二烯丙基二硫通过磷酸化Chk1负调控Cdc25C/CyclinB1/CDK1通路阻滞白血病K562细胞G_(2)/M期

目的:研究二烯丙基二硫(diallyl disulfide,DADS)诱导人白血病K562细胞周期阻滞及其分子机制。方法:采用CCK-8、细胞计数及流式细胞术观察DADS对K562细胞增殖与周期阻滞效应。Western Blot检测DADS对K562细胞PCNA、Chk1/2以及下游分子Cdc25C、CyclinB1与CDK1表达的影响。结果:CCK-8检测显示,15μmol/L、30μmol/L、60μmol/L、120μmol/L、240μmol/L DADS处理后,呈浓度依赖性抑制K562细胞增殖,抑制率分别为32.48%、59.34%、66.42%、77.06%、81.05%(P<0.05)。对照组与Tween80组无抑制作用(P>0.05)。细胞计数结果显示,30μmol/L、60μmol/L与120μmol/L DADS处理K562细胞后,群体倍增时间分别为22.71±0.29、36.69±0.93与73.02±0.87呈浓度依赖性增加(P<0.05),而Tween80组与对照组无明显差异(P>0.05)。流式细胞术检测显示,60μmol/L与120μmol/L DADS作用K562细胞24 h与48 h后,G_(2)/M期百分率分别增加到17.6%与28.5%和18.6%与34.4%,较对照组有显著性差异(P<0.05)。60μmol/L DADS作用K562细胞1 h、2 h、4 h、8 h和24 h后,PCNA表达呈时间依赖性表达下调(P<0.05)。p-Chk1表达呈时间依赖性上调(P<0.05),而Chk1、Chk2与p-Chk2表达无明显差异(P>0.05)。并且,Cdc25C、CyclinB1和CDK1分别呈时间依赖性下调(P<0.05),但是,14-3-3蛋白无明显改变(P>0.05)。结论:DADS可磷酸化Chk1通过Cdc25C/CyclinB1/CDK1通路抑制K562细胞增殖与阻滞G_(2)/M期。

比例电磁阀内置式CDC减振器设计与验证

设计了一种比例电磁阀内置式连续阻尼可调(Continuously Damping Control,CDC)减振器,分析了其主要结构组成及工作原理,并基于流体力学建立了参数化仿真模型。通过仿真和试验的方法获得了该CDC减振器的示功特性曲线和速度特性曲线,并从2组特性曲线的形态变化来分析了其阻尼特性的可调范围和调节特点。结果表明:仿真和试验结果相对误差小于10%,仿真模型准确有效;该CDC减振器的阻尼力随着激励电流的增大而减小,这种减小趋势的速率随着激励电流的增加先增大后减小;速度特性曲线的斜率在“拐点速度”之前逐渐变大,在“拐点速度”之后基本不变,且随着激励电流的增大而逐渐减小;该CDC减振器在复原行程的阻尼力可调范围为1544~4914 N,压缩行程的阻尼力可调范围为-1415~-1937.7 N。

CDC20通过稳定NLRP3的表达促进食管癌细胞增殖的研究

背景与目的:食管癌(esophageal carcinoma,ESCA)是死亡率较高的恶性肿瘤之一,其发生、发展的机制不明。CDC20被认为具有癌基因功能,其表达失调与肿瘤的发生、发展密切相关。CDC20在多种肿瘤中表达升高,敲低CDC20能够抑制肿瘤细胞增殖。NLRP3是炎症小体的主要成分之一,炎症小体失调与肿瘤的发生、发展也密切相关。本研究旨在探究CDC20是否通过NLRP3促进ESCA细胞增殖,同时分析其调控机制。方法:通过癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库和GTEx公共数据库分析ESCA患者中CDC20和NLRP3基因的表达水平。收集新乡医学院第一附属医院收治的80例ESCA患者的临床病理学资料和组织,通过免疫组织化学染色检测NLRP3在ESCA患者中的蛋白表达水平。本研究通过新乡医学院第一附属医院伦理委员会的审批(编号:EC-021-137)。通过短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)技术检测敲低CDC20和NLRP3基因后对食管鳞状细胞癌细胞系EC9706和KYSE150增殖能力的影响。通过免疫共沉淀(Co-immunoprecipitation,Co-IP)、蛋白酶体抑制剂和泛素化实验检测CDC20是否与NLRP3相互作用,以及阐明CDC20是否通过泛素化途径调控NLRP3表达。结果:TCGA数据库分析结果显示,ESCA组织中CDC20和NLRP3 mRNA表达水平明显高于癌旁组织。免疫组织化学结果也进一步显示,与癌旁组织相比,CDC20、NLRP3在ESCA组织中蛋白表达水平升高。敲低CDC20和NLRP3基因可抑制ESCA细胞增殖。Co-IP、蛋白酶体抑制剂和泛素化实验证实CDC20通过NLRP3的LRR区与NLRP3相互作用,且CDC20通过促进NLRP3泛素化稳定其表达。结论:CDC20和NLRP3在ESCA癌组织中表达上调,且CDC20通过泛素化NLRP3稳定其表达,从而促进ESCA细胞增殖,提示CDC20和NLRP3可能是ESCA潜在的诊断靶向标志物。

CRISPR/Cas9技术敲除斑马鱼cdc42基因对骨软骨发育的影响

目的利用CRISPR/Cas9技术敲除斑马鱼cdc42基因,探讨其对早期骨软骨发育的影响。方法通过多序列比对分析cdc42的种属保守性,设计cdc42基因的gRNA,利用CRISPR/Cas9技术构建cdc42敲除的斑马鱼突变体。应用整胚原位杂交检测cdc42的表达模式,繁殖并利用转基因标记鱼系Tg(col2a1a:GFP)观察软骨发育表型,并通过茜素红染色观察椎体矿化。结果多序列比对分析显示cdc42在人、小鼠和斑马鱼中高度保守,原位杂交结果显示cdc42在斑马鱼头颅及身体中广泛表达,包括下颌软骨区域。成功设计cdc42的gRNA并利用CRISPR/Cas9技术构建了cdc42基因敲除的斑马鱼突变体。cdc42突变体在受精后第3天表现出体长短小(P<0.01)和头颅发育迟缓,头部和眼睛小(P<0.01),以及下颌发育凹陷。Tg(col2a1a:GFP)斑马鱼显示突变体梅克尔软骨和角舌软骨细胞形态异常,软骨细胞排列紊乱,其角舌软骨夹角增大、长度缩短(P<0.01)。纯合突变体在受精后10~13 d死亡。茜素红染色结果提示突变体椎体矿化数量减少以及软骨内骨化面积减少(P<0.01)。结论通过CRISPR/Cas9技术成功敲除了斑马鱼cdc42基因,导致下颌软骨发育迟缓、椎体矿化延迟以及软骨内成骨减少。

CDC42基因的激活和抑制对烟曲霉极性生长影响的初步探究

目的构建烟曲霉CDC42基因显性激活性(dominant active,DA)和显性抑制性(dominant negative,DN)点突变菌株,初步了解这两种点突变对烟曲霉极性生长以及RAC1基因表达的影响。方法运用分子生物学方法构建CDC42基因激活性(CDC42^(G14V))和抑制性(CDC42^(T19N))菌株;光学显微镜观察点突变菌落特征;RT-PCR方法检测Ku80、DA Cdc42和DN Cdc42菌株中RAC1的表达量。结果成功构建烟曲霉CDC42显性激活性(DA)和显性抑制性(DN)点突变菌株并经测序确认;烟曲霉DA Cdc42和DN Cdc42菌株的菌落生长直径、形成分生孢子数和各时间点孢子发芽率较对照株Ku80都明显降低,且差异均有统计学意义(P<0.05);RT-PCR结果表明DA Cdc42和DN Cdc42菌株中的RAC1的表达量均较对照株Ku80有所上升(P<0.05)。结论CDC42的激活和抑制都会对烟曲霉的极性生长产生负面影响;且会影响RAC1基因的表达。

考虑CDC系统时滞的半主动悬架控制器设计研究

针对某高级轿车研制的CDC减振器原理样机,通过实验测试及其数据分析,建立了考虑CDC系统时滞影响的非线性系统模型。分别对单、双电磁阀两种模式CDC减振器进行了研究。充分考虑复杂多变的车辆实际运行工况及系统非线性因素(包括路面激励较大时可能导致的悬架缓冲块撞击,以及轮胎跳离地面等情况),基于建立的非线性车辆系统模型及不同激励水平输入下的非线性系统仿真,研究了减振器系统时滞对车辆性能的影响。结合NSGA-Ⅱ算法优化结果,设计了一个改进的天棚控制算法,分别对单、双阀减振器进行了车辆性能分析与对比。研究结果表明,采用最优天棚控制的双阀CDC减振器相比于单阀CDC减振器有更好的控制效果,且对CDC系统时滞适应能力更强。研究结果可为自主研发的减振器设计和改进提供指导,并为CDC半主动悬架控制算法设计提供重要依据。

CDC42介导树突状细胞迁移行为的力学感知

目的本研究探索DC感知细胞外力学微环境变化动态调整其迁移行为的分子机制,以期为干预体内DC的迁移行为、提升DC抗肿瘤免疫治疗效果提供理论依据和新策略。方法本研究对比DC在不同刚度基底上的迁移行为;探究肝脏纤维化如何调控DC的浸润情况;分析肝硬化患者单细胞测序结果寻找调控DC迁移行为的力学感知的关键分子,并通过相应的激动剂、抑制剂等检测其功能。结果DC在较硬基底上的迁移受到显著抑制;大鼠纤维化肝脏中的DC浸润数量相较于正常大鼠肝脏显著增加,抗纤维化治疗后下降至正常水平;RNA-seq结果表明CDC42可能是DC感知环境刚度变化动态调整其迁移行为的关键分子;在DC迁移实验中加入CDC42抑制剂、激动剂发现DC在软、硬基底上的迁移能力均受到CDC42功能的显著影响。结论(1)DC在较硬基底上迁移能力受损,肝脏纤维化导致的组织刚度增加潜在可能通过抑制DC的迁移效率导致DC浸润增加;(2)CDC42是DC感知环境刚度变化动态调整其迁移行为的关键分子,以CDC42作为靶点的策略有望提升DC抗肿瘤免疫治疗效果。

酿酒酵母细胞cdc50基因敲除及其转录组测序分析

为探讨cdc50基因对酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)细胞功能的影响,该研究以PYM14质粒为模板,采用醋酸锂转化法对野生型酿酒酵母BY4742进行cdc50基因敲除,测定突变菌株Δcdc50生长情况,分别对野生型酵母菌株BY4742和突变菌株Δcdc50进行转录组分析,筛选二者差异表达基因(DEGs),并对其进行基因本体论(GO)、京都基因与基因百科全书(KEGG)富集分析。结果表明,成功构建酿酒酵母cdc50基因缺失菌株Δcdc50,cdc50基因缺失后酵母细胞形态由圆形变为杆状,培养12 h后菌株Δcdc50相对生长率为1.98%,较野生型酵母BY4742菌株显著降低(P<0.05)。与野生型酵母菌株BY4742相比,菌株Δcdc50的DEGs共有581个,其中271个基因上调,310个基因下调。GO富集分析表明,DEGs主要富集在生物学过程中的氧化还原过程等,分子功能中的氧化还原酶活性、辅助因子结合和跨膜转运体活性等。KEGG富集分析表明,DEGs主要富集于糖酵解/糖异生、脂肪酸降解和碳代谢通路等。

LncRNA CDC6通过抑制c-Myc表达调节肺癌细胞增殖、凋亡和上皮间质转化

目的探讨LncRNA CDC6(CDC6)对肺癌细胞增殖、上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)和凋亡的影响及其作用机制。方法RT-qPCR检测肺癌组织和细胞中CDC6和c-Myc的mRNA水平,并分析CDC6和c-Myc mRNA水平与患者临床指标的相关性。随后,通过CDC6-siRNA和pcDNA-CDC6转染,或CDC6-siRNA和pcDNA-c-Myc共转染肺癌细胞;MTT法检测细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞凋亡;Western Blotting检测增殖、凋亡及EMT相关蛋白的表达。结果LncRNA CDC6在肺癌组织和细胞系中高表达(P<0.05)。CDC6和c-Myc mRNA水平与肺癌的病理分型、TNM分期、分化程度以及淋巴结的转移密切相关。沉默CDC6抑制肺癌细胞增殖,促进细胞凋亡,降低增殖相关蛋白以及EMT相关蛋白表达水平,促进促凋亡蛋白Bax表达,抑制抗凋亡蛋白Bcl-2表达(P<0.05)。过表达CDC6促进肺癌细胞增殖,抑制细胞凋亡,上调增殖相关蛋白以及EMT相关蛋白表达,减少促凋亡蛋白Bax水平,增加抗凋亡蛋白Bcl-2水平(P<0.05)。过表达c-Myc逆转了沉默CDC6对A549细胞增殖、凋亡以及EMT相关蛋白表达的影响。结论LncRNA CDC6通过调控c-Myc促进EMT过程及肺癌细胞的增殖能力,抑制细胞凋亡。

CDC20在胃腺癌组织中的表达及其临床意义

目的:检测细胞分裂周期蛋白20(cell division cycle 20,CDC20)在胃腺癌组织中的表达及临床病理学意义。方法:使用GEPIA数据库分析CDC20在非肿瘤性胃黏膜组织及胃癌组织中的mRNA水平。免疫组化(SP)法检测CDC20蛋白表达,分析其与胃腺癌临床病理特征及预后的关系。结果:GEPIA分析显示,CDC20在胃腺癌组织中显著高表达(P<0.05)。免疫组化结果显示:CDC20蛋白在胃腺癌组织中的阳性表达率明显高于癌旁正常胃黏膜组织(P<0.05)。且CDC20表达与胃腺癌的淋巴结转移、TNM分期以及分化程度显著相关(P<0.05)。Cox比例风险回归模型分析显示:CDC20高表达是影响胃腺癌患者预后的独立危险因素(P<0.05)。结论:胃腺癌组织中CDC20呈高表达,与肿瘤分期和淋巴结转移显著相关,可能是胃腺癌预后的标志物。

黄牛、牦牛和犏牛睾丸组织中Cdc2、Cdc25A基因mRNA表达水平

黄牛和牦牛远缘杂交后代犏牛雄性不育是牦牛杂交改良中的一大难题。Cdc2和Cdc25A是减数分裂的两个关键基因,其表达水平的下降将使精子发生不能正常进行,导致雄性不育。为了探讨Cdc2、Cdc25A基因mRNA表达水平与犏牛雄性不育的关系,文章采用荧光定量PCR技术对Cdc2和Cdc25A基因的组织表达特征以及在黄牛、牦牛和犏牛睾丸组织中的表达水平进行了分析。结果表明:Cdc2和Cdc25A基因在牦牛各种组织中广泛表达,说明Cdc2和Cdc25A基因在各种组织细胞分裂和细胞周期运行中均发挥作用;黄牛和牦牛睾丸组织中Cdc2、Cdc25A基因表达水平均显著高于犏牛(P<0.05),说明睾丸组织中Cdc2和Cdc25A基因的低表达可能与犏牛雄性不育相关。

环状RNA CDC14A表达与急性缺血性脑卒中发生风险、严重程度及复发的相关性研究

目的探讨急性缺血性脑卒中(AIS)患者血清环状RNA CDC14A(circCDC14A)表达与疾病发生风险、严重程度及复发的关系。方法纳入国药葛洲坝中心医院AIS患者114例作为观察组,收集其基线资料,根据患者AIS严重程度分为轻型组39例、中型组50例、重型组25例;随访6个月,根据是否复发分为未复发组94例和复发组20例。同期纳入本院因紧张性头痛或周围性眩晕而住院观察的非AIS患者126例作为对照组。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测血清circCDC14A水平;绘制受试者工作特性(ROC)曲线分析血清circCDC14A表达水平对AIS发生风险的评估价值及对AIS患者复发的预测价值;采用多因素Logistic回归分析AIS患者复发的影响因素。结果观察组血清circCDC14A表达水平高于对照组,差异有统计学意义(t=12.558,P<0.01)。观察组血清circCDC14A表达水平评估AIS发生风险的曲线下面积(AUC)为0.888,敏感度为84.2%,特异度为84.1%。重型组AIS患者血清circCDC14A表达水平高于轻型组和中型组,中型组血清circCDC14A表达水平高于轻型组,差异有统计学意义(F=14.772,P<0.01)。复发组血清circCDC14A表达水平及高血压、高血脂、吸烟患者比例高于未复发组(t/χ^(2)=4.503、4.028、21.596、4.658,P<0.05)。血清circCDC14A预测AIS患者复发的AUC为0.764,敏感度为55.0%,特异度为96.8%。circCDC14A、高血脂是AIS患者复发的危险因素(OR=2.627、2.459,P<0.01)。结论AIS患者血清circCDC14A高表达,且其表达水平与疾病发生风险、AIS严重程度及复发均相关,可作为潜在预测标志物。

小鼠受精卵早期发育过程中PKC对cdc2和cdc25C活性的影响

为研究小鼠受精卵细胞早期发育过程中PKC对cdc2和cdc2 5C活性的影响 ,采用免疫印迹和电泳迁移率差异分析的方法 ,观察PKC的激活剂TPA及其抑制剂星形孢子素对小鼠受精卵一细胞期cdc2和cdc2 5C活性的影响 .10nmol L的TPA作用 10min后 ,小鼠受精卵一细胞期卵裂率明显大于对照组 (P <0 0 5 ) ,而星形孢子素作用后卵裂率显著下降 (P <0 0 1) .TPA处理后 ,受精卵中呈去磷酸化状态的活性cdc2明显增加 ,没有活性呈磷酸化状态的cdc2 5C明显减少 ;而星形孢子素处理的受精卵中没有活性的cdc2明显增加 ,有活性的cdc2 5C明显减少 .结果表明 ,TPA短时间作用可以促进小鼠一细胞期受精卵分裂 ,星形孢子素抑制受精卵的分裂 ;TPA可以促进cdc2的去磷酸化以及cdc2 5C的磷酸化 ,从而促进G2 M转换 ,星形孢子素则抑制cdc2和cdc2 5C的活性 ,阻止受精卵由G2

技能习得理论下“CDCD”教学法在实训课程中的应用

目的:探讨技能习得理论下“CDCD”教学法在《基础护理学》实训教学中的实践效果。方法:从2021级18个实训组中采用随机数字表法随机抽取2个组为试验组,2个组为对照组。对照组采用常规教学法,试验组采用CDCD教学法,比较2组学生的阶段性操作成绩、期末操作考核成绩和操作总成绩,及对教师课堂教学效果的评价。结果:试验组学生阶段性操作成绩、期末操作考核成绩和操作总成绩均高于对照组(P<0.05),试验组学生对CDCD教学法的课堂评价高于对照组。结论:CDCD教学法能有效提升学生的实践技能水平及对课堂教学的满意度。

CDC策略下三氯化铁催化哒嗪酮衍生物N-H烷基化研究

利用FeCl_(3)催化的交叉脱氢偶联反应,在温和反应条件下,建立了哒嗪酮N-H与烷基C(sp^(3))-H之间形成C-N键的方法.不同的哒嗪酮类化合物与氧/硫醚反应,顺利得到了一系列N-氧基/硫烷基哒嗪酮衍生物,收率为44%~83%.该方法为构建具有潜在生物活性的N-取代哒嗪酮类化合物提供了一种新的策略.

2013年AHA/ACC/CDC有效控制高血压的科学建议解读

由美国心脏协会（AHA）、美国心脏病学会（ACC）和美国疾病预防与控制中心（CDC）共同制定的《有效控制高血压的科学建议》[1]（以下简称《建议》）于2013年11月15日在高血压杂志（Hypertension）在线发表。这是第一次由这3个学术和疾病预防组织在高血压的防控方面提出联合的建议。

细胞周期调控因子CDC25A、B抑制剂F09ZB-860H的研究

目的从真菌的代谢产物中筛选出对细胞周期调控因子CDC25A、CDC25B具有抑制活性的化合物,为研发新抗癌药物提供了先导化合物。方法利用基于重组表达的CDC25A和CDC25B建立的高通量筛选模型进行体外酶抑制活性测定,筛选获得活性菌株;筛选得到的阳性菌株,其发酵液溶剂提取物经硅胶柱层析及HPLC制备分离,得到活性化合物并通过综合波谱解析确定了活性化合物结构;利用肿瘤细胞株进行活性化合物体外抗肿瘤细胞增殖活性评价。结果从真菌F09ZB-860的代谢产物中分离得到活性化合物F09ZB-860H,其结构与脱氢弯孢菌素相同。该化合物对CDC25A和CDC25B的IC50值分别为4.0和14.9μg/mL。抗癌细胞增殖结果表明该化合物具有强肿瘤细胞增殖抑制活性,对人宫颈癌细胞株HeLa和人乳腺癌细胞株MDA-MB-231的IC50值分别为0.7和2.8μg/mL。结论 F09ZB-860H是一个新的CDC25A和CDC25B双抑制剂,并具有强抗癌细胞增殖活性。

CDC28蛋白激酶调节亚基2对卵巢癌A2780细胞丝足形成的影响及其机制研究

目的探讨CDC28蛋白激酶调节亚基2(CKS2)对A2780细胞丝足形成的影响及其可能机制。方法采用慢病毒介导的sh RNA敲除A2780细胞的CKS2基因,显微镜下观察细胞丝足的变化;采用细胞划痕实验检测A2780细胞迁移能力的变化;采用real time PCR检测CKS2敲除对CDC42两种剪接变异体(CDC42-V1和CDC42-V2)表达的影响,以及不同卵巢癌标本中CKS2、CDC42-V1和CDC42-V2剪接变异体的表达情况。结果 CKS2表达抑制后,A2780细胞丝足明显减少,细胞迁移能力明显减弱(P<0.05),CDC42-V1 m RNA表达降低,而CDC42-V2 m RNA表达升高(P<0.05)。Real time PCR结果显示,卵巢癌组织标本中CKS2及CDC42-V1的表达高于对应的正常卵巢组织,而CDC42-V2的表达低于对应的正常卵巢组织(P<0.05)。结论 CKS2通过调控CDC42的选择性剪接而影响细胞丝足的形成,进而影响卵巢癌细胞A2780的迁移能力。

芒果苷对白血病HL-60细胞周期及CDC2/CyclinB1表达的影响

目的:观察芒果苷对白血病HL-60细胞周期分布及细胞周期素B1(CyclinB1)、细胞周期分裂基因2(CDC2)表达的影响,以进一步探讨芒果苷抗白血病的分子作用机制。方法:应用MTT比色法测定芒果苷对白血病HL-60细胞增殖的抑制作用;用流式细胞术(FCM)检测芒果苷对细胞周期的影响;用RT-PCR技术检测CyclinB1及CDC2 mRNA表达水平。结果:芒果苷呈剂量及时间依赖性抑制HL-60细胞的生长,作用24 h后,G2/M期细胞增多,出现G2/M期阻滞;CyclinB1 mRNA和CDC2 mRNA的表达随药物质量浓度的增加而逐渐增强,在芒果苷质量浓度80μmol/L时表达达到峰值。结论:芒果苷可抑制HL-60细胞增殖,阻滞细胞周期于G2/M期,显著上调HL-60细胞CyclinB1 mRNA和CDC2 mRNA的表达水平。芒果苷诱导HL-60细胞G2/M期阻滞可能是其抗白血病作用的分子机制之一。

去甲斑蝥素对肿瘤细胞DNA复制起始蛋白Cdc6的抑制作用

目的本研究旨在明确去甲斑蝥素(Norcantharidin,NCTD)对肿瘤细胞DNA复制起始蛋白Cdc6的抑制作用。方法采用MTT法检测NCTD对多种肿瘤细胞,包括:HeLa、HepG2、Jurkat以及Ramos细胞增殖的抑制作用;采用Westernblotting检测NCTD对细胞Cdc6蛋白表达的影响;BrdU掺入实验检测NCTD对肿瘤细胞DNA复制的影响。结果 NCTD显著抑制上述4种肿瘤细胞的增殖,肿瘤细胞Cdc6蛋白被降解,DNA复制受到明显抑制。结论 NCTD可诱导多种肿瘤细胞Cdc6蛋白的降解并有效抑制肿瘤细胞的DNA复制及增殖,Cdc6蛋白可能是NCTD的一个有效抗肿瘤靶点。