抗U1-RNP抗体和抗RNPA/RNP68抗体联合检测在自身免疫性疾病诊断中的价值

目的探讨抗U1-核糖核蛋白(RNP)抗体和抗RNPA/RNP68抗体在自身免疫性疾病(AID)诊断中的价值。方法选取2021年10月—2024年3月同济大学附属上海市第四人民医院、上海交通大学医学院附属仁济医院AID患者136例[AID组,包括混合性结缔组织病(MCTD)23例、系统性红斑狼疮(SLE)49例、干燥综合征(SS)14例、狼疮性肾炎14例、自身免疫性肝炎(AIH)17例、类风湿性关节炎(RA)19例]和非AID患者136例(非AID组),以及健康体检者100名(正常对照组)。采用流式点阵免疫发光法检测所有研究对象抗RNPA/RNP68抗体,采用免疫印迹法检测抗U1-RNP抗体。采用Kappa检验评估不同方法之间的一致性。采用受试者工作特征(ROC)曲线评估各项指标诊断AID的效能。结果AID组抗U1-RNP抗体和抗RNPA/RNP68抗体阳性率均高于非AID组和正常对照组(P<0.0167),非AID组2种抗体的阳性率亦高于正常对照组(P<0.0167)。各组抗U1-RNP抗体阳性率与抗RNPA/RNP68抗体阳性率差异无统计学意义(P>0.05)。正常对照组2种抗体的一致性较好(Kappa=0.92),AID组的一致性差(Kappa=0.10)。抗U1-RNP抗体、抗RNPA/RNP68抗体联合检测(2种抗体均阳性)诊断AID的曲线下面积(AUC)为0.80,高于单项检测(0.70、0.73)(P<0.01)。对于MCTD、SLE,抗U1-RNP抗体、抗RNPA/RNP68抗体联合检测的AUC分别为0.81、0.75,均高于抗U1-RNP抗体单项检测(AUC分别为0.73、0.70)(P<0.01);且2种抗体联合检测诊断SLE的AUC高于抗RNPA/RNP68抗体单项检测(0.67)(P<0.01)。对于狼疮性肾炎,抗U1-RNP抗体和抗RNPA/RNP68抗体联合检测的AUC为0.52,低于2种抗体单项检测的AUC(0.62、0.69)(P<0.05)。对于SS,抗RNPA/RNP68抗体单项检测的AUC为0.72,高于抗U1-RNP抗体单项检测(0.51)(P<0.05)。抗U1-RNP抗体、抗RNPA/RNP68抗体单项检测和联合检测诊断其他AID的AUC差异均无统计学意义(P>0.05)。结论抗U1-RNP抗体对诊断狼疮性肾炎、RNPA/RNP68抗体对诊断SS具有较高的效能;2种抗体联合检测可提高对SLE和MCTD的诊断效能。

PIM1基因对急性髓系白血病U937细胞增殖、凋亡及JAK2/STAT3信号通路的影响

目的:探讨PIM1基因对急性髓系白血病(AML)U937细胞增殖、凋亡的影响,以及对JAK2/STAT3通路的调控作用。方法:收集初诊成人AML患者和单纯缺铁性贫血患者的骨髓单个核细胞,荧光定量PCR检测PIM1 mRNA表达。将AML细胞系U937细胞分为:U937组(U937细胞正常培养)、Si-PIM1组(U937细胞转染含PIM1 mRNA的低表达腺病毒载体)、Si-NC组(U937细胞转染不含PIM1 mRNA的低表达腺病毒载体)、CoA1组(U937细胞中加入浓度为20μmol/L的JAK2激活剂CoA1)、Si-PIM1+CoA1组(U937细胞转染含PIM1 mRNA低表达的腺病毒载体并加入浓度为20μmol/L的CoA1)。培养24 h。荧光定量PCR和蛋白印迹法检测U937细胞PIM1 mRNA和蛋白、JAK2/STAT3通路、细胞周期、凋亡相关蛋白表达;噻唑蓝法检测细胞增殖活性;流式细胞术检测细胞周期变化及凋亡率。结果:AML患者骨髓单个核细胞中PIM1 mRNA表达水平高于单纯缺铁性贫血患者(P<0.05)。与U937组相比,Si-PIM1组细胞PIM1 mRNA和蛋白、p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3、Cyclin D1、CDK2蛋白、细胞增殖活性、S期比例、G2/M期比例降低(均P<0.05),p27、Caspase-3蛋白、G0/G1期、凋亡率升高(均P<0.05),而CoA1组上述指标的变化情况与Si-PIM1组正好相反,CoA1可逆转Si-PIM1对U937细胞的作用效果。U937组、Si-PIM1+CoA1组、Si-NC组U937细胞上述指标差异无统计学意义(P>0.05)。结论:敲低PIM1基因表达可抑制U937细胞增殖、促进凋亡,缓解ALM进程,且上述作用可能与抑制JAK2/STAT3通路活化有关。

MEK1/2抑制剂U0126对射频消融术后残留肝癌细胞系HepG2-H作用的研究

目的研究MEK1/2抑制剂U0126对肝癌射频消融术后残留肝癌细胞系HepG2-H的增殖、迁移和侵袭的影响。方法运用肝癌细胞系HepG2体外制作射频消融术后残留肝癌细胞系HepG2-H,通过细胞增殖、划痕、侵袭实验,观察实验组(加入10μmol/L、20μmol/L、30μmol/L的U0126)和对照组(不加入U0126)细胞的增殖、迁移和侵袭能力。结果实验组(加入10、20、30μmol/L的U0126)的吸光度值分别为:(0.6929±0.08257)、(0.5084±0.06012)、(0.4549±0.07660),对照组吸光度值为:(1.1245±0.07971);组间差异有统计学意义(P<0.05);实验组的迁移面积分别为:(5640.2±285.4)mm^(2)、(5082.4±237.7)mm^(2)、(4821.7±246.3)mm^(2),对照组的迁移面积为:(6053.8±269.2)mm^(2),组间差异有统计学意义(P<0.05);实验组的每高倍视野细胞计数分别为:(164.2±18.89)个、(138.4±18.06)个、(129.4±18.54)个,对照组的每高倍视野细胞计数为:(226.6±16.81)个,组间差异有统计学意义(P<0.05)。结论U0126可抑制射频消融术后残留肝癌细胞HepG2-H的增殖、迁移和侵袭。

一种(2SPU-1U)&1R少自由度帆船运动模拟平台的研究

针对现存多数单一自由度的帆船模拟运动平台,提出一种新型3-DOF的(2SPU-1U)&1R少自由度混联帆船运动模拟平台,该运动平台由一个2SPU-1U的并联机构和一个旋转副R串联构成,能够实现帆船的横摇、纵摇、艏摇三个自由度的运动模拟,同时该平台还可以应用到驾驶、飞行等模拟器场合。采用Grübler-Kutzbach公式计算出机构的自由度数目,建立了2SPU-1U并联机构的约束方程,并通过数值法求解出并联机构的位姿逆解,利用粒子群优化(PSO)算法分析并联机构的位姿正解。最后运用Solidworks和Adams软件进行联合建模仿真分析,验证了机构运行平稳,能够实现帆船横摇、纵摇和艏摇的运动模拟。

Cr和Si含量对重载铁路用75 kg·m^(-1)U77MnCrH钢轨组织与性能的影响

为开发适应重载铁路用高强韧、高硬度耐磨钢轨,按照C-Si-Mn-Cr成分设计体系进行U77MnCrH钢轨钢的成分设计和中试试验;基于中试试验的组织性能,筛选出组织性能较好的试验钢进行75 kg·m^(-1)U77MnCrH钢轨试制试验;使用金相显微镜、场发射扫描电子显微镜、透射电子显微镜、万能拉伸试验机及硬度计对75 kg·m^(-1)U77MnCrH钢轨试样进行组织性能分析。结果表明:随着Cr含量由0.26%增加到0.38%,钢轨钢试样中珠光体片层间距由165 nm减小到146 nm,抗拉强度和硬度均有提高,屈服强度R_(p0.2)与断后伸长率均有降低;随着Si含量由0.25%增加到0.45%,珠光体片层间距由165 nm减小到132 nm,断后伸长率和硬度均有提高,屈服强度R_(p0.2)明显增加,抗拉强度变化不大;0.45%的Si配合0.26%的Cr获得的钢轨珠光体更加均匀细小,片层间距分布更加均匀,力学性能与硬度匹配更好,抗拉强度达到1258 MPa,屈服强度R_(p0.2)达到845 MPa,断后伸长率达到13.0%,轨头顶面硬度达384 HBW,横断面硬度介于36.2~38.8 HRC。75 kg·m^(-1)U77MnCrH钢轨的各项指标对生产实践具有较强的参考价值。

雷公藤甲素通过miR-34b-5p/Notch1轴抑制骨肉瘤U2OS细胞增殖并诱导其铁死亡

目的:探究雷公藤甲素(TPL)通过miR-34b-5p调控Notch1表达对骨肉瘤U2OS细胞铁死亡影响的机制。方法:常规培养U2OS细胞,将其分为对照组、TPL(10μmol/L)组、TPL(10μmol/L)+Fer-1(铁死亡抑制剂,20μmol/L)组、miR-NC组、miR-34b-5p组、miR-34b-5p+Fer-1(20μmol/L)组、TPL(10μmol/L)+anti-miR-34b-5p组、anti-miR-34b-5p+Fer-1(20μmol/L)组。qPCR法、CCK-8法、铁离子检测试剂、DHE-荧光探针和WB法分别检测各组U2OS细胞中miR-34b-5p的表达、增殖能力、Fe2+水平、ROS水平以及铁死亡相关蛋白(GPX4、SLC7A11及Notch1蛋白)的表达,双萤光素酶报告基因实验验证miR-34b-5p与Notch1的靶向结合关系。结果:TPL可促进U2OS细胞中miR-34b-5p表达,Fer-1和anti-miR-34b-5p则抑制miR-34b-5p的表达(均P<0.05)。TPL明显抑制U2OS细胞的增殖、GPX4、SLC7A11、Notch1蛋白的表达、增加细胞中Fe2+和ROS的含量,Fer-1可逆转TPL对U2OS细胞的作用(均P<0.05)。过表达miR-34b-5p与TPL对U2OS细胞的作用相似(均P<0.05)。miR-34b-5p可靶向结合Notch1(均P<0.05)。miR-34b-5p抑制剂可明显抑制TPL对U2OS细胞的影响,Fer-1可增强miR-34b-5p抑制剂的作用(均P<0.05)。结论:TPL可抑制U2OS细胞的增殖能力并促进其铁死亡,其作用机制可能与miR-34a-5p靶向调节Notch1表达有关。

κ‑阿片受体激动剂U50488H通过抑制NLRP3/Caspase‑1信号通路对体外循环致大鼠肺损伤的影响

目的观察κ-阿片受体(KOR)激动剂U50488H对体外循环诱导的大鼠肺损伤的影响,并探讨U50488H对肺保护的作用机制。方法将24只SPF级SD大鼠随机分为假手术组(Sham组)、大鼠体外循环模型组(CPB组)和KOR激动剂在体外循环(CPB)模型中的干预组(U50448H组),每组8只。U50448H组于CPB前30 min静脉注射1.5 mg/kg U50488H,分别于CPB后0 h、1 h和2 h各时点行动脉血气分析,计算肺泡-动脉氧分压差(AaDO_(2))和呼吸指数(Respiratory index,RI)。三组大鼠均在停CPB后2 h时处死,取完整右肺下叶,采用重力法测定血管外肺水(Extravascular lung water,EVLW),HE染色观察肺组织形态学变化。采用ELISA方法检测血浆脂多糖(LPS)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和还原型谷胱甘肽(GSH)的含量,TUNEL法检测肺组织的细胞凋亡,Western blot测定肺组织GSDMD-C、GSDMD-N、NLRP3、ASC、pro-Caspase-1和pro-IL-1β蛋白的表达。结果CPB组大鼠在CPB后0 h、1 h和2 h各时点的AaDO_(2)和RI、LPS明显高于Sham组(P<0.05);U50488H组3个时点的AaDO_(2)、RI、LPS均明显低于CPB组(P<0.05)。与Sham组比较,CPB组大鼠EVLW,血浆MDA和GSH,肺组织的凋亡指数(AI),NLRP3、ASC、pro-Caspase-1和pro-IL-1β蛋白的表达明显增高,血浆SOD含量明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05);而U50488H组上述指标与Sham组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。CPB组大鼠出现了严重的肺损伤和肺泡内充血/出血,并伴有广泛的炎症细胞浸润,U50448H组肺损伤明显减轻。结论κ-阿片受体激动剂U50488H通过抑制肺组织中NLRP3/Caspase-1信号通路介导的炎症和氧化应激反应,从而减轻CPB后大鼠的肺损伤。

肝细胞癌患者癌组织中CRIP1、STUB1表达及临床预后意义

目的探讨肝细胞癌患者癌组织中富含半胱氨酸肠蛋白1(CRIP1)、STIP1同源性和包含U-box蛋白1(STUB1)表达及临床预后意义。方法选取2018年2月至2020年2月该院诊治的112例肝细胞癌患者作为研究对象。免疫组化法检测肝细胞癌患者癌组织和癌旁组织中CRIP1、STUB1表达。分析肝细胞癌患者癌组织CRIP1、STUB1表达与其临床病理特征的关系。Kaplan-Meier生存分析癌组织CRIP1、STUB1表达对肝细胞癌患者预后的影响。COX回归分析影响肝细胞癌预后的因素。结果肝细胞癌患者癌组织中CRIP1阳性率为62.50%(70/112),明显高于癌旁组织[7.14%(8/112)],差异有统计学意义(χ^(2)=76.652,P<0.05)。肝细胞癌患者癌组织中STUB1阳性率为26.23%(32/112),明显低于癌旁组织[82.14%(92/112)],差异有统计学意义(χ^(2)=73.284,P<0.05)。癌组织中CRIP1与STUB1表达呈负相关(r=-0.678,P<0.001)。不同肿瘤TNM分期、组织学分级及肿瘤最大径的肝细胞癌患者癌组织中CRIP1、STUB1阳性率比较,差异有统计学意义(P<0.05)。CRIP1阳性组3年累积生存率明显低于CRIP1阴性组,差异有统计学意义(Log-rankχ^(2)=29.601,P<0.001)。STUB1阴性组3年累积生存率明显低于STUB1阳性组,差异有统计学意义(Log-rankχ^(2)=13.590,P<0.001)。肿瘤TNM分期Ⅱ~Ⅲ期、组织学分级Ⅲ级、肿瘤最大径>5 cm、CRIP1阳性、STUB1阴性是影响肝细胞癌患者预后的独立危险因素。结论肝细胞癌患者癌组织中CRIP1表达上调,STUB1表达下调,临床上可根据肝细胞癌患者癌组织中CRIP1、STUB1表达情况对患者预后进行评估。

塔里木马鹿CP2U1基因真核表达载体的构建及其生物信息学分析

为了分析塔里木马鹿(Cervus elaphus yarkandensis)细胞色素P450 2U1(CP2U1)基因的结构和相关功能,利用RTPCR方法获取塔里木马鹿CP2U1基因288 bp的CDS序列,并构建其真核表达载体pcDNA3.1(+)-CeyCP2U1。生物信息学分析结果表明:该基因能编码95个氨基酸,氨基酸组分中没有天冬酰胺;其蛋白为疏水性、不稳定蛋白,没有跨膜区、信号肽、N-糖基化位点和O-糖基化位点,但具有8个潜在的磷酸化位点;塔里木马鹿CP2U1与东欧马鹿和白尾鹿的相似性最高,而与褐家鼠的同源性最低.;CP2U1蛋白在适应极端干旱环境中发挥潜在的作用。

改进U-Net网络的高分辨率遥感影像建筑物提取方法

针对高分辨率遥感影像建筑物提取精度不高、易出现误提和漏提等问题,提出了一种改进U-Net网络的建筑物提取方法。以Res Net50为U-Net模型的编码器部分,同时引入CBAM混合注意力机制和FPN特征金字塔结构对网络进行优化,从而提高网络提取建筑物信息的准确度和稳健性。基于高景一号遥感影像,制作512×512大小的样本进行训练,并与U-Net、基于Res Net50骨干网络的U-Net网络和Deep Labv3+进行对比验证。结果表明,该算法具有更强的分割效果和性能,适用于不同类型的高分辨率建筑物提取任务。

u-PA、u-PAR和PAI-1在睾酮联合hCG致多囊卵巢大鼠中的表达与意义

目的:探讨尿激酶型纤溶酶原激活剂(u-PA)、其受体(u-PAR)和其抑制剂-1(PAI-1)在PCOS发病机制中的作用。方法:采用睾酮或孕酮联合hCG刺激建立PCOS大鼠模型;免疫组化S-P法测定u-PA、u-PAR和PAI-1在模型动物卵巢组织中的分布与表达。结果:u-PA、u-PAR在PCOS组颗粒细胞和泡膜细胞中的染色比正常对照组明显减弱(P<0.05),PAI-1在泡膜细胞及间质细胞中的染色均比正常对照组明显增强(P<0.05)。结论:u-PA、u-PAR及PAI-1的表达异常可能参与PCOS的发病。

环F2＋uF2上长为2^s的（1＋u）-常循环码的距离分布

研究了环F2+uF2上长为2s的(1+u)-常循环码的各种距离.首先给出了环F2+uF2上长为2s的(1+u)-常循环码的结构;然后利用这个结构,确定了环F2+uF2上长为2s的(1+u)-常循环码的Hamming距离、Lee距离、Euclidean距离的分布.

RNA干扰Fascin1表达抑制胶质瘤细胞U87MG的侵袭、转移能力

目的:本研究运用RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术特异性抑制肌动蛋白结合的细胞骨架蛋白Fascin1的表达,并探讨其对胶质瘤细胞U87 MG的侵袭和转移能力的影响及相关分子机制。方法:将针对Fascin1的小干扰RNA(Fascin1-si RNA)和阴性对照si RNA(Negative-si RNA)转染至人胶质瘤细胞株U87 MG中。实验分为3组:空白对照组(未转染的细胞)、阴性对照组(转染neg-si RNA的细胞)、实验组(转染Fascin1-si RNA的细胞)。用transwell小室法检测Fascin1对U87MG细胞的侵袭和转移能力的影响,蛋白印迹法(Western blot)检测U87 MG细胞中Fascin1、p AKT及p STAT3等蛋白的表达。通过添加针对PI3K通路的抑制剂LY294002和针对STAT3通路的抑制剂JSI-124,证实了这两条信号通路在胶质瘤细胞U87MG侵袭、转移方面的作用。结果:相比空白对照组和阴性对照组,实验组细胞的转移能力降低了约(49±5.8)%及(46±5.4)%(P<0.05),侵袭能力降低了约(42±4.9)%和(43±4.8)%(P<0.05);且相关的PI3K/AKT及STAT3等信号通路的磷酸化减少;添加相应的信号通路抑制剂后,细胞的侵袭、转移能力显著降低(P<0.05)。结论:RNAi抑制Fascin1表达能够降低胶质瘤细胞U87 MG的侵袭及转移能力,并可抑制PI3K/AKT和STAT3信号激活,在一定程度上可逆转胶质瘤细胞的转移和侵袭等肿瘤特性。

雷公藤红素对U937细胞Notch 1、NF-κB信号蛋白通路的调控作用

背景与目的:白血病是高度依赖NF-κB的恶性肿瘤,NF-κB与肿瘤的发生和转移以及肿瘤细胞的增殖、凋亡、耐药相关,现已证实NF-κB家族是Notch信号通路的一个靶基因。本研究探讨雷公藤红素对白血病U937细胞凋亡和细胞中Notch1、NF-κB表达水平的影响。方法:以不同浓度雷公藤红素(0.25～16.0μmol/L)分别作用于U937细胞12～60h,MTT法检测细胞增殖活性,透射电子显微镜、流式细胞术观察雷公藤红素对U937细胞凋亡的影响,Western blot、RT-PCR法分别检测雷公藤红素对U937细胞内Notch1通路蛋白、基因表达水平的调控作用,激光共聚焦显微技术检测细胞凋亡时NF-κB的核浆分布变化。结果:雷公藤红素能明显抑制U937细胞增殖,具有浓度依赖和时间依赖性。此外,雷公藤红素以浓度依赖性方式诱导U937细胞凋亡,并伴随明显的凋亡细胞形态学改变,而雷公藤红素的凋亡诱导效应可能与其将细胞阻滞于G0/G1期有关。雷公藤红素对Notch1通路蛋白及基因表达水平均有不同程度的抑制作用,该抑制作用呈明显的量效关系。NF-κB在胞核表达减少,胞浆表达增多。与对照组相比差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:雷公藤红素明显抑制U937细胞的增殖,并诱导其凋亡,其抗白血病效应可能与下调Notch1信号通路以及NF-κB蛋白表达有关。

二苯乙烯苷对ox-LDL诱导的U937细胞ICAM-1、VCAM-1及VEGF表达的影响

目的观察二苯乙烯苷(TSG)对ox-LDL诱导的U937细胞ICAM-1、VCAM-1及VEGF表达的影响,探讨TSG抗动脉粥样硬化(AS)的可能机制。方法体外培养经PMA处理过的U937细胞,在给予ox-LDL刺激的同时给予不同浓度TSG干预,采用黄嘌呤氧化酶法测定细胞培养液中SOD活力,TBA法测定培养液中MDA含量,蛋白免疫印迹法分析观察各组细胞ICAM-1、VCAM-1及VEGF的蛋白表达,逆转录聚合酶链反应法分析观察各组细胞ICAM-1和VCAM-1的基因表达。结果模型组细胞液总SOD活力较对照组明显降低,TSG高剂量及阳性对照组总SOD活力较模型组明显升高(P<0.05);模型组细胞液MDA水平较对照组明显升高,TSG高中剂量及阳性对照组较模型组明显升高(P<0.05)。蛋白免疫印迹分析显示,模型组ICAM-1、VCAM-1及VEGF的蛋白表达较对照组明显升高(P<0.05);TSG高剂量和辛伐他汀能明显降低ICAM-1、VCAM-1及VEGF表达(P<0.05)。逆转录聚合酶链反应分析显示,模型组细胞ICAM-1、VCAM-1 mRNA水平较正常组明显升高(P<0.01);TSG高剂量和辛伐他汀较模型组能明显降低ICAM-1、VCAM-1mRNA水平(P<0.01)。结论TSG具有抗氧化、抑制单核巨噬细胞黏附分子分泌作用;其作用可能与其抗动脉粥样硬化有关。

Al-Mg-Si合金中U1和U2相的原子成键与性能

应用EET理论和改进的TFD理论对Al-Mg-Si合金时效过程中析出的U1与U2相的原子成键和结合能进行计算。结果表明:两相晶胞中最强键和次强键都是Al—Si键,其键络比基体Al晶胞中的最强键络都强得多;两析出相晶胞中都以较强的Al—Si键构成主要键络骨架结构,起到增强基体键络强度、强化合金的作用。由于析出相U1比析出相U2具有更强的Al—Si键络结构,且结合能较大,因此,相对U2相来说,U1相更稳定。计算结果还表明:(001)Al//(110)U1相界面处电荷保持连续且连续性较好,界面应变能较低,界面较稳定;界面(001)Al//(010)U2处的面电荷密度偏离连续条件,因此在此界面处,应力较大,界面原子键匹配较差,界面储能(应变能)较高,容易成为新相形核、长大和裂纹萌生的地方。

无障碍电脑语言系统U1在失语症患者语言训练中的应用

目的:探讨电脑辅助语言训练系统(无障碍电脑语言系统U1)在失语症患者语言训练中的效果。方法:脑卒中、脑损伤后失语症患者23例利用无障碍电脑语言系统U1进行语言训练,对患者训练前后的语言能力进行比较。结果:失语症患者经过训练,听说读写能力有不同程度的提高,其中听理解(由36.25±21.65升至54.25±26.71)、复述(由42.00±35.58升至63.65±22.27)、读理解(由35.35±31.98升至56.42±34.11),治疗前后比较差异有非常显著性意义(t=4.9059,3.6407,3.9088,P均<0.01),其余各项治疗前后比较差异有显著性意义(t=2.4036～2.8651,P<0.05)。23例患者中20例听理解有改善,15例口语表达,18例复述、朗读、阅读有改善,12例描写、听写有改善,21例抄写有改善。结论:电脑辅助语言训练系统(无障碍电脑语言系统U1)在失语症患者康复训练中有一定治疗价值,训练效果满意。

ERK抑制剂U0126通过下调cyclin D1与survivin蛋白表达抑制乳腺癌细胞增殖

目的 研究ERK通路抑制剂U0126对乳腺癌细胞增殖的抑制作用,并探讨其调控机制。方法培养人乳腺癌细胞株MCF-7、MDA-MB231,将细胞分组干预,MTT法检测各组细胞增殖情况;流式细胞仪检测各组细胞周期及细胞凋亡;Western blot检测细胞中p-ERK/ERK、cyclin D1、survivin及cleaved caspase-3蛋白表达。结果 MTT结果显示,U0126干预24、48 h后,MCF-7、MDA-MB231细胞抑制率明显增加(P<0.01);MCF-7、MDA-MB231细胞经U0126干预24 h后,检测细胞周期及细胞凋亡,G 0/G 1期细胞比例较对照组明显增加,S及G 2期细胞比例下降(P<0.05);而干预组细胞凋亡率较未干预组明显增多(P<0.01);U0126处理人乳腺癌细胞2 h后,可阻断ERK的磷酸化,减少cyclin D1的蛋白表达,抑制survivin而上调cleaved caspase-3的表达,与对照组相比差异有显著性(P<0.01)。结论 U0126通过阻断MCF-7、MDA-MB231细胞中ERK信号通路,调控cyclin D1,将细胞周期阻断在G 0/G 1期,抑制survivin而增加cleaved caspase-3表达,增加细胞凋亡,继而使乳腺癌细胞MDA-MB231、MCF-7的增殖受到抑制。

锌转运体1基因在脑胶质瘤组织中的表达及其对U87细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响

目的:检测锌转运体1(zinc transporter 1,ZnT1)基因在胶质瘤组织中的表达,初步探索ZnT1对U87细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法:收集2015年10月至2017年1月中国医科大学附属第一医院神经外科收治的术前未接受过放化疗的Ⅱ~Ⅲ期胶质瘤患者20例,采用Real-time PCR和Western blotting检测胶质瘤组织与瘤旁组织中ZnT1 mRNA和蛋白的含量。向胶质瘤细胞系U87中分别转染ZnT1和si-ZnT1质粒,构建ZnT1过表达和低表达细胞系,MTT和Transwell实验分别检测ZnT1对U87细胞增殖、侵袭和迁移的影响。结果:ZnT1mRNA和蛋白在胶质瘤组织中表达显著高于瘤旁组织(均P<0.05)。成功构建ZnT1过表达和低表达U87细胞系。与空白和空质粒对照组相比,转染12 h后,ZnT1过表达U87细胞的增殖(0.54±0.01 vs 0.45±0.04、0.43±0.03,P<0.01)、侵袭和迁移能力(均P<0.05)显著升高;而转染12 h后ZnT1低表达U87细胞的增殖(0.37±0.03 vs0.45±0.01、0.44±0.03,P<0.01)、侵袭和迁移能力(均P<0.05)显著降低。结论:ZnT1在胶质瘤组织中呈高表达,ZnT1可以促进胶质瘤U87细胞的增殖、迁移和侵袭。

家蚕细胞色素P450基因Bmcyp6u1的克隆、序列分析与表达谱

细胞色素P450第6亚家族基因为昆虫所特有,与抗性相关。为了检测家蚕Bombyx mori cyp6u1基因是否与耐氟性相关,首先克隆了cyp6u1基因。采用生物信息学方法获得与黑腹果蝇Drosophila melanogaster cyp6u1基因同源的家蚕B.moricyp6u1基因序列,预测该序列的开放阅读框(ORF)为1476bp,编码491个氨基酸,推定的蛋白质分子质量为56.15kD,等电点为9.23。以家蚕5龄第3天幼虫精巢cDNA为模板,设计特异引物PCR扩增出一条约1500bp的条带,大小与家蚕cyp6u1序列的ORF预测值接近,命名为Bmcyp6u1基因(GenBank登录号:HM130560)。同源性分析表明,Bmcyp6u1基因与蜜蜂Apis mellifera的同源基因cyp6AS13的相似性为56%,与拟南芥Arabidopsis thaliana的cyp72A82的相似性为48%,与人Homosapiens的cyp3A7基因的相似性为50%。芯片数据分析表明,Bmcyp6u1基因在家蚕5龄第3天幼虫各组织表达量很低,只在精巢组织(5龄第3天)稍有表达,推测该基因具有组织特异性。