穿心莲内酯介导c-SKI抑制心肌成纤维细胞转分化和心肌纤维化

目的:探讨c-SKI(cellular Sloan-Kettering Institute)蛋白表达变化对穿心莲内酯(andrgrapholide,Andr)治疗小鼠心肌纤维化的影响。方法:将18只C57雄性小鼠随机分为control组、模型组[异丙肾上腺素(isoprenaline,ISO)组]和ISO+Andr组,每组6只。ISO组和ISO+Andr组小鼠皮下注射ISO,control组注射生理盐水;ISO+Andr组小鼠给予Andr灌胃,ISO组和control组给予等体积生理盐水灌胃。给药8周,取心脏组织进行HE和Masson染色检测病理特征;免疫组化或Western blot实验检测c-SKI和细胞外基质(extracellular matrix,ECM)相关蛋白水平;qPCR检测c-SKI mRNA水平。用不同浓度Andr干预人心脏成纤维细胞(human cardiac fibroblasts,HCFBs)48 h,CCK-8实验检测细胞活力,Western blot实验检测c-SKI和ECM相关蛋白水平。用Andr最低有效剂量处理转分化细胞模型,显微镜观察细胞形态,Western blot实验检测c-SKI和ECM相关蛋白水平,qPCR检测c-SKI mRNA水平。敲减c-SKI和Andr联合处理转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)诱导的HCFBs,CCK-8实验检测细胞增殖活力,Western blot实验检测c-SKI和ECM相关蛋白水平。结果:与ISO组相比,Andr干预后小鼠心肌纤维排列整齐,心肌细胞形态基本正常,细胞膜完整,胶原容积分数显著减少(P<0.01),c-SKI的mRNA和蛋白水平显著上调(P<0.05或P<0.01),纤连蛋白1(fibronectin 1,FN1)、α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、波形蛋白(vimentin)和I型胶原(collagen type I,Col I)蛋白水平显著下调(P<0.01)。HCFBs经50μmol/L Andr处理48 h,细胞活力显著降低(P<0.01),FN1、α-SMA、vimentin和Col I蛋白水平显著下调(P<0.01),c-SKI表达显著上调(P<0.01)。与PBS组相比,TGF-β1组细胞数量增多,胞核固缩,细胞形态改变,细胞中FN1、α-SMA、vimentin和Col I蛋白表达显著上调(P<0.01),c-SKI表达显著下调(P<0.01);Andr干预逆转了TGF-β1对HCFBs的诱导作用。敲减c-SKI和Andr联合处理显著下调HCFBs中c-SKI表达(P<0.01),显著上调FN1、α-SMA、vimentin和Col I蛋白表达水平(P<0.05),显著增强细胞活力(P<0.05)。结论:Andr可能通过调控c-SKI表达影响TGF-β1信号通路,抑制心肌成纤维细胞增殖和ECM沉积,从而抑制心肌纤维化。

c-ski在食管鳞状细胞癌中的表达及意义

目的:研究c-ski在食管鳞癌组织中的表达以及与临床病理特征之间的关系,探讨食管鳞癌的发病机制并为其早期诊断及治疗寻找新的因子。方法:采用原位杂交法及免疫组化SP法检测22例正常食管组织,24例上皮内瘤变组织及84例食管鳞癌组织中c-ski mRNA及c-ski蛋白的表达情况。结果:c-ski mRNA在食管上皮组织,上皮内瘤变组织和食管鳞癌组织中的阳性表达率分别是13.6%(3/22),62.5%(15/24),92.9%(78/84),3组差异具有高度统计学意义(P<0.01);c-ski蛋白在食管上皮组织,上皮内瘤变组织和食管鳞癌组织中表达阳性率分别是6.67%(6/22),45.8%(11/24),70.2%(59/84),3组差异具有高度统计学意义(P<0.01)。c-ski蛋白在食管鳞癌中的表达与TNM分期有相关性(P<0.05),而与患者的年龄、性别、肿瘤分化程度、淋巴结转移等均关系不大。结论:c-ski可能是一个潜在的癌基因,在食管鳞癌的发生发展中起作用。