树舌灵芝深层发酵产物抑菌作用的研究

以分离自广西乐业天坑群的树舌灵芝的深层发酵产物(菌丝体、发酵液)为试材,采用滤纸片法、二倍稀释法,研究了树舌灵芝发酵产物提取物的抑菌作用,以期为开发防腐、食品保鲜产品提供参考依据。结果表明:树舌灵芝菌丝体提取物和发酵液提取物中均含有抗菌活性物质,发酵液乙酸乙酯提取物的抑菌能力最强,对10种供试菌均有较好的抑菌效果;发酵液乙酸乙酯提取物梯度洗脱、分离纯化后得到的30%乙酸乙酯组分(B5)的抑菌能力最高,对10种供试菌的抑菌圈直径基本上均最大;B5对藤黄微球菌的最低抑菌浓度(MIC)值为25 mg·mL^(-1),对大肠杆菌等5种菌的MIC值为50 mg·mL^(-1),对酿酒酵母的MIC值为200 mg·mL^(-1),对黑曲霉、米曲霉和绿色木霉的MIC值为400 mg·mL^(-1)。

树舌灵芝中三萜类化合物的提取工艺研究

[目的]研究树舌灵芝中三萜类化合物的提取工艺条件。[方法]采用微波萃取法、浸提法、回流法和超声法研究了树舌灵芝中三萜类化合物的提取工艺条件,然后通过单因素试验和中心组合试验对提取工艺条件进行了优化,并比较了不同提取方法对三萜化合物的提取效率的影响。[结果]微波萃取法的最佳提取条件为:乙醇浓度75%,提取时间15 min,提取温度75℃,料液比1∶20(g/ml);在此条件下三萜类化合物的平均提取率为0.748%;浸提法、回流法和超声法中三萜类化合物的提取率分别是微波萃取法的74%、80%和83%。[结论]微波萃取法具有试剂用量少、时间短和提取效率高的优点,是树舌灵芝中三萜类化合物的最佳提取方法。

树舌灵芝总三萜提取工艺优化及其抗氧化作用研究

以树舌灵芝为原料,研究总三萜的提取工艺及其抗氧化性。选择料液比、乙醇浓度、超声温度和超声时间进行单因素实验,在单因素实验基础上,采用Box-Behnken试验设计,以树舌灵芝总三萜得率为响应值进行响应面分析,确定最优工艺参数为:料液比1∶20(g/m L),乙醇浓度70%,超声温度55℃,超声时间60 min。在此工艺条件下进行5次验证性实验,树舌灵芝总三萜的提取得率平均值为1.75%。并通过测定DPPH的清除率、羟基自由基的清除率以及总还原力,研究其抗氧化活性。

树舌灵芝化学成分分析及其多糖、三萜组分的抗氧化活性

本研究测定了树舌灵芝子实体的粗多糖、粗蛋白、粗脂肪、矿物质元素以及三萜的含量,分析了其氨基酸、脂肪酸及矿物质元素组成,并通过测定DPPH·与HO·的清除率,研究三萜及多糖的抗氧化活性。研究结果表明,树舌灵芝子实体含有总糖43.8%,三萜1.75%,蛋白质11.4%,粗脂肪0.40%,灰分1.80%,维生素C 10.5%,维生素A 15.6%;还包含丰富的矿物质元素如Ca、Fe、Zn等,其含量分别为5740、29.7、15.6 mg/kg。树舌灵芝子实体还富含甲硫氨酸(19.3 g/kg)、天冬氨酸(5.5 g/kg)、缬氨酸(19.4 g/kg)、亮氨酸(4.2 g/kg)以及亚油酸(340.9 mg/kg)等,是一种营养丰富且气味独特的食药用菌,通过测定DPPH·的清除率与HO·的清除率得知,三萜与多糖均具有一定的抗氧化活性,且三萜的抗氧化能力比多糖强。

长白山药用真菌树舌凝集素的纯化及生化特性

用硫酸铵分级沉淀、离子交换和HPLC层析等方法,从长白山药用真菌树舌的菌丝体中分离纯化了一种凝集素(Ganoderma applanatum lectin,简称GAL),SDS-PAGE检测其为单一蛋白条带。经过SDS-PAGE测得其亚基分子量为15kDa左右,HPLC分析分子量为58kDa左右,表明GAL由4个亚基组成。氨基酸组成分析表明,GAL中甘氨酸含量较高,不含蛋氨酸和色氨酸,中性糖含量约11.2%。圆二色CD谱显示其含有3.6%的α螺旋、46.8%的β转角和49.6%无规则卷曲,不含有β折叠。GAL可以凝集供试的2种动物血和3种血型人血的血红细胞,但对不同来源的血红细胞凝集滴度不同。糖抑制实验表明,只有棉籽糖和D-松三糖部分抑制GAL的凝血活性。GAL具有较好的热稳定性且其凝血活性不受Ca2+、Mg2+和Zn2+等二价阳离子的影响。

树舌多糖对胃黏膜损伤大鼠胃黏膜PGE_2含量及血流量和黏液分泌的影响

目的:研究树舌多糖对大鼠胃黏膜损伤的保护作用及其机制。方法:采用醋酸法和幽门结扎法复制大鼠胃溃疡模型,分别测定胃黏膜PGE2含量和胃黏膜血流量及胃黏液分泌。结果:与模型对照组比较,多次灌服树舌多糖250～1000mg·kg-1可明显增加大鼠胃黏膜PGE2含量和胃黏膜血流量,对大鼠胃内游离黏液和胃壁黏液的分泌也具有显著的增加作用,且有明显量效关系。结论:树舌多糖通过提高胃黏膜PGE2含量和胃黏膜血流量及胃黏液分泌来加强胃黏膜屏障,这是其保护胃粘膜损伤的作用机制之一。

树舌灵芝菌丝体发酵工艺条件试验

树舌灵芝是灵芝属真菌中的一种,是我国中医药宝库中的珍贵药用菌。为寻求高产的生长条件和经济的培养基,进行了转速、温度、pH值、装瓶体积、接种量、碳源、氮源、C/N等单因素试验和多因素试验设计,利用菌丝体液体培养探索这些条件对菌丝体产量的影响。结果表明,菌丝生长的最适转速为150r/min,最适温度为25～30℃,最适pH值为5.5～6.5,最适装瓶体积为125ml,最适接种量为5ml/100ml;最适碳源为葡萄糖,最适氮源为米糠,最适C/N为25:1。液体培养的最佳营养条件为:3%的葡萄糖,0.072%的KNO3,0.02%的NaH2PO4,pH为8.5。通过生长曲线实验得出logistic方程:Y=0.616/(1+17.732e-8.874x),菌丝体干重达到500～700mg/100ml。

长白山树舌水溶性多糖的研究——F_T.F_A分离纯化与结构确定

长白山树舌经分离纯化获两个级份 F_T.F_A,经超离心、电泳、Sepharose 4B 柱层析检验。F_T 与 F_A 均为均一级份。采用 G.C.、高碘酸氧化、Smith 降解、部分酸水解、甲基化分析、IR、H—NMR、^(13)C-NMR 等方法,确定 F_T、F_A 均是由β(1→3)葡萄糖基组成其主链,在6—0上有分支,F_T 分支较多,F_A 分支较少。

树舌荧光多糖的制备及其在人大肠癌细胞SWWC1116中的定位

应用胺化还原法在树舌灵芝液体深层发酵浸膏水提多糖(GAP)的还原性末端连接荧光基团(FITC),制备荧光标记GAP(FITC-GAP),并测定其荧光取代率为0.90%.利用xCELLigence RTCA DP全自动实时细胞分析仪检测GAP荧光标记,其前后的细胞毒活性不变.流式细胞仪和荧光显微镜对GAP在人大肠癌细胞SWWC1116定位结果表明,GAP可与人大肠癌细胞SWWC1116的细胞膜结合,并可转运至细胞核内.

树舌胞内多糖抗氧化活性的研究

目的:探讨树舌胞内多糖(GAPS)体外抗氧化作用。方法:从清除超氧阴离子自由基、抑制羟基自由基的产生、清除DPPH自由基和还原力4个方面,研究了树舌胞内多糖的体外抗氧化效果。结果:树舌胞内多糖有较强的还原力,并在体外对超氧阴离子自由基(O_2^-·)、羟基自由基(·OH)、DPPH有机自由基有较强的清除作用。树舌胞内多糖浓度为1.0mg/mL时,其清除O_2^-·能力为36.36%;对于·OH,在浓度为2.5mg/mL时,清除率达到56.97%;对于DPPH·,在浓度为1.0mg/mL时,清除率达到45.31%;当树舌胞内多糖浓度为0.5mg/mL时的还原能力与0.03mg/mLV_C相当。结论:树舌胞内多糖具有抗氧化方面的应用开发前景。

树舌胞外富锌多糖体外抗氧化活性研究

利用树舌的深层发酵法获得胞外富锌多糖,从抗油脂过氧化、抑制羟自由基的产生、清除DPPH.和O.-24个方面,探讨树舌胞外富锌多糖抗氧化活性。结果表明:树舌富锌培养基内ZnSO4浓度在200μg/mL时,可以显著提高胞外多糖的有机锌含量,使有机锌含量达0.67 mg/g,比对照组提高252%。有机锌对提高胞外多糖抗氧化能力有显著的效果,在多糖浓度为2.5 g/L,对油脂过氧化的抑制、清除羟自由基、DPPH.和O2.-的能力分别比对照提高12.5%、26.83%、30%和20%。胞外富锌多糖抗氧化活性与多糖浓度呈显著的量效关系。

20种真菌抑制HBV的实验研究

本文研究了20种吉林长白山区产的真菌对HBV的抑制作用。使用体外试管法测定对HBV DNAP的抑制、细胞生物学方法及在感染乙肝病毒的幼鸭上行整体实验。结果证明:某些真菌有抑制HBV作用,以冬虫夏草及树舌作用较强。它们对HBV-DNAP抑制率可达85％,抑制PLC/PRF/5细胞分泌HBsAg作用超过50％,并能抑制鸭体内的鸭乙肝病毒(DHBV)感染。通过实验提出一种系统研究抑制HBV药物的实验方法。

树舌灵芝菌丝体多糖提取条件的研究

对树舌灵芝菌丝体粗多糖的提取条件进行研究,通过单因素试验和L(934)正交试验设计等方法,重点考察不同的浸提剂、浸提温度、料液比、浸提时间、乙醇沉淀倍数对树舌灵芝多糖提取率的影响。结果表明,最佳提取条件为:浸提剂为氢氧化钠(4%),料液比为1∶30(g/mL),温度为80℃,时间为4h,乙醇沉淀体积为3倍,多糖提取率为4.022%。

树舌灵芝免疫调节蛋白基因克隆,生物信息学分析及真核表达载体构建

树舌灵芝(Ganoderma applanatum)为灵芝属内独特的一类,克隆树舌灵芝免疫调节蛋白(fungal immunomodulatory protein,FIP)基因,对其进行生物信息学分析并构建真核表达载体,将为高效表达重组树舌灵芝FIP和揭示其生物学功能奠定基础。采用染色体步移的方法从树舌灵芝菌丝体基因组DNA中扩增得到1个新型真菌免疫调节蛋白基因—FIP-gap,对其核苷酸序列进行生物信息学分析,结果表明,FIP-gap基因属于灵芝属FIP家族,含有342 bp,编码113个氨基酸。对其氨基酸序列分析表明:树舌灵芝免疫调节蛋白FIP-gap分子量为12.7 k D,理论等电点为4.93,富含丝氨酸,缬氨酸和苏氨酸,不含组氨酸和半胱氨酸。另外将FIP-gap与其他灵芝属FIP进行蛋白质序列比对分析,其具有FIP典型的保守序列,并与灵芝(G.lucidum)、松杉灵芝(G.tsugae)、紫灵芝(G.japoncium)、紫芝(G.sinensis)、小孢子灵芝(G.microsporum)和黑灵芝(G.atrum)具有78%、78%、78%、79%、78%和77%的同源性,为一新型的FIP。构建灵芝属真菌免疫调节蛋白系统进化树,结果表明树舌灵芝FIP-gap与其他灵芝属FIP均不聚类,说明其与其他灵芝属FIP的亲缘性相对较远。同时,构建了毕赤酵母重组表达载体p PIC9-FIP-gap,为进一步研究FIP-gap的生物学功能提供基础,为全面了解真菌免疫调节蛋白提供理论依据。

树舌灵芝发酵液中灵芝酸的提取及测定

利用有机溶剂萃取法提取树舌灵芝MP-01发酵液中灵芝酸,并用分光光度法测定提取液中灵芝酸的含量,确定了分光光度法测定的最佳比色条件为:比色波长为520 nm,5%香草醛-冰醋酸和高氯酸用量分别为0.2 mL和1.0 mL(在反应系统中浓度分别为1.0%和83%),显色温度70℃,显色时间为25 min,在此条件下测得醇溶物和醇沉物提取液中灵芝酸含量分别为0.022 mg/g和0.049 mg/g。

富锗树舌胞内多糖抗氧化活性研究

利用树舌深层发酵法制备富锗胞内多糖,并测定其体外抗氧化活性。结果表明:氧化锗在250μg/mL质量浓度时,对胞内多糖产量及有机锗的含量有显著提高,同时富锗胞内多糖对超氧自由基(O.-2)、羟基自由基(.OH)、DPPH.及亚硝酸盐有较好的清除作用,且还原能力较强。

灵芝三萜类成分与药理学研究进展

灵芝的化学成分有三萜类、多糖、生物碱、有机酸、核苷、氨基酸、酶类及微量元素等 ,其主要成分是三萜类化合物中的灵芝酸。由于灵芝化学成分的多样性 ,使灵芝具有较广泛的药理活性 ,主要包括抗肿瘤作用 ;调节免疫系统、心血管系统、神经系统、呼吸系统的作用 ;保肝、抗衰老、抗病毒、消炎抗菌、放射保护作用 ;清除氧自由基和抗氧化、致突变、活血化淤作用 ;对学习和增强记忆有良好的影响。

树舌灵芝深层发酵培养基的优化研究

通过单因素试验,确定以米糠和蔗糖为复合碳源,黄豆粉为氮源,以筛选的碳源、氮源与无机盐KH2PO4和MgSO4.7H2O为考察因素,以菌丝干重和总三萜产量为主要指标,利用正交设计法优化树舌灵芝菌丝体培养基配方比例,确定树舌灵芝液体发酵培养基最佳配方为:米糠40.0g/L,蔗糖10.0g/L,黄豆粉40.0g/L,磷酸氢二钾2.0g/L,硫酸镁0.5g/L,自然pH。于25℃、120r/min振荡培养7d,该菌菌丝体干重高达21.41g/L,总三萜产量为69.94g/L。

UHPLC-Q-Exactive-Orbitrap-MS整合网络药理学探讨树舌灵芝有效成分及其防治新型冠状病毒肺炎的可行性

目的基于UHPLC-Q-Exactive-Orbitrap-MS技术阐明树舌灵芝主要成分,结合网络药理学探讨其防治新型冠状病毒肺炎的作用机制。方法采用UHPLC-Q-Exactive-Orbitrap-MS技术鉴定树舌灵芝的主要成分;采用Swiss Target Prediction数据平台对鉴定成分进行靶点预测,对核心靶基因进行GO和KEGG富集分析,运用Cytoscape 3.8.0绘制关联网络图,同时通过分子对接评价树舌灵芝核心成分与血管紧张素转化酶Ⅱ(ACE2)及3种新型冠状病毒(SARS-CoV-2)蛋白的结合作用。结果该研究从树舌灵芝中鉴定化合物62个;30个活性化合物主要作用在IL-6、PTGS2和MAPK1等32个核心靶点,通过PI3K/Akt、TNF及肺结核等多条与肺损伤保护相关通路,发挥防治COVID-19的作用;分子对接显示小白菊内酯、1,4-二羟基-2-萘甲酸和瑞香素等核心成分与ACE2及3种SARS-CoV-2蛋白的亲和作用较好。结论该研究初步阐明树舌灵芝的化学成分及潜在作用机制,为筛选树舌灵芝防治COVID-19的药效成分及深入阐明作用机制提供了科学的理论依据。