富含亮氨酸重复序列免疫球蛋白样结构域1(LRIG1)增强顺铂诱导的人垂体瘤细胞凋亡

目的探讨富含亮氨酸重复序列免疫球蛋白样蛋白结构域1(LRIG1)在人垂体瘤组织中表达情况,并观察过表达LRIG1后对顺铂(DDP)诱导的垂体瘤细胞增殖、凋亡的影响。方法采用免疫组织化学染色法检测45例垂体瘤患者肿瘤组织及瘤旁组织中的LRIG1表达,分析LRIG1阳性表达与患者临床病理指标的相关性。选取原代分离培养的人垂体瘤细胞,采用脂质体介导的基因转染技术将LRIG1基因过表达质粒p EGFP-N1-LRIG1转染进细胞中,筛选LRIG1过表达的细胞,同时选取转染空质粒p EGFP-N1的细胞作为对照组。两组细胞均经20μg/m L DDP诱导48 h,流式细胞术检测细胞凋亡情况,平板克隆实验检测细胞的增殖能力,Western blot法检测细胞中凋亡相关蛋白BAX、胱天蛋白酶3(caspase-3)和Bcl2的相对表达量。结果垂体瘤患者肿瘤组织中LRIG1阳性率显著低于瘤旁组织,且LRIG1在侵袭性肿瘤表达显著降低。与对照组相比,过表达LRIG1后,DDP诱导的细胞凋亡率显著增加、细胞增殖显著降低、BAX、caspase-3的水平显著增加,而Bcl2水平显著降低。结论过表达LRIG1增加DDP诱导的人垂体瘤细胞凋亡并抑制其增殖。

亮氨酸重复序列和免疫球蛋白样结构域1、存活蛋白在胶质瘤中的表达及对患者远期预后的影响

目的探讨亮氨酸重复序列和免疫球蛋白样结构域1(LRIG1)、存活蛋白(survivin)在胶质瘤中的表达及对患者远期预后的影响。方法选取77例胶质瘤患者,取其胶质瘤组织及相应的癌旁组织,采用免疫组化法检测LRIG1、survivin的表达情况。随访3年,记录胶质瘤患者的预后情况,胶质瘤患者预后的影响因素采用多因素Logistic回归分析。结果胶质瘤组织中LRIG1阳性表达率明显低于癌旁组织,survivin阳性表达率明显高于癌旁组织,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。随访3年,77例胶质瘤患者中死亡25例,生存52例。预后死亡胶质瘤患者胶质瘤组织中LRIG1阳性表达率低于生存患者,survivin阳性表达率高于生存患者,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。Logistic回归分析结果显示,肿瘤直径≥5 cm、高级别胶质瘤、LRIG1阴性表达、survivin阳性表达均是胶质瘤患者预后的独立危险因素(P﹤0.05)。结论胶质瘤组织中LRIG1呈阴性表达,survivin呈阳性表达,且二者均是胶质瘤患者预后的独立危险因素,临床可通过检测这两种指标为胶质瘤患者的远期预后评估提供参考。

锚蛋白重复结构域1的研究进展

锚蛋白重复结构域1(ANKRD1)也被称为心肌锚定重复序列蛋白(CARP),由ANKRD1编码,是一种应激反应蛋白,为细胞质中的重要组成部分,而且是细胞核转录的重要辅助因子。其在细胞的表达水平,定位甚至病理应激类型不同,可发挥不同的功能。CARP作为肌肉锚蛋白重复蛋白家族的一员,在各种心脏疾病中高表达,但其发挥作用的机制及对相关病理生理学仍不清楚。本文从ANKRD1的结构及其在心脏疾病中的作用进行阐述。

FIH与锚蛋白重复序列结构域

缺氧诱导因子抑制因子(FIH)是体内调节缺氧诱导因子1(HIF-1)转录活性的主要因子之一。近年FIH研究中最引人注意的是一组含有锚蛋白重复序列结构域的底物蛋白质,这组蛋白普遍存在并参与多种生理功能,其含多个FIH羟化位点,但具有不完全羟化及优势底物的特征,又与FIH、HIF-1之间存在错综复杂的关系。

HPV阳性宫颈癌组织中AIB1 mRNA和ANCO1 mRNA表达及临床意义

目的研究人乳头状瘤病毒(HPV)阳性宫颈癌组织中乳腺癌扩增基因1(AIB1)、锚蛋白重复结构域11(ANKRD11/ANCO1)表达与临床病理特征的关系及对术后复发的预测价值。方法选取2018年1月~2020年1月就诊于绵阳市第三人民医院的94例HPV阳性宫颈癌患者癌组织和癌旁组织,以同期50例HPV阴性宫颈癌组织为对照。采用实时荧光定量PCR(RT qPCR)检测HPV阳性宫颈癌癌组织和癌旁组织、HPV阴性宫颈癌组织中AIB1 mRNA,ANCO1 mRNA表达。采用Pearson分析HPV阳性宫颈癌癌组织中AIB1 mRNA与ANCO1 mRNA表达的相关性。采用Logistic回归分析筛选术后复发的影响因素。采用受试者工作特征(ROC)曲线研究AIB1 mRNA,ANCO1 mRNA对患者术后复发的预测价值。结果HPV阳性宫颈癌癌组织中AIB1 mRNA(3.04±0.37)高于癌旁组织(0.87±0.21)及HPV阴性宫颈癌癌组织(1.02±0.33),ANCO1 mRNA(1.13±0.26)低于癌旁组织(1.91±0.35)及HPV阴性宫颈癌癌组织(1.82±0.36),差异具有统计学意义(t=68.499,53.137;23.649,17.434,均P<0.05)。HPV阳性宫颈癌癌组织中AIB1 mRNA与ANCO1 mRNA表达呈负相关(r=-0.714,P<0.001)。相比于FIGO分期ⅠA~ⅠB期、无淋巴结转移患者,肿瘤FIGO分期ⅡA期、淋巴结转移HPV阳性宫颈癌患者癌组织中AIB1 mRNA(3.88±0.32 vs 2.04±0.41,4.46±0.33 vs 2.16±0.46)较高,ANCO1 mRNA(0.67±0.29 vs 1.68±0.20,0.49±0.24 vs 1.53±0.32)较低,差异具有统计学意义(t=24.425,26.097;19.288,16.777,均P<0.001)。FIGO分期ⅡA期、淋巴结转移、AIB1 mRNA高水平[OR(95%CI):1.644(1.223~2.210);1.779(1.295~2.444),1.247(1.050~1.728)]是影响HPV阳性宫颈癌患者术后复发的危险因素,ANCO1 mRNA高水平[OR(95%CI):0.634(0.451~0.891)]是保护因素。AIB1mRNA,ANCO1 mRNA联合检测对HPV阳性宫颈癌患者术后复发预测AUC下面积(95%CI)为0.914(0.863~0.952),高于单指标检测[0.821(0.782~0.869),0.794(0.763~0.847)],差异具有统计学意义(Z=4.123,4.432,均P<0.001)。结论HPV阳性宫颈癌中AIB1 mRNA升高,ANCO1 mRNA降低,均参与HPV阳性宫颈癌的发生发展,两者联合对评估术后复发具有较高的预测价值。

结直肠癌组织中RREB1和ANKRD1的表达与临床病理特征和预后的相关性研究

目的探讨结直肠癌(colorectal cancer,CRC)组织ras反应元件结合蛋白1(ras-responsive element binding protein 1,RREB1),ankyrin重复结构域1(ankyrin repeat domain 1,ANKRD1)的表达及与临床病理特征和预后不良的关系。方法选取2013年1月~2016年12月复旦大学附属中山医院厦门医院收治的105例CRC患者,应用免疫组织化学SP法检测CRC患者癌组织和癌旁组织RREB1和ANKRD1蛋白表达,分析RREB1和ANKRD1蛋白表达与患者临床病理特征的关系,患者均随访5年,比较不同RREB1和ANKRD1表达患者的预后情况,并分析CRC患者预后不良的影响因素。采用Spearman相关系数分析RREB1与ANKRD1表达的相关性。结果CRC癌组织RREB1蛋白阳性率(59.05%)显著高于癌旁组织(27.61%),差异有统计学意义(χ^(2)=21.120,P=0.000)。CRC癌组织ANKRD1蛋白阳性率(31.43%)显著低于癌旁组织(60.95%),差异有统计学意义(χ^(2)=18.410,P=0.000)。TNM分期Ⅲ期、淋巴结转移N1~N2患者RREB1蛋白阳性率高于TNM分期Ⅰ~Ⅱ期、淋巴结转移N0患者,差异有统计学意义(χ^(2)=4.263,8.199,均P<0.05)。TNM分期Ⅲ期、淋巴结转移N1~N2患者ANKRD1蛋白阳性率低于TNM分期Ⅰ~Ⅱ期、淋巴结转移N0患者,差异有统计学意义(χ^(2)=5.515,7.411,均P<0.05)。RREB1高表达组5年生存率(54.84%)低于RREB1低表达组(74.42%),差异有统计学意义(χ^(2)=5.459,P=0.020);ANKRD1高表达组的5年生存率(78.79%)高于ANKRD1低表达组(55.56%),差异有统计学意义(χ^(2)=5.130,P=0.024)。RREB1高表达(HR=2.437,95%CI:1.113~4.684)、ANKRD1低表达(HR=0.573,95%CI:0.185~1.952)、TNM分期Ⅲ期(HR=2.202,95%CI:1.357~4.215)和淋巴结转移N1~N2(HR=1.247,95%CI:1.532~4.368)是CRC患者预后不良的危险因素(均P<0.05)。Spearman秩相关分析结果,CRC癌组织中RREB1与ANKRD1表达呈负相关(r=-0.389,P=0.036)。结论CRC癌组织中RREB1表达升高,而ANKRD1表达降低,二者共同参与CRC的发生发展,有望成为评估CRC患者预后的组织肿瘤标志物。

胰腺癌组织中IQGAP1和Gankyrin的表达及临床意义

目的:探讨胰腺癌组织中IQ结构域GTP酶激活蛋白1(IQGAP1)、癌性锚蛋白重复序列(Gankyrin)的表达及临床意义。方法:回顾性分析2011年1月—2014年1月武威市人民医院行胰腺癌根治术治疗的95例胰腺癌患者的病历及随访资料,免疫组织化学染色法检测正常胰腺组织、胰腺癌组织及癌旁组织中IQGAP1和Gankyrin的表达,分析IQGAP1和Gankyrin表达与胰腺癌临床病理参数的关系,采用Kaplan-Meier生存曲线分析不同IQGAP1和Gankyrin表达患者的总生存率的差异,Cox比例风险回归模型分析患者预后的影响因素。结果:与癌旁组织和正常胰腺组织相比,胰腺癌组织中IQGAP1和Gankyrin表达均上调(P<0.05)。IQGAP1和Gankyrin表达均与胰腺癌TNM分期、分化程度和糖类抗原199(CA199)表达相关(P<0.05)。IQGAP1阳性、Gankyrin阳性患者的5年生存率均明显低于阴性患者(P<0.05);Cox比例风险回归分析结果显示,TNM分期、IQGAP1表达、Gankyrin表达和CA199表达均是胰腺癌患者预后的独立危险因素(HR=1.250、13.316、3.542、4.089,P<0.05)。结论:胰腺癌组织中IQGAP1和Gankyrin表达上调,IQGAP1和Gankyrin表达与胰腺癌患者生存以及预后相关,可能作为胰腺癌患者的预后预测因子,辅助胰腺癌的诊断和临床治疗。

沉默海马LINGO-1对小鼠学习记忆以及有髓神经纤维的影响

目的:研究沉默海马含亮氨酸重复序列和免疫球蛋白结构域的蛋白-1(LINGO-1)对APP/PS1小鼠空间学习和记忆能力以及海马有髓神经纤维的影响。方法:随机选取18只雄性APP/PS1小鼠,随机分为对照组和rAAV-LINGO-1-shRNA组,通过海马立体定位注射表达LINGO-1-shRNA的重组腺相关病毒rAAV-LINGO-1-shRNA,运用Morris水迷宫方法测试小鼠的空间学习和记忆能力;运用免疫荧光染色和real time RT-PCR分析小鼠海马内LINGO-1表达水平;运用real time RT-PCR分析小鼠海马内LINGO-1下游分子RhoA和ROCK的表达水平;运用无偏体视学方法结合透射电子显微镜技术对小鼠海马(CA1~3和齿状回)的体积,海马内有髓神经纤维的长度、髓鞘体积及其损伤情况进行定量研究。结果:与对照组小鼠相比,rAAV-LINGO-1-shRNA组小鼠的逃避潜伏期显著性缩短,穿台次数显著增多,而目标象限游泳时间及目标象限游泳路程比无显著性改变;与对照组相比,rAAV-LINGO-1-shRNA组海马内LINGO-1显著下调,同时其下游RhoA和ROCK的表达水平降低;对照组和rAAV-LINGO-1-shRNA组海马体积无显著性差异;与对照组相比,rAAV-LINGO-1-shRNA组海马内有髓神经纤维的长度和正常髓鞘的体积显著性增加,受损的有髓神经纤维占比和受损的髓鞘占比均显著降低。结论:沉默海马LINGO-1能够有效改善APP/PS1小鼠海马依赖的空间学习和记忆能力,抑制RhoA/ROCK的表达,减轻海马内有髓神经纤维及其髓鞘的损伤,这将为阿尔茨海默病的发病及治疗提供新的方向。

LRIG1在卵巢浆液性囊腺癌细胞对依托泊苷敏感性中的作用研究

目的探讨亮氨酸重复序列免疫球蛋白样结构域基因-1(LRIG1)在卵巢浆液性囊腺癌(SKOV3)细胞株中对依托泊苷敏感性的可能机制。方法噻唑蓝比色法(MMT)检测不同浓度VP16干预下48 h的SKOV3细胞组、siRNA LRIG1转染SKOV3细胞组、SKOV3/VP16细胞组和siRNA LRIG1转染SKOV3/VP16细胞组的增殖。平板克隆检测细胞增殖,流式检测细胞凋亡情况,实时荧光定量聚合酶链反应(q RT-PCR)检测LRIG1mRNA表达。结果半抑制浓度(IC50)分别为62.90、115.49、156.50和195.42μg/L,siRNA LRIG1转染SKOV3、SKOV3/VP16和siRNA LRIG1转染SKOV3/VP16的耐药指数分别为1.8、2.5和3.1。SKOV3、siRNA LRIG1转染SKOV3、SKOV3/VP16和siRNA LRIG1转染SKOV3/VP16细胞组的克隆率(F=39.338,P=0.000),细胞的LRIG1 mRNA(F=63.095,P=0.000)和凋亡细胞(F=230.046,P=0.000)明显不同,与SKOV3比较,siRNA LRIG1转染SKOV3、SKOV3/VP16和siRNA LRIG1转染SKOV3/VP16细胞的克隆率增加(t=0.026、0.0710和0.125,P=0.042、0.000和0.000),细胞的LRIG1 mRNA降低(t=0.130、0.525和0.825,均P=0.000),凋亡细胞减少(t=12.350、35.506和44.412,均P=0.000),与siRNA LRIG1转染SKOV3比较,SKOV3/VP16和siRNA LRIG1转染SKOV3/VP16细胞的克隆率增加(t=0.044和0.099,P=0.001和0.000),LRIG1 mRNA降低(t=0.395和0.695,均P=0.000),凋亡细胞减少(t=23.156和32063,均P<0.05),与SKOV3/VP16比较,siRNA LRIG1转染SKOV3/VP16细胞的克隆率增加(t=0.055,P=0.000),细胞的LRIG1 mRNA降低(t=0.300,P=0.000),凋亡细胞减少(t=8.906,P=0.000)。结论 LRIG1 mRNA影响SKOV3细胞对药物的敏感性,沉默LRIG1的耐药细胞可抑制SKOV3细胞凋亡。

富含亮氨酸重复和免疫球蛋白样结构域1基因过表达增强膀胱癌T24细胞对顺铂敏感性的实验研究

目的 探讨富含亮氨酸重复和免疫球蛋白样结构域1 （leucine-rich repeats and immunoglobulin-like domains-1,LRIG1）基因过表达对膀胱癌T24细胞顺铂（cis-diaminodichloroplatinum,CDDP）敏感性的影响及其机制.方法 2012年12月至2014年2月选取膀胱癌T24细胞株,将建立并鉴定的过表达LRIG1基因的T24细胞分为3组：实验组,转染Ad-Surp-LRIGl;对照组,转染Adeno-SP-EGFP;空白组,未转染.将3组细胞分别加入CDDP,构建为CDDP/Ad-Surp-LRIG1组、CDDP/Adeno-SP-EGFP组、CDDP组,与未加入CDDP的空白组共4组进行诱导凋亡实验.采用RT-PCR和蛋白质印迹法检测转染前后T24细胞中LRIG1和表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor,EGFR）的表达水平.蛋白质印迹法检测CDDP对T24细胞的总EGFR和核磷酸化EGFR表达的影响.采用CCK-8法检测各组细胞对CDDP的敏感性.流式细胞学检测各组细胞的凋亡率.结果 实验组、对照组和空白组的LRIG1 mRNA和EGFR mRNA的表达量分别为2.79±0.15和0.65±0.05、0.76±0.09和1.98±0.07、0.66±0.05和2.05±0.04,LRIG1蛋白和EGFR蛋白分别为1.98±0.12和0.92±0.05、0.88 ±0.07和2.51 ±0.07、1.00 ±0.08和2.42±0.09,实验组与对照组和空白组比较差异均有统计学意义（P＜0.05）,对照组与空白组比较差异无统计学意义（P＞0.05）.CDDP组、CDDP/Adeno-SP-EGFP组和CDDP/Ad-Surp-LRIGl组的半数抑制浓度IC50值分别为（30.96±0.57）、（31.55 ±0.48）和（14.09±0.31） μg/ml,CDDP组与CDDP/Adeno-SP-EGFP组和CDDP/Ad-Surp-LRIGl组比较差异均有统计学意义（P＜0.05）,CDDP/Adeno-SP-EGFP组和CDDP/Ad-Surp-LRIGl组比较差异无统计学意义（P＞0.05）.CDDP/Ad-Surp-LRIGl组的细胞凋亡率[（69.77±2.14）％]高于CDDP/Adeno-SP-EGFP组[（48.15±1.53）％]、CDDP组[（46.82±1.23）％]、空白组[（3.17±0.21）％],差异均有统计学意义（P＜0.05）,CDDP组和CDDP/Adeno-SP-EGFP组比较差异无统计学意义（P＞0.05）.空白组、CDDP组、CDDP/Adeno-SP-EGFP组、CDDP/Ad-Surp-LRIGl组的总EGFR和核磷酸化EGFR的表达量分别为2.52±0.11和1.76±0.08、1.22±0.05和2.75±0.15、1.25±0.05和2.82±0.13、0.32 ±0.02和1.08±0.04,CDDP组与空白组比较差异有统计学意义（P＜0.05）,CDDP/Adeno-SP-EGFP组与CDDP/Ad-Surp-LRIGl组比较差异有统计学意义（P＜0.05）,CDDP组与CDDP/Adeno-SP-EGFP组比较差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 LRIG1通过下调EGFR和核磷酸化EGFR的表达促进CDDP诱导的T24细胞凋亡,提高T24细胞对CDDP的敏感性.

富含亮氨酸重复序列和免疫球蛋白样结构域基因1过表达对膀胱癌细胞免疫相关基因的影响

目的利用基因表达谱芯片技术筛选过表达富含亮氨酸重复序列和免疫球蛋白样结构域基因1（LRIG1）的膀胱癌细胞与对照组膀胱癌细胞间差异表达的免疫相关基因，探讨LRIG1对膀胱癌细胞免疫功能影响的机制。方法分别提取转染LRIG1基因的膀胱癌细胞BIU87-LRIG1和未转染LRIG1基因的膀胱癌细胞BIU87的总核糖核酸（RNA），反转录成cDNA并标记后，同22K人类基因表达谱芯片杂交后筛选出与免疫相关的差异表达基因，并进一步使用反转录-聚合酶链反应（RT—PCR）验证。结果在21522条基因中，两组细胞间差异表达的免疫相关基因有9条，其中BIU87-LRIG1细胞中上调基因4条，下调基因5条。RT-PCR提示BIU87-LRIG1组的程序化死亡基因5（PDCD5）表达水平（1．22±0．04）较BIU87组（0．43±0．06）明显增高。结论使用基因芯片技术筛选出了LRIG1过表达可影响膀胱癌免疫功能的9种相关基因。

LRIG1基因过表达慢病毒载体的构建和鉴定

目的探讨构建人类富含亮氨酸重复和免疫球蛋白样结构域1(LRIG1)基因过表达慢病毒表达载体并转染胶质瘤细胞系U87细胞的技术方法,为研究LRIG1的功能提供帮助。方法用EcoRⅠ及BamHⅠ双酶切LRIG1基因和plvxDsRed-monomer-n1慢病毒载体,琼脂糖凝电泳回收LRIG1片段和载体片段;通过T4连接酶将LRIG1基因连接至慢病毒载体上;按Lenti-XHT慢病毒包装试剂盒说明包装慢病毒;用EcoRⅠ及BamHⅠ双酶切法鉴定重组慢病毒载体;然后用plvxDsRed-monomer-n1和plvxDsRed-monomer-n1-3×flagLRIG1分别转染293T细胞和胶质瘤细胞系U87细胞,荧光定量PCR和western blot检测LRIG1 m RNA和蛋白表达。结果 U87细胞感染病毒载体后经嘌呤霉素筛选显示细胞红色荧光较空载体感染细胞减弱;实时PCR结果显示LRIG1 m RNA过表达组较对照明显升高;提取感染后细胞蛋白,Western blot鉴定flag标签蛋白表达成功。结论 LRIG1基因慢病毒表达载体能感染胶质瘤细胞系U87细胞,可使外源基因获得稳定表达。

拟南芥LRR-RLK家族蛋白CLV1胞外域的可溶性表达与纯化

大肠杆菌NusA蛋白与拟南芥LRR-RLK家族蛋白CLAVATA1(CLV1)胞外结构域(Ectodomain,ECD)融合表达,实现了蛋白CLV1-ECD的可溶性表达;CLV1-ECD与其配体蛋白CLAVATA3(CLV3)共表达,可以明显提高它的水溶性。该实验方法快速简易地获得了大量纯化的CLV1-ECD蛋白,避免了包涵体变性与复性的复杂过程,为植物CLAVATA信号系统的进一步研究奠定了基础。

Kankl抑制肿瘤的机制研究进展

KN基序和锚蛋白重复结构域1(Kank1)与肿瘤关系密切,其在大多数肿瘤中表达下降或缺失,而启动子甲基化是Kank1表达下降或缺失的重要原因。Kank1在不同组织来源的恶性肿瘤中发挥抑制作用,其可以通过各种信号通路、下游分子抑制肿瘤的增殖、转移、侵袭,促进肿瘤的凋亡。因此,Kank1的低表达与肿瘤的不良预后密切相关,其可能成为恶性肿瘤预后、早期诊断的分子指标以及肿瘤靶向药物的治疗靶点。未来对Kank1进行深入研究,不仅有助于更好地了解肿瘤的发生和发展机制,也为恶性肿瘤的诊断和治疗提供了新的思路和方法。

胃腺癌组织中LRIG1蛋白的表达及意义

目的探讨富亮氨酸重复序列免疫球蛋白样结构域1(LRIG1)在人体胃腺癌组织中的表达及其与临床病理参数的关系。方法采用免疫组织化学En Vision二步法检测LRIG1蛋白在116例胃腺癌及其相应癌旁正常胃组织中的表达情况,并分析其表达与临床病理参数的关系。结果 LRIG1在胃腺癌组织中的阳性表达率(63.8%,74/116)低于癌旁正常胃组织(81.9%,95/116),差异具有统计学意义(P<0.05)。LRIG1蛋白的表达与肿瘤的分化程度、浸润深度、淋巴结转移、远处转移及TNM分期密切相关(P<0.05),而与患者年龄、性别及肿瘤大小无关(P>0.05)。结论 LRIG1在胃腺癌组织中的表达较相应癌旁正常胃组织低,而且随着肿瘤恶性程度的增加LRIG1蛋白的表达逐渐降低,可能作为抑癌基因参与了胃腺癌的发生、发展。

胃癌组织FIBCD1、ANKRD49表达与临床病理特征和预后的关系研究

目的 分析胃癌组织中含纤维蛋白原C结构域蛋白1(FIBCD1)及锚蛋白重复结构域49 (ANKRD49)表达及与临床病理特征和预后的关系。方法 选取2015年1月至2018年1月该院收治的132例胃癌患者。以免疫组化染色法检测其胃癌组织和癌旁组织(距癌组织边缘2 cm以上)中FIBCD1、ANKRD49的表达情况。采用Spearman相关分析FIBCD1与ANKRD49的相关性。分析胃癌组织中FIBCD1、ANKRD49的表达与临床病理特征的关系。采用Kaplan-Meier生存曲线及Log-rank检验分析不同FIBCD1、ANKRD49表达情况胃癌患者生存情况。采用COX比例风险回归模型分析影响胃癌患者预后的危险因素。结果 胃癌组织中FIBCD1、ANKRD49阳性表达率显著高于癌旁组织(P<0.05)。胃癌组织中FIBCD1与ANKRD49表达呈正相关(r=0.522,P<0.001)。不同TNM分期、肿瘤浸润深度的患者胃癌组织中FIBCD1、ANKRD49阳性表达率差异均有统计学意义(P<0.05)。FIBCD1、ANKRD49阳性表达患者3年生存率均低于FIBCD1、ANKRD49阴性表达患者(P<0.05)。TNM分期Ⅲ期、肿瘤浸润深度T3~T4、FIBCD1阳性表达、ANKRD49阳性表达是影响胃癌患者预后的危险因素(P<0.05)。结论 胃癌组织中FIBCD1、ANKRD49阳性表达率升高,二者与TNM分期、肿瘤浸润深度有关,且可影响胃癌患者预后。

ANKIB1相关泛素结合酶的筛选

含锚蛋白重复和IBR结构域蛋白1(ankyrin repeat and IBR domain-containing protein 1,ANKIB1)属于RING-IBR-RING(RBR)蛋白家族,也是该家族中唯一含有泛素结合模体的成员,能促进某些蛋白的泛素化.几乎所有的RBR蛋白都具有泛素连接酶(E3)活性.ANKIB1也被推测为一种E3,但迄今尚未证实.RBR型E3能够与多种泛素结合酶(ubiquitin-conjugating enzyme,Ubc,统称E2)互作并发挥催化作用,其中最常见的是UbcH7,UbcH8和UbcH5B次之.为了筛选ANKIB1相关的E2,本研究在大肠杆菌BL21(DE3)中分别表达了UbcH5B、UbcH7和UbcH8蛋白,并采用GST沉降(GST pull-down)实验验证3种E2与ANKIB1的相互作用.实验结果表明,内源性及过表达的ANKIB1均能与UbcH5B、UbcH7或UbcH8相互作用,同时ANKIB1也是唯一能与这3种E2互作的RBR蛋白.本研究为ANKIB1可能是1种E3的假说提供了支持,并为后续研究ANKIB1的E3活性和催化机制提供了线索.

Lingo-1及其相关传导通路在神经系统修复中的研究进展

富含亮氨酸重复序列和免疫球蛋白结构域的Nogo受体作用蛋白-1（Lingo-1）在神经元与少突胶质细胞修复、神经突延长、轴突再生等过程中，通过NgR/p75/Lingo-1或NgR/TROY/Lingo-1、WNK1、Myt1与Myt1l等通路发挥明确的负性调节作用，阻断Lingo-1及其通路可促进损伤的中枢神经系统再生，提示Lingo-1有可能成为治疗神经精神系统疾病的新靶点。

下调PHLPP1表达通过激活PI3K/AKT/mTOR通路改善高糖诱导的人足细胞自噬抑制和凋亡促进作用

目的研究富含亮氨酸重复序列的普列克底物蛋白同源结构域蛋白磷酸酶1(PHLPP1)在糖尿病肾病(DN)肾组织的表达及其对足细胞自噬、凋亡的影响并初步探究其相关作用机制。方法采用免疫组织化学检测DN肾组织及非糖尿病肾组织PHLPP1表达,免疫荧光组织化学染色检测肾病蛋白(nephrin)、 PHLPP1的共表达以确定PHLPP1在足细胞的定位;在正常葡萄糖(NG)及高糖(HG)培养液中培养足细胞,实时荧光定量PCR检测细胞PHLPP1 mRNA表达。采用脂质体瞬时转染技术将靶向沉默PHLPP1的小干扰RNA(si-PHLPP1)转染入足细胞,实时定量PCR检测转染效率;按足细胞处理方式的不同将细胞分为NG组(正常葡萄糖浓度的培养液进行培养的足细胞)、 HG组(高糖培养液培养的足细胞)、 HG联合si-PHLPP1组(高糖培养液培养转染si-PHLPP1后的足细胞组)、羟氯喹(HCQ)处理的HG组(用自噬抑制剂HCQ与HG培养液联合处理的足细胞)。透射电镜观察各组足细胞中自噬小体的形成, Western blot法检测微管相关蛋白1轻涟3(LC3)、 P62、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、磷酸化的mTOR(p-mTOR)、裂解型胱天蛋白酶3(c-caspase-3)、蛋白激酶B (AKT)及磷酸化的AKT(p-AKT)蛋白表达,异硫氰酸荧光素标记的膜联素Ⅴ/碘化丙啶(annexinⅤ-FITC/PI)双标记结合流式细胞术检测细胞凋亡。结果 PHLPP1在DN患者肾组织中高表达,且主要表达于肾小球足细胞内。HG培养液能够促进足细胞中PHLPP1 mRNA表达,并具有时间依赖性;与NG组相比, HG组、 HG联合si-PHLPP1组及HG联合HCQ组的足细胞自噬水平、 PI3K蛋白表达与mTOR的磷酸化水平均显著减低,细胞凋亡率、 c-caspase-3蛋白表达水平均显著增加,但HG联合si-PHLPP1组细胞的AKT磷酸化水平明显升高,其余两组AKT磷酸化水平显著降低;与HG组相比, HG联合si-PHLPP1组细胞的凋亡率、c-caspase-3蛋白表达均明显降低,而自噬水平, PI3K蛋白表达与mTOR和AKT蛋白的磷酸化水平均显著增加, HG联合HCQ组细胞的自噬水平明显降低,凋亡率与c-caspase-3蛋白表达均显著增加,其他指标无明显变化。结论 PHLPP1在DN肾组织显著高表达,下调足细胞PHLPP1的表达通过激活PI3K/AKT/mTOR通路促进足细胞自噬水平,减少足细胞的凋亡。

敲低ASAP1降低结核分枝杆菌感染小鼠RAW264.7细胞的迁移能力

目的观察含SH3结构域-ADP-核糖基化因子(Arf)GTP酶激活蛋白-锚蛋白重复序列和PH结构域1(ASAP1)介导小鼠RAW264.7巨噬细胞对结核分枝杆菌感染过程的影响以及ASAP1对巨噬细胞迁移能力的影响。方法建立ASAP1敲低的RAW264.7细胞系,感染结核分枝杆菌H37Ra后,利用荧光共聚焦显微镜和平板计数方法对胞内细菌的载量进行检测,采用TranswellTM法检测ASAP1敲低细胞的迁移能力。结果与对照组细胞相比,ASAP1敲低的RAW264.7细胞感染H37Ra后胞内细菌载量增多,且细胞迁移能力降低。结论敲低ASAP1降低RAW264.7细胞的迁移能力。