UM171体外扩增脐血造血干细胞的机制

背景:研究表明UM171可以在体外扩增造血干细胞,但作用机制尚不清楚。目的:通过高通量对接(HTDocking)筛选技术研究UM171作用的靶点,并概述其潜在的作用机制。方法:利用StemCellCKB在线计算平台,找出UM171可能的作用靶点。通过验证实验排除阴性靶点,利用表面等离子体共振(SPR)分析确定UM171和转化生长因子βRⅠ之间的相互作用。Western blot法检测UM171作用于转化生长因子β信号通路的几种重要蛋白质表达变化。结果与结论:(1)根据StemCellCKB计算得分,找出了UM171可能的作用靶点有转化生长因子βRⅠ等;(2)表面等离子体共振分析得出KD_(50)值为62.5μmol/L,说明UM171和转化生长因子βRⅠ有较强的结合能力;(3)转化生长因子β信号通路中转化生长因子βRⅠ、Smad3、p-Smad3、Smad4等主要蛋白质的表达水平显著提高;(4)结果提示UM171通过作用于转化生长因子β信号通路扩增脐血造血干细胞。

UM171+SR1结合细胞分群体外高效扩增造血干细胞的探究

目的:探究UM171+SR1结合细胞分群体外高效扩增造血干细胞,获取可稳定体外长期扩增造血干细胞的方法。方法:将正常脐带血来源的造血干细胞分为4组,运用不同体系进行培养。对照组:StemSpanTMSFEM Ⅱ培养基+SCF+TPO+Flt3-ligand+IL-6,组1:StemSpanTMSFEM Ⅱ培养基+SCF+TPO+Flt3-ligand+IL-6+UM171,组2:StemSpanTMSFEM Ⅱ培养基+SCF+TPO+Flt3-ligand+IL-6+SR1,组3:StemSpanTM SFEM Ⅱ培养基+SCF+TPO+Flt3-ligand+IL-6+UM171+SR1。观察在不同细胞因子组合及结合后期流式细胞术分群培养对长期维持CD34+CD133+造血干细胞的增殖能力和干性等方面的影响。结果:在培养5天后,组3的CD34+CD133+造血干细胞数量(14.050±2.049)×106及CD34+CD133+百分比(66.13±4.603)%高于其他3组,CFU检测显示组3集落数目为(88.00±4.000),高于组1(64.67±3.215)及组2(51.33±6.506),均为P<0.05。后期细胞分群培养结果H+H组的细胞增值数目(38.44±0.4561)×106与CD34+CD133+阳性率(51.37±2.859)%明显高于其余实验组(P<0.05)。结论:造血干细胞的体外扩增培养过程中,在同时使用UM171和SR1的过程中结合细胞分群,且CD34+CD133high细胞群在细胞增殖及干性维持中发挥一定作用,可为造血干细胞的体外高效扩增培养提供可行的思路。

SR-1/UM171在beta-地中海贫血来源的造血干细胞长期培养中对于细胞增殖和干性维持的作用研究

目的:探索一次性制备基因修饰自体造血干细胞产品的可能性.方法:将β-地中海贫血患者来源的造血干细胞分为五组, Con组: X-VIVO 20完全培养基;组1: SR-1 + X-VIVO 20完全培养基;组2: UM171 +X-VIVO 20完全培养基;组3: SR-1 +UM171 + X-VIVO 20完全培养基,组4为分选后冻存的CD34+细胞.观察不同的细胞因子或组合对长期培养中CD34+细胞增殖能力、干性维持等的变化.结果:在84小时培养时,组3的CD34+细胞百分比最高,达(89.8±4.8)%,细胞数目为(4.13±0.61)×10^6, CFU检测示其集落形成能力(177.7±5.5)与组4 (178.3±9.5)无统计学差异,小鼠植入试验表明组3和组4在3个月和6个月时,植入能力无统计学差异.超过84小时,无论采用何种方法培养CD34+细胞,其CD34+百分比及集落形成能力均逐渐下降.结论: SR-1、 UM171、 UM171+SR1等细胞因子或组合,均能在造血干细胞增殖的同时,维持干性. 84小时培养, UM171+SR1对于造血干细胞的干性维持效果最佳,也能较好地促进增殖,适合用于基因治疗的细胞培养.