Wnt蛋白生成抑制剂2对非小细胞肺癌细胞迁移与侵袭能力的影响

目的:探讨Wnt蛋白生成抑制剂2(the inhibitor of Wnt production 2,IWP2)对非小细胞肺癌细胞迁移与侵袭能力的影响。方法:体外培养非小细胞肺癌H1299和95C细胞,分为对照组(无血清培养基)及实验组(应用10μmol/L IWP2处理24或48 h)。采用划痕实验和未铺Matrigel胶的Transwell迁移实验检测IWP2对细胞迁移能力的影响;铺有Matrigel胶的Transwell侵袭实验检测IWP2对细胞侵袭能力的影响;Western blot实验检测IWP2对非小细胞肺癌细胞中β-catenin及上皮间充质转化(EMT)相关蛋白ZEB1、Snail表达的影响。结果:划痕实验结果显示,经10μmol/L IWP2处理24 h后,与对照组比较,实验组H1299和95C细胞的划痕愈合面积均明显降低(P<0.01);在Transwell迁移实验中,实验组过膜细胞数明显降低(P<0.01);Transwell侵袭实验结果显示,实验组细胞表现出更低的侵袭能力(P<0.01)。Western blot结果表明,H1299和95C细胞在经IWP2作用后,与对照组比较,β-catenin的表达水平分别降低41.3%和36.1%(P均<0.01);IWP2也抑制了EMT相关蛋白ZEB1、Snail的表达,与对照组比较,实验组H1299和95C细胞中,ZEB1的表达水平分别降低51.8%和40.9%,Snail表达水平分别降低43.2%和30.7%,差异均具有统计学意义(P均<0.01)。结论:IWP2抑制β-catenin的表达并抑制非小细胞肺癌细胞发生EMT,从而降低细胞的迁移与侵袭能力。

补阳还五汤对2型糖尿病大鼠肾组织Wnt蛋白表达影响研究

目的探讨补阳还五汤保护2型糖尿病大鼠肾脏的可能作用机制。方法取120只健康雄性SD大鼠,随机选择20只作为空白组,其余100只大鼠采用高脂饲料喂养和STZ注射法建立糖尿病模型。将造模成功大鼠随机分为模型组、阻断剂组、补阳还五汤组、补阳还五汤+阻断剂组,阻断剂组大鼠给予无翅型MMTV整合位点家族/β-连环蛋白(Wnt/β-catenin)信号通路阻断剂XAV-939腹腔注射,补阳还五汤组大鼠给予补阳还五汤灌胃,补阳还五汤+阻断剂组大鼠给予补阳还五汤灌胃并XAV-939腹腔注射,空白组和模型组给予等体积生理盐水灌胃,均连续干预4周。记录各组大鼠干预4周末体重,干预4周末腹主动脉取血,检测各组大鼠空腹血糖(FPG)、血肌酐(SCr)、血尿素氮(BUN)水平;处死各组大鼠后取肾脏,计算肾脏指数,苏木素-伊红染色(HE)观察肾脏病理变化,Western blot法检测肾脏组织中Wnt5a、Wnt4、β-catenin蛋白表达量。结果干预4周后,模型组大鼠体重明显低于空白组(P<0.05),FPG、BUN水平和肾脏指数均明显高于空白组(P均<0.05);肾组织病理观察显示大鼠肾组织结构紊乱,肾小球肥大,基质增生,系膜增厚,部分肾小管细胞出现空泡样变性;肾脏组织中Wnt5a、Wnt4、β-catenin蛋白相对表达量均明显高于空白组(P均<0.05)。与模型组比较,阻断剂组大鼠血清BUN水平、补阳还五汤+阻断剂组大鼠体重和补阳还五汤组大鼠FPG、BUN水平均明显降低(P均<0.05),补阳还五汤+阻断剂组大鼠血清SCr水平明显升高(P<0.05);阻断剂组、补阳还五汤组大鼠体重均明显高于补阳还五汤+阻断剂组(P均<0.05),而SCr水平明显低于补阳还五汤+阻断剂组(P均<0.05)。各给药组大鼠肾脏病理改变均有不同程度改善,补阳还五汤+阻断剂组改善最明显;阻断剂组大鼠肾脏组织中Wnt4蛋白相对表达量和补阳还五汤组、补阳还五汤+阻断剂组大鼠肾脏组织中Wnt5a、Wnt4、β-catenin蛋白相对表达量均明显降低(P均<0.05)。结论补阳还五汤可明显降低糖尿病大鼠血糖,减轻肾脏病变程度,机制可能与其抑制肾组织中Wnt蛋白的高表达有关。

Wnt蛋白分泌机制的研究进展

人类疾病的发生发展是多因素、多环节共同参与的复杂过程,其中涉及多条复杂的信号转导通路.近年来,关于Wnt信号转导通路的研究越来越受到人们的重视.Wnt/β-catenin信号通路是人体内一条极为重要的信号转导途径,与胚胎发育密切相关,对细胞的生长、增殖、分化及凋亡等生物学行为具有重要的调控作用.Wnt信号通路调节细胞生长、发育和分化的多个重要环节,在正常情况下对胚胎发育和成人的部分组织形成和功能发挥起着重要作用,而当该途径紊乱异常时,会导致多种疾病的发生.随着对该信号转导通路的研究逐渐深入,现比较明确的Wnt信号转导通路中的靶基因包括细胞增殖调控基因、发育控制基因和与肿瘤发生相关基因,如在细胞周期中能加速G1/S期进程的c-myc、cyclin D1及抗细胞凋亡的基因survivin 等.Wnt信号通路紊乱与众多人类肿瘤的发生密切相关,目前有十几种目前已知的高发性癌变都源于Wnt信号转导途径的失调[1-4].

Fosl-1、β-catenin及Wnt蛋白在儿童肾母细胞瘤中的表达及临床意义

目的检测Fos样抗原1(Fosl-1)、β-连环蛋白(β-catenin)及Wnt蛋白在儿童肾母细胞瘤中的表达情况,结合临床资料,探讨其与儿童肾母细胞瘤发生、转移及预后的关系。方法采用免疫组化法检测57例肾母细胞瘤及癌旁组织中Fosl-1、β-catenin及Wnt蛋白的表达。分析三种蛋白与患者临床资料的关系。采用Cox多因素回归分析探讨它们的表达与患者预后的关系。结果Fosl-1、β-catenin及Wnt蛋白在癌组织中的高表达、异常表达率均高于癌旁组织(P<0.05)。在TNM分期、转移情况等临床特征下,Fosl-1高表达与Wnt蛋白异常表达在癌组织、癌旁组织中均有差异(P<0.05);在肿瘤转移情况下,β-catenin异常表达在癌旁组织中有差异(P<0.05)。Cox多因素回归分析示转移情况、β-catenin异常表达对肾母细胞瘤患儿预后有独立影响(P<0.05)。生存曲线示Fosl-1高表达、β-catenin及Wnt异常表达均降低肾母细胞瘤患儿生存率。结论Fosl-1、β-catenin及Wnt蛋白可能参与肾母细胞瘤的发生转移,并影响其预后,为肾母细胞瘤的诊治提供新的思路及理论基础。

SLC7A11对乳腺癌活性、细胞自噬、恶性行为及VEGF/Wnt蛋白的影响机制

目的探究溶质转运蛋白家族7成员(SLC7A)11对乳腺癌细胞活性、自噬、恶性行为及血管内皮生长因子(VEGF)/Wnt蛋白的影响机制。方法实时荧光定量-聚合酶链反应(PCR)法检测正常乳腺上皮细胞及4种乳腺癌细胞系中SLC7A11 mRNA表达,选择SLC7A11表达最高的细胞系,将其分为乳腺癌细胞(A)组、乳腺癌细胞+SLC7A11 shRNA-CTR(B)组、乳腺癌细胞+SLC7A11 shRNA(C)组,膜联蛋白(Annexin)Ⅴ/异硫氢酸荧光素(FITC)/碘化丙啶(PI)双标记法染色法检测细胞凋亡,噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖,小室法检测细胞恶性行为,Western印迹法检测自噬相关蛋白及VEGF/Wnt蛋白表达。结果乳腺癌细胞系中的SLC7A11 mRNA表达量均显著高于正常乳腺上皮细胞系HMEC,其中,MCF7的SLC7A11 mRNA表达量最高(P<0.05),因此选取MCF7作为此次实验细胞;A组与B组相比,细胞凋亡、增殖率、侵袭及迁移数量、微管相关蛋白1轻链(LC)3、自噬相关基因(Beclin)1、VEGF、Wnt1、Wnt3蛋白无明显差异(P>0.05);与B组相比,C组凋亡率、LC3、Beclin1蛋白表达明显升高(P<0.05),增殖率、迁移侵袭数量、VEGF、Wnt1、Wnt3蛋白明显降低(P<0.05)。结论下调SLC7A11可显著改善乳腺癌细胞活性,促进细胞自噬,并抑制细胞恶性行为,抑制VEGF/Wnt蛋白表达。

Wnt/β联蛋白信号通路在纤维化疾病中的研究进展

纤维化疾病涉及肝脏、肺、皮肤、肾脏、心脏等器官,以器官组织内纤维结缔组织增多、实质细胞减少为主要病理改变,持续进展可致器官结构破坏和功能减退,甚至导致器官衰竭,严重威胁人类生命健康。近年认为,Wnt/β联蛋白(β-catenin)信号通路可能在多种组织纤维化进展过程中发挥调控作用,因此调控Wnt/β-catenin信号通路可能有助于减缓纤维化疾病进展或逆转纤维化进程,但目前其具体作用机制尚不清楚。未来,深入研究Wnt/β-catenin信号通路在纤维化疾病中的作用机制及其调控靶点将为纤维化疾病的临床治疗提供新策略。

针刺通过调节Wnt/β-联蛋白信号通路治疗脑梗死的研究进展

Wnt信号通路对干细胞的增殖分化有决定性作用,针刺在治疗缺血性脑卒中的研究越来越充分、确切、多样,Wnt/β-联蛋白信号通路是针刺改善脑卒中损伤的重要机制之一。本文总结了针刺通过该信号通路改善梗死后损伤的现有研究,阐明了相关机制和靶点,为脑卒中的治疗提供了新的思路。

松果菊苷对动脉粥样硬化血管钙化小鼠Wnt/β-连环蛋白信号通路的影响

目的探究松果菊苷对动脉粥样硬化血管钙化小鼠Wnt/β-catenin信号通路的影响。方法将48只7周龄雄性ApoE-/-小鼠采用随机数字表法分为6组,每组8只:分别为模型组,松果菊苷(ECH)12.5、25、50 mg/kg组,辛伐他汀片(Sta)组和对照组,依据不同分组建模及给药。观察小鼠主动脉组织形态学变化,检测小鼠血清中生化指标水平,采用实时荧光定量PCR法检测小鼠主动脉组织β-连环蛋白(β-catenin)mRNA的表达水平,采用Western Blot法检测小鼠主动脉组织β-catenin、Wnt3a、LDL受体相关蛋白5(LRP5)及骨形态发生蛋白2(BMP-2)蛋白表达水平,采用免疫组化法检测小鼠主动脉组织LRP5蛋白表达水平。结果ECH 25、50 mg/kg组及Sta组小鼠主动脉中膜较模型组明显变薄,弹力纤维排列整齐,斑块明显缩小。ECH 25、50 mg/kg组和Sta组TG、TC、LDL-C水平均低于模型组,差异均有统计学意义(均P<0.01)。ECH 12.5、25、50 mg/kg组和Sta组HDL-C水平均高于模型组,差异均有统计学意义(均P<0.01)。模型组小鼠主动脉β-cateninmRNA表达水平高于对照组,ECH 12.5、25、50 mg/kg组及Sta组β-cateninmRNA表达水平均低于模型组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。模型组小鼠模型组小鼠主动脉β-catenin、Wnt3a、LRP5及BMP-2蛋白表达水平高于对照组,ECH 25、50 mg/kg组及Sta组小鼠主动脉β-catenin、Wnt3a、LRP5及BMP-2蛋白表达水平均低于模型组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。模型组小鼠主动脉LRP5蛋白表达水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。ECH 12.5、25、50 mg/kg组及Sta组LRP5蛋白表达水平均低于模型组,差异均有统计学意义(均P<0.01)。结论ECH可以有效改善小鼠动脉粥样硬化血管钙化的发生与发展,其机制可能与调控Wnt/β-catenin信号通路相关。

Wnt4重组蛋白对炎症状态下成骨细胞的影响

目的建立体外炎性环境,对比研究Wnt4重组蛋白在炎症状态下对成骨细胞分化及矿化能力的影响,初步探讨Wnt重组蛋白在炎症状态下调控成骨细胞分化的作用。方法通过酶消法从小鼠颅顶骨中提取成骨细胞,CCK8法检测不同浓度LPS、Wnt4重组蛋白对小鼠成骨细胞增殖分化的影响,设计浓度梯度,根据检测结果确定所需的最适浓度。体外成骨诱导培养,按是否添加LPS、Wnt4重组蛋白分为对照组、LPS组、Wnt4组、LPS+Wnt4组4个组。培养7 d后比较碱性磷酸酶(ALP)活性。培养21 d后应用茜素红染色法比较细胞矿化能力。结果经过分组培养7 d后,与LPS组比较,LPS+Wnt4组ALP活性明显升高,P<0.05。第21天的茜素红染色结果表明,LPS+Wnt4组矿化能力高于LPS组,P<0.05。结论Wnt4重组蛋白(0.05μg/mL)对炎症状态下的成骨细胞的分化具有正向调节的作用。

薄型子宫内膜不孕症患者Wnt/β-链蛋白信号通路相关基因水平及临床意义

目的分析薄型子宫内膜不孕症患者Wnt/β-链蛋白信号通路相关基因水平及临床意义。方法选取2020年4月至2021年4月在本院接受治疗的46例薄型子宫内膜不孕症患者作为观察组。同期选择非薄型子宫内膜造成不孕症患者46例作为对照组。采用腹部超声观察两组患者子宫内膜厚度及形态。采用多普勒超声检查子宫螺旋动脉收缩期峰值流速(PSV)、搏动指数(PI)与阻力指数(RI)。采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清雌二醇(E2)、孕酮(P)水平和促卵泡成熟激素(FSH)。Western Blot检测内膜组织血管内皮生成分子(VEGF)、白血病抑制因子(LIF)、E-钙粘蛋白、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、β-链蛋白水平。结果观察组子宫内膜厚度明显小于对照组(P<0.05);观察组A型子宫内膜比例明显低于对照组,C型子宫内膜比例明显高于对照组(P<0.05)。观察组患者血清E2、P水平明显低于对照组,FSH水平明显高于对照组(P<0.05)。观察组患者PSV明显低于对照组,PI和RI明显高于对照组(P<0.05)。观察组VEGF、LIF蛋白水平明显低于对照组,E-钙粘蛋白、MMP-9、β-链蛋白水平明显高于对照组(P<0.05)。结论薄型子宫内膜不孕症患者子宫内膜容受性较差,血流量较差,Wnt/β-链蛋白可能参与调节患者子宫内膜的生长发育。

利多卡因调控Wnt/β-连环蛋白轴对胃癌细胞化疗敏感性的影响

目的探讨利多卡因调控Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)轴对胃癌细胞化疗敏感性的影响。方法将对数生长期的人胃癌细胞SGC-7901接种于96孔板中,用不同浓度利多卡因(0、10、50、100、150、200μmol/L)处理24 h,比较不同浓度下的细胞活力。将对数生长期SGC-7901细胞分为对照组(Control组)、顺铂组(Cisplatin组)、利多卡因低浓度组(Lido-L组)、利多卡因中浓度组(Lido-M组)、利多卡因高浓度组(Lido-H组)、利多卡因高浓度+Wnt/β-catenin信号通路激活剂SKL2001组(Lido-H+SKL2001组),通过5-乙炔基-2′脱氧尿嘧啶核苷(EdU)细胞增殖检测、Transwell法和划痕愈合实验分别比较各组细胞增殖、侵袭和迁移能力,使用TUNEL试剂盒检测各组细胞凋亡情况,并检测各组细胞凋亡、上皮-间质转化、Wnt/β-catenin通路相关蛋白的表达情况。结果与0μmol/L利多卡因相比,50、100、150、200μmol/L利多卡因处理的SGC-7901细胞活力均降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与Control组相比,Cisplatin组EdU阳性率、细胞侵袭数、划痕愈合率和波形蛋白(Vimentin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、B细胞淋巴瘤相关蛋白-2(Bcl-2)、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、散乱蛋白2(DVL2)、Wnt家族成员3a(Wnt3a)、β-连环蛋白(β-catenin)表达降低,细胞凋亡率升高,E-钙黏蛋白(E-cadherin)、B细胞淋巴瘤-2相关X蛋白(Bax)、裂解半胱天冬酶-3(Cleaved-Caspase-3)表达增加,差异有统计学意义(P<0.05);与Cisplatin组相比,Lido-L组、Lido-M组、Lido-H组EdU阳性率、细胞侵袭数、划痕愈合率和Vimentin、N-cadherin、Bcl-2、Cyclin Dl、DVL2、Wnt3a、β-catenin表达逐渐降低,细胞凋亡率逐渐升高,E-cadherin、Bax、Cleaved-caspase-3表达逐渐增加,差异有统计学意义(P<0.05);与Lido-H组相比,Lido-H+SKL2001组EdU阳性率、细胞侵袭数、划痕愈合率和Vimentin、N-cadherin、Bcl-2、Cyclin Dl、DVL2、Wnt3a、β-catenin表达升高,细胞凋亡率和E-cadherin、Bax、Cleaved-caspase-3表达降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论利多卡因可能通过抑制Wnt/β-catenin轴的激活而增强胃癌细胞化疗敏感性。

Wnt/β-连环蛋白信号通路在部分器官缺血再灌注损伤中的研究进展

缺血再灌注损伤是发生在许多器官和疾病中的病理过程,主要包括两个阶段,一是缺血期缺氧诱导的细胞损伤,二是血流恢复后所引起的一系列级联反应。缺血再灌注损伤可加重细胞和组织损伤。Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路在细胞增殖、分化、凋亡过程中起重要作用,是一个高度保守的信号级联通路。越来越多的研究发现,激活Wnt/β-catenin信号通路可减轻缺血再灌注损伤。本文就Wnt/β-catenin信号通路在部分器官缺血再灌注损伤中的研究进展进行综述。

沉默CDC20基因通过抑制Wnt/β-连环蛋白信号通路对子宫内膜癌细胞增殖和细胞周期的影响

目的:探讨细胞分裂周期蛋白20 (CDC20)对子宫内膜癌(EC)细胞增殖和细胞周期的影响,并阐明其作用机制。方法:实时荧光定量PCR (RT-qPCR)和Western blotting法检测人子宫内膜基质T-HESC细胞和人EC细胞(KLE、RL95-2、ZJB-ENC1和ECC-1细胞)中CDC20 mRNA及蛋白表达水平,选择RL95-2细胞用于后续实验。将CDC20 shRNA干扰慢病毒转染至RL95-2细胞中,分为对照组、sh-NC组(感染阴性对照慢病毒)、sh-CDC20组(感染CDC20 shRNA干扰慢病毒)、sh-NC+SM04690组(感染阴性对照慢病毒后,加入64 nmol·L^(-1) Wnt/β-连环蛋白信号通路抑制剂SM04690干预48h)和sh-CDC20+SM04690组(感染CDC20shRNA干扰慢病毒后,加入64 nmol·L^(-1) SM04690干预48 h)。RT-qPCR法和Western blotting法检测不同细胞中CDC20 mRNA和蛋白表达水平,CCK-8法检测各组细胞增殖活性,BrdU法检测各组细胞中BrdU阳性细胞百分率,流式细胞术检测各组G2/M期细胞百分率,Western blotting法检测各组细胞中β-连环蛋白、c-Myc和细胞周期素D1蛋白表达水平。结果:与T-HESC细胞比较,KLE、RL95-2、ZJB-ENC1和ECC-1细胞中CDC20 mRNA和蛋白表达水平均明显升高(P<0.05),其中RL95-2细胞中CDC20 mRNA和蛋白表达水平最高。与sh-NC组比较,sh-CDC20组和sh-NC+SM04690组细胞增殖活性和BrdU阳性细胞百分率明显降低(P<0.05),G2/M期细胞百分率明显升高(P<0.05),细胞中β-连环蛋白、c-Myc和细胞周期素D1蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。与sh-CDC20组比较,sh-CDC20+SM04690组细胞增殖活性和BrdU阳性细胞百分率明显降低(P<0.05),G2/M期细胞百分率明显升高(P<0.05),细胞中β-连环蛋白、c-Myc和细胞周期素D1蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。结论:EC细胞中CDC20呈高表达,沉默CDC20可能通过调控Wnt/β-连环蛋白信号转导诱导RL95-2细胞G2/M期阻滞,抑制细胞增殖。

组织Wnt/β-catenin通路蛋白表达水平与卵巢子宫内膜异位症组织恶变的关系分析

目的探讨组织Wnt/β-catenin信号通路蛋白表达水平与卵巢子宫内膜异位症(OE)组织恶变的关系。方法选取2016年10月至2018年10月在郑州人民医院就诊的46例子宫内膜异位症相关性卵巢癌(EAOC,即OE恶变)患者为EAOC组,另取同期入院的34例OE患者为OE组,采用免疫组化法检测两组患者组织中β-catenin和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达水平,分析组织中β-catenin和MMP-9表达水平与临床病理特征的关系以及与预后的关系。结果EAOC组β-catenin阳性表达率为63.04%,高于OE组的23.53%,MMP-9阳性表达率为69.57%,高于OE组的44.12%(P<0.05);β-catenin的阳性表达率在不同分化程度、淋巴结转移、临床分期、铂敏感性的EAOC组织中比较,差异具有统计学意义(P<0.05);MMP-9的阳性表达率在不同分化程度、淋巴结转移、临床分期EAOC组织中比较,差异具有统计学意义(P<0.05);β-catenin阴、阳性患者3年生存率分别是68.97%(20/29)、35.29%(6/17),差异有统计学意义(χ^(2)=4.945,P=0.026),MMP-9阴、阳性患者3年生存率分别是68.75%(22/32)、28.57%(4/14),差异有统计学意义(χ^(2)=6.398,P=0.011)。结论Wnt/β-catenin信号通路可能是OE恶变的重要途径,其中,β-catenin和MMP-9均与OE恶变密切相关,这两个指标的阳性表达可以提示EAOC患者预后不良。

苓桂术甘汤对心梗后慢性心衰模型大鼠心肌纤维化及心肌组织Wnt1/β-catenin信号通路蛋白表达的影响

目的:观察苓桂术甘汤对心肌梗死后慢性心衰大鼠心肌纤维化及心肌组织Wnt/β-catenin通路相关分子表达的影响,探讨其抑制心肌纤维化的作用和可能机制。方法:采用冠状动脉左前降支结扎法复制心肌梗死后慢性心衰大鼠模型;造模24 h后,连续干预4 w。采用小动物彩色多普勒超声成像系统检测大鼠LVIDd、LVIDs、LVEF、LVFS;HE及Masson染色观察大鼠心肌组织病理学变化;ELISA法检测大鼠血清CK-MB、cTnT及心肌组织CollagenⅠ、CollagenⅢ水平;Western Blot检测大鼠心肌组织Wnt1、GSK-3β、p-GSK-3β、β-catenin、α-SMA及细胞核β-catenin蛋白表达;RT-qPCR检测大鼠心肌组织β-catenin、MMP-9 mRNA表达。结果:与假手术组比较,模型组大鼠LVIDd、LVIDs水平显著升高,LVEF、LVFS水平显著降低(P<0.01),心肌组织出现明显的心肌细胞排列紊乱,心肌纤维部分断裂及间质纤维化等病理变化,血清CK-MB、cTnT和心肌组织CollagenⅠ、CollagenⅢ含量及CollagenⅠ/CollagenⅢ比值显著升高,心肌组织细胞质GSK-3β蛋白表达显著降低,心肌组织α-SMA蛋白及细胞质Wnt1、β-catenin、p-GSK-3β蛋白和细胞核β-catenin表达显著升高,心肌组织β-catenin、MMP-9 mRNA表达显著升高(P<0.01)。与模型组比较,苓桂术甘汤干预4 w后,上述指标均显著改善(P<0.05或P<0.01)。结论:苓桂术甘汤能减轻心肌梗死后慢性心衰大鼠心肌损伤并抑制心肌纤维化,改善CHF大鼠心功能,其作用机制与其抑制心肌组织Wnt/β-catenin信号通路激活有关。

坚骨胶囊调控Wnt/β-联蛋白信号通路对骨质疏松症模型大鼠的作用及机制

目的 基于Wnt/β-联蛋白(β-catenin)信号通路探讨坚骨胶囊对骨质疏松症模型大鼠的作用及机制。方法 将50只Wistar雌性大鼠随机分为正常对照组,模型对照组,坚骨胶囊高、中、低剂量组[2 184,1 092,546 mg/(kg·d)],各10只。除正常对照组外,其余各组大鼠均灌胃100 mg/kg维甲酸复制骨质疏松症模型,每天1次,连续30 d。坚骨胶囊高、中、低剂量组大鼠灌胃相应剂量药物,正常对照组和模型对照组大鼠均灌胃纯化水8 mL/kg,每天1次,连续30 d。检测各组大鼠血清的生化指标Ca2+、Mg2+、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、总抗氧化能力(T-AOC)、超氧化物歧化酶(SOD)、碱性磷酸酶(ALP)水平;利用Micro-CT仪记录骨微结构,并检测大鼠股骨微结构指标[远心端感兴趣区结构模型指数(SMI)、骨密度(BMD)、骨体积分数(BV/TV)、骨表面与骨体积比(BS/BV)、骨小梁数量(TbN)、骨小梁厚度(TbTh)、骨小梁分离度(TbSp)];采用免疫印迹(Western blot)法检测股骨组织中细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、β-catenin、低密度脂蛋白受体相关蛋白5(LRP5)、淋巴增强因子(LEF)的蛋白表达水平。结果 MicroCT仪检测结果显示,坚骨胶囊高剂量组大鼠骨小梁结构最完整,与正常对照组股骨远心端骨小梁多呈板状、致密均匀接近。与模型对照组比较,坚骨胶囊中、高剂量组大鼠血清中MDA,GSH-Px,SOD水平均明显升高(P <0.05),ALP水平均明显降低(P <0.05);坚骨胶囊高剂量组大鼠股骨微结构中BMD,BV/TV,BS/BV,TbN,TbTh均明显升高,SMI和TbSp均明显降低(P <0.05);坚骨胶囊高剂量组大鼠股骨组织中LRP5,β-catenin,LEF,CyclinD1蛋白表达均明显上调(P <0.05)。结论 坚骨胶囊能预防维甲酸诱导的大鼠骨质疏松,其作用机制可能与激活Wnt/β-catenin信号通路及其基因蛋白表达有关。

基于Wnt/β-catenin信号通路治疗阿尔茨海默病的中医药研究进展

阿尔茨海默病(AD)是导致痴呆最主要的原因,其病理机制较复杂,治疗难度大,是全球范围内重大公共健康问题。发病机制复杂,迄今尚未完全阐明其发病机制,目前认为其主要病理特征包括细胞凋亡、氧化应激、神经炎症、自噬功能障碍、线粒体功能障碍、tau蛋白过度磷酸化和淀粉样蛋白斑块沉积等,临床表现为记忆力减退、认知障碍以及人格改变等,给患者本身、家庭、社会造成严重影响。目前临床上西药常用乙酰胆碱酯酶抑制剂治疗AD,但存在临床疗效欠佳、价高高昂等诸多缺点。研究显示,中医药治疗AD具有临床疗效显著、不良反应少、价格低廉等诸多优势,越来越多的研究者使用中医药治疗AD,取得一定进展。Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路属于保守信号通路,对生命发生发展起重要作用。研究证明,Wnt/β-catenin信号通路对治疗AD有重要作用。通过大量查阅文献,对Wnt/β-catenin信号通路概况及其在AD中的作用,中药单体及单味中药提取物和中药复方通过减少Aβ沉积、神经元损伤及神经毒性等方式来治疗AD的研究现状进行综述,以期为中医药治疗AD提供新的方法和思路。

基于Wnt/β-联蛋白信号通路探讨坚骨胶囊对骨质疏松症模型大鼠骨代谢的影响

目的基于Wnt/β-联蛋白(β-catenin)信号通路探讨坚骨胶囊对骨质疏松症模型大鼠骨代谢的影响。方法将48只Wistar大鼠随机分为空白对照组(A组,等量生理盐水),模型对照组(B组,等量生理盐水),仙灵骨葆组[C组,468 mg/(kg·d)],坚骨胶囊高、中、低剂量组[D_(1)组、D_(2)组、D_(3)组,2184,1092,546 mg/(kg·d)],各8只。A组大鼠每日灌服纯化水;B组、C组、D_(1)组、D_(2)组、D_(3)组大鼠每日灌服维甲酸100 mg/kg,连续4周,以复制大鼠骨质疏松症模型。建模成功后,均灌胃相应药物或生理盐水,每日1次,连续8周。检测大鼠股骨结构模型指数(SMI)、骨密度(BMD)、骨表面积与组织体积比(BV/TV)、骨表面积与骨体积比(BS/BV)、骨小梁数量(Tb.N)、骨小梁厚度(Tb.Th)、骨小梁分离度(Tb.Sp);采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测大鼠血清中降钙素(CT)、抗酒石酸酸性磷酸酶(TRACP)、骨保护素(OPG)、生长激素(GH)的表达水平;采用免疫印迹(Western blot)法检测大鼠股骨组织中Wnt1、β-catenin、糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)、骨形成蛋白-2(BMP-2)的蛋白表达水平。结果与B组比较,D_(1)组大鼠SMI和Tb.Sp均显著降低(P<0.01),BMD,BV/TV,BS/BV,Tb.N,Tb.Th均显著升高(P<0.05);血清中CT,OPG,GH水平均显著升高(P<0.05),TRACP水平显著降低(P<0.01);股骨组织中Wnt1,β-catenin,GSK-3β,BMP-2蛋白表达水平均显著升高(P<0.01)。结论坚骨胶囊可通过上调Wnt1,β-catenin,GSK-3β,BMP-2蛋白表达影响骨质疏松症模型大鼠的骨代谢,发挥改善骨质疏松的作用,其作用机制可能与Wnt/β-catenin信号通路相关。

Wnt/β联蛋白信号通路在结直肠癌中的研究进展

Wnt信号通路参与调控生命体多种功能,如胚胎发育、干细胞维持等,其失调也与肿瘤的发生发展、复发转移、治疗抵抗等密切相关。结直肠癌的发生发展是一个复杂的多步骤过程,受基因突变和表观遗传失调等因素的调控,Wnt信号通路的异常激活对结直肠癌的发生发展起关键的驱动作用,异常激活的Wnt信号通路可促进结直肠癌的发生、增殖、转移以及放化疗抵抗等。因此,探寻结直肠癌的基因突变以及表观遗传的相关治疗靶标对结直肠癌患者的治疗具有重大意义。

基于Wnt/β-连环蛋白信号通路和炎症反应探讨通络益肾温阳方对糖尿病肾病大鼠的干预机制

目的基于Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路及炎症反应探讨通络益肾温阳方对糖尿病肾病大鼠的干预机制。方法(1)将60只大鼠随机分为对照组、模型组和观察组,每组20只。模型组和观察组采用单次腹腔注射大剂量链脲佐菌素的方法构建糖尿病肾病大鼠模型。建模成功后,观察组给予通络益肾温阳方灌胃处理,模型组和对照组给予生理盐水灌胃处理。干预4周后,测量3组大鼠体重及肾重,检测血清尿素氮、血清肌酐、空腹血糖、24 h尿蛋白、血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)、血清转化生长因子β1(TGF-β1)水平,以及肾组织Wnt4、β-catenin的mRNA和蛋白表达水平。(2)通过中药系统药理学数据库与分析平台检索通络益肾温阳方主要中药(山茱萸、山药、炙黄芪、熟地黄)的活性成分,根据口服生物利用度及药物相似性筛选出主要活性成分。选取β-catenin作为受体,选取山茱萸、山药、炙黄芪、熟地黄主要活性成分中口服生物利用度最大的成分(远华蟾蜍精、薯蓣皂苷元、异黄烷酮、豆甾醇)作为配体,运用PyMOL、AutoDock Vina等软件进行分子对接,测定结合能。结果(1)对照组、观察组和模型组大鼠体重依次降低,肾重及血清尿素氮、血清肌酐、空腹血糖、24 h尿蛋白、血清TNF-α、血清TGF-β1水平依次升高,肾组织Wnt4、β-catenin mRNA和蛋白的表达水平也依次升高(均P<0.05)。(2)通络益肾温阳方中,山茱萸的主要活性成分有20个、山药的主要活性成分有16个、炙黄芪的主要活性成分有15个、熟地黄的主要活性成分有2个。分子对接分析结果显示,远华蟾蜍精、异黄烷酮、豆甾醇、薯蓣皂苷元与β-catenin的结合能分别为-5.28、-6.40、-5.67、-5.33。结论通络益肾温阳方可有效改善糖尿病肾病大鼠的肾功能,其可能是通过抑制Wnt/β-catenin信号通路及炎症反应,从而减轻肾损伤。