胞过表达TTC36后,炎症介质表达减少;细胞凋亡率降低以及c-caspase-3、BAX表达减弱;细胞增殖加快,PCNA和ZO-1的表达增强;IκBα表达上调,NF-κB p65、p-NF-κB p65表达下调,胞质和胞核中的NF-κB p65表达量均减少。CHX处理后过表达TTC36延长IκBα的半衰期,而MG132可恢复过表达TTC36带来的IκBα的变化。结论过表达TTC36抑制HK2细胞的炎症反应,减少细胞凋亡,促进增殖,加强紧密连接,其机制可能是通过增强IκBα的表达抑制NF-κB信号通路的激活从而减轻炎症反应带来的细胞损伤。

TTC法测定滇黄精种子生活力条件的优化

以滇黄精种子为试验材料,采用TTC法测定生活力,分别通过正交试验和响应面法对染色温度、染色时间和TTC浓度进行优化。结果显示,正交设计试验最佳测试条件为TTC浓度0.5%、染色温度35℃、染色时间24 h;响应面法试验优化后结果与正交试验一致,利用响应面法优化TTC法测定滇黄精种子生活力的方法可行。

tRF-1:32-Glu-TTC-1介导高糖诱导肾小管上皮细胞焦亡的机制研究

目的探究tRF-1:32-Glu-TTC-1在高糖(HG)诱导的肾小管上皮细胞(RTECs)焦亡中的作用及相关机制。方法用高糖(35 mmol/L)干预RTECs,RT-PCR法检测tRF-1:32-Glu-TTC-1的表达,扫描电镜观察细胞形态变化,RT-PCR法检测NLRP3、GSDMD在mRNA水平上的表达变化,Western blot法检测NLRP3、caspase-1、GSDMD-N在蛋白水平上的表达变化;采用tRF-1:32-Glu-TTC-1抑制剂转染RTECs并用RT-PCR法检测转染效率,RT-PCR及Western blot法检测焦亡相关指标在mRNA及蛋白水平表达变化,Western blot法检测通路蛋白p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、p-FoxO3a/FoxO3a的表达水平。结果与Control组相比,HG组tRF-1:32-Glu-TTC-1表达增加,扫描电镜下可见细胞焦亡发生,焦亡相关指标转录上调及蛋白水平表达增加;抑制表达tRF-1:32-Glu-TTC-1组焦亡相关指标在mRNA及蛋白水平低于HG组及抑制剂空载组(HG+NC inhibitor组);与Control组相比,HG组p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、p-FoxO3a/FoxO3a蛋白减少;抑制表达tRF-1:32-Glu-TTC-1组p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、p-FoxO3a/FoxO3a蛋白水平高于HG组及抑制剂空载组。结论tRF-1:32-Glu-TTC-1可能通过负向调控PI3K/Akt/FoxO3a信号通路促进高糖诱导的RTECs焦亡。

TTC框架下欧盟和美国人工智能标准化合作重点分析

自2021年欧盟和美国成立欧美贸易技术理事会(TTC)以来,人工智能已经成为其在新兴技术领域寻求标准突破的重点领域.本文分析了欧盟和美国在TTC框架下共同开展人工智能标准化工作的主要行动、趋势和特点,为我国推动人工智能等新兴技术领域标准化发展提供参考与借鉴.

TTC9A在泛癌中的表达水平与多种癌症的预后和免疫微环境相关

目的确定四肽重复蛋白9A(TTC9A)在泛癌中的基因表达及其预后价值,明确其与免疫浸润的关系。方法R语言分析癌症基因组图谱及GTEx网站中TTC9A在不同肿瘤组织与正常组织中的表达及其与各种癌症的预后、DNA甲基化、肿瘤突变负荷、微卫星不稳定性的关系;应用TIMER和xCell比较TTC9A表达与免疫浸润的关系;运用免疫印迹法与RT-qPCR检测TTC9A在4种癌症中的表达情况。结果生信结果显示与正常组织相比,TTC9A在多种肿瘤中mRNA表达水平升高,少数肿瘤中下调(P<0.05)。实验结果显示在肺癌、结肠癌和肝癌中,TTC9A的蛋白和mRNA水平均较正常细胞高,与泛癌分析结果一致;而在膀胱癌细胞系中的表达下降,与泛癌分析结果相反。在头颈鳞状细胞癌、肾透明细胞癌、肾乳头状细胞癌、低级别胶质瘤、恶性间皮瘤、子宫内膜癌等肿瘤中,TTC9A的高表达与更好的总生存期、疾病特异性生存期、无进展间期密切相关(P<0.05);而在肺腺癌、胰腺癌、肾上腺癌、直肠腺癌中,高表达TTC9A与更差的总生存期、疾病特异性生存期、无进展间期密切相关(P<0.05)。在多形成性胶质细胞瘤、低级别胶质瘤、葡萄膜黑色素瘤、卵巢浆液性囊腺癌中,TTC9A高甲基化患者预后较好(P<0.05);但是,在宫颈鳞状细胞癌和宫颈内腺癌、头颈部鳞状细胞癌、肺鳞状细胞癌、肾上腺癌、子宫内膜癌中,TTC9A高甲基化患者预后较差(P<0.05)。TTC9A基因表达分别与7种和4种癌症类型的TMB和MSI显著相关(P<0.05)。在大多数癌症类型中,TTC9A与免疫细胞的浸润水平显著相关(P<0.05),尤其B细胞、CD4^(+)T细胞、CD8^(+)T细胞、巨噬细胞、中性粒细胞和树突状细胞。结论TTC9A可作为多种癌症的预后标志物,且与肿瘤突变负荷、微卫星不稳定性和免疫细胞浸润密切相关。

TTC法测定嵩草种子生活力的适宜条件研究

在不同温度（２０℃，２５℃，３０℃，３５℃，４０℃，４５℃），不同ＴＴＣ浓度（０．１％，０．２％，０．３％，０．４％，０．５％，０．６％）下，在０～１２ｈ内测定了线叶嵩草种子生活力的适宜条件。结果表明：在３５℃的温度、０．１％的ＴＴＣ浓度和３ｈ的染色时间下，可获得最佳染色效果，可作为线叶嵩草种子生活力测定的适宜条件。

TTC染色指数配合Logistic方程鉴定山葡萄种质抗寒性

为了能简便、准确地鉴定山葡萄种质抗寒性,该研究以40份山葡萄种质1 a生休眠期枝条为试材,利用连有图像分析软件的扫描仪对各低温处理下枝段染色图像进行可视化评估,配合Logistic方程建立回归方程,确定其低温半致死温度。结果表明,枝段染色指数随温度降低而下降,染色指数变化规律符合Logistic方程;40份山葡萄种质低温半致死温度在-39.41～-29.75℃范围内,拟合度在0.956 4～0.999 3范围内,种质抗寒性差异明显;各种质低温半致死温度与其平均隶属度及田间萌芽率均呈极显著负相关,相关系数分别为-0.883 03和-0.876 70。研究结果证明TTC染色图像可视化评估配合Logistic方程鉴定山葡萄种质抗寒性可行,同时为山葡萄种质抗寒性评价及抗寒亲本选择提供了简单、可靠的鉴定方法。

TTC染色评价豚鼠离体心脏缺血/再灌注损伤梗死面积的适宜观察时间及计算方法

目的探索氯化三苯基四氮唑(TTC)染色法评价豚鼠离体心脏缺血/再灌注损伤梗死面积的适宜观察时间及计算方法。方法将11只豚鼠离体心脏分为2组:对照组(control组,n=5)和缺血30 min再灌注60 min组(I30R60组,n=6)。Langendorff灌流后垂直心脏长轴将心脏横切成5片,弃去心耳片后,由心耳往心尖方向依次记为第1片、第2片、第3片、第4片并进行TTC染色,分别于染色后4个时间点(1、2、3、4周)对4个横切片进行逐个观察,并通过统计前2片、前3片和前4片的方法计算梗死面积百分比。结果与control组比较,I30R60组在第1周观察时第1至第4横切片梗死面积百分比均显著增加(P<0.05);第2周观察时,第1片无明显梗死,其余3个横切片与control组比较可见明显梗死区域(P<0.05);第3周观察时,4个心脏横切片梗死面积与control组比较无统计学差异(P>0.05);第4周观察时,仅第4片与control组比较具有统计学差异(P<0.05)。在计算梗死面积百分比方法中,与control组比较,I30R60组采用前2片、前3片和前4片进行计算,在第1周和第2周观察梗死面积具有统计学差异(P<0.05),在第3周、第4周观察均无统计学差异(P>0.05)。结论用TTC染色法评价豚鼠离体心脏缺血/再灌注损伤时,单片及多片心脏横切片评估梗死程度染色后第1周及第2周内观察为宜。

玉米根系活力TTC测定法的改良

根系活力是研究玉米生长发育时常常需要测定的一项生理指标。本文比较了玉米根系活力ＴＴＣ测定法的三种提取方法。结果表明，甲醇浸泡法，简便易行，结果准确。

TTC-脱氢酶还原法测定铜绿微囊藻活性

利用氯化三苯基四氮唑（TTC）-脱氢酶还原法定量地测定了铜绿微囊藻细胞的活性,并对影响活性测定的因素进行了分析与研究.结果显示,TTC浓度大于0.6%时会抑制酶活性,最适TTC浓度为0.2%;脱氢酶还原反应在Tris-HCl缓冲液中能正常进行,而在磷酸盐缓冲液中受到抑制,最适pH值为7.5-8.0;培养时间和培养温度对TTC脱氢酶还原反应的影响较大,最适培养时间为8-16h,最适培养温度为30-35℃;反应不需加入非离子去垢剂,吐温20和曲拉通X-100对脱氢酶反应会产生较强抑制作用.TTC还原所生成的三苯基甲臢（TPF）可采用50%乙醇提取.研究显示TTC-脱氢酶还原法可以很好地进行藻细胞活性定量化测定.

TTC-脱氢酶测定法表征低温真空环境对细菌呼吸活性的影响

在探索TTC-脱氢酶法测定大肠杆菌脱氢酶活性的最佳条件基础上，对真空、-20℃低温对大肠杆菌脱氢酶的影响进行研究。TTC法显色最佳条件为：TTC的浓度0．4％，pH值7～8，反应时间30min，测定波长485nm。真空处理5min大肠杆菌脱氢酶活性显著降低，而-20℃低温处理1h时脱氢酶活性才明显下降。因此，-20℃低温、真空处理都会导致细菌呼吸活性的下降，细菌刚放入真空的瞬间对其呼吸活性影响较大，而-20℃低温处理1h后才引起细菌呼吸活性显著下降。

TTC在黄酒酵母选育中的应用

TTC在筛选发酵能力强的酵母的同时也能对酵母起着纯化和复壮的作用 ,本实验用TTC显色剂筛选得到一株产酒精能力较强的酵母LJ2 # ,同原始菌相比 ,它细胞大小均一 ,形状规则 ,生长速度快 ,在同样的发酵条件下 ,它的发酵速度快 ,对原料的利用率高 ,产酒精能力强 ,但其代谢途径并没有改变 。

蛹虫草TTC-脱氢酶测定方法的优化

TTC-脱氢酶还原法可用于检测和鉴别优良及退化蛹虫草菌株。这一方法的应用依赖测定参数的优化。本文优化了蛹虫草TTC-脱氢酶的测定方法,结果显示:测定蛹虫草TTC-脱氢酶活性时,培养6d的蛹虫草菌液先以生理盐水洗涤4次后配成0.15g/mL的待用菌液;反应缓冲液为Tris-HCl,最适pH值为8.4;最适反应温度为37℃、最适反应时间为3h。酶促反应完成后无需加终止剂,立即将样品放置冰上,4℃离心再以无菌水洗2次,用无水乙醇萃取便可测定吸光度得到脱氢酶活性。本文优化的蛹虫草TTC-脱氢酶活性检测方法具有测定结果稳定可靠、重现性好、准确度高、操作方便等优点。

广州相思子和毛相思子种子活力TTC测定方法研究

通过对广州相思子(Abrus cantoniensis Hance)和毛相思子(Abrus mollis Hance)种子在4种TTC溶液浓度、3种预湿方法、3个染色温度下进行活力测定的研究,确定了广州相思子和毛相思子种子TTC法活力测定的最佳条件。研究结果表明,种子在30℃恒温下水浸种5～6 h,或纸间浸湿12 h,种子充分吸胀后剥去种皮,置于1.0%TTC溶液中,在30℃恒温暗光条件下染色5～6 h,观察表面,以全染为正常鲜红色(或毛相思子允许染色略淡的红色)为有生活力的种子。

TTC在发酵木糖高产乙醇的休哈塔假丝酵母选育中的应用

TTC可以作为筛选发酵葡萄糖产酒精能力强的酵母菌的显色剂,但发酵木糖产乙醇的酵母菌的代谢和发酵途径与之相比都有所不同,本实验用TTC作为初筛显色剂筛选发酵木糖产酒精能力较强的休哈塔假丝酵母。紫外诱变后从TTC平板上挑取显红色菌株150株进行摇瓶发酵测定乙醇产量,得到的正突变率为29%,负突变率为10%;挑取显白色菌株100株,得到的正突变率为0,负突变率为56%。将紫外诱变后产量已经有所提高的突变株S28进行氮离子注入诱变,从TTC平板上挑取显红色菌株100株进行摇瓶发酵测定乙醇产量,得到的正突变率为20.05%,负突变率为10.14%,其中的部分突变株的产量相比S28又有所提高。可见TTC能将乙醇产量较低的菌株淘汰,筛选出乙醇产量高的休哈塔假丝酵母菌。

TTC法测定4种针茅种子生活力染色技术的研究

采用TTC法测定4种针茅种子生活力,结果表明TTC法能够较好的反映4种针茅种子的生活力。试验针对影响TTC染色效果的5个因子进行了全面的梯度试验与数学分析,即浸种温度、浸种时间、TTC浓度、染色温度和染色时间,其中浸种温度、浸种时间和TTC浓度对染色效果起主要作用,并得到了测定4种针茅种子最佳染色技术条件,分别为(浸种温度-浸种时间-TTC浓度-染色温度-染色时间):短花针茅种子30℃-6 h-0.3%-40℃-3 h;大针茅种子30℃-3 h-0.1%-40℃-6 h;克氏针茅种子30℃-6 h-0.3%-35℃-18 h;贝加尔针茅种子35℃-12 h-0.3%-30℃-18 h。

基于TTC染色法的高活力酵母细胞定量筛选

在2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色法及96孔板基础上建立高活力与高产乙醇酵母细胞的同步定量筛选方法。选用体积分数为85%二甲基亚砜作为TTF提取剂,培养液(pH8.0)中TTC添加浓度为0.4%,以96孔板在0%、10%、14%的乙醇浓度下培养27株备选酵母菌株,通过酶标仪测定波长486 nm下TTF吸收值。结果显示TTF吸收值越高,酵母活性越高,并且通过比较酵母活性与其乙醇产量,得出两者在一定程度上呈正相关,即高活性酵母其乙醇产量也较高。共筛得6株具有较高细胞活性的菌株。此方法为高活性、高产乙醇酵母及其他微生物及植物细胞的活性的快速、大量检测提供了一条新途径。