基于UHPLC-Q-Exactive Orbitrap-MS技术分析土茯苓苯丙素类化学成分及其对类风湿关节炎特征基因的干预

通过超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱联用技术(UHPLC-Q Exactive Orbitrap-MS)鉴定土茯苓苯丙素类化合物,筛选与特定免疫细胞浸润相关的类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)诊断标志物及苯丙素类化合物。以正离子和负离子模式采集数据分析土茯苓苯丙素类化学成分。通过GEO(gene expression omnibus)数据库获取RA基因芯片,基于“一致性聚类”进行共识聚类且区分RA不同的分子亚型。通过R软件绘制特征基因受试者工作特征曲线(receiveroperating characteristic curve,ROC),并计算ROC曲线下的面积。通过单样本基因集富集分析特征基因与免疫细胞的相关性。基于SYBYL2.1.1分子对接分析苯丙素类化合物与特征基因的结合情况。对RA差异表达基因进行过滤,获得5个特征基因,其中RAC2、ITGB7、CD52、ITGB2基因的ROC曲线面积通过验证,4特征基因能影响8种免疫细胞(活化的CD4+T细胞,活化的CD8+T细胞,中央记忆CD4+T细胞,效应记忆CD4+T细胞,骨髓源性抑制细胞,单核细胞,调节性T细胞,效应记忆CD8+T细胞),且呈正相关(P<0.05,P<0.01,P<0.001)。土茯苓苯丙素类化合物26个,能共同干预4个免疫特征基因。基于免疫细胞浸润的模型可用于预测RA的发病机制,土茯苓苯丙素类化合物对免疫特征基因具有干预作用,研究结果为RA免疫调节治疗和早期诊断提供科学依据。

基于UHPLC-Q-Exactive Orbitrap-MS技术分析桂附地黄丸的化学成分及入血成分

目的采用超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱联用技术(UHPLC-QExactive Orbitrap-MS)对该复方的体外化学成分谱及入血成分进行研究。方法利用ACQUITY UPLC BEH C_(18)色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.7μm),以0.1%甲酸水溶液(A)-0.1%甲酸乙腈(B)为流动相进行梯度洗脱(0~1 min,1%B;1~10 min,1%~99%B;10~11.5 min,99%B;11.5~11.6 min,99%~1%B;11.6~13.5 min,1%B),流速为0.4 mL·min^(-1),在电喷雾离子源(ESI)下,以正、负离子模式采集数据。运用Xcalibur software软件,根据化合物保留时间、准分子离子峰和二级质谱信息,结合对照品及文献报道,对该复方的化学成分及入血成分进行解析。结果在桂附地黄丸体外样品中共鉴定出85个化学成分,包括生物碱类11个、环烯醚萜苷类14个、苯乙醇苷类9个、单萜苷类11个、三萜类14个、酚酸类9个、有机酸/醛6个、糖苷类5个、其他类6个,并对化学成分进行药材来源归属;共表征了大鼠血浆中的化合物22个,包括14个原形药物和8个代谢物。结论所建立的方法能高效、灵敏地分析桂附地黄丸中的体外化学成分和入血成分,初步阐明了该复方的体外化学成分轮廓及血中移行成分,为其体内的药效物质基础和作用机制研究奠定基础。

基于UHPLC-Q-Exactive Orbitrap HRMS技术结合化学计量学方法的不同干燥处理杜仲叶成分分析

采用基于液质联用的非靶向代谢组学技术结合化学计量学数据自动解析软件AntDAS-LCHRMS分析了4种不同干燥处理(冻干、热泵烘干、电热烘干、晒干)杜仲叶样本中的化合物。杜仲叶样本数据由超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱(UHPLC-Q-Exactive Orbitrap HRMS)分别在正、负离子模式下进行采集,经AntDAS-LCHRMS软件解析,共鉴定出71种差异性化合物,经标准品验证确定40种化合物,包括环烯醚萜类、有机酸类、黄酮类、氨基酸类、核苷类、维生素类等9类物质。其中,正、负离子模式下均可识别并验证的化合物有车叶草苷、绿原酸、芦丁、异槲皮苷、车叶草苷酸、京尼平苷等25种化合物。层次聚类分析(HCA)及主成分分析(PCA)结果均显示,相同处理的杜仲叶样本各自聚成一类,不同处理的杜仲叶样本可明显区分。热图分析进一步揭示了不同干燥处理杜仲叶样本中差异性化合物的含量变化。晒干处理样本中苯丙氨酸及色氨酸等氨基酸类物质的水平较高;冻干及热泵烘干处理样本中有机酸类、环烯醚萜类、糖类等含量较高;电热烘干样本中核苷类、黄酮类物质的含量较高;黄酮类物质在冻干、热泵烘干及晒干样本中差异较小。研究结果为不同干燥处理杜仲叶的成分分析、品质评价及其开发应用提供了科学依据,也可为其他复杂药用植物体系的化学成分分析提供参考。

基于UHPLC-Q-Exactive Orbitrap MS技术的静宁方入脑、入肠及粪便成分分析

目的基于UHPLC-Q-Exactive Orbitrap MS技术对静宁方给药后的大鼠入脑、入肠及粪便中的成分进行分析和鉴定。方法采用UHPLC-Q-Exactive Orbitrap MS,以0.1%甲酸-乙腈(A)和0.1%甲酸-水(B)为流动相进行梯度洗脱,流速0.2 mL·min^(-1),进样量5μL,加热电喷雾离子化源(HESI),正、负离子扫描。结合对照品比对、文献报道、数据库比对等方式对成分进行分析鉴定。结果共鉴定出42种成分,其中脑、回肠、结肠、粪便中分别鉴定出9、33、20、27种成分。结论本实验初步阐明静宁方入脑、入肠及粪便成分,为阐明其药效物质基础及作用机制提供了依据。

基于UPLC-Q-Exactive Orbitrap-MS的经典名方温胆汤化学成分分析

[目的]采用超高效液相色谱-四极杆静电场轨道阱高分辨质谱法(UPLC-Q-Exactive Orbitrap-MS)对温胆汤的化学成分进行快速识别和鉴定。[方法]采用Waters Acquity BEH C18(2.1×100 mm,1.7μm),以0.1%甲酸水溶液(A)-乙腈(B)作为流动相进行梯度洗脱,流速为0.3 mL/min、柱温30℃;采用加热电喷雾离子源(HESI),正、负离子模式同时检测,扫描模式为Full MS/dd-MS2,扫描范围m/z 100~1500。[结果]通过与对照品比对、精确相对分子质量、多级质谱碎片信息并结合文献报道、质谱数据库信息等对化合物进行鉴别。从温胆汤中共鉴别了121个成分,包括70个黄酮类成分,18个香豆素类成分,9个皂苷类成分,10个生物碱成分,3个苯丙素类成分及其他类化合物11个。其中15个成分通过与对照品比对后确认。[结论]利用UPLC-Q-Exactive Orbitrap-MS技术较为系统地阐明了温胆汤的物质基础,可为该复方药效物质基础的深入研究和质量标准的合理制定奠定基础。

基于UHPLC-Q-Exactive Orbitrap MS技术的退黄合剂化学成分快速表征

目的建立一种高效快速的超高效液相色谱串联四极杆轨道阱质谱(UHPLC-Q-Exactive Orbitrap MS)法,对退黄合剂的化学成分进行表征。方法采用Waters ACQUITY UPLC BEH C_(18)色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.7μm),以流动相0.1%甲酸水溶液(A)-乙腈(B)进行梯度洗脱,流速为0.3 mL/min,进样量为2μL,柱温为40°C。质谱采用电喷雾离子源(ESI)负离子模式,质谱扫描范围为m/z 100~1500。结果通过对照品、数据库及参考文献共鉴定出退黄合剂中77种化学成分,其中包括黄酮类30种、多酚类18种、有机酸10种、萜类9种、蒽醌类9种、其他类1种。结论所建立的方法可高效、快速地鉴定退黄合剂的化学成分。

基于UPLC-Q Exactive Orbitrap-MS的不同产地半枝莲药材差异分析

目的采用超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱(UPLC-Q Exactive Orbitrap-MS)技术,结合多元统计分析半枝莲药材不同产地的差异代谢物,为分析影响药材质量的指标控制提供依据。方法采集不同产地半枝莲质谱数据,以热图Pearson聚类、主成分分析(Principal components analysis,PCA)、偏最小二乘法判别分析(Partial least squares discriminant analysis,PLS-DA)等多元统计分析手段,确定不同产地半枝莲药材的差异成分。结果通过数据库比对共鉴别39个化合物,聚类热图结果表明21批样品可以分为5类,且在31个化合物上存在明显差异,PCA结果分析得到3个主成分可以实现不同产地半枝莲的区分,累积解释率为93.68%,其中野黄芩苷对主成分1影响较大,黄芩苷、芹菜素对主成分2影响较大。PLS-DA可以实现5个产地样本的分离,通过特征值大于1,得到关键差异化合物与PCA结果一致。结论所建立的方法能用于不同产地半枝莲药材差异分析及质量评价。

基于UPLC-Q-Exactive Orbitrap-MS的栀子厚朴汤毒性的代谢组学研究

基于超高液相色谱-四极杆-静电场轨道阱技术(UPLC-Q-Exactive Orbitrap-MS)结合代谢组学方法研究栀子厚朴汤的毒性机制。评价栀子厚朴汤对大鼠的肝毒性。对采集的两组大鼠肝组织样本进行检测,用主成分分析(PCA)结合正交偏最小二乘判别分析(OPLS-DA)寻找差异代谢物及代谢通路。结果鉴别出30种差异代谢物,涉及9条主要的代谢通路。本研究为栀子厚朴汤的毒性机制研究提供参考。

基于UPLC-Q-Exactive Orbitrap-MS方法分析清热祛湿凉茶化学成分

目的采用超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱(UPLC-Q-Exactive Orbitrap-MS),对清热祛湿凉茶的化学成分进行快速识别和鉴定。方法采用Luna C18色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.8μm),0.1%甲酸水溶液-乙腈溶液为流动相,梯度洗脱,流速为0.3 mL·min^(-1),柱温为35℃,采用正负离子检测模式。结果共鉴定出清热祛湿凉茶中33种化学成分。包括糖类成分2个,有机酸类成分5个,香豆素类成分1个,黄酮类成分16个,苯丙素类成分4个和三萜类成分5个。结论本研究首次采用UPLC-Q-Exactive Orbitrap-MS技术对清热祛湿凉茶的主要成分进行鉴定,可为清热祛湿凉茶的药效成分研究提供科学依据。

SCX-SPE结合UHPLC-Q-Exactive Orbitrap MS分析草乌中的四类二萜生物碱

目的对草乌中的二萜生物碱进行表征分析。方法以强酸性阳离子交换树脂固相萃取(SCX-SPE)分离纯化草乌中的二萜生物碱,并结合超高效液相色谱串联四极杆静电场轨道阱质谱(UHPLC-Q-Exactive Orbitrap MS)进行结构鉴定。结果结合精确分子质量、多级质谱裂解规律、对照品对比、Clog P值及文献报道,共从草乌中鉴定了99个二萜生物碱类成分,包括双酯型二萜生物碱(DDA)27个,单酯型二萜生物碱(MDA)29个,酰胺型二萜生物碱(ADA)40个,多酯型二萜生物碱(PDA)2个,以及长链型二萜生物碱(LDA)1个。结论本文所建立的SCX-SPE结合UHPLC-Q-Exactive Orbitrap MS方法能快速地鉴定草乌中的二萜生物碱类成分,可为草乌的药效物质基础及质量控制研究提供科学依据。

基于UPLC-Q-Exactive Orbitrap-MS分析藏药诃子与毛诃子化学成分

采用超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱联用技术(UPLC-Q-Exactive Orbitrap-MS),在电喷雾负离子模式下对使君子科(Combretaceae)榄仁树属(Terminalia Linn.)成分相近的藏药诃子与毛诃子的化学成分进行快速识别和鉴定。采用Acquity UPLC HSS T3色谱柱(2.1 m×100 mm×1.8μm),以含0.1%乙酸的甲醇-0.1%乙酸水溶液为流动相进行梯度洗脱。通过高分辨质谱给出的分子离子峰和碎片离子数据,结合相关文献和对照品,从诃子中鉴定出94个成分,包括28个特有成分,从毛诃子中鉴定出96个成分,包括30个特有成分,二者共有成分66个,其中12个鞣质类成分为首次从榄仁树属内发现。本研究可为诃子与毛诃子的快速鉴定,质量控制及阐明其药效基础提供参考。

基于UPLC-Q-Exactive Orbitrap-MS的半夏厚朴汤化学成分分析

采用超高液相色谱-四极杆-静电场轨道阱联用技术(UPLC-Q-Exactive Orbitrap-MS)对半夏厚朴汤化学成分进行分析。采用XBridge BEH C_(18)色谱柱(100 mm×2.1 mm,2.5μm),以0.1%甲酸水溶液-甲醇为流动相进行梯度洗脱,流速为0.3 mL/min;质谱采用加热电喷雾离子源(HESI),正、负离子扫描模式。结果从半夏厚朴汤中共鉴定了90个化学成分,包括33个苯丙素类,19个氨基酸类,16个有机酸类,12个黄酮类等。本研究为半夏厚朴汤药效物质深入研究及质量控制奠定基础。

UHPLC-Q-Exactive Orbitrap HRMS法同时测定北沙参中12个成分的含量

目的:建立UHPLC-Q-Exactive Orbitrap HRMS法同时测定北沙参中12个成分的含量。方法:采用ACQUITY UPLC HSS T_(3)(100 mm×2.1 mm,1.8μm)色谱柱;流动相为乙腈-0.1%甲酸溶液,梯度洗脱;流速为0.4 mL/min;柱温为40℃;质谱采用电喷雾离子源,一级正负离子全扫描模式。对北沙参中补骨脂素、佛手柑内酯、花椒毒素、欧前胡素、异欧前胡素、绿原酸、新绿原酸、隐绿原酸、异绿原酸C、咖啡酸、水杨酸和阿魏酸进行含量测定。结果:上述12个成分在各自的浓度范围内线性关系良好;精密度、重复性及稳定性试验RSD均良好,平均加样回收率为86.89%~114.13%,RSD为1.02%~2.63%。16批样品中成分的含量差异较大。结论:该方法可用于快速、准确测定北沙参中12个成分的含量,可为北沙参质量评价提供参考。

基于UPLC-Q-Exactive Orbitrap-MS分析黄精炆制前后化学成分差异

目的:分析黄精炆制前后化学成分差异。方法:采用UPLC-Q-Exactive Orbitrap-MS联用技术对黄精与炆黄精化学成分进行分析与鉴别,运用主成分分析(PCA)和正交偏最小二乘判别分析(OPLS-DA)对黄精与炆黄精的液质数据进行分析。结果:从黄精中鉴定出50个成分,从炆黄精中鉴别出36个成分,包括糖类、皂苷类、黄酮类、生物碱类及其他类成分;PCA及OPLS-DA表明黄精与炆黄精化学成分存在明显差异,共筛选出包括糖类、皂苷类、黄酮类等35个差异性成分。结论:黄精炆制后化学成分发生明显变化,辨识出的35个差异成分为黄精炆制前后功效变化物质基础研究提供了依据。

基于UHPLC-Q-Exactive/MS及多元统计分析识别栀子果实不同部位差异化学成分

目的采用超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱技术(UHPLC-Q-Exactive/MS),建立栀子果皮、果仁中化学成分的快速识别方法,鉴别其特征性差异化合物。方法选择电喷雾离子源,负离子模式下采集数据,通过保留时间、二级碎片及文献参考等进行分析,获得栀子果实不同部位的特征性差异成分。结果筛选鉴定出栀子果实皮、果仁中具有统计学差异的化合物22种,其中环烯醚萜类化合物9种,有机酸类6种,西红花苷类3种,黄酮类2种,单萜苷类2种。结论通过液质及多元统计分析识别的具有统计学差异的化合物中,鸡矢藤次苷甲酯、京尼平龙胆二糖苷、栀子苷、Jasminodiol、西红花苷Ⅰ在栀子果仁中的相对含量更高,该结果为栀子不同部位入药物质基础的研究提供了一定的参考。

UHPLC-Q-Exactive Orbitrap HRMS法同时测定大黄-桃仁药对中16种成分及其溶出规律探究

目的建立UHPLC-Q-Exactive Orbitrap HRMS法同时测定大黄-桃仁药对中16种成分的含量,并探讨不同配比药对中其溶出规律。方法分析采用BEH C_(18)色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.7μm);流动相0.1%甲酸-乙腈,梯度洗脱。质谱采用电喷雾离子源,一级负离子全扫模式。测定单煎液、大黄-桃仁药对不同配比合煎液中,以及单药组、药对组温浸不同时间16种成分的含量。结果16种成分在各自范围内线性关系良好(r≥0.9994),加样回收率95.39%~104.90%,RSD≤4.14%,单煎液和不同配比大黄桃仁药对煎液中16种成分的溶出量差异明显。大黄总蒽醌苷类和桃仁氰苷类成分的含量随着大黄占比减少具有先增加后降低的趋势。在温浸试验中,除没食子酸、番泻苷B、番泻苷A、大黄素外,其他12种成分含量在单药组与药对组的组间差异显著。结论该方法可用于快速、准确测定大黄-桃仁药对中16种成分的含量。大黄-桃仁药对中的糖苷及相对应苷元含量受到大黄占比的影响。

UHPLC-Q-Exactive Orbitrap MS法分析桃红四物汤物质基准中化学成分

目的 建立UHPLC-Q-Exactive Orbitrap MS法分析桃红四物汤物质基准中化学成分。方法 该药物水提液的分析采用BEH C_(18)色谱柱(150 mm×2.1 mm,1.7μm);流动相水-乙腈,梯度洗脱;体积流量0.3 mL/min;柱温30℃;正负离子模式扫描。结果 共鉴别出48种成分,包括10种有机酸、12种萜类、3种鞣质、4种黄酮、2种苯乙醇苷、17种其他类。结论 该方法稳定可靠,可为桃红四物汤相关制剂的研发及质量控制体系的建立提供依据。

基于UPLC-Q-Exactive Orbitrap-MS的栀子甘草豉汤化学成分分析

利用超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱质谱(UPLC-Q-Exactive Orbitrap-MS)技术对栀子甘草豉汤的化学成分进行分析与鉴定。色谱采用Waters Acquity UPLC HSS T3色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.8μm),以0.1%甲酸水溶液-乙腈为流动相进行梯度洗脱,流速0.3 mL/min;质谱采用加热电喷雾离子源(HESI),正、负离子扫描模式。结果从栀子甘草豉汤中共鉴定了150个化学成分,包括55个黄酮类,30个三萜类,21个环烯醚萜类,20个有机酸类,12个单萜类,6个藏红花素类和6个其他类,为该方药效物质深入研究及质量控制奠定基础。

基于UHPLC-Q-Exactive Orbitrap MS技术分析经典名方芍药甘草汤的化学成分

目的基于超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱联用(UHPLC-Q-Exactive Orbitrap MS)技术对经典名方芍药甘草汤的化学成分进行定性分析。方法采用Thermo Scientific Hypersil GOLD C18色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.7μm),以乙腈(A)-0.1%甲酸水溶液(B)为流动相梯度洗脱,流速为0.3 mL·min^(-1),柱温30℃。HESI-Ⅱ源正、负离子2种模式采集芍药甘草汤的一级、二级质谱数据。结果根据高分辨质谱提供的精确分子量和碎片离子信息,结合标准品比对、软件预测分析和相关文献报道对芍药甘草汤的化学成分进行分析。正、负离子模式下共鉴定出129个化合物,包括82个黄酮类化合物,20个萜类化合物,10个酚类化合物,7个香豆素类化合物和10个其他类化学成分。结论利用UHPLC-Q-Exactive Orbitrap MS技术分析鉴定芍药甘草汤中的化学成分,并初步归纳其各类主要化学成分的质谱裂解特点,可为芍药甘草汤的质量控制以及药效物质基础的深入研究提供实验依据。

养阴清肺口服液化学成分的 UPLC-Q-Exactive Orbitrap-MS分析

运用超高效液相色谱-四级杆-静电场轨道阱联用技术(UPLC-Q-Exactive Orbitrap-MS)对养阴清肺口服液的化学成分进行分析和鉴定。采用ACQUITY UPLC BEH C_(18)色谱柱(150 mm×2.1 mm,1.7μm)色谱柱,以0.1%甲酸-乙腈为流动相进行梯度洗脱,流速0.25 mL/min。质谱使用电喷雾离子源(ESI),负离子模式。结果从养阴清肺口服液中初步鉴定出60个化学成分。该研究首次对养阴清肺口服液化学成分进行较为全面的分析,为其质量控制和药效研究提供了物质研究基础。