基于UHPLC-MS技术的NSCLC血浆生物学标志物的筛选及鉴定研究

目的研究UHPLC-MS技术的NSCLC血浆生物学标志物的筛选及鉴定。方法本研究纳入符合非小细胞肺癌临床诊断标准的60例NSCLC患者,随机分为两组,接受靶向治疗(TACE)的非小细胞肺癌患者为鉴别诊断组,未接受靶向治疗的NSCLC患者为正常对照组。结果在60例NSCLC患者中,通过LC-MS/MS技术共检测到552个生物标志物。在其中17个生物标志物中,有8个出现在已知的EGFR突变患者中,另7个出现在ALK融合患者中,6个出现在HER2突变患者中。此外,NSCLC患者血浆中含有丰富的非编码RNA(miRNA),包括58个miRNA和23个mRNA。结论本研究中,采用LC-MS/MS技术对NSCLC患者血浆进行分析,可快速、高效地获得血浆样品中的生物学标志物。这些标志物可以作为NSCLC诊断的潜在生物学标志物,并且可以用于预测肿瘤进展和不良预后。

UHPLC-MS/MS同时测定清感童饮中6种有效成分在大鼠体内血药浓度及药代动力学研究

[目的]本实验旨在研究清感童饮活性成分在大鼠血浆中的药代动力学特征。[方法]实验建立大鼠血浆中甘草次酸、木犀草素、芹菜素、芍药苷、连翘酯苷A、连翘苷等6种活性成分的超高效液相色谱-串联质谱(UHPLC-MS/MS)检测方法,考察大鼠灌胃给药清感童饮后,6种成分在大鼠体内的药代动力学特征。采用WELCN Ultimate XB-C_(18)色谱柱(2.1 mm×100 mm,3μm)分离;流动相为0.1%甲酸水(A)-乙腈(B);梯度洗脱;进样量3μL;流速为0.2 mL/min;柱温40℃;在多反应监测模式(MRM)下正、负离子同时测定。[结果]结果显示,大鼠血浆样品中各成分的线性关系均良好(r>0.99),其日内、日间精密度、准确度、稳定性、基质效应以及提取回收率均符合生物样品的分析要求。药动学参数结果显示,各成分的t_(1/2z)为1.18~34.12 h,T_(max)为0.44~19.33 h,C_(max)为9.00~318.09μg/L,AUC_(0~t)为12.40~15 969.32 h·μg/L,MRT_(0~t)为2.23~23.19 h。[结论]本实验所建立的检测方法快速、准确、重复性好,可适用于清感童饮中甘草次酸、木犀草素、芹菜素、芍药苷、连翘酯苷A、连翘苷在大鼠血浆中的药动学研究。

基于网络药理学结合UHPLC-MS/MS探讨清感童饮的抗炎作用

目的 基于血清药理学和网络药理学探究清感童饮的体外抗炎作用。方法 采用血清药理学评价方法,验证清感童饮含药血清对脂多糖(LPS)诱导的小鼠巨噬细胞(RAW264.7)释放一氧化氮(NO)、细胞坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)的影响。利用液质联用(UHPLC-MS/MS)技术对清感童饮指标性成分进行含量测定,并根据这些成分进行网络药理学分析,对清感童饮有效成分发挥抗炎作用的潜在靶点及作用通路进行预测。结果 细胞实验证明清感童饮可明显降低NO、TNF-α、IL-6水平(P<0.05,P<0.01,P<0.001)。清感童饮中含量较高的成分为连翘酯苷A、牛蒡苷、绿原酸、野黄芩苷、没食子酸、迷迭香酸、芍药内酯苷、连翘苷。清感童饮中17个活性成分与炎症的交集靶点共215个,主要涉及ALB、VEGFA、IL-6、TNF-α等31个核心靶点,调节AGE-RAGE、PI3K-Akt、MAPK信号通路等多种通路发挥抗炎作用。结论 清感童饮具有多成分-多靶点发挥抗炎作用的特点。

UHPLC-MS/MS法同时测定补骨脂药材中17种成分的含量

[目的]建立UHPLC-MS/MS法同时测定25批补骨脂中17种成分的含量。[方法]采用超高效液相色谱-三重四级杆串联质谱技术检测,色谱柱为Thermofisher Scientific Hypersil GOLD(100 mm×2.1 mm 1.9μm),流动相为水(A)-乙腈(B),梯度洗脱,进样量为3μL,流速为0.2 mL/min,柱温40℃;离子源为电喷雾离子源(ESI);在多反应检测(MRM)模式下正、负离子同时测定。[结果]补骨脂素、异补骨脂素、补骨脂酚、4,5-去氢异补骨脂定、补骨脂查尔酮、异补骨脂色烯查尔酮、补骨脂二氢黄酮甲醚、补骨脂宁、补骨脂定、补骨脂甲素、补骨脂乙素、8-甲氧基补骨脂素、异补骨脂二氢黄酮、新补骨脂异黄酮、5-甲氧基补骨脂素、巴库查尔酮、Corylifol A 17种成分线性关系良好(r>0.99),平均加样回收率(n=6)为95.66%~101.38%,RSD为0.77%~3.04%;精密度、重复性,稳定性试验的RSD均小于2.57%,符合分析要求。含量测定显示,不同批次补骨脂中各成分含量差别较大。[结论]本实验建立的检测方法快速、准确、重复性好,可适用于补骨脂的质量控制研究。

基于HPLC和UHPLC-MS/MS方法探究植物生长调节剂对白术品质的影响

目的:通过比较白术内在成分含量的变化及检测农药残留,探究植物生长调节剂的使用对白术品质产生的影响。方法:通过田间试验分别喷施不同浓度多效唑(A组)、矮壮·甲哌鎓(B组),并设计空白对照组(C组),收集样品;建立HPLC方法,同时测定白术中白术内酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ及苍术酮的含量,比较A组、B组与C组的成分含量差异;建立UHPLC-MS/MS方法,同时检测白术中多效唑、矮壮素等8种植物生长调节剂的残留量,分析白术样品的残留情况。结果:HPLC测定白术内酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和苍术酮的含量,结果显示A组和B组的白术内酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ含量均降低,且部分样品含量降低差异有统计学意义(P<0.01),A组的苍术酮含量先升高后降低,当多效唑浓度最高时,样品A5的苍术酮含量最低,且与C组比较,差异有统计学意义(P<0.01);B组的苍术酮含量变化程度不一。UHPLC-MS/MS检测结果显示,样品共检测出3种植物生长调节剂,分别为矮壮素、多效唑和烯效唑。白术A组多效唑残留量在2.81~246.67μg/kg;白术B组中矮壮素残留量在1.36~16.13μg/kg。白术A组多效唑的残留量和B组中矮壮素的残留量显著高于C组,且随着浓度的增加,残留量呈增大趋势。结论:白术种植过程中使用植物生长调节剂不但降低白术内在质量,还会使药材出现一定程度的有害残留,降低白术药材的安全性、有效性,进而可能会影响其临床用药,因此建议科学监管植物生长调节剂在白术种植过程中的使用。

基于UHPLC-MS/MS、分子对接及细胞实验探讨健脾益气方对肝癌PD-L1和PD-1表达的影响

目的采用超高效液相色谱-串联质谱(UHPLC-MS/MS)、分子对接和体外细胞实验探讨健脾益气方对肝癌细胞的影响。方法制备健脾益气方甲醇水溶液并采用UHPLC-MS/MS法分析鉴定中药活性成分。利用Schrodinger软件对鉴定出的所有活性成分及信号通路核心靶点白介素6(IL-6)、糖蛋白130(gp130)、酪氨酸激酶1(JAK1)、酪氨酸激酶2(JAK2)、信号转导蛋白及转录激活子3(STAT3)、程序性细胞死亡蛋白-1(PD-1)和程序性细胞死亡配体1(PD-L1)分别进行分子对接;并用Pymol软件将各靶标蛋白结合能最低的活性成分对接模式进行可视化。采用健脾益气方含药血清干预人肝癌细胞株HepG2进行体外实验验证,将HepG2细胞分为空白组,模型组,健脾益气方低、中、高剂量组(5.25、10.5、21 g/kg),STAT3抑制组(C188-9,4μmol/L)和gp130抑制组(SC144,10μmol/L)。除空白组外,模型组加入IL-6(50 ng/mL),各给药组加入IL-6和相应药物进行干预。采用CCK-8法、Transwell培养小室法、Annexin V+PI双染色法分别检测各组细胞存活率、侵袭数和凋亡率,ELISA法检测各组细胞培养液中IL-6水平,Western blot法检测各组细胞中gp130、磷酸化JAK1(p-JAK1)、磷酸化JAK2(p-JAK2)、磷酸化STAT3(p-STAT3)、PD-1和PD-L1蛋白表达。结果UHPLC-MS/MS鉴定出健脾益气方113个活性成分。分子对接结果显示,健脾益气方中有多个活性成分与IL-6、gp130、JAK1、JAK2、STAT3、PD-1和PD-L1靶点蛋白均分别存在分子结合位点且有较低结合能,均小于-5.0 kcal/mol。体外细胞实验显示,与空白组比较,模型组细胞侵袭数升高(P<0.01),细胞凋亡率则降低(P<0.01);培养液中IL-6水平升高(P<0.01);gp130、p-JAK1、p-JAK2、p-STAT3、PD-1和PD-L1蛋白表达均升高(P<0.01)。与模型组比较,除低剂量健脾益气方含药血清对细胞侵袭数的抑制和对细胞凋亡率的影响无明显变化外(P>0.05),其它各药物干预组均可抑制模型细胞的增殖与侵袭能力,促进细胞凋亡(P<0.01);各药物干预组均可降低模型细胞培养液中IL-6水平(P<0.01);并降低细胞中gp130、p-JAK1、p-JAK2、p-STAT3、PD-1和PD-L1蛋白表达(P<0.01)。结论健脾益气方可通过多成分调控肝癌细胞IL-6/STAT3炎症信号通路及其介导的PD-L1和固有PD-1的表达,抑制肝癌细胞增殖侵袭,促进细胞凋亡。

UHPLC-MS/MS测定睫毛类化妆品中14种前列腺素类似物含量

建立超高效液相色谱-串联三重四极杆质谱(UHPLC-MS/MS)法测定睫毛类化妆品中苯甲酸拉坦内酯、比马前列素、氯前列醇等14种前列腺素类似物。样品以四氢呋喃为分散剂,经乙腈提取、饱和氯化钠溶液除杂,离心、取上清液过滤后,采用Poroshell 120 EC-C18柱(150 mm×3.0 mm×2.7μm)分离,以5 mmol/L甲酸铵(含质量分数0.1%甲酸)-乙腈为流动相,外标法定量。结果显示,14种前列腺素类似物在5~50 ng/mL线性关系良好,检出限(LOD)均在0.8μg/g内,定量限(LOQ)均在3μg/g以内。平均回收率为81.9%~119.7%,相对标准偏差(RSD)小于5%。该方法快速简便、灵敏准确,适用于睫毛类化妆品中14种前列腺素类似物的测定。

UHPLC-MS/MS法测定耕地周围地表水中5种除草剂含量

实验研究建立了超高压液相色谱-三重四级杆串联质谱法测定耕地周围地表水中2,4-二氯苯氧乙酸、灭草松、草铵膦、α-萘乙酸、马来酰肼除草剂含量的分析方法。随机采集耕地周围地表水样品,预处理后,取上述水样500 mL,调节酸度为中性,取HLB固相萃取柱,活化完毕后,设定程序,将上述水样以12 mL·min^(-1)的流量过柱,最后用16 mL甲醇洗脱,收集洗脱液;洗脱液于氮吹至近干,加甲醇1 mL定容,涡旋混匀,质谱分析采用多反应监测模式,定性、定量检测。2,4-二氯苯氧乙酸、灭草松、草铵膦、α-萘乙酸、马来酰肼质量浓度在0.004~4.0μg·mL^(-1)范围内呈良好的线性关系,检测限分别为0.21μg·L^(-1)、0.23μg·L^(-1)、0.14μg·L^(-1)、0.25μg·L^(-1)、0.15μg·L^(-1);三水平回收率范围在85.4%~96.6%;2,4-二氯苯氧乙酸、灭草松、草铵膦、α-萘乙酸、马来酰肼重复性RSD分别为3.4%,4.0%,3.2%,2.9%,3.6%,方法重复性良好。实验结果表明,此方法具有快速、准确等特点,方法可以用于耕地周围地表水中2,4-二氯苯氧乙酸、灭草松、草铵膦、α-萘乙酸、马来酰肼等除草剂的监测。

UHPLC-MS/MS法测定酱油中的焦谷氨酸

建立了测定酱油中焦谷氨酸的超高效液相色谱-串联质谱(UHPLC-MS/MS)分析方法。采用水直接提取样品中的焦谷氨酸,并适当稀释,将供试液用安捷伦InfinityLab Poroshell 120 Aq-C18(Φ4.6 mm×50 mm, 2.7μm)进行色谱分离,使用0.1%甲酸水溶液-0.1%甲酸乙腈溶液流动相体系梯度洗脱。电喷雾离子源正离子(ESI+)模式,多反应监测(MRM)模式进行测定。实验结果显示,焦谷氨酸的线性范围为0.025~2.5μg/mL,线性关系良好,相关系数(R^(2))为0.9992,检出限(LOD)和定量限(LOQ)为0.45 mg/kg和1.5 mg/kg。加标样品的回收率在80.7%~101.1%之间,精密度(RSD)(n=6)为2.4%~8.3%。该方法简单高效,灵敏准确,能应用于酱油中焦谷氨酸含量的定量检测。

Analysis of Fourteen Mycotoxins in Chili Peppers in Guizhou Province Combining DES-DLLME and UHPLC-MS/MS and Their Risk Evaluation

Mycotoxins exist widely in food and have a serious impact on human health.At present,most detection methods of mycotoxins are costly and time-consuming.Most of these methods are aimed at detecting a single type of mycotoxin,and the efficiency is not high.On this basis,in this study,QuEChERS-deep eutectic solvent liquid-liquid microextraction was applied to extract and enrich 14 mycotoxins in chili peppers from the concept of green chemistry.A simple,time-consuming and environment-friendly multi-flux pretreatment method was established,and 100 chili pepper samples were randomly sampled from farmers'markets and supermarkets in major urban areas of Guizhou Province for detection,and risk assessment was carried out according to the detection results.

UHPLC-MS/MS法测定面膜化妆品中甘草、人参和黄芩类功效成分

建立了超高效液相色谱-三重四极杆质谱法(UHPLC-MS/MS)测定面膜化妆品中甘草功效成分(甘草苷、甘草酸)、人参功效成分(人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re)和黄芩功效成分(黄芩苷)的方法,并用该方法对市售20批面膜样品进行风险监测。样品采用0.1%甲酸甲醇超声提取法,以0.1%甲酸水溶液-乙腈溶液为流动相,梯度洗脱,ACQUITY UPLC HSS T3(2.1 mm×100 mm,1.8μm)色谱柱分离,以UHPLC-MS/MS负离子模式检测。同时对样品前处理条件及色谱-质谱条件进行优化,并对方法学进行验证。结果表明:甘草苷、黄芩苷在0.25~100 ng/mL及人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re和甘草酸在0.50~200 ng/mL质量浓度范围内呈良好线性关系,相关系数大于0.998;检出限为0.41~6.4μg/kg(S/N=3);基质中加标回收率为95.9%~109.1%,相对标准偏差小于4.9%(n=6)。该方法适用于面膜化妆品中甘草、人参和黄芩功效成分的测定。

UHPLC-MS/MS法同时测定调味品中5种脂溶性色素和5种罂粟壳生物碱的残留量

建立了一种经QuEChERS EMR(Enhanced Matrix Removal)-Lipid净化结合超高效液相色谱-串联质谱(UHPLC-MS/MS)同时测定调味品中苏丹红Ⅰ~Ⅳ、对位红5种脂溶性色素和罂粟碱、吗啡、可待因、蒂巴因、那可丁5种罂粟壳生物碱残留量的高通量分析方法。罂粟碱、蒂巴因、那可丁和5种脂溶性色素在1~100 ng/mL范围内线性关系良好,相关系数均大于0.99,定量限(LOQ)为1.0μg/kg;吗啡、可待因在8~100 ng/mL范围内线性关系良好,相关系数均大于0.99,定量限(LOQ)为5.0μg/kg;各化合物平均回收率为81.2%~104.5%,相对标准偏差为2.9%~11.4%(n=6)。该方法简便、灵敏、稳定、通量高、成本低,适用于香辛料调味油、火锅底料及蘸料、麻辣烫底料等多种调味品的检测质控需求。

UHPLC-MS/MS测定人血浆中的阿普斯特浓度及生物等效性研究

目的采用超高效液相色谱-串联质谱(UHPLC-MS/MS)法,建立快速、简单、灵敏的测定人血浆中阿普斯特浓度的方法并用于阿普斯特人体生物等效性试验研究。方法采用蛋白沉淀法处理,以阿普斯特-d5作为内标,色谱柱为Phenomenex Kinetex C_(18)柱(2.1 mm×50 mm,2.6μm),流动相为0.1%甲酸水-0.1%甲酸乙腈,流速0.45 mL·min^(-1)梯度洗脱,采用电喷雾(ESI)离子源以正离子方式进行MRM检测,用时3 min。结果阿普斯特在2~600 ng·mL^(-1)(r^(2)=0.9977)范围内线性关系良好,准确度和精密度均小于15%。空腹和餐后条件下阿普斯特片受试制剂AUC_(0~t)、AUC_(0~∞)和C_(max)的90%CI为参比制剂相应参数的80.00%~125.00%范围内。结论受试制剂与参比制剂具有生物等效性。

UHPLC-MS/MS测定化妆品中67种植物提取物标识成分

建立了超高效液相色谱-串联质谱(UHPLC-MS/MS)测定化妆品中67种植物提取物标识成分的方法。化妆品样品经甲醇(含1%甲酸)超声提取,样液在0.1%甲酸溶液-乙腈流动相体系下经Agilent RRHD Eclipse Plus Zorbax C18(3.0 mm×100 mm,1.8μm)色谱柱梯度洗脱分离。采用电喷雾正、负离子模式分别对67种成分进行定性定量分析,其中正离子采用多反应监测(MRM)方式,负离子采用动态多反应监测(DMRM)方式,以基质匹配外标法定量。以膏霜、乳液基质为代表,67种成分在各自质量浓度范围内线性关系良好,相关系数(r^(2))均大于0.99;检出限为0.0026~1.7μg/g,定量下限为0.0080~5.0μg/g;3个不同加标水平下,膏霜、乳液基质的平均回收率分别为85.6%~117%和82.7%~116%,相对标准偏差(RSD,n=6)分别为1.0%~12%和0.90%~12%。该法简单快速,灵敏度高,适用于化妆品中67种植物提取物标识成分的定性鉴定和含量测定。

UHPLC-MS/MS法同时测定苏桔口服液中4种成分的含量

目的建立超高效液相色谱-三重四级杆串联质谱(UHPLC-MS/MS)同时快速测定苏桔口服液中甘草苷、迷迭香酸、桔梗皂苷D、甘草酸4种成分质量浓度的分析方法,以期更全面控制苏桔口服液的质量。方法样品采用Agilent Extend C18(2.1 mm×100 mm,1.7μm)色谱柱分离,柱温为35℃,以0.1%甲酸水(A)-乙腈(B)为流动相进行梯度洗脱,流速为0.3 mL/min;质谱采用电喷雾离子源,多重反应监测模式下负离子同时测定,检测离子对为甘草苷417.1/255.1(135)、迷迭香酸359.0/197.1(160.9)、桔梗皂苷D 1223.6/681.0、甘草酸821.4/350.9。结果4种成分在一定质量浓度范围内呈良好线性关系(r>0.999),平均加样回收率为98.80%~100.84%,RSD为1.82%~2.53%;10批苏桔口服液样品中,甘草苷、迷迭香酸、桔梗皂苷D、甘草酸的质量浓度分别为0.1408~0.1592、0.0824~0.1421、0.0359~0.0698、0.6659~0.7238 mg/mL。结论建立的多成分质量浓度检测方法快速、准确、重现性高,可为有效评价苏桔口服液的质量提供依据。

UHPLC-MS/MS法同时测定蒲地蓝消炎片中10种成分

目的建立超高效液相色谱-串联质谱（UHPLC-MS/MS）法同时测定蒲地蓝消炎片（蒲公英、黄芩、苦地丁和板蓝根）中腺苷、表告依春、咖啡酸、绿原酸、阿魏酸、紫堇灵、乙酰紫堇灵、芹菜素、黄芩素和汉黄芩素的含有量。方法分析采用Eclipse Plus C18RRHD色谱柱（1.8μm,2.1 mm×50 mm）;流动相为乙腈-0.2%乙酸水溶液,梯度洗脱;体积流量为0.3 m L/min。结果 10种成分分别在0.000 050 0～1.00、0.010 0～5.00、0.015 0～10.0、0.030 0～20.0、0.100～100、0.000 300～10.0、0.003 00～10.0、0.000 600～20.0、0.200～20.0、0.000 500～5.00 mg/L范围内线性关系良好,平均加样回收率在91.4%～105.0%之间,RSD均小于2.0%。结论该方法快速、简便、灵敏,适用于蒲地蓝消炎片的质量控制。

分散固相萃取-UHPLC-MS/MS法测定水中5种苯脲类除草剂

建立分散固相萃取-超高液相色谱串联质谱（UHPLC-MS/MS）同时测定环境水样中5种苯脲类除草剂（敌草隆、利谷隆、灭草隆、异丙隆、绿麦隆）残留的分析方法。考察了吸附剂的种类与数量、水样pH、吸附剂的种类和体积等条件对除草剂回收率的影响。在最佳实验条件下,5种苯脲类除草剂在0.01~5.0μg/L范围内呈良好的线性关系（0.999 3~0.9999）,方法检出限为2.04~3.12 ng/L。对环境水样的加标回收率分别为78.2%~108.3%,相对标准偏差RSD分别为6.8%~11.2%。本方法操作简便快速、稳定性好、灵敏度高,能够满足环境水体中苯脲类除草剂残留的分析要求。

漂浮固化分散液液微萃取-UHPLC-MS/MS法测定水产品中丁香酚的残留量

建立了漂浮固化分散液液微萃取(DLLME-SFO)前处理技术,结合超高效液相色谱-串联质谱(UHPLC-MS/MS)法测定水产品中丁香酚的残留量。通过考察萃取剂种类、萃取剂体积、分散剂种类、分散剂体积、氯化钠质量分数、萃取时间、离心温度对萃取效率的影响,确定了最佳萃取条件,即以30μL1-十一醇为萃取剂,800μL乙醇为分散剂,氯化钠质量分数为6%,于-3℃下以10 000r/min离心5min,将液体部分移除,待固体融化后取20μL供UHPLC-MS/MS分析。结果表明,在5~500μg/kg范围内,丁香酚的线性关系良好,相关系数为0.999 6,回收率在88.9%~103.4%之间,方法检出限和定量限分别为1.47μg/kg和4.91μg/kg,日内相对标准偏差(RSD)均低于7.5%(n=6),日间相对标准偏差(RSD)均低于9.8%(n=3)。该方法操作简单,溶剂用量少,快速、安全、重现性好,适用于水产品中丁香酚残留的分析。

参芪扶正注射液UHPLC-MS特征图谱的研究

目的建立参芪扶正注射液UHPLC-MS特征图谱,以更全面控制产品的质量。方法运用UHPLCMS技术,采集总离子流图,确定共有特征峰,用精确质量数提取得到提取离子流图,以黄芪甲苷峰为参照峰,计算各特征峰的相对保留时间,建立特征图谱。结果确定了18个共有特征峰,建立的特征图谱方法精密度、稳定性、重复性等良好。结论建立的特征图谱能更全面地评价参芪扶正注射液的化学成分,适用于参芪扶正注射液的快速鉴别,在实际工作中容易推广。

参芪扶正注射液中党参成分UHPLC-MS分析

目的:利用UHPLC-MS法研究参芪扶正注射液中的党参成分。方法:采用UHPLC-MS法建立党参特征成分测定方法,并进行方法学验证。结果:建立的方法线性、定量限、精密度、重复性、加样回收率良好,可用于党参指标成分的含量测定。结论:参芪扶正注射液中党参的6个指标成分含量普遍偏低,批间存在差异,差异主要与不同批次药材相关。