补阳还五汤合参芪地黄汤化裁调控VEGF-C/VEGFR3通路抑制淋巴管新生对糖尿病肾病小鼠的保护作用

目的基于调控VEGF-C/VEGFR3通路抑制淋巴管新生探讨补阳还五汤合参芪地黄汤化裁对糖尿病肾病(DKD)小鼠的保护作用及机制。方法将24只雄性db/db小鼠随机分为模型组、中药组(补阳还五汤合参芪地黄汤化裁,生药量24.44 g·kg-1)和西药组(厄贝沙坦,13.5 mg·kg-1),每组8只,另外取8只db/m小鼠作为对照组。灌胃给药,每日1次,连续12周。检测小鼠血糖(FBG)、总胆固醇(TC)、甘油三脂(TG)、尿白蛋白/肌酐比值(ACR)及肾脏指数;采用HE、Masson染色法观察肾脏组织病理变化;免疫组化法检测肾脏组织纤连蛋白(FN)、Ⅰ型胶原蛋白(ColⅠ)、波形蛋白(Vimentin)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、转化生长因子β1(TGF-β1)、血管内皮生长因子受体3(VEGFR3)、血管内皮生长因子C(VEGF-C)、淋巴管内皮透明质酸受体1(LYVE-1)、平足蛋白(PDPN)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素1β(IL-1β)的表达;Western Blot法检测肾脏组织ColⅠ、Vimentin、α-SMA、TGF-β1、VEGFR3、VEGF-C、LYVE-1、TNF-α、IL-1β蛋白表达;Real-time PCR法检测肾脏组织FN、ColⅠ、TGF-β1、VEGF-C、VEGFR3、TNF-α、IL-1βmRNA表达。结果与对照组比较,模型组小鼠的血清FBG、TG、TC、ACR水平及肾脏指数均明显升高(P<0.05);肾小球肥大,系膜外基质增加,基底膜增厚,囊腔变窄,肾小管上皮细胞变性、坏死,间质有大量炎性细胞浸润,肾小管萎缩,纤维化水平明显升高(P<0.05);肾间质中FN、ColⅠ、Vimentin、α-SMA、TGF-β1、VEGFR3、LYVE-1、TNF-α、IL-1β蛋白表达,胞质中VEGF-C蛋白表达及肾小管毛细血管周围VEGFR3、PDPN蛋白表达均明显上调(P<0.05);肾脏组织中ColⅠ、Vimentin、α-SMA、TGF-β1、VEGFR3、VEGF-C、LYVE-1、TNF-α、IL-1β蛋白表达均明显上调(P<0.05);肾脏组织中FN、ColⅠ、TGF-β1、VEGF-C、VEGFR3、TNF-α、IL-1βmRNA表达水平均明显升高(P<0.05)。与模型组比较,中药组小鼠的血清TG、TC、ACR水平均明显降低(P<0.05);肾脏组织损伤有不同程度好转,炎性细胞浸润有一定程度减轻,纤维化水平明显降低(P<0.05);肾间质中FN、ColⅠ、Vimentin、α-SMA、TGF-β1、VEGFR3、LYVE-1、TNF-α、IL-1β蛋白表达,胞质中VEGF-C蛋白表达及肾小管毛细血管周围VEGFR3、PDPN蛋白表达均明显下调(P<0.05);肾脏组织中ColⅠ、Vimentin、α-SMA、TGF-β1、VEGFR3、VEGF-C、LYVE-1、TNF-α、IL-1β蛋白表达均明显下调(P<0.05);肾脏组织中FN、ColⅠ、TGF-β1、VEGF-C、VEGFR3、TNF-α、IL-1βmRNA表达水平均明显降低(P<0.05)。结论补阳还五汤合参芪地黄汤化裁可降低DKD小鼠肾脏组织炎症及纤维化水平,其机制可能与调控VEGF-C/VEGFR3通路抑制淋巴管新生有关。

激活VEGF-C/VEGFR-3信号通路调控淋巴管生成对慢性结肠炎的影响

炎症性肠病（IBD）是一组病因及发病机制尚未明确的慢性非特异性肠道炎性疾病,主要包括克罗恩病（CD）和溃疡性结肠炎（UC）。近年来研究表明,IBD的发病及病情迁延与淋巴管生成有关。早在20世纪初期就有大量报道指出CD患者的病变肠道中可见淋巴管阻塞、组织水肿等表现,表明慢性淋巴管炎的存在。

VEGF-C/VEGF-D/VEGFR-3信号通路与肿瘤淋巴转移

侵袭和转移是肿瘤恶性特征的主要表现,是导致肿瘤患者死亡的主要原因。经淋巴管转移为多种肿瘤早期的转移方式。随着一些特异性淋巴管内皮细胞分子被发现,对肿瘤淋巴管系统的生成及其与肿瘤的生物学行为有了进一步的认识,尤其是新近对肿瘤淋巴管生成机制的研究表明,VEGF-C和VEGF-D作为目前公认的主要淋巴管生成因子。

补肾活血方调控VEGF-C/VEGFR-3通路治疗骨性关节炎的研究进展

从骨性关节炎(osteoarthritis,OA)炎症介质及新生淋巴管的关系、淋巴管与VEGF-C/VEGFR-3通路的关系及补肾活血方治疗OA的机制3方面入手综述补肾活血方通过调控VEGF-C/VEGFR-3通路治疗骨性关节炎的研究进展,指出补肾活血方可通过调控VEGF-C/VEGFR-3信号通路,介导淋巴管成熟与功能,从而加快清除关节周围炎性物质及分解酶类,抑制炎症反应,消除肿胀,减轻关节损伤。

miR-409-3p通过抑制LHX2调控VEGF/VEGFR2信号通路促进前列腺癌细胞凋亡、抑制细胞增殖

目的:探讨微小RNA-409-3p(microRNA-409-3p,miR-409-3p)对前列腺癌细胞增殖、凋亡的影响及其分子机制。方法:qRT-PCR与Western blot平行检测前列腺癌细胞中miR-409-3p与LIM同源框基因2(LIM-homeobox gene 2,LHX2)的表达;CCK-8实验检测miR-409-3p过表达对前列腺癌细胞增殖能力的影响,以及LHX2过表达对前列腺癌细胞增殖能力的恢复作用;流式细胞术检测细胞凋亡率;双荧光素酶报告基因检测miR-409-3p与LHX2的靶向作用关系;Western blot检测细胞中LHX2、CyclinD1、CDK4、Cleaved-caspase-3及VEGF/VEGFR2信号通路相关蛋白表达。结果:miR-409-3p在前列腺癌细胞中的表达水平显著低于正常前列腺上皮细胞(P<0.05),LHX2的表达水平高于正常前列腺上皮细胞(P<0.05);miR-409-3p过表达可显著抑制前列腺癌细胞增殖,促进细胞凋亡(P<0.05),并可上调Cleaved-caspase-3的表达(P<0.05),下调CyclinD1、CDK4、VEGF、t-VEGFR2、p-VEGFR2的表达(P<0.05);双荧光素酶实验证明miR-409-3p与LHX2存在靶向关系,miR-409-3p可负性调控LHX2的表达;LHX2过表达可部分逆转miR-409-3p对前列腺癌细胞增殖、凋亡及VEGF/VEGFR2信号通路的影响。结论:miR-409-3p可通过下调LHX2的表达而促进前列腺癌细胞凋亡、抑制细胞增殖,其作用机制可能与抑制VEGF/VEGFR2信号通路激活有关。

甲状腺乳头状癌组织中VEGF-C及VEGFR3的表达及意义

目的观察VEGF-C和VEGFR3在甲状腺乳头状癌组织中的表达,研究二者表达的相关性,探讨甲状腺乳头状癌细胞淋巴管转移机理。方法用免疫组化方法检测VEGF-C和VEGFR3在人甲状腺乳头状癌、甲状腺腺瘤中的表达情况,并进行比较和分析。结果在甲状腺乳头状癌、甲状腺腺瘤组织中均见到VEGF-C和VEGFR3阳性表达,但在甲状腺乳头状癌组织VEGF-C和VEG-FR3的表达率和表达强度均高于甲状腺腺瘤,且VEGF-C和VEGFR3在甲状腺乳头状癌中的表达呈正相关。结论VEGF-C和VEGFR3在甲状腺乳头状癌细胞中高表达,并且可能与此肿瘤的淋巴管转移相关。

扶正祛毒方抑制人乳腺癌MCF-7细胞增殖及对PI3K/Akt信号通路和血管内皮生长因子C、血管内皮细胞生长因子受体3表达的影响

目的:探讨扶正祛毒方对人乳腺癌MCF-7细胞增殖的抑制作用及对PI3K/Akt信号通路和血管内皮生长因子C(VEGF-C)、血管内皮细胞生长因子受体3(VEGFR-3)表达的影响。方法:人乳腺癌细胞株MCF-7经完全培养基于37℃、5%CO2、完全饱和湿度培养箱中培养至对数生长周期,接种于96孔培养板,加入浓度梯度(5、10及20μmol/L)扶正祛毒方培养基,以正常培养细胞作为对照;孵育24 h后采用噻唑蓝法检测细胞增殖情况,计算细胞增殖抑制率;采用逆转录聚合酶链反应法检测VEGF-C、VEGFR-3 mRNA水平;采用蛋白质印迹法检测PI3K、AKT蛋白表达水平。结果:扶正祛毒方低、中及高剂量组细胞增殖抑制率明显高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05),提示扶正祛毒方对乳腺癌细胞增殖具有较好的抑制效果,且随着剂量的增加抑制效果越明显;扶正祛毒方低、中及高剂量组细胞VEGF-C、VEGFR-3 mRNA水平明显低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05),提示扶正祛毒方能够下调VEGF-C、VEGFR-3基因水平,且随着剂量的增加下调幅度越大;扶正祛毒方低、中及高剂量组细胞PI3K、Akt蛋白表达水平明显低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05),且呈剂量依赖性,剂量越大降低幅度越明显。结论:扶正祛毒方能够抑制乳腺癌MCF-7细胞增殖,其机制可能与阻断PI3K/Akt信号通路,下调VEGF-C、VEGFR-3基因表达有关。

VEGF-C与妇科肿瘤关系的研究进展

血管内皮生长因子穴VEGF雪-C是VEGF家族的新成员熏通过促进肿瘤细胞生长和抑制凋亡,介导淋巴血管形成促进肿瘤转移熏在宫颈癌、子宫内膜癌、卵巢癌的发生发展及转移中起重要作用。VEGF-C成为控制肿瘤生长转移以及治疗肿瘤新的理想靶点,阻断VEGFR-3信号通路可为阻止肿瘤淋巴结转移提供一个有效途径。

基于VEGF-C/VEGFR-3通路探讨电针对急性心肌缺血小鼠心肌炎性损伤及细胞凋亡的影响

目的:观察电针对急性心肌缺血(AMI)小鼠心肌组织血管内皮生长因子-C(VEGF-C)、血管内皮生长因子受体-3(VEGFR-3)、促炎因子和细胞凋亡的影响,探讨电针治疗AMI的作用机制。方法:将50只雄性C57BL/6小鼠随机分为假手术组、模型组、电针组、抑制剂组和抑制剂+电针组,每组10只。除假手术组外,其余各组小鼠结扎冠状动脉左前降支(LAD)制备急性心肌缺血模型;假手术组开胸后仅穿线不结扎。电针组予电针“神门”“通里”干预,疏密波,频率2 Hz/15 Hz,电流强度1 mA,每次30 min,每天1次,连续3 d;抑制剂组腹腔注射SAR 131675(12.5 mg·kg^(-1)·d^(-1),每日1次,连续3 d);抑制剂+电针组于电针前30 min腹腔注射SAR 131675。检测小鼠造模前、造模后30 min、干预3 d后心电图,记录ST段位移值;干预结束后,ELISA法检测血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)及心肌组织肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素23(IL-23)含量;HE染色法观察心肌组织形态变化;免疫荧光双标法检测心肌组织VEGF-C/VEGFR-3共表达阳性细胞数;TUNEL法检测心肌细胞凋亡水平;Western blot法检测心肌组织VEGF-C、VEGFR-3、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、活化的半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3(Cleaved Caspase-3)、活化的多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1(Cleaved PARP-1)蛋白表达。结果:与假手术组比较,模型组小鼠ST段位移值升高(P<0.01);CK-MB、AST、TNF-α、IL-23含量升高(P<0.01);心肌纤维排列紊乱,间质炎性细胞浸润明显;VEGF-C/VEGFR-3共表达阳性细胞数减少(P<0.01);心肌细胞凋亡数增加(P<0.01);VEGF-C、VEGFR-3、Bcl-2蛋白表达减少(P<0.01),Cleaved Caspase-3、Cleaved PARP-1蛋白表达增加(P<0.01)。与模型组比较,电针组小鼠ST段位移值降低(P<0.01);CK-MB、AST、TNF-α、IL-23含量降低(P<0.01);心肌病理损伤程度减轻;VEGF-C/VEGFR-3共表达阳性细胞数增加(P<0.01);心肌细胞凋亡数减少(P<0.01);VEGF-C、VEGFR-3、Bcl-2蛋白表达增加(P<0.01),Cleaved Caspase-3、Cleaved PARP-1蛋白表达减少(P<0.01)。模型组与抑制剂组各指标比较差异无统计学意义(P>0.05)。与模型组比较,抑制剂+电针组小鼠VEGF-C蛋白表达增加(P<0.01)。与抑制剂组比较,电针组小鼠ST段位移值降低(P<0.01);CK-MB、AST、TNF-α、IL-23含量降低(P<0.01);心肌病理损伤程度减轻;VEGF-C/VEGFR-3共表达阳性细胞数增加(P<0.05);心肌细胞凋亡数减少(P<0.01);VEGF-C、VEGFR-3、Bcl-2蛋白表达增加(P<0.01),Cleaved Caspase-3、Cleaved PARP-1蛋白表达减少(P<0.01)。与抑制剂+电针组比较,除VEGF-C蛋白表达外,电针组各指标均改善(P<0.01)。结论:电针可减轻AMI小鼠炎性反应和细胞凋亡,其机制可能与激活VEGF-C/VEGFR-3通路促进淋巴管生成有关。

肺纤方提取物对肺间质纤维化大鼠VEGFR1介导的p38MAPK/PI3K信号通路表达的影响

目的:探讨肺纤方提取物对肺间质纤维化大鼠血管新生的影响。方法:将大鼠分为假手术组、模型组、泼尼松组、氯沙坦组、肺纤方大、中、小剂量组7组,除假手术组外,采用气管插管灌注博莱霉素3mg/kg进行大鼠肺间质纤维化造模;造模第2天予以药物灌胃干预。于14d及28d分两批进行动物处理,免疫组化SP法检测VEGFR1、p38MAPK、PI3K蛋白表达。结果:肺纤方大剂量组均减轻VEGFR1、p38MAPK、PI3K蛋白表达,较模型组差异显著(P<0.05)。结论:肺纤方通过减少肺泡炎及纤维化修复时异常血管新生介导的胶原沉积而具有抗肺间质纤维化作用。

基于VEGF/VEGFR2/PI3K/Akt信号通路研究健脾活骨方对酒精性股骨头坏死血管损伤的修复作用机制

目的:本研究旨在观察健脾活骨方(JPHGP)对实验性酒精性股骨头坏死(AONFH)血管损伤的修复作用,并基于血管内皮细胞生长因子(VEGF)/血管内皮细胞生长因子受体2(VEGFR2)/磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路探索其作用机制。方法:实验采用46%酒精度红星二锅头10 m L·kg^(-1)·d^(-1)灌胃建立AONFH大鼠模型,观察JPHGP不同剂量组(2.5、5.0、10.0 g·kg^(-1))的干预作用,选择健骨生丸(JGS,1.5 g·kg^(-1))为阳性药物;给药8周后,Micro-CT扫描分析股骨头骨计量学,墨汁灌注观察股骨头骨髓内微血管面积,苏木素-伊红(HE)染色法观察病理学改变程度,免疫组化和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测股骨头中血小板-内皮细胞黏附分子31(CD31)、VEGF、VEGFR2、PI3K、磷酸化蛋白激酶B(p-Ak)和抑癌基因(PTEN)的蛋白表达水平。结果:与正常组比较,模型组大鼠股骨头骨小梁断裂变细,空骨陷窝增多,脂肪细胞数量明显增多和直径显著变大(P<0.01),Micro-CT影像学结果显示骨密度(BMD)、骨体积分数(BV/TV)、骨小梁厚度(Tb.Th)、骨小梁数量(Tb.N)均明显降低(P<0.05,P<0.01),骨表面积体积比(BS/BV)和骨小梁分离度(Tb.Sp)均显著升高(P<0.01),墨汁灌注结果表明股骨头髓腔内微血管面积显著减少(P<0.01);与模型组比较,JPHGP作用后能降低AONFH大鼠股骨头的空骨陷窝率、脂肪细胞面积和直径,Micro-CT影像学结果显示JPHGP低剂量组BV/TV、Tb.Th、Tb.N均明显升高(P<0.05,P<0.01),BS/BV显著降低(P<0.01),BMD呈升高趋势,Tb.Sp呈下降趋势,但差异均无统计学意义,JPHGP中、高剂量组的BMD、BV/TV、Tb.Th、Tb.N均明显升高(P<0.05,P<0.01),BS/BV、Tb.Sp明显降低(P<0.05,P<0.01),并明显升高股骨头髓腔内微血管面积(P<0.05,P<0.01),扩大股骨头髓腔内微血管面积;与正常组比较,模型组大鼠均显著下调CD31、VEGF、VEGFR2、PI3K、p-Akt和上调PTEN的表达含量(P<0.01),与模型组比较,JPHGP作用后中、高剂量组显著升高大鼠股骨头CD31、PI3K、p-Akt表达含量(P<0.01),降低PTEN蛋白的表达水平(P<0.01),同时JPHGP作用后上调VEGF、VEGFR2表达含量(P<0.05,P<0.01)。结论:JPHGP对AONFH股骨头血管损伤具有修复作用,其机制可能与激活VEGF/VEGFR2/PI3K/Akt信号通路有关,相关研究结果将为JPHGP的临床应用提供一定科学依据和参考。

电针调控血管内皮生长因子C/血管内皮生长因子受体3信号通路改善急性心肌缺血小鼠炎性反应

目的:观察电针对急性心肌缺血(AMI)小鼠心功能、淋巴管标志物、巨噬细胞及炎性细胞因子的影响,探讨电针治疗AMI的作用机制。方法:将雄性C57BL/6小鼠随机分为假手术组、模型组、电针组、抑制剂组、抑制剂+电针组,每组10只。采用冠状动脉左前降支结扎法制备AMI模型。电针组、抑制剂+电针组于造模后连续3 d给予电针双侧“神门”“通里”,30 min/次,1次/d;抑制剂组仅腹腔注射血管内皮生长因子受体3(VEGFR-3)抑制剂SAR131675,抑制剂+电针组在电针前30 min腹腔注射SAR131675。用BL-420F型生物机能实验系统采集小鼠心电图数据,分析ST段电位变化;HE染色法观察小鼠心肌组织病理变化;ELISA法检测血清乳酸脱氢酶(LDH)、心肌肌钙蛋白I(cTnI)及缺血心肌组织中白细胞介素(IL)-18、IL-6的含量;免疫荧光染色法检测小鼠缺血心肌组织淋巴管内皮透明质酸受体-1(LYVE-1)、巨噬细胞标记物CD68的阳性表达;Western blot法检测缺血心肌组织中血管内皮生长因子C(VEGF-C)、VEGFR-3的表达。结果:与假手术组比较,模型组小鼠ST段电位升高(P<0.01),血清LDH、cTnI含量及心肌组织中IL-18、1L-6含量均增加(P<0.01),心肌组织中LYVE-1阳性表达及VEGF-C、VEGFR-3蛋白表达水平均明显降低(P<0.01),CD68阳性表达细胞数量明显增加(P<0.01)。与模型组、抑制剂组及抑制剂+电针组比较,电针组小鼠ST段电位明显降低(P<0.01),血清LDH、cTnI含量及心肌组织中IL-18、IL-6含量明显减少(P<0.01),心肌组织中LYVE-1阳性表达及VEGFR-3蛋白表达水平均明显升高(P<0.01),CD68阳性表达细胞数量明显减少(P<0.01)。与模型组、抑制剂组比较,电针组小鼠心肌组织中VEGF-C蛋白表达水平明显升高(P<0.01)。HE染色结果显示,假手术组小鼠心肌纤维、间质未见明显异常;模型组心肌纤维排列紊乱,有大量炎性细胞浸润;电针组心肌组织损害程度减轻。结论:针刺可改善AMI小鼠炎性损伤,其机制可能与激活VEGF-C/VEGFR-3信号通路促进淋巴管生成,减少巨噬细胞浸润,降低炎性因子释放有关。

苦参碱减轻N-甲基-N'-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)诱导的大鼠胃黏膜损伤及机制

目的研究苦参碱对N-甲基-N'-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)诱导大鼠胃黏膜损伤的影响及机制。方法将75只Wister大鼠随机分为空白组、模型组、(100、150、200)mg/kg苦参碱处理组。除空白组外,其余各组采用MNNG复合造模方法建立胃黏膜损伤大鼠模型。造模成功后,苦参碱处理组大鼠分别腹腔注射(100、150、200)mg/kg苦参碱,连续给予45 d。最后一次给药后,测定各组实验大鼠的体质量、24 h饮食饮水量。处死大鼠后收集组织样本,ELISA测定胃黏膜组织白细胞介素1β(IL-1β)、IL-4、γ干扰素(IFN-γ)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平;HE染色观察胃黏膜组织的病变情况,免疫组织化学染色检测胃黏膜组织血管内皮生长因子C(VEGF-C)和血管内皮生长因子受体3(VEGFR3)的表达,Western blot法检测各组大鼠胃组织Bcl2、BAX、胱天蛋白酶3(caspase-3)、细胞色素C(Cyt-C)、Toll样受体4(TLR4)、髓样分化因子88(MyD88)和核因子κB p65(NF-κBp65)的蛋白水平。结果苦参碱处理的胃黏膜损伤大鼠的饮食饮水量、体质量增加,胃黏膜组织的损伤减轻;苦参碱能够显著降低胃黏膜组织VEGF-C和VEGFR3表达,增加Bcl2蛋白水平并降低BAX、caspase-3、Cyt-C、TLR4、MyD88和NF-κBp65蛋白水平。结论苦参碱能够减轻MNNG引起的大鼠胃黏膜损伤,可能与其抑制VEGF-C/VEGFR3和NF-κB/TLR4信号通路有关。