siRNA对SGC7901/VCR细胞mdr1基因沉默效果的影响因素分析

目的分析siRNA沉默人胃癌SGC7901/VCR细胞mdr1基因效果的相关因素。方法设计并体外转录合成4条靶向mdr1的siRNA(mdr1si326、mdr1si1513、mdr1si2631和mdr1si3071),转染SGC7901/VCR细胞,用RTPCR和免疫印迹检测mdr1mRNA和Pgp的表达、流式细胞仪检测细胞内阿霉素的蓄积和MTT法检测细胞对阿霉素的敏感性,综合这4方面结果评价4条siRNA的沉默效果情况;用分子生物学软分析siRNA沉默效果的影响因素。结果沉默效果最好的mdr1si326和较好的mdr1si2631靶序列编码Pgp的跨膜区而且自身无茎和袢;沉默效果较差的mdr1si3071和最差的mdr1si1513靶序列编码Pgp的胞内区,前者自身成茎和成袢。沉默效果最好的mdr1si326和较好的mdr1si2631靶序列在靶位点和靶位点外间有较少的碱基配对和氢键。siRNA的沉默效果与siRNA3’5’端3个碱基中的A/U数量、N1和N19、GC含量间无规律可循。结论siRNA沉默SGC7901/VCR细胞mdr1的效果与靶序列的结构关系密切。

小分子干扰RNA逆转胃癌SGC7901/VCR细胞mdr1介导的多药耐药

目的研究小分子干扰RNA(siRNA)逆转胃癌多药耐药细胞亚系SGC7901/VCR mdr1介导的多药耐药效应。方法根据mdr1cDNA已知序列,设计并体外转录2条含21个核苷酸的siRNA(mdr1si2631和mdr1si3071),转染SGC7901/VCR细胞,用RT-PCR检测mdr1基因mRNA的表达,免疫组织化学检测P-gp的表达,流式细胞仪检测阿霉素在细胞内的蓄积,MTT法检测细胞对阿霉素的敏感性。结果siRNA转染SGC7901/VCR细胞48 h后,mdr1基因mRNA和P-gp的表达水平下降,细胞内阿霉素积累量增加,对阿霉素敏感性的相对逆转率各达79.59%及59.98%。结论siRNA可逆转SGC7901/VCR细胞mdr1介导的多药耐药。

正常人骨髓基质细胞对HL-60和HL-60/VCR细胞凋亡易感性的影响

为了观察正常人骨髓成纤维样基质细胞系HFCL对白血病敏感细胞HL-60和多药耐药细胞HL-60／VCR 凋亡易感性的影响,先建立HL-60或HL-60／VCR细胞与HFCL细胞共培养体系;采用瑞氏-吉姆萨染色和吖啶橙／ 溴化乙啶(AO／EB)染色,分别在光镜和荧光显微镜下进行形态学观察;TUNEL检测晚期凋亡细胞,流式细胞术检 测细胞周期、凋亡峰和annexin V阳性的早期凋亡细胞;Western blot检测Bcl-2、活化的胱冬蛋白酶(caspase)-3蛋 白和P糖蛋白(Pgp)的表达变化。结果表明,经topotecan(TPT)处理后的HL-60和HL-60／VCR细胞,在光镜和荧光 显微镜下均有典型的凋亡细胞形态学改变,这些改变具有时间和剂量依赖性;annexin V染色后能检测到早期凋亡 细胞;细胞周期显示:G1期细胞比例增高,S期减低,并有明显凋亡峰;TUNEL能检测到许多阳性细胞;同时出现活 化的caspase-3,伴有Bcl-2的表达下调,但与HFCL细胞共培养后,经TPT处理的HL-60和HL-60／VCR细胞中早期 和晚期凋亡细胞有所减少,凋亡峰减低,而且活化的Caspase-3表达减弱,Bcl-2蛋白表达上调,且以直接接触组为 甚。结论:正常骨髓成纤维样基质细胞HFCL能轻度降低白血病HL-60和HL-60／VCR细胞对TPT的凋亡易感性, 并有caspase-3和Bcl-2重要信号传导分子的参与。

LY294002逆转KB/VCR细胞多药耐药的作用及机制

目的探讨蛋白激酶抑制剂LY294002对多药耐药细胞KB/VCR的耐药逆转作用及逆转机制。方法采用MTT法检测LY294002对VCR和ADR的耐药逆转作用,流式细胞仪检测Rh123在KB和KB/VCR细胞内的蓄积,Western blot法检测LY294002对P-gp蛋白表达的影响,DAPI染色检测细胞凋亡。结果 LY294002对化疗药物具有协同增效作用,可以显著逆转KB/VCR的耐药性,能明显减少Rh123的外排,同时降低P-gp的表达。结论LY294002能够逆转KB/VCR细胞的多药耐药性,不仅能够抑制P-gp功能,而且能够降低P-gp蛋白表达,使肿瘤细胞内化疗药物的浓度增加,提高化疗药物的杀伤作用。

苦参素复合长春新碱对HCT-8/VCR细胞耐药性的影响及其机制

目的:探究苦参素复合长春新碱对HCT-8/VCR细胞耐药性的影响及其机制。方法:HCT-8/VCR体外培养,分为空白组、苦参素单药组,长春新碱单药组、苦参素和长春新碱联合组,每组6个复孔。CCK-8法检测各组HCT-8/VCR细胞的耐药性;MDC法检测细胞内自噬小泡的变化;ELISA法检测IL-6的含量;Western blot检测自噬相关基因与免疫因子TLR4蛋白的表达水平。结果:苦参素复合长春新碱可降低HCT-8/VCR细胞的耐药性,逆转倍数为3.23;与空白组比较,苦参素组和联合组自噬体含量降低、IL-6含量也明显降低(P<0.01),长春新碱组自噬体含量升高,IL-6含量也明显升高(P<0.01);联合组与苦参素组比较,自噬体含量升高,而IL-6含量降低(P<0.01);Western blot实验表明,与空白组比较,苦参素组P62的表达降低(P<0.05),LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、Beclin-1、TLR4均升高(P<0.05),长春新碱组和联合组P62的表达升高(P<0.05),LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、Beclin-1、TLR4均降低(P<0.05);联合组与长春新碱组比较,P62的表达升高(P<0.05),LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、Beclin-1、TLR4均降低(P<0.05)。结论:苦参素与长春新碱联合可显著降低HCT-8/VCR的耐药性,其机制与抑制自噬活动和TLR4信号活化有关。

塞来昔布提高耐长春新碱细胞株KB/VCR细胞化疗敏感性的研究

目的研究选择性环氧化酶-2(COX-2)抑制剂塞来昔布影响口腔癌耐长春新碱细胞株KB/VCR细胞对长春新碱敏感性的效应,探讨其作用机制。方法采用MTT法分别检测塞来昔布组、长春新碱组、塞来昔布+长春新碱组、塞来昔布+长春新碱+前列腺素E(2PGE2)组对KB/VCR细胞的生长抑制作用,用Western印迹法检测P-糖蛋白(P-gp)、Bcl-2和Bcl-XL的表达,流式细胞术检测塞来昔布对KB/VCR细胞凋亡的影响。采用SPSS 13.0软件进行统计分析。结果塞来昔布+长春新碱组的细胞生长抑制率高于塞来昔布组、长春新碱组及塞来昔布+长春新碱+PGE2组(P<0.01)。塞来昔布+长春新碱组和塞来昔布组P-gp的表达显著低于长春新碱组及塞来昔布+长春新碱+PGE2组(P<0.01),塞来昔布+长春新碱组、塞来昔布+长春新碱+PGE2组和塞来昔布组Bcl-2、Bcl-XL的表达显著低于长春新碱组(P<0.01)。塞来昔布+长春新碱组、塞来昔布+长春新碱+PGE2组细胞凋亡率均显著高于长春新碱组、塞来昔布组,塞来昔布+长春新碱+PGE2组细胞凋亡率显著低于塞来昔布+长春新碱组(P<0.01)。结论塞来昔布可以通过下调P-gp的表达及促进细胞凋亡,增强长春新碱耐药株KB/VCR细胞对长春新碱的敏感性。

鱼藤素诱导人胃癌SGC7901/VCR细胞程序性坏死的作用研究

目的:研究鱼藤素诱导人胃癌SGC7901/VCR细胞程序性坏死的作用。方法:应用Hoechst33342/碘化丙锭(PI)染色荧光显微镜、Annexin V-FITC/PI流式细胞仪检测鱼藤素作用前后人胃癌SGC7901/VCR细胞凋亡与坏死的变化;应用透射电镜观察鱼藤素作用前后人胃癌SGC7901/VCR细胞超微结构的变化;用Western blot检测RIP1和RIP3蛋白表达情况。结果:与对照组比较,鱼藤素组可见大量坏死细胞,细胞凋亡率无明显差异,但坏死率显著升高(P<0.05);透射电镜检测发现,鱼藤素组细胞可见细胞核肿胀外突,染色质凝聚成块,核膜周边聚集形成大量坏死小体;Western blot检测结果显示,鱼藤素组细胞RIP1和RIP3蛋白表达显著升高,且随时间延长逐渐增加。结论:鱼藤素作用于人胃癌SGC7901/VCR细胞后,诱导其出现细胞程序性坏死,其机制有待进一步研究。

罗格列酮逆转丝裂霉素对人胃癌SGC7901/VCR细胞株耐药的作用

目的探讨过氧化物酶体增殖子活化受体γ(PPARγ)配体罗格列酮(ROS),对耐药胃癌SGC7901/VCR细胞药物敏感性的影响。方法以长春新碱(VCR)诱导的人胃癌多药耐药细胞SGC7901/VCR及其亲代SGC7901为研究对象,应用MTT比色法及集落形成实验,研究罗格列酮对丝裂霉素(MMC)抑制人胃癌SGC7901细胞及其耐药亚系SGC7901/VCR细胞生长及增殖的影响及罗格列酮逆转SGC7901/VCR细胞对MMC的耐药作用。结果 ROS对SGC7901/VCR及SGC7901细胞生长具有明显抑制作用,且其作用与ROS浓度呈时间-剂量依赖关系;40μmmol/L、80μmmol/L ROS逆转SGC7901/VCR细胞对MMC的耐药倍数(RI)分别为9.6、10.5,与增敏对照组作用相当(P>0.05);集落形成实验结果显示,ROS与MMC联用降低SGC7901/VCR细胞的集落形成率。结论罗格列酮能部分逆转多药耐药胃癌细胞株SGC7901/VCR对MMC的耐药。

LY294002对SGC7901/VCR细胞VCR耐药逆转作用研究

目的观察LY294002对SGC7901/VCR胃癌细胞长春新碱(VCR)耐药的逆转作用,并探讨其可能机制。方法通过MTT法明确LY294002可以逆转SGC7901/VCR对VCR的耐药作用后,采用TUNEL检测细胞的凋亡,高效液相法检测细胞内药物浓度,RT-PCR法和Western blot法分别检测细胞中MDR1、caspase-3和XIAP的基因和蛋白表达水平。结果 LY294002能明显提高VCR的诱导细胞凋亡作用,明显增加细胞内VCR的浓度,并可降低耐药细胞中MDR1、XIAP的基因和升高caspase-3表达水平。结论抑制PI3K/PKB通路可逆转胃癌耐药,其机制可能与降低耐药基因MDR1的表达以及调控凋亡相关基因caspase-3和XIAP的表达有关。

粉防己碱增敏长春新碱通过MAPK信号通路诱导SGC-7901/VCR细胞凋亡的分子机制研究

目的阐明粉防己碱(tetrandrine)增敏长春新碱(vincristine)诱导胃癌SGC-7901/VCR细胞凋亡的分子机制。方法用不同浓度(0、2、4、6、8μmol/L)粉防己碱及不同浓度(0、50、100、150、200 nmol/L)长春新碱单用或联用处理SGC-7901/VCR细胞48 h,MTT实验检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡。Western blot检测细胞凋亡相关蛋白PARP-1、cleaved-Caspase 9、cleaved-Caspase 3、Bcl-2及MAPK信号通路相关蛋白P38、p-P38、JNK、p-JNK、ERK、p-ERK的表达。应用p38-MAPK抑制剂SB203580、JNK-MAPK抑制剂SP600125或ERK-MAPK抑制剂PD98059预处理SGC-7901/VCR细胞2 h,再以粉防己碱联用长春新碱处理48 h,测定细胞凋亡及相关蛋白表达。粉防己碱及长春新碱单用或联用处理SGC-7901/VCR细胞24 h,流式细胞术检测细胞周期,Western blot检测细胞周期相关蛋白CDC2、p-CDC2的表达。结果粉防己碱联用长春新碱导致SGC-7901/VCR细胞增殖活力以剂量依赖的方式下降,联合作用效果为协同。联合用药导致细胞凋亡显著增加(P<0.05),与PARP剪切激活及Caspase 9、Caspase 3裂解激活有关。联合用药增强细胞MAPK信号通路p-P38和p-JNK表达,减弱p-ERK表达,应用p38-MAPK或JNK-MAPK通路抑制剂预处理SGC-7901/VCR细胞后减弱联合用药诱导凋亡的作用(P<0.05),而应用ERK-MAPK通路抑制剂预处理后增强联合用药诱导凋亡的作用(P<0.05)。联合用药导致SGC-7901/VCR细胞S/G_(2)周期阻滞(P<0.05)。结论粉防己碱增敏长春新碱抑制细胞增殖并诱导SGC-7901/VCR细胞凋亡,MAPK信号通路可能在诱导细胞凋亡中起关键作用。

塞来昔布增强长春新碱对KB/VCR细胞增殖和迁移的抑制作用

目的观察塞来昔布增强长春新碱对口腔癌KB/VCR细胞增殖和迁移的抑制作用。方法 KB/VCR细胞分为对照组、长春新碱组、塞来昔布组(10μmol/L)及长春新碱(1.5μmol/L)联合塞来昔布(10μmol/L)组,应用体外细胞培养技术培养人口腔癌KB/VCR细胞24 h,倒置显微镜下观察KB/VCR细胞的形态变化。Click-iT Edu检测各组细胞的生长增殖能力,并采用Transwell实验观察各组细胞的迁移能力。结果 10μmol/L塞来昔布和1.5μmol/L长春新碱联合作用于人口腔癌KB/VCR细胞后,KB/VCR细胞的增殖和迁移能力显著减弱(P<0.05),且两者联合检测效果显着高于单用塞来昔布(10μmol/L)或VCR(1.5μmol/L)组。结论环氧化酶-2抑制剂塞来昔布具有增强长春新碱抑制人口腔癌KB/VCR细胞的生长增殖和迁移的相关作用,但其机制有待进一步研究。

siRNA沉默COX-2基因与增强口腔癌耐药株KB/VCR细胞化疗敏感性的相关性

目的观察siRNA沉默COX-2基因增强口腔癌耐长春新碱细胞株KB/VCR对长春新碱的敏感性。方法将KB/VCR细胞分为COX-2 siRNA组、阴性对照组及空白对照组,RT-PCR检测COX-2 mRNA和MDR-1 mRNA的表达,流式细胞术检测细胞内Rho-123的蓄积量,MTT法检测细胞活力。结果 COX-2 siRNA能增强长春新碱对KB/VCR细胞的生长抑制作用(P<0.01),同时有效地抑制COX-2 mRNA和MDR-1 mRNA的表达及抑制P-糖蛋白(P-gp)的功能。COX-2 siRNA抑制COX-2基因表达与抑制P-gp的外排功能及与抑制MDR-1 mRNA的表达均呈正相关。结论 siRNA沉默COX-2基因可显著增强KB/VCR细胞对长春新碱的敏感性,其作用与下调节MDR-1基因表达及抑制P-gp功能有关。

miR-548c-5p靶向Notch通路增强胃癌SGC7901/VCR细胞对紫杉醇的敏感性

目的分析miR-548c-5p在胃癌SGC7901/VCR细胞药物耐受中的作用。方法通过qRTPCR分析miR-548c-5p在SGC7901细胞系和SGC7901耐药细胞系(SGC7901/VCR)中的表达差异。分别通过qRT-PCR和western blot分析SGC7901细胞系和SGC7901/VCR中Notch1和Hes1在mRNA水平上和蛋白质水平上的表达变化。通过荧光素酶实验分析miR-548c-5p与Notch1的3′-UTR的作用。采用CCK-8实验分析miR-548c-5p对细胞增殖的影响,采用Transwell实验分析miR-548c-5p对细胞侵袭的影响。在SGC7901/VCR细胞中转染miR-548c-5p mimics,采用CCK-8分析miR-548c-5p联合紫杉醇对细胞增殖的影响,采用流式细胞术分析miR-548c-5p联合紫杉醇对细胞增殖和侵袭的影响,评估miR-548c-5p对胃癌耐药细胞系SGC7901/VCR细胞药物耐受性的作用。结果 miR-548c-5p在SGC7901/VCR细胞中的表达显著低于SGC7901细胞(P <0.05),Notch1和Hes1 mRNA和蛋白质在SGC7901/VCR细胞中的表达显著低于SGC7901细胞(P <0.05)。miR-548c-5p mimics可以抑制SGC7901/VCR细胞的增殖和侵袭。而过表达Notch1可以抵消miR-548c-5p对SGC7901/VCR细胞的抑制作用。miR-548c-5p与紫杉醇联合使用,可以进一步抑制SGC7901/VCR细胞的增殖和侵袭。结论 miR-548c-5p可以通过靶向Notch通路,提高胃癌SGC7901/VCR细胞对化疗药物紫杉醇的敏感性。

白花蛇舌草总黄酮对多药耐药白血病CEM/VCR细胞增殖凋亡的影响

目的探索白花蛇舌草总黄酮对白血病CEM/VCR细胞增殖凋亡的影响。方法通过在白血病CEM/VCR细胞中加入不同浓度的白花蛇舌草总黄酮溶液,并经过MTT比色实验检测溶液对细胞的抑制率;细胞凋亡研究直接利用光镜、电镜技术观察CEM/VCR细胞形态和结构是否发生变化,细胞凋亡率则通过流式细胞术计算取得。结果白花蛇舌草总黄酮能够明显抑制CEM/VCR的生长速度,并且抑制作用随着溶液药物浓度以及时间的改变而改变,当药物浓度处于0.0256μg/mL左右时抑制作用达到最高,半数抑制浓度为0.128μg/mL;通过光镜、电镜可以看见CEM/VCR细胞在白花蛇舌草溶液中体积有明显的缩小、细胞膜出现皱缩,核聚集并且以新月形边聚于核膜下,细胞的染色质出现浓缩等细胞凋亡特征;通过流式细胞计量术能够得出细胞凋亡率与药物浓度以及时间均有相关性。结论白花蛇舌草能够明显抑制白血病CEM/VCR细胞的生长,并且能够使细胞凋亡。

三七总皂甙体外逆转K562/VCR细胞多药耐药的实验研究

目的从中药中寻找安全有效的多药耐药逆转剂,并初步研究三七总皂甙(PNS)对人白血病细胞K562(敏感细胞)及K562/VCR(耐药细胞)的影响。方法以MTT法测定三七总皂甙注射液对K562及K562/VCR的直接细胞毒作用;测定阿霉素(DOX)对两种细胞的毒性作用并计算出耐药倍数;用流式细胞仪测定PNS作用后敏感细胞和耐药细胞内阿霉素的浓度;以流式细胞仪测定敏感细胞和三七总皂甙作用的耐药细胞表达多药耐药糖蛋白P-gp(P-170)的阳性率。以上实验均用维拉帕米作为阳性对照。结果①三七总皂甙在300μg/ml浓度以下时对两细胞基本无毒性,为安全有效的逆转剂量。②阿霉素对敏感细胞和耐药细胞的半数抑制浓度(IC50)分别为28.7ng/ml和1141.8ng/ml,耐药倍数为39.7倍。③三七总皂甙能够增强阿霉素(DOX)对K562/VCR的细胞毒作用。④三七总皂甙能够增加耐药细胞K562/VCR细胞内的阿霉素的蓄积浓度。⑤三七总皂甙(200μg/ml)可下调多药耐药基因mdr-1表达的P-gp糖蛋白的量,而未发现维拉帕米的类似作用。结论三七总皂甙能够部分逆转耐药细胞K562/VCR的多药耐药性。

siRNA沉默COX-2基因对KB/VCR细胞的增殖及侵袭的影响

目的:观察siRNA沉默口腔癌耐长春新碱细胞株KB/VCR细胞COX-2基因后,对KB/VCR细胞增殖及侵袭能力的影响。方法:将KB/VCR细胞分为COX-2 siRNA组、阴性对照组及空白对照组,采用RT-PCR检测各组细胞COX-2 mRNA的表达,蛋白印迹法检测COX-2蛋白的表达,MTT法检测各组细胞的生长抑制率,Transwell小室测定各组细胞侵袭能力的变化。结果:COX-2 siRNA组细胞的COX-2蛋白和mRNA的表达明显低于阴性对照组和空白对照组(P<0.01)。COX-2 siRNA组细胞的生长抑制率明显高于阴性对照组和空白对照组(P<0.01)。COX-2 siRNA组细胞的侵袭能力也明显降低。结论:COX-2 siRNA能特异性沉默KB/VCR细胞的COX-2基因,使KB/VCR细胞生长得到抑制,并减弱其侵袭能力。

中药复方君子汤联合环孢霉素A逆转白血病细胞株K562/VCR耐药性的实验研究

本研究观察中药复方君子汤(FFJZ)联合环孢霉素A(cyclosporine A,CsA)逆转白血病耐药细胞系K562/VCR细胞耐药性的效果,以便寻找有效的联合逆转剂。采用MTT法、流式细胞术研究FFJZ联合CsA逆转白血病耐药细胞系K562/VCR耐药性的作用。结果表明:FFJZ联合CsA在体外对K562/VCR细胞的耐药性有明显的逆转作用(p<0.01),能提高K562/VCR细胞对阿霉素(ADM)的敏感性,且在药物有效浓度范围内对细胞本身无毒性作用。FFJZ联合CsA对K562/VCR细胞的P-gp表达的阳性率无明显影响。结论:复方君子汤联合环孢霉素A可能成为治疗白血病多药耐药的安全有效的耐药逆转药物。

瑞香狼毒小鼠药物血清增敏化疗药物对K562/VCR耐药细胞的抗癌活性

目的 :研究瑞香狼毒 (SC)小鼠药物血清与细胞毒化疗药物联合应用对K5 6 2 /VCR多药耐药细胞的协同抗肿瘤效应。方法 :小鼠口服SC水提物 6g·kg-1,2h后采集血清。SC药物血清与长春新碱 (VCR)、阿霉素 (Dox)或足叶乙甙 (VP - 16 )联合处理K5 6 2 /VCR多药耐药细胞 ,检测细胞MTT转化率 ,克隆形成和DNA合成能力。结果 :5 %SC药物血清显著增加细胞毒化疗药物对K5 6 2 /VCR耐药细胞的敏感性 ;VCR、Dox、VP - 16对K5 6 2 /VCR的IC50 较单独化疗药物组分别减小 6 .3、15 .0和 18.5倍 ;细胞克隆数分别减少 45 .1%、6 6 .6 %和 5 8.6 % ;[3 H]TdR掺入K5 6 2 /VCR细胞DNA也显著减少。增敏作用随SC药物血清比例的增高而增强。结论

靶向人胃癌SGC7901/VCR细胞多药耐药基因1小分子干扰RNA的有效序列筛选

目的筛选靶向人胃癌SGC7901/VCR细胞多药耐药基因1(MDR1)小分子干扰RNA(siRNA)的有效序列。方法设计并体外转录靶向MDR1的4条siRNA(MDR1si326、MDR1si1513、MDR1si2631和MDR1si3071),转染SGC7901/VCR细胞。用RT PCR检测MDR1mRNA表达,免疫印迹检测P糖蛋白(P gp)表达,流式细胞仪检测细胞内阿霉素(ADR)蓄积,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞对ADR的敏感性。结果4条siRNA均能不同程度逆转SGC7901/VCR细胞MDR1介导的多药耐药。转染后48h,MDR1si326组和MDR1si2631组的mRNA表达水平分别为0.42±0.07和0.49±0.02,较MDR1si1513或MDR1si3071组明显下降(P<0.05);MDR1si326组细胞内ADR蓄积最显著,中位数为30.03,MDR1si2631组次之,MDR1si3071组较少,MDR1si1513组最少(P<0.05);MDR1si2631组对ADR耐药的相对逆转率最高,为(98.12±0.26)%,MDR1si326组次之(P<0.05),MDR1si1513组和MDR1si3071组的差别不大(P>0.05)。转染后72h,MDR1si326组蛋白质表达水平下降最明显。结论MDR1si326对人胃癌SGC7901/VCR细胞MDR1介导的耐药逆转效果最好,MDR1si2631次之,MDR1si3071较差,MDR1si1513最差。

长春新碱诱导的白血病多药耐药细胞株CEM/VCR的建立及其生物学特性

目的建立白血病多药耐药细胞株CEM/VCR,探讨其生物学特性。方法以白血病CEM细胞为亲本细胞,通过逐步增加长春新碱的浓度联合大剂量间断冲击诱导方法建立对长春新碱耐药的白血病CEM/VCR细胞株。MTT实验检测耐药细胞株对常用化疗药物阿霉素(ADM)、阿糖胞苷(Ara-C)、表柔比星(EPI)、长春新碱(VCR)、柔红霉素(DNR)及门冬酰胺酶(L-ASP)的耐药性,计算出CEM和CEM/VCR细胞的半数抑制浓度(IC50)和耐药倍数(RI);光镜下观察其细胞形态学变化,绘制细胞生长曲线,并计算细胞倍增时间;流式细胞仪检测细胞周期分布;RT-PCR半定量检测MDR1 mRNA的表达。结果历时14个月,传代110代,成功建立可操作的、重复性好的CEM/VCR耐药细胞株,该细胞株能够在含0.01μg/mL VCR条件下长期生存。ADM、Ara-C、EPI、VCR、DNR及L-ASP作用CEM细胞72 h的IC50分别为(0.009 9±0.001 8)、(0.0097±0.001 7)、(0.011 8±0.005 1)、(0.002 7±0.000 3)和(0.0 085±0.000 9)μg/mL及(7.679 4±0.058 3)u/mL,而作用CEM/VCR细胞株72 h的IC50分别为(5.597 6±0.113 8)、(0.105 5±0.004 1)、(0.897 9±0.069 0)、(2.5259±0.098 2)和(1.356 3±0.033 5)μg/mL及(3 354.796 5±9.012 8)u/mL,其RI分别为563.71、10.79、75.55、905.34、158.08和436.85倍,差异有统计学意义(P<0.05),说明耐药细胞株CEM/VCR不仅对VCR耐药,还存在交叉耐药;光镜下,CEM/VCR细胞与CEM细胞相比,其体积较小;CEM细胞、CEM/VCR细胞的倍增时间分别为(25.09±0.78)h和(24.27±0.79)h,差异无统计学意义(P>0.05);两种细胞在G0/G1期、S期的分布差异无统计学意义(P>0.05),在G2/M期的分布差异有统计学意义(P<0.05);耐药细胞株CEM/VCR的MDR1mRNA表达水平高于亲本细胞CEM,分别为(1.012±0.031和0.187±0.006)(P<0.01)。结论成功建立了一株白血病多药耐药细胞株CEM/VCR。该细胞株可以成为研究长春新碱获得性耐药机制及开展多药耐药逆转剂筛选较好的体外模型。