利鼻片HPLC指纹图谱及多组分含量测定

目的建立多组分含量测定结合化学计量学分析,评价利鼻片质量。方法采用高效液相色谱法,Waters SunFire C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);乙腈(A)-0.55%磷酸水溶液(B)为流动相;梯度洗脱,流速:1.0 ml·min^(-1);切换检测波长:323、280、248 nm;柱温:35℃,进样量:10μl。采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统结合聚类分析与正交偏最小二乘判别分析评价15批利鼻片质量。结果建立的利鼻片HPLC指纹图谱共确定了19个共有峰,并指认出其中7个色谱峰;利鼻片中菊苣酸、绿原酸、咖啡酸、黄芩苷、木兰脂素、欧前胡素、异欧前胡素的平均回收率分别为100.30%、99.87%、99.25%、99.45%、99.08%、98.75%和98.58%,RSD均<1.5%(n=6)。15批利鼻片中上述7个成分的含量测定结果分别为15.05~17.93、10.17~12.51、7.03~9.30、4.42~6.50、1.08~2.76、1.01~1.76、1.00~1.90 mg·g^(-1)。不同批次利鼻片存在差异,区分的特征峰为菊苣酸、绿原酸和木兰脂素。聚类分析结果表明3家企业的样品各自聚为一类,S1~S4(陕西康惠)聚为一类,S5~S10(通化民泰)聚为一类,S11~S15(长春银诺克)聚为一类。正交偏最小二乘法判别分析结果表明这4种化学成分〔10号峰菊苣酸(VIP值为2.216)、6号峰未知(VIP值为1.934)、4号峰绿原酸(VIP值为1.438)、13号峰木兰脂素(VIP值为1.013)〕显著影响利鼻片的分类,是引起该制剂质量差异的潜在标志性成分,可以考虑将这些差异标志性成分作为指标成分监控利鼻片的质量。结论建立的综合质量评价法简便、专属、准确,可客观评价利鼻片质量。

黄芩苷对抗结核药物肝损伤保护作用的实验研究

目的探讨黄芩苷对抗结核药物肝损伤的保护作用机制。方法将60只小鼠完全随机分为6组,即正常对照组,肝损伤(异烟肼+利福霉素钠)组,联苯双酯组及黄芩苷高、中、低剂量组。给药8d后,分别用光镜和电镜观察肝脏组织细胞病理学的改变情况,用免疫组织化学染色技术分析肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达情况。结果黄芩苷能明显减轻肝细胞变性和坏死,炎症活动程度明显减轻(P<0.05或P<0.01);TNF-α蛋白在黄芩苷组小鼠肝脏组织内为弱阳性表达(P<0.05或P<0.01);黄芩苷3个剂量组间小鼠肝脏病理形态学及肝脏组织内TNF-α蛋白的表达均无显著性差异(P>0.05)。结论黄芩苷对抗结核药物肝损伤的保护作用可能与抑制TNF-α蛋白表达有关。

小柴胡汤滴丸质量标准研究

目的建立小柴胡汤滴丸的质量标准。方法采用薄层色谱(TLC)法对小柴胡汤滴丸中的柴胡、黄芩进行薄层色谱定性鉴别,采用HPLC法对制剂中黄芩的黄芩苷进行含量测定,采用Hypemil C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇-0.2%磷酸溶液(45∶55),检测波长为280 nm,柱温30℃。结果薄层鉴别的色谱斑点清晰,阴性对照无干扰;黄芩苷在0.1～1.2μg/mL范围内呈良好线性关系,平均回收率为99.20%,RSD为2.29%(n=6)。结论本方法可用于小柴胡汤滴丸的质量控制,具有简便、准确及专属性强的特点。

黄芩提取物的耐药抑制作用机理初步研究

目的探讨黄芩提取物对耐药性金黄色葡萄球菌的耐药抑制机理,为中药耐药抑制剂的研究开发提供一定的基础。方法采用SDS-PAGE电泳法测定黄芩提取物处理后耐药性金黄色葡萄球菌蛋白质电泳图谱变化情况;采用荧光分光光度法测定菌体内环丙沙星药物的蓄积量。采用半自动生化分析仪测定细菌细胞外液中有关酶活性。结果耐药金黄色葡萄球菌在分子量为43kDa～55 kDa范围内有蛋白质条带的缺失或表达量的降低,经黄芩提取物处理后这些蛋白质可恢复表达或表达量增加;黄芩提取物可使菌体内环丙沙星蓄积浓度明显增加,但对细菌细胞膜通透性无明显影响。结论黄芩提取物具有恢复耐药菌某些蛋白质的表达和抑制膜上外排泵的作用,因此具有明显的耐药抑制作用。

HPLC法测定胆胰康泰散中黄芩苷含量

目的 测定胆胰康泰散中黄芩苷的含量。方法 采用HPLC法。ODS色谱柱 (4mm× 2 5 0mm ,5 μm) ;流动相为甲醇 -四氢呋喃 - 0 .0 2mol·L-1KH2 PO4水溶液 (4∶1∶6 ) ;流速 :1.0m1/min ;柱温 :2 5℃ ;检测波长 :2 78nm。结果 HPLC法测定黄芩苷可达基线分离 ,进样量为 0 .0 8～ 0 .8μg时线性良好 ,平均回收率为 99.4 7% ,RSD为 0 .71%。结论 该法操作简便 ,结果准确 ,重现性好 ,可用于胆胰康泰散中黄芩苷的含量测定。

黄芩茎叶总黄酮对大鼠气囊滑膜炎抗炎作用机制的研究

目的:研究黄芩茎叶总黄酮的抗炎机制。方法:制作大鼠气囊滑膜炎模型,测定各组大鼠炎性渗出物中蛋白质总量。采用酶联免疫分析方法,定量检测白三烯(LTB4)的生成量。结果:黄芩茎叶总黄酮组可明显抑制炎性渗出物中蛋白质及LTB4的生成。结论:黄芩茎叶总黄酮的抗炎作用机制与抑制5-脂氧合酶活性有关。

胆胰康泰散质量标准研究

目的 建立胆胰康泰散的质量标准。方法 采用 TL C法对胆胰康泰散中的大黄、丹参进行定性鉴别 ;并采用 HPL C法对处方中的黄芩所含黄芩苷进行了含量测定。ODS分析色谱柱 (4 mm× 2 5 0 mm,7μm) ;流动相为甲醇 -四氢呋喃 - 0 .0 2 m ol/ L KH2 PO4(4∶ 1∶ 6 ) ;流速 :0 .8ml/ min;检测波长 :2 76 nm。结果 处方中大黄、丹参所含主要成分与其它成分分离良好。 HPL C法测定黄芩苷可达基线分离 ,进样量为 0 .0 8～ 0 .8m g· ml- 1时线性良好 ,回归方程 :Y=15 6 32 X- 2 36 6 ,r=0 .9996 ,5次测定平均加样回收率为 99.47 ,RSD为0 .71%。结论 该法操作简便 ,结果准确 ,重现性好 ,可作为该制剂的质量控制方法。

王氏连朴饮加滑石、黄芩;茵达日-4味汤对温病湿热模型、炎性反应因子IL-1β、IL-6、TNF-α的影响

目的:通过动物实验观察王氏连朴饮加滑石、黄芩;茵达日-4味汤对大鼠湿热模型、炎性反应因子血清白细胞介素1β、白细胞介素6、肿瘤坏死因子α的作用影响。方法:建立大鼠湿热炎性反应模型,设空白组、模型组、对照药组、中药组、蒙药组分别采取不同处理方法观察记录各项指标,血清细胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α检测采用酶联免疫吸附法(ELISA)。结果:中蒙医温病经典方在治疗大鼠湿热症状上具有可靠疗效,尤其在改善大鼠进食饮水减少,大便稀软,口角眼角分泌物增多等方面有显著成效。ELISA检测显示对照药组IL-1β、IL-6、TNF-α无意义,中药组TNF-α有统计学意义(P<0.01),对IL-1β、IL-6无意义(P>0.05),蒙药组TNF-α有统计学意义(P<0.01)、IL-6有意统计学义(P<0.05),对IL-1β无意义(P>0.05)。结论:王氏连朴饮加滑石、黄芩;茵达日-4味汤在解除湿热症状上有切实可靠的作用,对腹腔炎性反应引起的发热及炎性反应,虽然细胞因子血清检测没有得出有力检验数据支持,但动物模型治疗后期各项体征监测都有好转。ELISA检测显示中药组TNF-α有统计学意义(P<0.01);蒙药组TNF-α有统计学意义(P<0.01)、IL-6有统计学意义(P<0.05)。

黄芩-金银花药对治疗新型冠状病毒肺炎潜在作用机制的网络药理学研究

目的:基于网络药理学探讨黄芩-金银花药对与新型冠状病毒肺炎(COVID-19)关联关系及潜在作用机制。方法:利用TCMSP和STRING数据库平台过滤黄芩-金银花的有效化合物及对应作用靶点;运用Cytoscape 3.7.0统计软件建立并分析黄芩-金银花有效化合物-作用靶点网络;利用STRING数据库平台和Cytoscape 3.7.0统计软件建立并分析黄芩-金银花有效化合物作用靶点PPI网络;利用Bioconductor对作用靶点进行GO功能和KEGG通路富集分析。结果:黄芩-金银花59个有效化合物通过171条通路作用于202个靶点发挥其中医临床功效及潜在的COVID-19治疗作用。结论:黄芩-金银花所含的活性化合物可能通过抗病毒、抗炎等和肺、肝及心血管保护等作用,对COVID-19引发的肺损伤、肝损伤、心血管疾病和炎性反应具有潜在的预防与治疗作用,研究结果可为中医药治疗新冠肺炎提供一定的理论基础与科学依据。

黄芩防治疫病本草文献、药理学及临床研究概况

目的对历代本草类文献关于黄芩防治疫病的情况以及现代相关药理作用、预防诊治疫病的临床研究进行探讨,丰富临床应用中医药防治疫病思路。方法查阅历代及近代黄芩干预疫病的相关文献、药理实验及临床研究,进行总结分析。结果对于黄芩的论述最早见于《神农本草经》,许多古代的文献记载了黄芩干预疫病。黄芩具有抗炎、调节免疫、抗菌、抗病毒、保护肝脏及生殖系统等药理作用,临床疗效较好。结论黄芩本草文献学、药理学、临床研究以及近几年新冠病毒感染的临床实践,都表明了黄芩在防治新冠病毒感染方面具有突出贡献。

高效液相色谱法及高效毛细管电泳法对黄芩苷的含量测定比较

目的:高效液相色谱法及高效毛细管电泳法测定黄芩中黄芩苷含量结果的分析比较。方法:高效液相色谱法采用 C_(18)柱,甲醇∶水∶磷酸(60∶40∶0.2)为流动相,检测波长280hm。高效毛细管电泳法采用缓冲液为40mmol/L硼砂缓冲液(pH8.5),75KPa·s 压力进样,17Kv 恒压电泳(25℃),检测波长280nm。结果:通过对两种方法间的系统适用性试验、线性范围、重复性、方法回收率试验的比较研究,证明两种方法测定结果基本一致。结论:两种方法均适合于黄芩含量的测定分析。

法学基础理论课程改革的思考与探索

《法学基础理论》课程的设置必须改革,其方向是分别开设两门课程;在一年级开设《法学导论》,在高年级开设《法理学》。前者介绍法和法学的基础知识,后者阐述法的一般原理,包括法治国家的一般理论。

青羚散的薄层色谱鉴别

目的:研究青羚散的质量控制方法。方法:采用薄层色谱(TCL)鉴别对青羚散中大黄、平贝母、黄苓进行鉴别。结果:三味药材的薄层色谱鉴别呈阳性,阴性对照无干扰。结论:方法可靠,对青羚散的质量控制有重要意义。

黄连解毒汤组方在体外对白念珠菌生物膜的影响

目的对黄连解毒汤和单味药在体外对白念珠菌生物膜的影响进行对比分析,为今后的研究与临床工作提供有价值的参考信息。方法采取MTT法对白念珠菌的悬浮菌、生物膜对黄连解毒汤、单味药的敏感性进行评价;药物预先包被对白念珠菌生物膜生成产生的影响。结果经研究发现,黄柏、黄芩对白念珠菌悬浮菌的MIC50、MIC90以及对白念珠菌生物膜的SMIC50、SMIC90与黄连解毒汤比较无明显差异;而黄连MIC50、MIC90以及对白念珠菌生物膜的SMIC50、SMIC90与黄连解毒汤比较发生明显降低,并且低于黄柏和黄芩。结论黄柏、黄芩对体外白念珠菌生物膜具有一定的抑制作用,并与黄连解毒汤效果相近,黄连的抑制效果更加的明显。

含大黄、黄芩、黄连和黄柏药材的中成药微生物限度检查法的建立

目的:建立含大黄、黄芩、黄连和黄柏药材的中成药微生物限度检查方法。方法:通过对大黄、黄芩、黄连和黄柏4种药材的抗菌谱、最小抑菌浓度、敏感菌株等的归纳,总结出表征成药总抑菌活力的公式。结果:根据抑菌药材在处方中的含量可以快速计算成药的总抑菌活力,进而快速选择适宜的微生物限度检查法进行实验验证。结论:该方法可以大大简化实验操作,缩短工作时间,为简化2010年版中国药典的修订与验证提供了新的思路。

黄芩对血管性痴呆沙土鼠学习记忆及海马神经细胞凋亡的作用研究

目的:探讨中药黄芩乙醇提取物对血管性痴呆(Va D)沙土鼠的保护作用及抑制海马CA1区神经细胞凋亡的研究。方法:以双侧颈总动脉夹闭沙土鼠为研究对象,实验分为正常对照组、Va D组、Va D+黄芩低剂量(25mg/kg)组、Va D+黄芩中剂量(50mg/kg)组、Va D+黄芩高剂量(100mg/kg)组,采用乙醇提取黄芩,腹腔注射给药,2次/d,共14d。采用Morris水迷宫评价沙土鼠的学习记忆能力,Nissl染色观察海马CA1区神经细胞的形态变化,TUNEL染色观察神经细胞的凋亡,Western blotting方法检测B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)/Bcl-2相关x蛋白(Bax)凋亡通路变化。结果:黄芩乙醇提取物能够增加提高沙土鼠的学习记忆能力,减少Morris水迷宫中潜伏期时间(P<0.05,P<0.01),增加穿梭次数(P<0.05,P<0.01);减轻海马组织的病理性改变;降低神经细胞的凋亡数(P<0.01),并且提高了Bcl-2/Bax的比值(P<0.05)。结论:黄芩乙醇提取物能够改善Va D沙土鼠的学习记忆能力,减轻海马组织的凋亡,其作用机制可能与Bcl-2/Bax凋亡通路相关。

基于液相质谱联用的黄芩水提液抗病毒效应的脂质组学研究

目的:研究黄芩水提液干预对呼吸道合胞病毒(RSV)感染BALB/c小鼠血浆和肺组织脂质代谢异常的调节作用。方法:RSV滴鼻感染BALB/c小鼠,黄芩水提液灌胃给药进行干预,采集血浆和肺组织样品进行基于超高效液相-二维线性离子阱高分辨静电场组合质谱仪(UPLC-LTQ/Orbitrap XL)的脂质组学研究,考察干预前后脂质代谢物组的变化,寻找潜在生物标志物,探讨黄芩水提液抗病毒作用的途径。结果:正常组、模型组、利巴韦林组、黄芩组血浆和肺组织脂质谱均得到明显分离,在血浆和肺组织中分别鉴定了与RSV感染相关的9种和7种生物标志物,主要包括甘油磷脂酰胆碱、鞘磷脂和甘油三酯,黄芩水提液干预对部分异常脂质代谢具有明显的改善作用。结论:黄芩水提液能有效缓解RSV感染所致的甘油磷脂酰胆碱、鞘磷脂和甘油三酯代谢紊乱,表明黄芩抗病毒的作用机制可能与调节这些代谢途径有关。

黄芩苷对自身免疫性脑脊髓炎大鼠细胞凋亡的影响

目的观察黄芩苷(BAC)对自身免疫性脑脊髓炎(EAE)大鼠的疗效及其对脊髓炎症细胞凋亡的影响。方法 44只Wistar大鼠随机分为正常对照组(NC,n=10)、EAE组(n=12)、地塞米松治疗组(DXM,n=12)、BAC治疗组(n=10)。DXM组和BAC组在抗原免疫后1周分别予以DXM(1 mg/kg)和BAC(200 mg/kg)治疗7 d;观察各组动物脊髓病理变化及髓鞘碱性蛋白(MBP)表达的情况和脊髓炎症细胞凋亡情况。结果 EAE组、DXM组和BAC组较NC组体重均下降,BAC组体重较EAE组及DXM组明显上升(P<0.05)。DXM组和BAC组大鼠神经功能评分明显优于EAE组(P<0.05);DXM组和BAC组脊髓MBP阳性数均较EAE组显著增多(P<0.05)。DXM组和BAC组脊髓炎症细胞凋亡数均较EAE组显著增多(P<0.05)。结论 BAC对EAE大鼠有治疗作用,并且能促进大鼠脊髓炎症细胞凋亡。

基于大鼠机体能量代谢生物标志物变化的黄芩药性研究

目的:运用代谢组学方法探究黄芩及其拆分组分对寒、热证模型大鼠能量代谢的影响,寻找潜在干预靶点及其代谢途径,通过整合分析探讨其作用机制并对各组分的药性进行归属,为黄芩合理用药及临床应用提供重要依据。方法:基于代谢组学角度对黄芩及其拆分组分进行药性归属,以及与能量代谢有关的药效学评价。采用Unify软件对各组分中化合物进行鉴定,并通过高效液相色谱法(HPLC)、超高压液相色谱-飞行时间质谱技术(UPLC-TOF-MS)与MarkerlynxTM软件进行互不交叉验证。通过UPLC-TOF-MS技术对黄芩干预的寒、热证大鼠尿液进行代谢组学研究。结果:代谢组学结果显示,寒证模型大鼠鉴定出2-氨基马来酸等10个与能量代谢相关的生物标志物。其中黄芩全成分可减慢基因转录进程和促进色酪氨酸代谢过程。黄芩多糖可抑制谷胱甘肽代谢、能量代谢及三羧酸循环。黄芩苷元作用不明显。黄芩苷类能够对能量代谢起到显著抑制作用。热证模型大鼠鉴定出色胺等10个与能量代谢相关的生物标志物。其中黄芩全成分可减慢核酸代谢和细胞代谢过程;黄芩多糖除了与全成分有相似的作用外,还能减慢葡萄糖代谢;黄芩苷元能抑制核酸代谢与糖代谢;黄芩苷类能够抑制核酸代谢。结论:黄芩对寒、热证模型大鼠能量代谢作用呈现抑制的趋势,并且干预靶点不同,证明在其4段不同的药效物质基础组分中,全成分、苷类、苷元、多糖均为寒性。