Optimization of Suspension Culture Conditions for Hairy Roots of Aconitum coreanum(Levl.) Raipaics

[ Objective] This study aimed to establish an optimized suspension culture for hairy roots of Aconitum coreanum （Levi.） Raipaics. [ Method ] Hairy root of Aconitum coreanum （ Levl. ） Raipaics A0489 was selected as experimental material, to screen the optimal medium for suspension culture. [ Result] Aconitum coreanum （Levl.） Raipaics hairy roots showed different growth conditions in various liquid medium; salt concentration, nitrogen content, sugar content, rotation speed and room temperature had great influences on the growth of Aconitum coreanum （Levi.） Raipaics hairy roots. [ Conclusion] The optimal suspension culture system for Aconitum coreanum （ Levi. ） Raipaics hairy roots was established ： B5 was used as basic medium, culture temperature was 20℃ under dark conditions, rotation speed was 140 r/m in the first 15 d and 110 r/m in the latter 15 d.

不同栽培条件对黄花乌头生长的影响

[目的]解决黄花乌头野生资源枯竭、人工培育产量低等问题。[方法]调查对比黄花乌头不同栽培材料(种子、块根)的栽培成本和产量等要素,调查不同土壤类型、坡度、前期栽培植物对黄花乌头生长和产量的影响研究。[结果]选择出黄花乌头最佳栽培材料为种子,3年生1 m2块根鲜重达2.00kg,折合公顷产量达15000kg;黄花乌头栽培选择缓坡(6°~15°)、砂壤土、非重茬地块,涝害发生率低,折合公顷产量最高达16800kg。[结论]适宜的栽培条件可有效提高黄花乌头的生长和产量。

采收期、生长年限和加工方法对黄花乌头不同部位中关附甲素含量的影响

目的:为规范黄花乌头的人工栽培,通过优化高效液相法,对不同采收时期、生长年限黄花乌头不同部位中关附甲素的含量进行测定,比较不同加工方法对关附甲素含量的影响,为制定黄花乌头合理的采收时间和加工方式提供依据。方法:采用反相离子对高效液相色谱法,测定黄花乌头中不同部位中关附甲素的含量;色谱柱为安捷伦Zorbax SB-C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相A为2 mg/mL庚烷磺酸钠水溶液(含0.2%三乙胺并以H_(3)PO_(4)调pH值至3.0),流动相B为乙腈,采用梯度洗脱,流速为1.0 mL/min,检测波长为205 nm,柱温20℃。结果:关附甲素的质量浓度在0.0251~0.2513 mg/mL^(2)范围内线性关系良好(R^(2)=1),精密度、重复性、稳定性试验结果的RSD均≤1.0%;平均加样回收率为97.83%,RSD为3.5%。不同采收期黄花乌头不同部位中9月份采集的样品子根含量最高,说明9月份为最佳采收期。不同生产年限样品中,三年生和三年以上生黄花乌头母根含量相差不大,但均大于两年生母根,地上部分中所含关附甲素都明显小于根部。不同加工方法所得关白附中关附甲素的含量大小依次为:阴干>晒干>炕干,说明不同条件对含量的影响较大。结论:建立的含量测定方法专属性强、精密度、重复性和稳定性较好,结果可靠,黄花乌头的最佳采收期为9月份,生长期限为3年,本研究为黄花乌头科学的人工栽培采收提供了实验依据。

黄花乌头栽培病虫害防治技术

本文采用不同微生物制剂对黄花乌头病虫害进行了防治。结果表明:黄花乌头播种后,用哈茨木霉菌喷淋2次,每次用量2~4 g·m^(-2),猝倒病发生率为3.8%,较对照下降了7.6%;于栽培第二年和第三年生长季喷施细黄链霉菌800~1000倍液,每年2~3次,叶斑病发生率为2.9%,较对照下降了4.2%;整地时,分别用金龟子绿僵菌和枯草芽孢杆菌拌土,用量为4500~7500 g·hm^(-2),出苗率达87.9%,较对照提高了6.3%,块根受害率为3.5%,较对照下降了5.2%,根腐病发生率为3.9%,较对照下降了4.7%。

黄花乌头播种栽培技术研究

[目的]通过对黄花乌头播种后遮荫处理提高黄花乌头播种栽培效率。[方法]采用播种后罩遮荫网、不同栽培密度对比、栽培过程中搭架处理等方法对黄花乌头栽培技术进行了研究。[结果]黄花乌头播种后罩遮荫网为宜,出苗率达85.3%,苗高达4.06 cm;10 cm×10 cm是黄花乌头适宜的栽培密度,株高在(111.0±0.6)cm,地径粗达4.02 mm,块根鲜重达15840 kg/hm^(2);搭架处理后黄花乌头倒伏率下降了11.9个百分点,同时促进了黄花乌头的生长,子根数达2.78个,子根直径达0.95 cm,子根长度达3.73 cm。[结论]为东北地区黄花乌头播种栽培提供参考。

黄花乌头中盐酸关附甲素的提取工艺研究

为了更好地利用黄花乌头(Aconitum coreanum)资源,提高其产品附加值,以黄花乌头中盐酸关附甲素的提取量为指标,通过设立正交试验确定影响提取率的主要因素以及最佳提取条件。结果表明,最佳的热回流法提取工艺条件为:提取溶剂为50%乙醇,提取温度为80℃,料液比为1∶20,提取时间为40min。此提取工艺简单可行、稳定可靠,适用于盐酸关附甲素的大规模提取。

不同理化因子对黄花乌头花药愈伤组织诱导的影响

目的:通过不同理化因子对黄花乌头花药愈伤组织诱导研究,为国家一类新药关附甲素的工业化生产提供新的原料来源.方法:以黄花乌头花药为外植体,考察不同植物激素及其配比、不同种类的培养基、碳源、NH+4与NO-3比例、天然添加物及低温处理对花药愈伤组织诱导的影响.结果:2,4-D2mg/L,KT0 2mg/L为最佳激素配比;MS培养基诱导愈伤组织效果最好;以蔗糖为碳源,ρ(NH+4)/ρ(NO-3)为4∶1时有利于愈伤组织的诱导;分别以0 03mmol/L的组氨酸、赖氨酸、色氨酸、谷氨酰胺代替MS培养基中的甘氨酸有利于愈伤组织的诱导,而丝氨酸对其有抑制作用;水解酪蛋白能提高愈伤组织诱导率;低温(4～10℃)处理48～120h能促进愈伤组织生成.结论:植物细胞工程技术是解决黄花乌头原料匮乏问题的可行方法之一.

关白附多糖体外抗氧化性研究

利用水提分级醇沉法从关白附中提取可溶性多糖,采用邻苯三酚自氧化、Fenton体系和H2O2致鼠肝脏脂质过氧化的方法,观察体外加入关白附多糖对这些氧化反应的影响。研究结果表明:关白附多糖对.O2-抑制作用较好,最大抑制率为51.80%;对.OH抑制作用显著,最大抑制率为90.88%;对肝脂质过氧化的抑制率可达100%。

黄花乌头中Hetisine型生物碱的高速逆流色谱分离与结构鉴定

目的研究黄花乌头块根的化学成分,寻找更多天然活性物质。方法采用高速逆流色谱法分离纯化黄花乌头块根中的生物碱类化学成分,根据理化性质、波谱学分析鉴定化合物的结构。结果高速逆流色谱的两相溶剂分离系统采用氯仿-甲醇-0.2 mol.L-1HC l(体积比为10∶3∶3),从黄花乌头块根中一次性分离得到8个化合物,分别鉴定为2-αprop ionyl-11,α13-βd iacetyl-14-hydroxyhetisine(I)、关附巳素(II)、关附庚素(III)、关附己素(IV)、关附Z素(V)、关附辰素(V I)、关附甲素(V II)、关附壬素(V III)。结论化合物I为新化合物,命名为关附未素(Guanfubase R)。

关白附多糖的提取及其抗氧化性研究

利用水提分级醇沉法从关白附中提取可溶性多糖,通过正交实验确定提取多糖的最优条件,用蒽酮-硫酸法测定多糖含量。采用邻苯三酚自氧化法和Fenton体系,观察体外给予关白附多糖对这些氧化反应的影响。研究结果表明,提取温度80℃、提取时间4h、料液比1∶25为最佳提取条件,此时提取率为25.67%。关白附多糖对O2-·抑制作用较好,最大抑制率为49.84%;对·OH抑制作用显著,最大抑制率为90.88%。

朝鲜介蕨孢子周壁发育的研究(英文)

利用光镜、扫描电镜和透射电镜对朝鲜介蕨[Dryoathyrium coreanum(Christ)Tagawa=Lunathyrium coreanum(Christ)Ching]孢子周壁的发育规律进行了研究。结果表明,朝鲜介蕨孢子两侧对称,单裂缝,表面具粗大的脊状褶皱,褶皱形成网状或拟网状纹饰。孢壁包括内壁、外壁和周壁。孢子外壁表面光滑,在四分孢子时期就已发育成熟。四分孢子分离后,周壁开始形成,周壁来源于孢子囊的绒毡层,是由原质型绒毡层的残余物在外壁上沉积而成。成熟的周壁很厚,可分为外层和内层。周壁内有大的空腔,主要是由周壁外层向外隆起形成的,隆起进而形成了孢子的脊状褶皱和表面纹饰。

黄花乌头中一个C_(20)二萜生物碱的结构分析

目的 研究黄花乌头 Aconitum coreanum中的一个 C2 0 二萜生物碱。方法 采用氧化铝柱层析分离 ,通过理化鉴定和波谱分析确定化学结构。并经单晶 X射线衍射分析确证。结果 从黄花乌头中获得一个新的 C2 0 二萜生物碱 (关附子素 )。

关白附新工艺最佳技术参数优选

通过对关白附不同炮制品有效成分总生物碱、关附甲素及有毒成分次乌头碱含量测定，急性毒性实验，结合药典对关白附炮制品的法定标准要求（饮片表面特征、断面色泽、气味）及饮片收得率等指标考查，确定关白附新工艺技术参数为清蒸４小时为佳。

黄花乌头茎叶中一个新的Hetisine型生物碱

目的研究黄花乌头茎叶的化学成分。方法采用现代色谱方法进行化学成分分离,并通过各种波谱学分析鉴定化合物的结构。结果从黄花乌头茎叶中分离得到2个化合物,分别鉴定为13-dehydro-1β-acety1-2α,6β-dihydroxyhetisine(Ⅰ)和关附庚素(Ⅱ)。结论Ⅰ为新化合物。

关白附中多糖含量的测定

目的采用水提醇沉法提取关白附粗多糖.方法经反复冻融、酶法与Sevag法联合脱蛋白后测定关白附中多糖质量分数.结果多糖经苯酚-硫酸显色后在490 nm处用紫外可见分光光度计进行比色测定,测定结果：关白附中多糖质量分数达4.62%,平均加样回收率为97.72%,RSD=1.96%.结论该方法实验操作简便,准确可靠,重现性较好.

黄花乌头中生物碱类化学成分的研究

目的进一步研究毛茛科植物黄花乌头 Aconitum coreanum的化学成分 ,寻找更多有活性的生物碱类物质。方法采用乙醇提取、溶剂萃取、氧化铝柱色谱方法进行分离纯化有关成分 ,根据理化性质和谱学分析 (IR,ESI-MS,1 H- NMR,1 3C- NMR,1 H- 1 HCOSY,HMQC,HMBC)进行结构鉴定。结果从黄花乌头根中分离得到 7个化合物 ,分别鉴定为 :11,13-二乙酰基 - 14 -羟基 - 2 -异丁酰基 -赫替新 (11,13- diacetyl- 14 - hydroxy- 2 -isobutyryl heti- sine,I)、关附庚素 (guan- fu base G, )、关附己素 (guan- fu base F, )、关附 Z素 (guan- fubase Z, )、关附壬素 (guan- fu base I, )、关附子素 (guan- fu base K, )、关附胺醇 (guan- fu aminealcohol, )。结论化合物 I为新天然产物 ,命名为关附巳素 (guan- fu base P) ,首次报道其氢谱和碳谱数据。

炮制对关白附中有毒成分次乌头碱含量影响研究

用高压液相法测定关白附生品及不同炮制品中次乌头碱含量，结果表明，姜矾煮、豆腐煮后次乌头碱下降率为９８％，而蒸４小时后次乌头碱下降率约为１００％。

RP-HPLC法测定不同采收期黄花乌头中关附甲素的含量

采用 ＲＰ－ＨＰＬＣ方法对黄花乌头 Ａｃｏｎｉｔｕｍ ｃｏｒｅａｎｕｍ抗心律失常有效成分关附甲素（ｇｕａｎｆｕ ｂａｓｅ Ａ）的含量进行了测定。并对不同采收期黄花乌头的不同部位中关附甲素的含量进行比较．结果显示关附甲素在８月份采收的根中含量最高。实验采用Ｃ_１８柱，以乙腈－磷酸三乙胺缓冲液为流动相，检测波长２０８ｎｍ，以外标法定量，为合理有效地利用药物资源提供了参考。

药用植物黄花乌头植株再生系统的建立

目的 :通过茎尖培养实现药用植物黄花乌头Aconitumcoreanum (Levl )Rpaics的快速繁殖 ,建立黄花乌头植株再生系统。方法 :以黄花乌头茎尖为外植体 ,用不同的培养基和激素组合培养。结果 :MS培养基是不定芽分化和增殖的最佳基本培养基 ,附加 6 BA 2～ 5mg/L适合于不定芽的诱导 ,附加赤霉素 1～ 5mg/L和腺嘌呤 1～5mg/L能促进芽的生长与增殖 ,附加IBA 0 5～ 1 0mg/L适于根的诱导。结论 :在一定培养条件下 。

关白附化学成分的研究——关附甲素结晶水化合物的结构鉴定

关白附系毛茛科黄花乌头(Aconitum careanum(Levi.)Rapaics)的块根。本文报道从东北产该植物中分得一化合物(1)。化合物(1)的IR,MS,~1HNMR和坞^(13)C—NHR谱结果与关附甲素基本一致。