食管癌组织微RNA-634、锌指蛋白ZBTB20表达与食管癌临床特征及预后的关系

目的 分析食管癌组织中微RNA-634(miR-634)和锌指蛋白ZBTB20的表达水平,并分析二者是否与食管癌发生发展及预后相关。方法 选取2018年1月至2019年4月湖北医药学院附属国药东风总医院接受手术的食管癌病人102例,从病人根治切除术手术标本切取癌组织及癌旁正常组织。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-634、ZBTB20 mRNA相对表达水平。Pearson相关性分析食管癌组织中miR-634与ZBTB20 mRNA表达水平的相关性。Kaplan-Meier生存曲线分析miR-634、ZBTB20与预后的关系。Cox回归分析食管癌病人预后危险因素。结果 与癌旁正常组织(1.02±0.06、1.01±0.05)相比,食管癌组织中miR-634低表达(0.69±0.15)(P<0.05),ZBTB20 mRNA高表达(1.64±0.26)(P<0.05)。Pearson相关性分析显示,miR-634、ZBTB20 mRNA在食管癌病人的组织样本中表达水平负相关(r=-0.65,P<0.05);两者均与TNM分期、淋巴结转移、组织分化程度相关(P<0.05)。Kaplan-Meier法显示,miR-634高表达组(64.71%)无进展生存率较低表达(29.41%)高(χ^(2)=14.41,P<0.001),ZBTB20低表达组(62.75%)无进展生存率较高表达组(31.37%)高(χ^(2)=9.48,P=0.002)。多因素Cox回归分析表明,TNM分期(Ⅲ)、淋巴结转移、miR-634低表达、ZBTB20高表达是影响食管癌病人不良预后的危险因素(P<0.05)。结论 食管癌病人癌组织中miR-634表达水平降低,ZBTB20表达水平升高,两者与TNM分期、淋巴结转移、组织分化程度及预后密切相关。

ZBTB20基因敲除小鼠出生后肝脏甲胎蛋白基因持续高表达的病理学意义

目的探讨出生后肝脏甲胎蛋白(AFP)基因异常高表达在ZBTB20基因敲除小鼠生长发育障碍、严重低血糖和未成年死亡等表型中可能的病理作用。方法将ZBTB20单基因敲除小鼠与AFP单基因敲除小鼠杂交,建立ZBTB20与AFP的联合基因敲除小鼠模型,观察并监测其与ZBTB20单基因敲除小鼠在生长发育、存活率及血糖水平上的差异。结果 ZBTB20/AFP双基因敲除小鼠繁殖成功后,通过观察和监测发现其在生长发育、生存率及血糖代谢等方面与ZBTB20单基因敲除小鼠相比无明显差异。结论 ZBTB20单基因敲除小鼠生长发育障碍、严重低血糖和未成年死亡等表型与其AFP基因出生后异常开放无显著关系。

锌指蛋白ZBTB20生物学功能的研究进展

锌指蛋白ZBTB20是ZBTB锌指蛋白亚家族的新成员,与已知的BCL6和PLZF同源。通过基因打靶小鼠和疾病人群研究,学者们发现ZBTB20在肝脏、胰岛、神经系统和免疫系统等多个器官与系统中具有重要生理学功能,是个体发育、学习记忆、痛觉感受、糖脂代谢等正常生理过程所必需的调节分子。ZBTB20表达或功能异常可导致个体发育障碍,与智障、肿瘤和代谢性疾病等多种重大疾病的病理生理过程密切相关。作为甲胎蛋白基因的主要转录抑制因子,ZBTB20在出生后肝脏甲胎蛋白基因的表达失活中发挥了关键性作用,且与肝癌预后密切相关。人群中ZBTB20基因的缺失与多种肿瘤有关,其点突变可导致Primrose综合征。本文就ZBTB20的生物学功能研究进展作一综述。

抗新型锌指蛋白ZBTB20单克隆抗体的制备和鉴定

目的:制备新型锌指蛋白ZBTB20的单克隆抗体,建立敏感和特异的ZBTB20免疫学检测方法,为其生物学功能研究提供技术支持。方法:将经ZBTB20多肽免疫的小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞进行融合,用ZBTB20的GST融合蛋白为包被抗原进行ELISA筛选,经4次亚克隆后建立稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株,制备腹水并纯化抗体,鉴定其在免疫印迹、免疫沉淀和免疫组化中的应用效果。结果:成功制备了8株抗ZBTB20单克隆抗体,在不同的免疫学检测中均得到成功应用,尤其是单克隆抗体9A10具有敏感性高、特异性好和通用性强等优点。结论:首次成功制备了ZBTB20单克隆抗体,可应用于免疫印迹、免疫沉淀和免疫组化等免疫学检测,对ZBTB20的功能研究具有重要意义。

ZBTB20在SLE患者外周血B细胞中的表达和临床意义

目的研究锌指和BTB结构域蛋白20(ZBTB20)在系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血B细胞中的表达,并探讨ZBTB20在SLE中的临床意义。方法采用RT-PCR技术检测36例SLE患者(SLE组)和30例健康对照者(对照组)外周血CD19^+B细胞中ZBTB20 mRNA的表达水平;Western blot检测分析外周血ZBTB20蛋白水平;流式细胞术检测B细胞亚群所占比例。分析SLE患者B细胞中ZBTB20mRNA的表达与B细胞亚群比例变化的关系及与临床指标(抗ds-DNA抗体、抗核抗体、免疫球蛋白IgG、抗ENA抗体)的相关性。结果 SLE组外周血CD19^+B细胞中ZBTB20mRNA的表达明显高于对照组(P<0.05);SLE组患者外周血ZBTB20蛋白水平高于对照组(P<0.05)。与对照组相比,SLE患者外周血B细胞亚群,CD19^+B细胞比例降低(P<0.05),CD19^-CD138^+浆细胞/CD19^+B细胞之间的比值及CD19^-CD138^+浆细胞比例明显增高(P<0.05);SLE患者B细胞中ZBTB20mRNA的表达水平与CD19^-CD138^+浆细胞/CD19^+B细胞的比值呈正相关(P<0.05);ZBTB20mRNA与抗ds-DNA抗体、免疫球蛋白IgG、抗核抗体、抗ENA抗体均呈正相关(P<0.05)。结论 ZBTB20可能通过促进B细胞分化从而参与SLE发病。

慢性乙型肝炎合并肝细胞癌患者乙型肝炎病毒X基因整合对锌指蛋白ZBTB20表达的影响

目的探讨慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B,CHB)合并肝细胞癌患者乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)X基因整合对锌指蛋白ZBTB20表达的影响。方法选择2015年7月至2017年6月在台州恩泽医疗中心(集团)恩泽医院、台州市中心医院行手术治疗的18例CHB合并肝细胞癌患者,收集每例患者手术切除的标本,包括肝癌组织、癌旁组织和相对正常的肝组织。提取3种组织标本DNA,以HBVX和Alu为特殊引物,采用HBV-Alu-PCR扩增整合的HBVX片段和两侧的人类基因组DNA片段,扩增产物测序,计算目的片段整合情况。采用蛋白质印迹法检测锌指蛋白ZBTB20表达水平。统计学处理采用t检验、方差分析和χ^2检验。结果18例CHB合并肝细胞癌患者的癌组织、癌旁组织、正常组织中检测到HBVX基因整合例数分别为13、16和9例,差异有统计学意义(χ^2=6.353,P=0.037)。18例患者癌组织、癌旁组织、正常组织中锌指蛋白ZBTB20的表达分别为(50.14±11.25)%、(40.71±7.17)%和(39.06±5.17)%,差异有统计学意义(F=9.420,P<0.01)。5例患者的ZBTB20位点检测到HBVX基因整合,这5例患者癌组织、癌旁组织、正常组织中锌指蛋白ZBTB20的表达分别为(37.37±10.30)%、(32.06±2.61)%和(34.66±5.59)%;13例患者的ZBTB20位点未检测到HBVX基因整合,13例患者癌组织、癌旁组织、正常组织中锌指蛋白ZBTB20的表达分别为(55.06±7.06)%、(44.04±5.24)%和(40.76±4.04)%,有HBVX整合患者的ZBTB20表达水平均低于无整合患者,差异均有统计学意义(t=4.205、4.821、2.589,均P<0.05)。结论CHB合并肝细胞癌患者的HBVX基因整合率在癌旁组织中高于肝癌组织,肝癌组织锌指蛋白ZBTB20表达水平高于癌旁组织,HBVX基因在ZBTB20位点上的整合可能导致ZBTB20表达下降。

锌指蛋白ZBTB20敲低的血管平滑肌细胞稳转株的构建及鉴定

目的构建并鉴定锌指蛋白ZBTB20敲低的血管平滑肌细胞稳转株。方法本实验时间为2022-04-18至2022-11-29。设计合成针对ZBTB20基因的短发夹RNA(shRNA),构建ZBTB20干扰慢病毒载体——pHBLVZBTB20 shRNA,包装ZBTB20干扰慢病毒。将人肺动脉平滑肌细胞(HPASMCs)接种于6 cm培养皿中,分别加入含8μg/ml polybrene和0.5 ml ZBTB20干扰慢病毒上清液的无血清培养液3 ml(实验组)和含8μg/ml polybrene和0.5 ml含无意义干扰序列的慢病毒的无血清培养液3 ml(阴性对照组)进行转染,48 h后加入嘌呤霉素(优化剂量为1.5μg/ml)以筛选转染成功的HPASMCs。采用荧光定量PCR检测两组ZBTB20 mRNA相对表达量,采用Western blot法检测两组ZBTB20,采用免疫组化试验检测两组ZBTB20表达情况,并进行细胞增殖实验和细胞迁移实验。结果实验组ZBTB20 mRNA相对表达量、ZBTB20均低于阴性对照组(P<0.05)。免疫组化试验结果显示,ZBTB20在阴性对照组的细胞核内高度表达,而在实验组的细胞核内无明显表达,表明ZBTB20敲低的血管平滑肌细胞稳转株构建成功。感染后第2~5天,实验组细胞计数少于对照组,OD值低于阴性对照组(P<0.05)。感染后48 h,实验组划痕愈合面积百分比低于阴性对照组(P<0.05)。结论本实验成功构建了锌指蛋白ZBTB20敲低的血管平滑肌细胞稳转株,且ZBTB20敲低后HPASMCs的增殖和迁移能力明显受到抑制。