XW630对大鼠成骨细胞雌激素受体基因表达的影响

探讨抗骨质疏松新化合物 XW6 30促进成骨作用的机理。从 SD大鼠颅骨中分离培养成骨细胞 ,首次采用具有高灵敏度的逆转录 -聚合酶链反应 (RT- PCR)技术直接从大鼠成骨细胞中检测雌激素受体 m RNA的表达。结果表明 ,XW6 30具有促进成骨细胞 ERm RNA表达的作用 ,且呈时间依赖性。在相同浓度 (10 - 6 mol/ L)条件下 ,XW6 30作用强于四环素加哌嗪雌酮及单纯雌酚酮。XW6 30可能通过对

XW630促进去势大鼠骨组织中雌激素受体表达的研究

我们首次采用现代放免分析技术和免疫组织化学方法 ,对去势大鼠骨组织中 ER的表达进行了定量和定位研究。结果显示 :XW6 30具有促进去势大鼠骨组织中 ER含量及其免疫表达的作用 ,其作用优于雌酚酮 ;OVX大鼠骨组织中 ER表达随时间推移而降低 ,提示 ER的表达依赖于雌激素的存在。

XW630促进去势大鼠骨组织成骨作用的实验研究

目的 :探讨抗骨质疏松新药XW6 30在去势大鼠骨组织成骨中的作用。方法 :3月龄SD雌性大鼠 36只 ,随机分为 4组 ,即Sham组、OVX组、OVX加雌酚酮组和OVX加XW6 30组 ,每组 3只。术后 30、6 0、90d各处死 1组动物 ,取两侧胫骨作HE和SEM组织学观察 ,取 1侧股骨作三点弯曲力学强度测试。结果 :HE和SEM观察发现 ,OVX组胫骨干骺端术后 30d即呈骨丢失状态 ,并持续至整个观察期。应用雌酚酮和XW6 30治疗后 ,干骺端骨小梁出现不同程度的骨修复现象 ,整个观察期内XW6 30组成骨活动明显较雌酚酮治疗组活跃。整个观察期内 ,OVX组股骨三点弯曲强度呈下降趋势 ,与Sham组存在显著性差异 (P <0 0 1) ,两个治疗组骨强度则呈上升趋势 ,与OVX组存在显著性差异 (P <0 0 5和P <0 0 1)。结论 :XW6 30能有效地促进去势大鼠骨组织的成骨和预防骨质疏松性骨折的发生。

从生物力学角度探讨XW630对实验性骨折愈合的影响

探讨四环素雌酚酮（ＸＷ６３０）是否对实验性骨折愈合具有促进作用。在１２０只新西兰大白兔实验性桡骨骨折愈合过程中给予ＸＷ６３０、雌酚酮（Ｅ２）、四环素（Ｔ）和生理盐水（对照组Ｃ）治疗；采用肌肉注射与伤口局部两种给药方式。测定了骨折术后３０天、６０天和９０天愈合骨的弯曲和压缩强度，以及骨折局部骨痂中胶原和钙的含量。结果显示：在各不同时段，ＸＷ６３０肌注组兔桡骨的抗弯能力与抗压能力明显高于其它各组。在骨折后３０天，其弯曲破坏极限的增加最为明显，分别比Ｃ组、Ｅ２组和Ｔ组高出８０％、７６％和６９％。而在骨折后９０天，ＸＷ６３０肌注组的桡骨弯曲破坏极限已达正常的８０％，分别比Ｃ组、Ｅ２和Ｔ组高出３０％、３４％和１９５％。骨痂胶原含量和骨钙含量的变化与骨抗弯曲能力的变化一致。说明ＸＷ６３０肌肉注射具有明显的促进骨折愈合的作用。采用局部给药方式其各组间无明显差异。在同一时段相同药物组中，肌肉注射给药方式对骨折愈合的作用明显优于局部给药方式。

XW630对大鼠成骨细胞TGF-β_1和Ⅰ型胶原基因表达调控的研究

目的 :探讨抗骨质疏松新药XW6 30促进成骨作用的机理。方法 :提取并标记制备TGF_β1和ColⅠ基因的cDNA探针 ,将 3种不同药物作用于大鼠成骨细胞 2 4、72h后 ,提取细胞总RNA ,并与TGF_β1和ColⅠ基因的cDNA探针进行狭缝杂交。结果 :XW6 30具有促进大鼠成骨细胞中TGF_β1和ColⅠmRNA表达的作用 ,在相同浓度 (10 -6mol/L)下 ,其作用优于四环素加哌嗪雌酮和单纯雌酚酮 (P <0 0 5 )。结论 :XW6

XW630对大鼠成骨细胞雌激素受体mRNA表达的调控研究

目的：探讨抗骨质疏松新化合物XW630促进成骨作用的机理。方法：从SD大鼠颅骨中分离培养成骨细胞，首次采用具有较高灵敏度的逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）技术直接从大鼠成骨细胞中检测雌激素受体mRNA的表达。结果：XW630具有促进成骨细胞ERmRNA表达的作用。且呈时间依赖性，在相同浓度（10^6mol/L)条件下，XW630作用强于四环素加哌嗪雌酮及单纯雌酚酮（P<0.05)。结论：XW630能有效地促进成骨细胞ERmRNA的表达。并可能通过ER在骨代谢中起作用。

化合物XW630对成骨细胞的作用

为探讨新合成化合物ＸＷ６３０对成骨细胞的作用，采用噻唑蓝比色法（ＭＴＴ）法和碱性磷酸酶（ＡＬＰ）测定法观察了ＸＷ６３０对体外培养的成熟大鼠头盖骨成骨细胞的增殖和ＡＬＰ的表达，并用抗酒石酸磷酸酶染色法观察ＸＷ６３０对体外培养的破骨细胞形成的影响。结果显示：ＸＷ６３０有刺激成骨细胞增殖，提高ＡＬＰ活性及抑制甲状旁腺素促进破骨细胞形成的作用，从而表明ＸＷ６３０有可能成为治疗骨质疏松症的有效药物。

EFFECTS OF XW630 ON BONE FORMATION IN OVARIECTOMIZED RATS AND IN HUMAN OSTEOBLAST-LIKE CELLS

To study the effects of XW630 on bone formation in overiectomized(OVX) rats and in human osteoblast like cell line TE85. [WT5”BX]Method.[WT5”BZ] Bone histomorphometric analysis was performed with undecalcified bone sections and tetracycline intraperitoneally labeling. [WT5”BX]Results.[WT5”BZ] Compared with that of OVX rats, the static data of trabecular bone volume(TBV)/ total tissue volume(TTV), TBV/sponge bone volume(SBV) and mean trabecular plate density (MTPD) were enhanced while mean trabecular plate spacing(MTPS) decreased after treated with XW630 for 13w. The dynamic data of single labeled surface [Sfract(s)], double labeled surface[Sfract(d)],Sfract(d+1/2s),trabecular osteoid surface(TOS), and bone formation rate in tissue level (Svf) were increased and osteoid maturation period (OMP) shortened in XW630 group. In osteoblast like cells, both 3H thymidine incorporation and cell count increased after treated with XW630 for 48. Treated with XW630 for 12～18h,inducible nitric oxide synthase(iNOS) activity and cGMP content increased in time dependent manners. [WT5”BX]Conclusions.[WT5”BZ] XW630 enhanced bone activation frequency and increased trabecular connectivity, stability, and strength. The cellular mechanism related to effects of XW630 on bone formation in ovariectomized rats.

用培养成熟大鼠头盖骨的成骨细胞筛选药物

用周龄在25～35Wistar大鼠的头盖骨，经酶消化处理后，在10％胎牛血清的F－12培养液中培养一周，分别加入地塞米松（Dex）、17β-雌二醇（E2）和新型抗骨质疏松药物XW630，利用相差显微镜动态观察成骨细胞（AOB）骨形成情况，连续观察14～20d，经VonKossa染色，用BioMultiScaner－400（BMS－400ToYoSokki）测定骨结节表面积，作为骨形成定量指标，并作统计学分析，结果表明Dex，XW360有促骨形成作用，E2无促骨形成作用。

四环素-雌酮对去卵巢山羊髂骨的有利作用

目的切除山羊双侧卵巢(OVX山羊)建立绝经后骨质疏松(PMO)动物模型,应用骨组织形态计量学方法观察OVX山羊对四环素-雌酮(XW630)的治疗反应。方法31只雌性山羊随机分成4组,即正常对照组、假手术组、OVX术后6个月组、XW630治疗6个月组,制备山羊髂骨不脱钙骨切片,应用骨组织形态计量学方法,观察各组髂骨骨计量学参数的变化。结果正常对照组和假手术组比较各参数间差异无显著性。与正常对照组和假手术组比较,OVX术后6个月组的骨小梁体积比全部骨组织体积(TBV/TTV)、骨小梁体积比海绵骨体积(TBV/SBV)、平均骨小梁板厚度(MTPT)、四环素双标线距离(DDL)、平均类骨质宽度(MOSW)、骨矿化沉积率(MiAR)和组织水平的骨形成速率(Svf)显著减少(Svf:P<0.05,其余各参数:P<0.01),骨小梁表面比体积(S/V)则显著增加(P<0.01),说明去卵巢后山羊骨量丢失,骨小梁体积明显减小,骨小梁厚度下降、连接性降低,骨转换率降低,激活频率减慢,骨形成明显减少,表现为低转化型骨质疏松的骨代谢特征。骨质疏松山羊模型复制成功。与OVX术后6个月组相比,XW630治疗6个月组的TBV/TTV,TBV/SBV,MTPT,DDL,MOSW,MiAR和Svf显著增加(P<0.01),S/V,骨矿化延迟时间(MLT)显著减少(P<0.01);与假手术组相比,XW630治疗6个月组的TBV/TTV,TBV/SBV显著减少(P<0.01)。结论XW630有增加骨量,改善骨小梁空间结构,增加骨强度,提高骨激活频率,促进类骨质生成及矿化,增强成骨细胞活性的作用。

雌激素及XW_（630）对类成骨细胞增殖及碱性磷酸酶活性的影响

雌激素可有效预防妇女绝经后骨质疏松，关于雌激素对骨形成过程的影响尚存争议。我们应用成骨细胞样骨肉瘤细胞株ＵＭＲ－１０６细胞在细胞水平探讨１７β雌二醇（Ｅ２）对骨代谢的调节作用，同时观察新型抗骨质疏松药物ＸＷ６３０对成骨细胞的影响。Ｅ２１０９～１０７ｍｏｌ／Ｌ显著刺激ＵＭＲ－１０６细胞３Ｈ－ＴｄＲ掺入及细胞计数，并使细胞浆及分泌的碱性磷酸酶（ＡＫＰ）活性显著提高。Ｅ２１０－１０ｍｏｌ／Ｌ对ＵＭＲ－１０６细胞增殖及活性无影响。与Ｅ２比较，ＸＷ６３０１Ｏ－１０～１０－７ｍｏｌ／Ｌ均可显著刺激ＵＭＲ－１０６细胞的增殖及活性，且作用强于Ｅ２。结果表明，Ｅ２可刺激成骨细胞增殖及活性，百ＸＷ６３０可能成为治疗骨质疏松的有效药物。

四环素-哌嗪雌酚酮对小鼠骺板Ⅰ型胶原表达的影响

目的 研究四环素 -哌嗪雌酚酮 (XW6 30 )对胚胎小鼠骺板 型胶原的表达的影响。方法 采用胚胎小鼠体外培养模型 ,通过免疫组织化学手段 ,观察 XW6 30对 型胶原蛋白表达水平的影响。结果 当培养基中XW6 30浓度为 10 - 7m ol/L和 10 - 8mol/L时 ,各区 型胶原蛋白免疫组织化学染色阳性细胞面积与对照组相比均显著增加 ;与同浓度的雌酚酮组相比 ,10 - 7mol/L XW6 30组增殖区和肥大区阳性细胞面积增加。当浓度降至 10 - 9mol/L时 ,只有肥大区阳性细胞面积增加。随浓度升高 ,各区阳性细胞面积呈增加趋势。结论 在体外培养条件下 ,XW6 30剂量依赖地上调小鼠骺板静止区、增殖区和肥大区 型胶原蛋白的表达水平。

四环素-哌嗪雌酚酮上调骺板c-fos,c-jun的mRNA及其表达产物水平

目的 :研究四环素 哌嗪雌酚酮 (XW 6 30 )对软骨细胞c fos和c jun基因的mRNA及其表达产物水平的影响 ,初步探讨其对骨的作用机制。方法 :用原位杂交法 ,测定体外培养小鼠胚胎长骨骺板c fos和c junmRNA的水平 ,同时用免疫组织化学法 ,测定了相应的表达产物。结果 :1 0 - 7mol·L- 1XW 6 30可显著上调骺板静止区、增殖区和肥大区c fos和c jun的mRNA及其表达产物水平 ,且其作用比雌酚酮强。 结论 :XW 6 30可能通过上调软骨细胞c fos ,c jun的表达 ,促进软骨细胞中含有AP 1位点的、与骨生长发育有关的基因表达 。

四环素哌嗪雌酚酮对小鼠骨中c-fos、c-jun蛋白表达的影响

目的 考察骨定向雌激素———四环素哌嗪雌酚酮 (XW 6 30 )对骨c fos和c jun蛋白表达的影响 ,初步探讨该化合物对骨的作用机制。方法 用小鼠胚胎长骨体外培养模型考察XW6 30对骨生长的作用 ,并采用免疫组织化学方法测定其对软骨静止区、增殖区和肥大区c fos,c jun基因表达产物的影响。结果 XW6 30浓度为 10 -7mol·L-1时 ,长骨骨干和骨总长生长速度显著加快 ,在 10 -9～ 10 -7mol·L-1范围内以剂量依赖方式上调骺板各区c fos和c jun蛋白的表达。 结论 提示XW 6 30可能通过上调软骨细胞c fos和c

四环素-哌嗪雌酚酮上调骨中c-Myc蛋白表达水平(英文)

目的 研究四环素 哌嗪雌酚酮 (XW 6 30 )对长骨原癌基因c myc蛋白表达的影响 ,探讨其对骨的作用机制。方法 取 16d孕龄的雌性胚胎小鼠 ,剥取前肢尺骨 ,在特制的培养装置上于BGbJ培养基中培养4 8h ,培养基中XW6 30终浓度分别为 1× 10 -7,1× 10 -8和 1× 10 -9mol·L-1。用免疫组织化学方法测定长骨骺板c Myc蛋白的表达。图象分析系统下测定静止区、增殖区、肥大区c Myc蛋白免疫反应阳性细胞面积。结果 当培养基中XW6 30浓度为 1× 10 -9mol·L-1时 ,增殖区阳性细胞面积与同浓度雌酚酮组相比增加 ,静止区阳性细胞面积与对照组相比也增加 ,此浓度的雌酚酮组静止区阳性细胞面积与对照组无差异。XW 6 30浓度为 1× 10 -8和 1× 10 -7mol·L-1时 ,各区阳性细胞面积均比对照组及同浓度雌酚酮组增加。结论 XW6 30对骨的雌激素活性强于雌酚酮。XW 6 30可能通过促进骺板软骨细胞表达c Myc蛋白而促进了软骨细胞的增殖和分化 ,从而促进了软骨内成骨。

四环素-雌酮对去卵巢山羊髂骨的有利作用

目的 山羊双侧卵巢切除 (OVX)建立绝经后骨质疏松 (PMO)动物模型 ,应用骨组织形态计量学方法观察OVX山羊对四环素 雌酮 (XW 63 0 )的治疗反应。方法 3 1只雌性山羊随机分成 4组 ,即正常对照组、假手术组、OVX术后 6个月组、XW 63 0治疗 6个月组。在处死前第 2 1天和第 9天 ,给山羊口服四环素以标记骨组织和进行动力学研究。制备山羊髂骨不脱钙骨切片 ,应用骨组织形态计量学方法 ,观察各组髂骨骨计量学参数的变化。结果 与正常对照组和假手术组比较 ,OVX术后 6个月组的骨小梁体积比全部骨组织体积 (TBV/TTV)、骨小梁体积比海绵骨体积 (TBV/SBV)、平均骨小梁板厚度 (MTPT)、四环素双标线距离 (DDL)、平均类骨质宽度 (MOSW )、骨矿化沉积率 (MiAR)和组织水平的骨形成速率 (Svf)显著减少 (Svf:P <0 .0 5 ,其余各参数 :均P <0 .0 1) ,骨小梁表面比体积 (S/V)则显著增加 (P <0 .0 1) ,说明OVX山羊骨量丢失 ,骨小梁体积明显减小 ,骨小梁厚度下降、连接性降低 ,骨转换率降低 ,激活频率减慢 ,骨形成明显减少 ,表现为低转化骨质疏松的骨代谢特征。以上结果提示 ,骨质疏松山羊模型复制成功。与OVX术后 6个月组相比 ,XW63 0治疗 6个月组的TBV/TTV ,TBV/SBV ,MTPT ,DDL ,MOSW ,MiAR和Svf显著增加 (均P <0 .0 1)