WDR1在便秘型肠易激综合征患者结肠黏膜的表达

目的研究WDR1在便秘型肠易激综合征(irritable bowel syndrome with constipation,IBS-C)患者结肠黏膜的表达情况,探讨肠易激综合征(irritable bowel syndrome,IBS)发病的新机制,为未来研究提供新的思路。方法应用Western blotting和免疫组织化学(IHC)等方法,观察WDR1在IBS-C患者结肠黏膜的表达情况。结果 WDR1在IBS-C组乙状结肠表达量明显高于健康对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 WDR1的表达异常提示IBS-C结肠黏膜可能存在黏膜细胞的骨架、结构完整性或细胞形态与运动的异常。结肠不同部位IBS发病的分子机制可能并不相同。

WDR1与小鼠精神分裂样阴性症状呈正相关性

目的探讨海马CA1区条件性敲除WDR1与小鼠精神分裂样阴性症状的关系,并进一步分析其潜在神经机制。方法利用分子生物学手段,构建海马CA1区的WDR1条件性敲除小鼠[CA1-Cre;WDR1flox/flox(CKO)],结合做窝行为学手段、免疫荧光等实验方法观察分析CA1区WDR1在精神分裂样阴性症状中的作用。结果 (1)脑片免疫荧光的结果显示WDR1在CKO小鼠中敲除成功;(2)做窝实验结果显示:WDR1 CKO小鼠做窝质量明显高于WDR1flox/flox小鼠(WT组);(3)培养海马神经元,免疫荧光染色法显示,CKO小鼠的树突棘密度明显增加。结论实验结果表明敲除WDR1能够增加海马CA1区神经元的树突棘,并提高小鼠做窝能力,提示WDR1与小鼠精神分裂样阴性症状呈正相关。

敲除Wdr1抑制小鼠原代血管平滑肌细胞的迁移和增殖

细胞骨架肌动蛋白在细胞增殖、迁移等生物学过程中发挥重要作用,然而WDR1作为肌动蛋白解聚的主要辅助因子,其在平滑肌细胞中的作用尚无报道。构建Wdr1条件性诱导敲除小鼠模型,进而分离小鼠原代主动脉平滑肌细胞,诱导敲除Wdr1,检测平滑肌细胞的形态、增殖和迁移情况。PCR结果显示,Wdr1f/f;ERT2Cre小鼠模型构建成功。免疫荧光结果表明:在前人基础上改进的分离方法能够高效分离原代平滑肌细胞。细胞形态观察结果显示:Wdr1敲除后对细胞的形态有显著性影响。同时,划痕实验以及CCK8检测结果也表明:Wdr1的条件性诱导性敲除可明显抑制平滑肌细胞的迁移和增殖。Wdr1敲除后平滑肌细胞的形态以及细胞生物学过程的改变提示其与血管疾病的发生和发展有紧密联系,这对揭示血管病理生理过程有重要意义。

敲降WDR1抑制STAT3的核转移调控平滑肌细胞的增殖和迁移

信号转导和转录激活因子3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)的核转运是其发挥生物学功能的前提。WD重复结构域1(WD repeat domain 1,WDR1)作为细胞骨架的调节因子可能影响STAT3的核转运。然而,有关WDR1影响STAT3核转运的分子机制仍不清楚。平滑肌细胞的增殖和迁移是动脉狭窄的主要原因。为了探究在平滑肌细胞中WDR1对STAT3核转运的影响,本研究构建了WDR1稳定敲降的人主动脉血管平滑肌细胞(human aortic vascular smooth muscle cells,HAVSMCs)模型。RT-qPCR和Western印迹结果显示,敲降WDR1,STAT3的活化和表达未见明显改变(P>0.05);核质分离结果表明,与对照组相比,敲降WDR1后STAT3的核质分布受到显著影响。随后的研究结果表明,与对照组相比,STAT3核转运相关的核输入蛋白β(importinβ)表达受到抑制(P<0.05),Ras相关核蛋白(Ras-related nuclear protein,Ran)的核质比显著下降。CCK8和Transwell结果表明,过表达importinβ能够挽救由WDR1敲降引起的HAVSMCs增殖和迁移的抑制。进一步研究结果表明,敲降WDR1导致与Ran核苷酸循环有关的核转运相关因子2(nuclear transport factor 2,NTF2)的表达显著下降(P<0.05)。过表达NTF2后,CCK8和Transwell结果表明,HAVSMCs的增殖和迁移能力得到显著提升(P<0.05)。总结上述结果可见,敲降WDR1通过抑制核输入蛋白β和核转运相关因子2的表达,改变Ran的核质分布,降低STAT3的核转运,进而调控平滑肌细胞的增殖和迁移。

敲除小鼠生殖细胞Wdr1基因对卵巢功能的影响

目的探讨敲除小鼠Wdr1基因对其卵巢功能的影响。方法用条件性基因敲除小鼠Wdr1^fl/fl和生殖细胞特异性启动子驱动的Cre重组酶转基因小鼠构建卵母细胞特异性基因敲除小鼠模型。取出生14天、28天和4个月3个时间点的Wdr1 fl/-;Ddx4-Cre小鼠与对照鼠(每个时间点每种1只),处死。取卵巢,拍照、石蜡连续切片及苏木精-伊红染色(Hematoxylin-Eosin staining,HE)处理,观察卵巢体积变化及各级卵泡的数量。结果14天Wdr1^fl/-;Ddx4-Cre小鼠卵巢体积比对照小鼠略小;HE切片镜下可见原始卵泡、初级卵泡、次级卵泡等,较对照鼠略少。28天及4个月Wdr1^fl/-;Ddx4-Cre小鼠卵巢体积明显小于对照小鼠;HE切片镜下可见各级卵泡明显少于对照小鼠。结论敲除小鼠生殖细胞Wdr1基因对其早期卵巢功能略有影响,随着时间的推移,可导致卵巢早衰。

WDR1在PC9细胞对AZD9291抗性形成中的影响

[目的]探究WDR1在PC9细胞形成对AZD9291耐药中的作用。[方法]构建PC9耐奥西替尼(AZD9291)细胞株(PC9/AR),通过qRT-PCR和Western Blot检测PC9/AR细胞中WDR1的水平;通过siRNA敲降Wdr1后,用CCK8实验检测细胞存活率;在敲降Wdr1的基础上过表达cofilin,通过CCK8检测细胞的存活率;在PC9细胞中过表达Wdr1,在AZD9291的处理下检测细胞存活率。[结果]WDR1和Cofilin在PC9/AR细胞中与正常细胞相比蛋白水平上分别有2.5倍和1.5倍的上升;敲降Wdr1,细胞活性显著下降(P<0.05)。敲降Wdr1后,过表达cofilin,细胞的存活率显著提高(P<0.05)。[结论]WDR1能显著性增强PC9细胞对AZD9291的抗性,并且通过ADF/cofilin介导的肌动蛋白动力学来促进这一过程的。

N7-甲基鸟嘌呤表观遗传修饰参与恶性肿瘤发生发展的研究进展

RNA修饰作为调控RNA功能的一种高度特异性和高效率的方法,近年来已成为表观遗传学领域主要研究方向之一。目前已有100多种不同类型的RNA修饰被发现,包括RNA编辑、剪接、5-帽子和转录内修饰等不可逆修饰及甲基化、羟基化等可逆修饰,二者均在调节RNA功能中起着关键作用。

LncRNA WDR86-AS1调节FOXO3a对滋养细胞增殖和侵袭能力的影响

目的:探究LncRNA WDR86-AS1对叉头框转录因子3a(FOXO3a)与胎盘组织和人早孕绒毛外滋养细胞HTR8/SVneo细胞增殖和侵袭能力的影响及其可能参与子痫前期(PE)发生发展的分子机制.方法:选择子痫前期(PE)孕妇的胎盘组织25例为PE组,同期健康孕妇的胎盘组织25例为对照组,采用免疫组化法、蛋白印迹法及实时荧光定量PCR技术检测两组孕妇胎盘组织中LncRNA WDR86-AS1和FOXO3a的表达水平,并分析二者表达的相关性;沉默HTR8/SVneo细胞中LncRNA WDR86-AS1或FOXO3a的表达,检测FOXO3a的表达,并采用CCK-8和Transwell检测对滋养细胞增殖和侵袭能力的影响.结果:PE组中LncRNA WDR86-AS1 mRNA、FOXO3a mRNA和蛋白表达均高于对照组(P<0.05);FOXO3a在胎盘组织滋养细胞的胞质和胞核均有表达且PE组的表达高于对照组(P<0.05);PE组中LncRNA WDR86-AS1和FOXO3a表达呈正相关(r=0.54,P<0.05);在HTR8/SVneo细胞中沉默LncRNA WDR86-AS1,FOXO3a mRNA和蛋白表达水平下降(P<0.05),细胞的增殖和侵袭能力增加(P<0.05);在HTR8/SVneo细胞中沉默FOXO3a,FOXO3a mRNA和蛋白表达水平下降(P<0.05),细胞的增殖和侵袭能力增加(P<0.05).结论:LncRNA WDR86-AS1可能通过调节FOXO3a的表达影响滋养细胞增殖和侵袭能力,参与PE的发生发展.