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ESTABLISHMENT OF CELL CLONE OF LYMPHOMA AND A CELL LINE INFECTED WITH LEUKEMIA VIRUS AND STUDY ON ITS INDUCTED DIFFERENTIATION
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作者 程立 孔宪寿 +3 位作者 刘小沅 许菡 邓平 殷莲华 《Chinese Journal of Cancer Research》 SCIE CAS CSCD 1992年第3期64-68,共5页
Since 1960, the tumor strains of L6565 viral leukemia, SRS lymphoma and L783 transplantable leukemia were established successively in our laboratory. Recently, derived from the strains of threse leukemia/lymphoma, SRS... Since 1960, the tumor strains of L6565 viral leukemia, SRS lymphoma and L783 transplantable leukemia were established successively in our laboratory. Recently, derived from the strains of threse leukemia/lymphoma, SRS-82 cell line, SACIIB2, SACIIC3 cell clones and a cell line infected with SRS leukemia virus (SRSV/3T3) were obtained at vitro. The main results of study on the biology, virology and Its Induction of differentiation are summarily reported. 展开更多
关键词 cell line cell clone lymphoma leukemia nude mice cell differentiation.
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ELECTRON MICROSCOPIC OBSERVATION OF DIFFERENTIATION OF LEUKEMIC CELL CLONE AFTER CFU-MIX CULTURE
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作者 陈燕 王辨明 +3 位作者 李崇渔 喻东姣 阮幼冰 郑清平 《Chinese Journal of Cancer Research》 SCIE CAS CSCD 1992年第1期45-50,共6页
By scanning and transmission electron microscopy, leukemlc celb were obwrved after CFU-Mix culture. Even though granulocytlc growth factor, erythropoietin and lymphocytlc growth factor were added at vitor, acute leuke... By scanning and transmission electron microscopy, leukemlc celb were obwrved after CFU-Mix culture. Even though granulocytlc growth factor, erythropoietin and lymphocytlc growth factor were added at vitor, acute leukemlc celb still showed defects In differentiation and maturation. These were characterized by abnormal colony which consisted of smooth cells, bizarre shape, nuclear-cytoplasmic asynchrony In development, and appearance of nuclear bleb. However, chronic myelogenous leukemlc celb were more nature than the acute ones, manifesting in normal colony with finger- like projections and ruffled membrane. Macrophages and eosinophils could be observed. It b suggested that there b a difference In differentiation between acute and chronic leukemia cells. 展开更多
关键词 In cell ELECTRON MICROSCOPIC OBSERVATION OF DIFFERENTIATION OF LEUKEMIC cell clone AFTER CFU-MIX CULTURE CML CFU AML
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Establishment of cell clones with different metastatic potential from the metastatic hepatocellular carcinoma cell line MHCC97 被引量:112
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作者 Yan Li Zhao-You Tang Sheng-Long Ye Yin-Kun Liu Jie Chen Qiong Xue Jun Chen Dong-Mei Gao Wei-Hua Bao Liver Cancer Institute and Zhongshan Hospital of Fudan University (Former Liver Cancer Institute of Shanghai Medical University),Shanghai 200032,China 《World Journal of Gastroenterology》 SCIE CAS CSCD 2001年第5期630-636,共7页
AIM: To establish clone cells with different metastatic potential for the study of metastasis-related mechanisms. METHODS: Cloning procedure was performed on parental hepatocellular carcinoma (HCC) cell line MHCC97, a... AIM: To establish clone cells with different metastatic potential for the study of metastasis-related mechanisms. METHODS: Cloning procedure was performed on parental hepatocellular carcinoma (HCC) cell line MHCC97, and biological characteristics of the target clones selected by in vivo screening were studied. RESULTS: Two clones with high (MHCC97-H) and low (MHCC97-L) metastatic potential were isolated from the parent cell line. Compared with MHCC97-L, MHCC97-H had smaller cell size (average cell diameter 43 microm vs 50 microm) and faster in vitro and in vivo growth rate (tumor cell doubling time was 34.2h vs 60.0h). The main ranges of chromosomes were 55-58 in MHCC97-H and 57-62 in MHCC97-L. Boyden chamber in vitro invasion assay demonstrated that the number of penetrating cells through the artificial basement membrane was (37.5 +/- 11.0) cells/field for MHCC97-H vs (17.7 +/- 6.3)/field for MHCC97-L. The proportions of cells in G0-G1 phase, S phase, and G2-M phase for MHCC97-H/MHCC97-L were 0.56/0.65, 0.28/0.25 and 0.16/0.10, respectively, as measured by flow cytometry. The serum AFP levels in nude mice 5wk after orthotopic implantation of tumor tissue were (246 +/- 66) microg.L(-1) for MHCC97-H and (91 +/- 66) microg.L(-1) for MHCC97-L. The pulmonary metastatic rate was 100% (10/10) vs 40% (4/10). CONCLUSION: Two clones of the same genetic background but with different biological behaviors were established, which could be valuable models for investigation on HCC metastasis. 展开更多
关键词 ALBUMINS Animals Carcinoma Hepatocellular cell Division Chromosomes clone cells Flow Cytometry Hepatitis B Hepatitis B Surface Antigens Hepatitis B virus purification Humans Keratin Liver Liver Neoplasms Experimental Male MICE Mice Inbred BALB C Mice Nude Neoplasm Invasiveness Research Support Non-U.S. Gov't Tumor cells Cultured Virus Integration ALPHA-FETOPROTEINS
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Immunophenotypic analysis of abnormal plasma cell clones in bone marrow of primary systemic light chain amyloidosis patients 被引量:3
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作者 Hu Yang Wang Mangju +6 位作者 Chen Yan Chen Xue Fang Fang Liu Shiqin Zhang Ying Wu Xueqiang Zhu Ping 《Chinese Medical Journal》 SCIE CAS CSCD 2014年第15期2765-2770,共6页
Background Primary systemic light chain amyloidosis (AL) is a rare plasma cell disease,our purpose was to analyze the immunophenotypic characteristics of the plasma cells in bone marrow in AL patients,and explore wh... Background Primary systemic light chain amyloidosis (AL) is a rare plasma cell disease,our purpose was to analyze the immunophenotypic characteristics of the plasma cells in bone marrow in AL patients,and explore whether the detection of abnormal plasma cell clones in bone marrow by flow cytometry (FCM) could be used as an important indicator of AL diagnosis.Methods Fresh bone marrow samples were collected from 51 AL,21 multiple myeloma (MM),and 5 Waldenstr(o)m's macroglobulinemia (WM) patients.The immunophenotype of bone marrow cells were analyzed and compared by FCM using a panel of antibodies including CD45,CD38,CD138,CD117,CD56,and CD19.Results In AL,light chain restriction could be identified in 31 cases (60.9%),in which the λ light chain restriction was found in 24 cases (77.4%).In MM,κ light chain restriction was found in 13 cases (61.9%),and λ light chain restriction in eight cases.CD45 on abnormal plasma cells was negative to weakly positive in both AL and MM,but was positive to strongly positive in WM.In the bone marrow plasma cells of the 51 AL,78.4% were CD56+,68.6% were CD117+,and 88.2% were CD19-.While in the 21 MM cases,66.7% were CD56+,38.1% were CD117+,and 90.4% were CD19-.The plasmacytoid lymphocytes in the five WM patients were CD19+ and CD56-,CD117-.Conclusion Detection of abnormal plasma cell clones in bone marrow by FCM is valuable for the diagnosis of AL. 展开更多
关键词 primary systemic light chain amyloidosis plasma cell clone light chain restriction IMMUNOPHENOTYPE flow cytometry
原文传递
Research on Isolation and Clone of Embryonic Stem Cell-Like in Bovine 被引量:2
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作者 AN Li-long, YANG Qi, XIAO Mei, FENG Xiu-Liang, YANG Chun-rong, LEI An-min, GAO Zhi-min, DOU Zhong-ying and QIU Huai( Agriculture College of Zhanjiang Ocean University, Zhanjiang 524008 , P. R . China Key laboratory of AnimalReproductive Endocrinology and Embryo Biotechnology of Agricultural Ministry of China , Northwestern Scienceand Technology University of Agriculture and Forestry, yangling 712100 , P.R. China) 《Agricultural Sciences in China》 CAS CSCD 2002年第4期450-458,共9页
Bovine embryonic stem cell would be invaluable for researching the aspect of animal cloning, production transgenic animal and discussion of gene function in vitro. With the object of establishing an effective culture ... Bovine embryonic stem cell would be invaluable for researching the aspect of animal cloning, production transgenic animal and discussion of gene function in vitro. With the object of establishing an effective culture system for isolation and clone of bovine pluripotent stem cell, we cultured bovine embryos and mouse embryos including morula blastula and hatached blastula and obtained animal ICM on Primary murine embryonic fibroblast (Primary murine embryonic fibroblast, PMEF) feeder layer with tissue medium(DMEM supplemented with 15ml/100ml NBS,0.1μmol/L Na2SeO3, 0.1mmol/L p-mercaptoethanol, 1000ng/ml LIF, 10 ng/ml IGF, 1mmol/L necessary amino acid and 1mmol/L L-glutamine),then,we obtained mouse ICM and bovine ICM. Moreover, we isolated and cloned the 6 passage bovine ES like cells(12 cell lines) and 9 passage murine ES like cells (52 cell lines) deriving from bovine ICM and murine ICM respectively on the feeder layer of PMEF by disaggregating ICM and ES cell clones of bovine and murine into smaller clumps through digesting with 0.125g/100ml trypsin and 0.02g/100ml EDTA and scattering with a glass needle. The pluripotency of both murine and bovine ES like cells was identified with morphological character, histochemistry identification , karyotype analysis and differentiation of ES cells in vitro or in vivo. This result showed that bovine embryonic stem cell and murine embryonic stem cell had developmental pluripotency. 展开更多
关键词 BOVINE MURINE Embryonic stem cell Inner cell mass ISOLATION clone
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Hepatoprotective Effect of Guava (<i>Psidium guajava</i>L.) Leaf Extracts on Ethanol-Induced Injury on Clone 9 Rat Liver Cells 被引量:1
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作者 Hung-Hui Chen Po-Hua Wu +2 位作者 Diana Lo Yun-Chieh Pan Ming-Chang Wu 《Food and Nutrition Sciences》 2011年第9期983-988,共6页
Guava (Psidium guajava L.), a tropical fruit, belongs to Myrtaceae family. Leaves and fruits of guava have been reported to have an anti-diarrheal, hypoglycemic, lipid lowering, anti-bacterial in addition to antioxida... Guava (Psidium guajava L.), a tropical fruit, belongs to Myrtaceae family. Leaves and fruits of guava have been reported to have an anti-diarrheal, hypoglycemic, lipid lowering, anti-bacterial in addition to antioxidant activities. The aim of this study was to investigate several guava leaf extract cytotoxic effects on healthy clone 9 liver cells and its hepatoprotective effects on ethanol-induced heap-toxicity. It was discovered that when the clone 9 liver cells were treated with guava (Psidium guajava Linn.) extracts for 24 hours, there was no retardation of growth as well as when ethanol and acetone extracts at low concentrations 100 μg/mL and 50 μg/mL were administered however cytototoxic effects were detected at higher concentrations. Water and hot water extracts in concentrations lower than or equal to 500 μg/mL revealed no cytotoxic effects. Injury induction to healthy clone 9 liver cells using 5% alcohol concentration for 30 minutes revealed the hepatoprotective properties of guava (Psidium guajava Linn.) extracts. This was significant in concentrations of 100 μg/mL or lower for ethanol and all concentrations for hot water extracts. Hot water extracts showed higher hepatoprotective and lower cytotoxic properties than other extracts. 展开更多
关键词 GUAVA (Psidium Guajava Linn.) Alcohol-Injured cell Hepatoprotective Properties clone 9 cell Cytotoxicity
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lncRNA NEAT1降表达人喉鳞状细胞癌细胞增殖凋亡变化及与miR-214靶向关系
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作者 罗德艳 冯俊 +2 位作者 彭涛 唐一萍 杨久梅 《山东医药》 CAS 2024年第18期26-30,共5页
目的观察长链非编码RNA(lncRNA)核富集转录体1(NEAT1)降表达的人喉鳞状细胞癌(LSCC)细胞增殖凋亡变化,探讨其与微小RNA-214(miR-214)的靶向关系。方法采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测人永生化表皮细胞Hacat和人LSCC细胞系(FD-LSC-1... 目的观察长链非编码RNA(lncRNA)核富集转录体1(NEAT1)降表达的人喉鳞状细胞癌(LSCC)细胞增殖凋亡变化,探讨其与微小RNA-214(miR-214)的靶向关系。方法采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测人永生化表皮细胞Hacat和人LSCC细胞系(FD-LSC-1、Hep-2、TU177)中lncRNA NEAT1、miR-214,选择TU177细胞为受试细胞。取对数生长期TU177细胞,分为甲、乙组,分别转染si-lncRNA NEAT1(敲低lncRNA NEAT1表达)、si-NC(乱序无意义序列),培养至24 h时采用CCK8法观察两组细胞增殖情况、采用平板克隆形成实验观察两组细胞克隆形成情况、采用流式细胞术观察两组细胞周期和细胞凋亡情况、采用RT-qPCR法检测两组细胞lncRNA NEAT1及miR-214。另取对数生长期TU177细胞,分为一二三四组,一组顺序转染WT-lncRNA NEAT1、miR-214 mimic,二组顺序转染WT-lncRNA NEAT1、miR-NC,三组顺序转染MUT-lncRNA NEAT1、miR-214 mimics,四组顺序转染MUT-lncRNA NEAT1、miR-NC。采用双荧光素酶报告基因实验验证lncRNA NEAT1及miR-214的靶向关系。结果与乙组相比,培养24、48、72 h时甲组TU177细胞OD值低,培养14 d时甲组TU177细胞克隆形成数少,甲组TU177细胞G0/G1期细胞比例高、S期细胞比例低,细胞凋亡率高(P均<0.05);与乙组相比,转染24 h时甲组TU177细胞lncRNA NEAT1相对表达量低、miR-214相对表达量高(P均<0.05)。培养48 h时一、二、三、四组TU177细胞细胞荧光素酶活性分别为0.63±0.08、0.99±0.01、1.02±0.02、0.98±0.03,与二组相比,一组细胞荧光素酶活性低(P<0.05)。结论敲低lncRNA NEAT1表达可抑制TU177细胞的增殖和克隆,阻滞细胞周期于G0/G1期,并促进细胞的凋亡。TU177细胞中lncRNA NEAT1与miR-214靶向相关。lncRNA NEAT1可能通过与miR-214靶向结合,抑制TU177细胞的增殖克隆,阻滞细胞周期于G0/G1期,促进细胞的凋亡。 展开更多
关键词 长链非编码RNA 长链非编码RNA核富集转录体1 微小RNA-214 喉鳞状细胞癌 细胞增殖 细胞凋亡 细胞克隆 细胞周期
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七彩神仙鱼催乳素基因的克隆、定位及表达分析
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作者 成果 温彬 +1 位作者 高建忠 陈再忠 《广东农业科学》 CAS 2024年第4期35-44,共10页
【目的】七彩神仙鱼(Symphysodon aequifasciatus)具有特殊的亲代抚育行为,克隆并定位七彩神仙鱼催乳素基因,分析其在亲代抚育中的表达模式,为理解催乳素在七彩神仙鱼亲代抚育中的作用提供依据。【方法】通过BLASTP对七彩神仙鱼全基因... 【目的】七彩神仙鱼(Symphysodon aequifasciatus)具有特殊的亲代抚育行为,克隆并定位七彩神仙鱼催乳素基因,分析其在亲代抚育中的表达模式,为理解催乳素在七彩神仙鱼亲代抚育中的作用提供依据。【方法】通过BLASTP对七彩神仙鱼全基因组进行分析,鉴定出1个催乳素基因,命名为dfprl。基于dfprl基因的CDS区,设计克隆和PCR引物,通过RACE技术克隆获得dfprl基因全长,并利用生物信息学对dfprl基因进行结构分析,对其氨基酸序列进行理化性质和进化分析。对不同抚育阶段七彩神仙鱼的脑、性腺和皮肤进行转录组分析,探究dfprl基因在亲代抚育中的表达特征,并利用原位杂交技术对dfprl基因在七彩神仙鱼皮肤中的表达进行定位。【结果】dfprl全长为1282 bp,cDNA序列开放阅读框长度为639 bp,共编码212个氨基酸,5'-UTR为309 bp,3'-UTR为334 bp。dfprl蛋白存在PRL家族的典型结构域Hormone_1,dfprl蛋白与慈鲷科其他鱼类PRL蛋白相似性较高,与尼加拉瓜湖始丽鱼(Archocentrus centrarchus)对应的氨基酸序列同源性最高、为96.70%。亲鱼进入抚育阶段后,dfprl在性腺和皮肤中的表达水平逐渐上升,抚育结束时表达水平下降。原位杂交结果显示,dfprl在皮肤粘液细胞中表达,且与七彩神仙鱼催乳素受体(dfprlr)表达位点重叠,在抚育早期阶段高表达。【结论】七彩神仙鱼dfprl基因高度保守,存在稳定的Hormone_1结构域。七彩神仙鱼dfprl基因在亲代抚育阶段的皮肤中高表达,且在亲代抚育阶段的皮肤粘液细胞中与dfprlr表达位点重合,表明dfprl可能通过作用于dfprlr进而促进七彩神仙鱼独特抚育行为的发生。 展开更多
关键词 七彩神仙鱼 催乳素 亲代抚育 皮肤粘液细胞 基因克隆
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体细胞克隆技术扩繁超细型二狼山绒山羊的应用研究
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作者 卿玉波 程雯 +9 位作者 角德灵 刘城 郝志强 郭建雄 李钰莹 张筱琳 李臻 李效宇 王文 魏红江 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期1420-1427,共8页
【目的】通过体细胞克隆技术生产超细型二狼山绒山羊克隆个体,为该技术在地方优质羊品种资源扩繁及新品种培育中的应用提供理论依据。【方法】选择1只4岁龄羊绒细度为13.89μm的二狼山绒山羊(♂),采集耳组织并分离培养成纤维细胞,以其... 【目的】通过体细胞克隆技术生产超细型二狼山绒山羊克隆个体,为该技术在地方优质羊品种资源扩繁及新品种培育中的应用提供理论依据。【方法】选择1只4岁龄羊绒细度为13.89μm的二狼山绒山羊(♂),采集耳组织并分离培养成纤维细胞,以其为供体细胞,利用体细胞克隆技术开展超细型二狼山绒山羊的扩繁研究,通过克隆羊体重、羊绒细度、繁殖性能等指标评估该技术的可行性。【结果】试验成功建立了稳定的山羊卵母细胞体外成熟培养及体细胞克隆技术体系,卵母细胞成熟率为44.8%,孤雌激活卵裂率、囊胚率分别为83.0%、22.4%;二狼山绒山羊克隆胚的卵裂率、囊胚率分别为77.8%、13.7%。获得5只克隆羊个体,其生长发育正常,二狼山绒山羊母羊自然交配共获得16只健康的F1代个体,具有正常繁殖能力。克隆个体羊绒细度极显著低于同龄对照个体(P<0.01)。【结论】本研究通过体细胞克隆技术成功克隆了超细型二狼山绒山羊个体,其具备正常生产性能和繁殖性能,并保留了超细羊绒的特性,为地方优良羊种质资源扩繁和新品种培育应用研究奠定了基础。 展开更多
关键词 二狼山绒山羊 体细胞克隆 羊绒细度 繁殖性能
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荣昌猪Nanog基因克隆与多能性鉴定
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作者 陈鱼 周尹航 +2 位作者 袁子坤 刘安芳 伏彭辉 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2024年第9期2130-2136,共7页
【目的】Nanog基因是一种参与调控与维持干细胞多能性的转录因子,Nanog异位表达可以使体细胞重编程并获得一定的多能性。克隆荣昌猪Nanog基因,构建pMX逆转录病毒载体并鉴定表达载体的转染效率,为荣昌猪进一步的遗传改良与干细胞研究奠... 【目的】Nanog基因是一种参与调控与维持干细胞多能性的转录因子,Nanog异位表达可以使体细胞重编程并获得一定的多能性。克隆荣昌猪Nanog基因,构建pMX逆转录病毒载体并鉴定表达载体的转染效率,为荣昌猪进一步的遗传改良与干细胞研究奠定基础。【方法】以荣昌猪生殖嵴为材料,提取总RNA并反转录为cDNA,经PCR扩增克隆得到荣昌猪Nanog基因。采集荣昌猪耳部组织用组织块法培养荣昌猪成纤维细胞,选择第3~5代的猪成纤维细胞作为转染细胞,通过T-A克隆构建pMD18T-Nanog载体;采用T4连接法将Nanog基因连接到pMX逆转录病毒载体上,酶切鉴定后构建pMX-Nanog-neo表达载体,然后将报告基因EGFP连接到pMX-Nanog-neo构建pMX-Nanog-EGFP表达载体。采用脂质体LTX法进行转染,将pMX-Nanog与pCMV-VSVG按照2∶1的比例混合后,将pMX-Nanog-EGFP表达载体转染293GP包装细胞并收集病毒上清液备用,利用Hoechst染核与Nanog抗体免疫组化鉴定其转染表达效果,随后采用相同方法将pMX-Nanog-neo表达载体转染荣昌猪成纤维细胞并扩大培养,同时通过G418筛选阳性细胞株。【结果】成功克隆出荣昌猪Nanog基因,并成功构建pMX-Nanog-neo与pMX-Nanog-EGFP逆转录表达载体。pMX-Nanog-EGFP表达载体转染293GP细胞,48 h后可见稳定表达的EGFP荧光,细胞扩大培养后通过Hoechst染核与Nanog抗体免疫组化鉴定确认了Nanog基因为稳定核表达蛋白,从而确定所构建的逆转录表达载体可以高效转染细胞并稳定表达目的基因。pMX-Nanog-neo载体转染猪成纤维细胞,通过G418(600 ng/mL)筛选获得稳定表达Nanog基因的阳性细胞株。【结论】构建的pMX逆转录病毒表达载体可以将目的基因Nanog稳定转染猪成纤维细胞并高效表达,为今后进一步研究荣昌猪干细胞多能性维持机制、自我更新机制、分化机制及重编程机制提供可靠的技术方法。 展开更多
关键词 荣昌猪 NANOG基因 干细胞多能性 克隆
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细粒棘球绦虫PCNA蛋白生物信息学分析及验证
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作者 许少全 麦尔哈巴·麦麦提艾力 +5 位作者 吕国栋 周润 赵金龙 李婧 夏衣旦木·吐尼牙孜 赵军 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2024年第11期4956-4963,共8页
【目的】分析细粒棘球绦虫(Echinococcus granulosus sensu lato,Eg)增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)蛋白的生物信息学特性,以及去氢骆驼蓬碱(HM)及其衍生物(H-2-168与H-2-104)对EgPCNA蛋白含量的影响,以期治... 【目的】分析细粒棘球绦虫(Echinococcus granulosus sensu lato,Eg)增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)蛋白的生物信息学特性,以及去氢骆驼蓬碱(HM)及其衍生物(H-2-168与H-2-104)对EgPCNA蛋白含量的影响,以期治疗囊型棘球蚴病并为药物靶点的筛选奠定基础。【方法】运用PCR扩增并克隆EgPCNA基因全长序列,采用生物信息学软件预测和分析EgPCNA蛋白相关生物学信息。利用Mega 7.0构建蛋白序列系统发育树,并运用Western blotting分析HM及其衍生物(H-2-168与H-2-104)对EgPCNA蛋白含量的影响。【结果】EgPCNA基因全长783 bp,编码260个氨基酸,EgPCNA蛋白分子质量为28.36435 ku,等电点为4.62,脂肪指数为96.81,亲水性值为-0.015,为亲水性蛋白,无跨膜结构域。亚细胞定位预测结果显示,蛋白分布于细胞质。该蛋白含有PCNA超家族结构与PCNA保守功能结构域,二级结构主要为无规则卷曲,其次是α-螺旋,有2条可靠的B细胞抗原表位,与人和家鼠等哺乳动物的亲缘关系较远。Western blotting分析结果显示,与DMSO组相比,HM组EgPCNA蛋白表达量极显著上调(P<0.01),H-2-168与H-2-104组EgPCNA蛋白表达量均显著下调(P<0.05)。【结论】本研究成功克隆了EgPCNA全长基因。EgPCNA蛋白对细粒棘球绦虫的DNA复制和修复具有调控作用,H-2-168与H-2-104具有下调EgPCNA蛋白含量的功能。 展开更多
关键词 细粒棘球绦虫 增殖细胞核抗原 克隆 生物信息学
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戊地昔布抑制clone 26肿瘤细胞增生及机制 被引量:1
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作者 李军霞 师晨霞 +2 位作者 苏素文 张永健 王永利 《中国药学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期441-444,共4页
目的探讨戊地昔布对小鼠肠癌clone26细胞的生长抑制作用及机制。方法用噻唑蓝(MTT)法检测戊地昔布对clone26细胞生长的作用。用流氏细胞仪检测clone26细胞凋亡率和细胞周期分布。用Western blot检测clone26细胞caspase-3,PCNA和COX-... 目的探讨戊地昔布对小鼠肠癌clone26细胞的生长抑制作用及机制。方法用噻唑蓝(MTT)法检测戊地昔布对clone26细胞生长的作用。用流氏细胞仪检测clone26细胞凋亡率和细胞周期分布。用Western blot检测clone26细胞caspase-3,PCNA和COX-2的表达.结果①戊地昔布可抑制clone26细胞生长并呈时间和浓度依赖性。②50-400μmol·L^-1戊地昔布可明显提高clone26细胞的凋亡率,从对照的3.1%提高到4.4%~11.0%。给予戊地昔布后,细胞的增殖指数,S期的细胞比例和G2/M期细胞有下降趋势,但只有在400μmol·L^-1戊地昔布组时才有统计学意义。③给予戊地昔布后,细胞PCNA的表达降低,caspase-3的表达升高,COX-2的表达没有变化。结论戊地昔布通过诱导凋亡和细胞周期停滞而抑制clone26细胞生长,小剂量时主要与凋亡有关,大剂量时与诱导凋亡和细胞周期停滞有关、Caspase-3参与戊地昔布诱导的凋亡。 展开更多
关键词 戊地昔布 环氧化酶-2 小鼠肠癌clone26细胞 凋亡
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抗人Ⅰ型干扰素受体亚基1人源化单克隆抗体的制备和鉴定
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作者 裘霁宛 孔永 +4 位作者 陈卫 徐蕾 曹纯洁 陈涛 吴亦亮 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期404-411,共8页
Ⅰ型干扰素在系统性红斑狼疮(SLE)等自身免疫性疾病的发病机制中发挥重要作用,采用抗体阻断其信号转导通路具有潜在的治疗作用。本研究以人Ⅰ型干扰素受体亚基1(IFNAR1)重组蛋白为抗原免疫新西兰白兔,采用B细胞克隆技术筛选兔抗人IFNAR... Ⅰ型干扰素在系统性红斑狼疮(SLE)等自身免疫性疾病的发病机制中发挥重要作用,采用抗体阻断其信号转导通路具有潜在的治疗作用。本研究以人Ⅰ型干扰素受体亚基1(IFNAR1)重组蛋白为抗原免疫新西兰白兔,采用B细胞克隆技术筛选兔抗人IFNAR1单克隆抗体,经过人源化改造获得QX006N。体外研究结果显示,QX006N能特异性地结合人IFNAR1,亲和力约108 pmol/L,可阻断Ⅰ型干扰素信号通路及其介导的生物学效应。本研究为开发靶向干预Ⅰ型干扰素信号途径用于治疗SLE的抗体药物提供了坚实的基础。 展开更多
关键词 B细胞克隆 人源化 兔单克隆抗体 IFNAR1 Ⅰ型干扰素 系统性红斑狼疮
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雄激素受体调控的lncRNA ARLNC1对前列腺癌细胞增殖、克隆、迁移和细胞周期的影响
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作者 郑江婷 尹冶 +1 位作者 寸淑娥 王玉明 《现代肿瘤医学》 CAS 2024年第2期220-226,共7页
目的:探讨雄激素受体(androgen receptor,AR)调控的长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)ARLNC1对前列腺癌细胞增殖、克隆、迁移和细胞周期的影响。方法:选取正常前列腺上皮细胞株WPMY-1和前列腺癌细胞株PC3、VCaP、22RV1、DU145... 目的:探讨雄激素受体(androgen receptor,AR)调控的长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)ARLNC1对前列腺癌细胞增殖、克隆、迁移和细胞周期的影响。方法:选取正常前列腺上皮细胞株WPMY-1和前列腺癌细胞株PC3、VCaP、22RV1、DU145和LNCaP为研究对象,qRT-PCR分析lncRNA ARLNC1的表达水平;双氢睾酮(DHT)以时间和浓度依赖的方式刺激LNCaP细胞,分析lncRNA ARLNC1的转录水平;采用数据库预测和双荧光素酶报告基因系统分析雄激素受体与lncRNA ARLNC1的关系;将LNCaP细胞分为sh-NC和sh-lncRNA ARLNC1组,采用CCK-8分析细胞增殖,检测细胞克隆和迁移能力;流式细胞仪分析细胞周期变化,Western blot分析细胞周期蛋白CyclinD1、CDK6、p27的表达水平。结果:与正常前列腺上皮细胞相比,lncRNA ARLNC1在雄激素依赖性前列腺癌细胞株(LNCaP、VCaP、22RV1)中的表达水平明显增加,而在雄激素非依赖性前列腺癌细胞株(PC3、DU145)中几乎不表达(P<0.05),其中LNCaP细胞变化最显著,所以下续选用LNCaP细胞作为实验株。100 nmol/L DHT刺激LNCaP细胞0、6、12、18、24 h后,lncRNA ARLNC1的转录水平相对于对照组以时间依赖的方式逐渐升高(P<0.05);不同浓度(0、0.1、1、10、100 nmol/L)DHT刺激LNCaP细胞24 h后,lncRNA ARLNC1转录水平随浓度不断增加(P<0.05);JASPAR数据库预测到lncRNA ARLNC1启动子区域有AR结合的位点,双荧光素酶报告基因系统表明AR能结合在lncRNA ARLNC1启动子区域,并激活其转录(P<0.05);与sh-NC组相比,sh-lncRNA ARLNC1组细胞增殖、迁移和克隆能力减弱,细胞周期阻滞在S、G 2期(P<0.05);sh-NC组相对于sh-lncRNA ARLNC1组,CyclinD1、CDK6蛋白水平增加,而p27蛋白水平降低(P<0.05)。结论:AR调控的lncRNA ARLNC1作为癌基因在雄激素受体阳性的前列腺癌细胞系中高表达,能促进前列腺癌细胞的增殖、克隆、迁移和细胞周期进展。 展开更多
关键词 前列腺癌 长链非编码RNA 雄激素受体 增殖 克隆 迁移 细胞周期
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恒稳磁场辅助CHO细胞培养和表达特性研究
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作者 李晓红 李红文 +3 位作者 高丽 张雪艳 杨哪 李荣明 《工业微生物》 CAS 2024年第5期39-43,共5页
以中国仓鼠卵巢细胞为宿主细胞构建重组表达细胞用以表达单克隆抗体,已经被广泛应用于生物制药领域。物理调控是影响细胞增殖和表达的重要方式,但针对恒稳磁场暴露下的CHO细胞培养及其抗体表达还鲜有报道。基于此,文章利用3.0 mT恒稳磁... 以中国仓鼠卵巢细胞为宿主细胞构建重组表达细胞用以表达单克隆抗体,已经被广泛应用于生物制药领域。物理调控是影响细胞增殖和表达的重要方式,但针对恒稳磁场暴露下的CHO细胞培养及其抗体表达还鲜有报道。基于此,文章利用3.0 mT恒稳磁场,在37℃、8%CO_(2)环境下对CHO细胞进行克隆培养,通过克隆扩增筛选、蛋白表达及分析、拷贝数监测等手段来评估其对抗体表达的影响。结果表明,与对照组相比,在3.0 mT磁场环境下,单克隆形成数量增加了13.24%,细胞数量显著增多,单克隆抗体表达水平提升53.2%,克隆筛选周期缩短4~5 d。此外,在亚克隆筛选中,亚克隆的细胞数量和抗体表达在磁场暴露下略有增加,而抗体表达、蛋白质量和基因拷贝数在传代后均无显著变化,表明磁场暴露环境中培养的重组CHO细胞具有稳定的性质。该研究结果有望为未来CHO细胞的大规模培养以及磁场暴露下的高效生产抗体研究提供参考。 展开更多
关键词 CHO细胞 恒稳磁场 克隆表达 抗体表达 蛋白质特性
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新西兰白兔BMP 15基因的真核表达载体构建、表达模式及其在卵巢组织的表达
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作者 陈孟娟 刘雨晴 +4 位作者 王智通 温佳乐 许会芬 于光晴 李明 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期562-575,共14页
旨在获得新西兰白兔BMP 15基因序列及其组织表达规律,构建其真核表达载体,预测BMP15的生物学功能。本研究选择180日龄性成熟的健康新西兰白兔作为研究对象,采用RT-PCR技术扩增BMP 15基因CDS区序列,利用T4连接方法将目的片段连接至线性化... 旨在获得新西兰白兔BMP 15基因序列及其组织表达规律,构建其真核表达载体,预测BMP15的生物学功能。本研究选择180日龄性成熟的健康新西兰白兔作为研究对象,采用RT-PCR技术扩增BMP 15基因CDS区序列,利用T4连接方法将目的片段连接至线性化的Pmcherry-N1和pCMV-Myc空载体,构建真核表达载体,利用生物信息学分析其编码蛋白的性质及结构。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术与Western blotting技术检测pCMV-Myc-BMP 15过表达情况。接下来,使用qRT-PCR检测BMP 15基因在不同组织中的表达水平。激光共聚焦方法检测BMP 15基因的亚细胞定位。利用免疫荧光技术检测内源BMP15在新西兰白兔卵巢组织定位情况。结果表明:克隆得到新西兰白兔BMP 15基因CDS区序列长1182 bp,PCR及测序结果表明pCMV-Myc-BMP 15和Pmcherry-N1-BMP 15真核表达载体构建成功。生物信息学分析显示,BMP 15基因编码393个氨基酸;BMP15蛋白不稳定系数为55.32,等电点大小为9.69,是一种稳定的碱性蛋白质。BMP15蛋白共有26个磷酸化位点,15个糖基化位点,存在信号肽,不存在跨膜结构域。系统进化树表明,新西兰白兔与猪亲缘关系最近,与鸡的亲缘关系最远。二级结构和三级结构分析结果表明,BMP15蛋白主要由α-螺旋(38.68%)、无规则卷曲(37.4%)、延伸链(15.52%)、β-转角(8.40%)组成,为混合型蛋白。蛋白互作关系预测发现,BMP15蛋白与FSHR、FIGLA、BMPR1B、AMHR2、NOBOX等卵巢生长发育的相关蛋白之间存在相互作用。不同组织表达分析显示,BMP 15基因在卵巢组织中特异性表达;激光共聚焦结果显示,BMP15主要存在于在细胞质中。将pCMV-Myc-BMP 15转染至HEK293T细胞内,BMP15的mRNA水平和蛋白水平均显著上调。卵巢组织免疫荧光检测结果显示,BMP15主要定位在卵巢颗粒细胞的细胞质中。本研究成功构建了BMP15的真核表达载体,对BMP 15基因及其编码的蛋白的理化性质和生物学特性进行了预测分析,在HEK293T细胞内成功过表达,并得到了该基因的亚细胞定位情况、组织表达情况及在卵巢组织的分布情况。为后续开展BMP 15基因在卵巢生长发育中的功能及机制研究提供了理论依据。 展开更多
关键词 新西兰白兔 BMP 15基因 克隆 组织表达 细胞定位
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简州大耳羊CKMT2基因克隆、生物信息学分析及时空表达研究
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作者 孙诗雨 李金岚 +4 位作者 邢佳妮 董耀徽 李艳艳 王友利 林亚秋 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期2342-2353,共12页
【目的】克隆简州大耳羊肌节线粒体肌酸激酶2(creatine kinase mitochondrial 2,CKMT2)基因并探究其生物学特征,明确其在简州大耳羊不同组织以及不同分化阶段成肌细胞中的表达特性。【方法】采集简州大耳羊心脏、肝脏、脾脏、肾脏、背... 【目的】克隆简州大耳羊肌节线粒体肌酸激酶2(creatine kinase mitochondrial 2,CKMT2)基因并探究其生物学特征,明确其在简州大耳羊不同组织以及不同分化阶段成肌细胞中的表达特性。【方法】采集简州大耳羊心脏、肝脏、脾脏、肾脏、背最长肌、臂三头肌组织样品,利用PCR方法扩增简州大耳羊CKMT2基因并克隆测序,通过在线软件对其进行生物信息学分析。利用实时荧光定量PCR技术检测CKMT2基因在简州大耳羊不同组织及不同分化阶段成肌细胞中的表达水平。【结果】简州大耳羊CKMT2基因全长1 314 bp,其中包括CDS区1 259 bp,编码419个氨基酸,与绵羊和羚羊的亲缘关系最近。CKMT2蛋白是一种无信号肽及跨膜结构域的碱性亲水稳定蛋白,主要定位于线粒体、过氧化物类酶体及细胞质,共包含32个磷酸化位点、1个N-糖基化位点以及4个O-糖基化位点。蛋白二级结构主要包括α-螺旋(39.14%)、无规则卷曲(36.28%)、延伸链(16.23%)和β-转角(8.35%),三级结构与二级结构预测结果基本一致。蛋白互作分析结果显示,CKMT2蛋白与半胱氨酸和甘氨酸富含蛋白3(cysteine and glycine-rich protein 3,CSRP3)、M型肌酸激酶(creatine kinase M-type, CKM)、磷酸甘油酸变位酶2(phosphoglycerate mutase 2,PGAM2)等蛋白存在相互作用。组织表达谱结果显示,CKMT2基因在简州大耳羊心脏中表达量最高,显著高于其他组织(P<0.05);在背最长肌中表达量较高,显著高于脾脏和臂三头肌(P<0.05)。时序表达谱结果显示,简州大耳羊CKMT2基因在成肌细胞诱导分化4 d时表达水平达到峰值,显著高于0、6 d(P<0.05)。【结论】本研究成功克隆简州大耳羊CKMT2基因序列并明确了其分子特征,其在心脏、背最长肌以及成肌分化4 d时表达量较高。研究结果为进一步揭示CKMT2基因调控简州大耳羊成肌细胞增殖分化的分子机制奠定基础。 展开更多
关键词 简州大耳羊 CKMT2基因 克隆 组织表达 细胞分化
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家蚕glial cell missing(BmGcm)基因鉴定、表达、亚细胞定位和功能
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作者 张奎 潘光照 +4 位作者 苏晶晶 谈娟 徐曼 李钰添 崔红娟 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2018年第7期1401-1411,共11页
【目的】鉴定、克隆家蚕(Bombyx mori)glial cell missing(Bm Gcm)基因,分析其m RNA表达及亚细胞定位特征。制备多克隆抗体,同时在细胞水平进行过表达,检测Gcm对细胞增殖和周期的影响,为探究Bm Gcm功能打下基础。【方法】利用RACE方法... 【目的】鉴定、克隆家蚕(Bombyx mori)glial cell missing(Bm Gcm)基因,分析其m RNA表达及亚细胞定位特征。制备多克隆抗体,同时在细胞水平进行过表达,检测Gcm对细胞增殖和周期的影响,为探究Bm Gcm功能打下基础。【方法】利用RACE方法克隆获得Bm Gcm全长c DNA序列,利用ORF Finder和SMART等在线工具对Bm Gcm基本序列特征和结构信息进行分析,运用Clustalx和MEGA 6.0等软件对多物种Gcm蛋白进行同源序列比对和进化分析。采用RT-PCR和q RT-PCR方法检测Bm Gcm的表达情况。利用原核表达系统获得重组蛋白,通过蛋白纯化和免疫小鼠制备多克隆抗体,运用Western blot对抗体进行检测。构建Bm Gcm表达载体,转染家蚕胚胎细胞系,分析其亚细胞定位情况,同时利用EDU细胞增殖标记和流式细胞仪对其功能进行探索。【结果】Bm Gcm(BGIBMGA006182)定位于4号染色体的nscaf2847上,其基因全长4 046 bp,包含4个外显子和3个内含子。其c DNA全长1 734 bp,包含166 bp的5′UTR、227 bp的3′UTR和1 341 bp的完整开放阅读框(ORF)。该基因编码446个氨基酸残基,预测蛋白分子量为50.61 k D,等电点5.557,含有典型的GCM结构域。多重比对结果显示GCM结构域在不同物种间具有高度的保守性,进化分析显示昆虫Gcm蛋白单独聚为一支,其中Bm Gcm蛋白与帝王蝶同源蛋白亲缘关系最为接近。表达分析结果显示Bm Gcm在胚胎发育第4天表达达到峰值,随后表达水平逐渐下调,而在幼虫阶段,Bm Gcm主要表达于中肠、精巢和卵巢。将Bm Gcm完整的开放阅读框序列构建至原核表达系统,经IPTG诱导和亲和层析纯化获得高纯度重组蛋白,通过免疫小鼠获得了多克隆抗体,Western blot检测该抗体可以特异性识别重组蛋白。在家蚕细胞系中过表达Bm Gcm蛋白,结果显示其定位于细胞核。在细胞水平,过表达Bm Gcm会明显抑制细胞增殖,将细胞周期阻滞于G1/S期。【结论】克隆鉴定得到Bmgcm全长序列,获得其表达和亚细胞定位信息。通过原核表达、蛋白纯化和免疫小鼠制备了可用的多克隆抗体。细胞实验发现Bm Gcm可以显著抑制增殖和影响正常的细胞周期进程。 展开更多
关键词 家蚕glial cell missing基因(BmGcm) 克隆 表达分析 抗体制备 过表达
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猪流行性腹泻病毒敏感细胞的筛选方法及应用
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作者 许冬 虞慎义 +4 位作者 张辰羽 魏磊 侯丹丹 赵文艳 黄浩 《中国兽药杂志》 2024年第7期13-19,共7页
为提高猪流行性腹泻抗原的病毒含量,对敏感Vero细胞的筛选方法及应用进行了研究。从6株不同来源的Vero细胞中筛选出敏感细胞进行单细胞克隆,对每个克隆细胞进行猪流行性腹泻病毒培养实验,筛选出病毒含量最高的克隆细胞,即为敏感克隆细... 为提高猪流行性腹泻抗原的病毒含量,对敏感Vero细胞的筛选方法及应用进行了研究。从6株不同来源的Vero细胞中筛选出敏感细胞进行单细胞克隆,对每个克隆细胞进行猪流行性腹泻病毒培养实验,筛选出病毒含量最高的克隆细胞,即为敏感克隆细胞。对敏感克隆细胞进行猪流行性腹泻病毒感染实验,当细胞病变达到80%以上时冻融收获,病毒含量能达到10~(7.5)TCID_(50)/mL。试验表明,本研究克隆出了一株对猪流行性腹泻病毒最敏感的VERO-D细胞,生产出的抗原病毒含量比常规工艺提高0.5个滴度以上。制备的成品检验结果和常规产品无差异,且免疫效果良好,为猪流行性腹泻灭活疫苗生产工艺的优化提供了数据支持。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻 克隆细胞 病毒含量
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体细胞核移植技术及应用
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作者 王维佳 李道全 +8 位作者 刘建雷 尹诗 杨汉文 倪鹏程 张勇峰 杨卫兵 赵善江 李广栋 王志坤 《黑龙江动物繁殖》 2024年第5期25-31,40,共8页
体细胞核移植(somatic cell nuclear transfer,SCNT)是一种能使已分化的体细胞获得全能性(totipotency)的技术,在发育生物学、生物医学研究和农业应用方面具有重要价值。该技术主要包括卵细胞去核和核供体细胞植入两个环节。文章综述了S... 体细胞核移植(somatic cell nuclear transfer,SCNT)是一种能使已分化的体细胞获得全能性(totipotency)的技术,在发育生物学、生物医学研究和农业应用方面具有重要价值。该技术主要包括卵细胞去核和核供体细胞植入两个环节。文章综述了SCNT技术的原理、流程、应用等,以期为SCNT技术的研究与应用提供参考依据。 展开更多
关键词 体细胞核移植(SCNT) 全能性 克隆 重编程 应用
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