基于UHPLC-Q-TOF/MS技术分析肿节风总黄酮提取物促进巨核细胞分化的效应成分

目的筛选肿节风总黄酮提取物促进巨核细胞分化的效应成分。方法(1)以人巨核细胞白血病细胞(Dami)与人骨髓基质细胞(HS-5)共培养的方式建立巨核细胞分化障碍模型作为评价体系,实验分组:Dami组(Dami)、对照组(Dami+HS-5)、PMA组[Dami+HS-5+5 ng·mL-1佛波醇12-十四酸酯13-乙酸酯(PMA)]、模型组[Dami+HS-5+1%兔抗大鼠血小板血清(APS)+5 ng·mL-1PMA],培养48 h。采用流式细胞术检测巨核细胞分化成熟表面标记分子CD41a、CD61的表达情况。(2)将49只SD雄性大鼠随机分为空白血浆组、15 min组、30 min组、60 min组、90 min组、120 min组、240 min组,每组7只。各给药组大鼠灌胃肿节风总黄酮提取物1.26 g·kg^(-1),在6个设定时间点(15、30、60、90、120、240 min)采血制备肿节风总黄酮提取物经时含药血浆。(3)采用超高效液相色谱-四极杆串联飞行时间质谱法(UHPLC-Q-TOF/MS)对肿节风总黄酮提取物经时含药血浆进行分析,以峰面积构建肿节风总黄酮提取物经时含药血浆中的化学成分随时间变化量矩阵(X矩阵)。将所采集的6个不同时间点的肿节风总黄酮经时含药血浆对巨核细胞分化成熟障碍模型进行干预,采用流式细胞术检测细胞表面分子CD41a、CD61的表达水平,构建肿节风总黄酮提取物经时含药血浆效应矩阵(Y矩阵)。(4)将X矩阵和Y矩阵数据标准化处理后,采用偏最小二乘法(Partial least squares,PLS)计算分析量效关系,以变量重要性投影(Variable importance for projection,VIP)>1为阈值,筛选与细胞表面分子CD41a、CD61变化相关的效应成分,并进行化学成分鉴定,作为肿节风总黄酮提取物中促进巨核细胞分化的潜在效应成分,最后回归评价体系验证其药效。结果(1)与Dami组比较,对照组Dami细胞表面的CD41a表达水平明显升高(P<0.05)。与对照组比较,PMA组Dami细胞表面的CD41a、CD61表达水平均显著升高(P<0.01)。与PMA组比较,模型组Dami细胞表面的CD41a、CD61表达水平均显著降低(P<0.01)。(2)与空白血浆组比较,15、30、60、90、120、240 min各时间点Dami细胞表面分子CD41a、CD61表达水平均显著升高(P<0.01),且CD41a、CD61均在30 min组表达水平最高。在正、负离子模式下筛选出VIP值>1的潜在效应成分,并选取540.3638@12.25与559.2991@11.53两个成分进行药效学验证。559.2991@11.53被鉴定为胡萝卜苷(Daucosterol,Dau),540.3638@12.25被鉴定为迷迭香酸-4-O-β-D-葡萄糖(Rosmarinic acid 4-O-β-Dglucoside,Ros)。Ros、Dau分别干预巨核细胞分化成熟障碍模型后,与模型组比较,Ros及Dau低、中、高剂量组(40、60、80μg·mL-1)的Dami细胞表面的CD41a、CD61表达水平均显著升高(P<0.05,P<0.01)。结论Ros、Dau可能是肿节风总黄酮提取物促进巨核细胞分化的效应成分。

胡萝卜苷对H_(2)O_(2)诱导的HK-2细胞氧化应激的保护作用研究

目的分析胡萝卜苷干预对过氧化氢(H_(2)O_(2))诱导的人肾小管上皮细胞(HK-2细胞)氧化应激的保护作用及作用机制。方法体外培养HK-2细胞,对照组加入等体积0.9%氯化钠溶液,实验组中加入不同浓度的H_(2)O_(2)处理24h(1、5、10、50和100μmol/L),干预组中加入50μmol/L胡萝卜苷干预2h后再加入不同浓度H_(2)O_(2)处理,CCK-8实验检测各组细胞活力;Hochest33342/PI荧光染色和caspase-3免疫荧光实验分析各组细胞凋亡;DCFH-DA荧光探针染色分析各组细胞中的活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)水平;Western blot法检测各组细胞中Bax、Bcl-2和NOX4蛋白的表达水平。结果50μmol/L和10μmol/L H_(2)O_(2)处理后实验组中的抑制率分别为20.74%±3.32%和53.90%±2.37%,胡萝卜苷干预组中各抑制率分别为10.29%±1.69%(t=4.859,P=0.008)和37.38%±3.95%(t=6.212,P=0.003),差异均有统计学意义;Hochest33342/PI荧光染色结果显示,实验组中Hochest33342荧光信号聚集细胞以及PI荧光阳性细胞明显多于干预组;免疫荧光实验结果显示实验组中caspase-3表达水平明显高于干预组;荧光探针染色结果显示实验组中ROS水平明显高于干预组;Western blot法结果显示,H_(2)O_(2)实验组中NOX4蛋白表达水平高于对照组,经干预后出现明显下调,干预组中Bax蛋白表达水平也低于H_(2)O_(2)实验组。结论胡萝卜苷干预可减轻H_(2)O_(2)诱导的HK-2细胞氧化应激,并降低细胞凋亡发挥保护作用。

异叶南星的化学成分研究

目的 :对异叶南星的化学成分进行研究。方法 :采用硅胶柱色谱、薄层色谱对异叶南星的化学成分进行分离 ,并用理化常数和光谱鉴定其结构。结果 :从异叶南星中分离出 4个化合物 ,分别为十八酸单甘酯 (glycerolmonostearicacid ,Ⅰ ) ,β 谷甾醇 (β sitosterol,Ⅱ )、葫萝卜甙 (daucosterol,Ⅲ )、琥珀酸 (succinicacid ,Ⅳ ) ,结论 :化合物Ⅰ。

落新妇化学成分研究

目的 :对落新妇的化学成分进行分离和结构鉴定。方法 :用萃取、色谱等技术进行分离得到 4个化合物 ,根据理化性质和用HR EIMS ,EIMS ,13 C NMR ,1H NMR ,DEPT ,1H 1H COSY ,HMQC ,HMBC谱鉴定其化学结构。结果 :4个化合物分别为 β 谷甾醇棕榈酸酯 (β sitosterolpalmitate ,I)、胡萝卜苷 (daucosterol,Ⅱ )、β 谷甾醇 (β sitosterol,Ⅲ )、岩白菜素 (Bergenin ,IV)。结论 :化合物I和Ⅱ为首次从落新妇中获得。

破石珠化学成分研究

目的：对破石珠化学成分进行研究。方法：用溶剂提取和硅胶柱层析分离，经化学反应和光谱分析鉴定其结构。结果：分离并鉴定了３个化合，分别为６′Ｏ苯甲酰基胡萝卜甙（Ⅰ），胡萝卜甙（Ⅱ）和β谷甾醇（Ⅲ）。结论：均为首次从该植物中分离得到，其中Ⅰ为首次从天然物中获得的新化合物。

无花果根化学成分研究

目的:对无花果根的化学成分进行研究。方法:采用硅胶柱色谱及重结晶等方法进行成分分离及精制,并利用UV、IR、1H-NMR、13C-NMR、MS等光谱技术鉴定其化学结构。结果:从无花果根乙醇提取液的石油醚萃取物中分离得到2个化合物,鉴定为β-谷甾醇(β-sitosterol,化合物1)、羽扇豆醇(lupeol,化合物2);从乙酸乙酯萃取物中分离得到3个化合物,鉴定为补骨脂素(psoralen,化合物3)、香柠檬内酯(bergapten,化合物4)及胡萝卜苷(daucosterol,化合物5)。结论:化合物1、2和5为首次从无花果根中分离得到。

苎麻根化学成分的初步研究

从苎麻Ｂｏｅｈｍａｒｉａｎｉｖｅａ根中分离得到３个化合物，根据波谱方法分别鉴定为β－谷甾醇，胡萝卜甙和１９α－羟基乌苏酸，均为首次从该植物中分离得到。

青钱柳化学成分的研究

从青钱柳嫩叶中分得４个化合物，经理化性质测定和光谱分析鉴定为胡萝卜甙、β－Ｌ－吡喃阿拉伯糖、硬脂酸和棕榈酸。

狭叶红景天的化学成分

从狭叶红景天根茎的醇提物中分离得到５个化合物，经理化和光谱分析鉴定为酪醇，胡萝卜甙，百脉根甙，红景天甙，蔗糖。

显脉香茶菜化学成分的研究

从江西宜丰地区产的显脉香茶菜Raadosia nevrosa(Hemsl)C. Y. Wu et H. W. Li茎叶中分得10个单体,经光谱解析和理化鉴别,确定了5个化合物的结构,其中2个为β-seco-entkaurene型二萜,nodosin(1)、epinodosinol(2),其余为β-谷甾醇、乌苏酸及胡萝卜甙。

黔产毛子草化学成分研究

从黔产毛子草中首次分离得到7个化合物,通过理化及波谱分析,它们分别确定为十六烷酸(1),二十六烷酸(2),9、12-十八二烯酸(3),β-谷甾醇(4),β-胡萝卜苷(5),熊果酸(6),齐墩果酸(7)。

黄心卫矛化学成分的分离与鉴定

目的:研究黄心卫矛(Euonymus macropterus Rupr.)的化学成分。方法:采用色谱技术分离纯化,并通过波谱技术及理化性质鉴定化合物结构。结果:从黄心卫矛根部的乙醇提取物中分离得到6个化合物,分别鉴定为胡萝卜苷亚油酸酯(daucosterol linoleate,1),10-eicosanol(2),胡萝卜苷(daucosterol,3),β-谷甾醇(β-sitosterol,4),二十八烷酸(octacosanoic,5),烟酰胺(nicotinamide,6)。结论:以上化合物均尚未见从黄心卫矛中分离得到的相关文献报道。

胡萝卜苷对人肝癌细胞株HepG2增殖、凋亡的影响及其机制探讨

目的观察胡萝卜苷对人肝癌细胞株HepG2增殖、凋亡的影响,并探讨其机制。方法体外培养HepG2细胞,取对数生长期细胞,分为胡萝卜苷组和对照组。将HepG2细胞按5×10~5/mL接种于96孔板中,胡萝卜苷组分别加入25、50、100、150、200μg/mL的胡萝卜苷,对照组不加入药物,继续培养48 h后采用CCK-8法测算细胞增殖抑制率。将HepG2细胞按5×105/mL接种于6孔板中,胡萝卜苷组分别加入50、100μg/mL的胡萝卜苷,对照组不加入药物,继续培养48 h后采用流式细胞仪观察细胞凋亡情况,采用Western blotting法检测细胞中的凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2及Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白WNT3A、β-catenin。结果胡萝卜苷各亚组细胞增殖抑制率均高于对照组,且胡萝卜苷组中25、50、100、150、200μg/mL亚组细胞增殖抑制率依次增高(P均<0.05)。胡萝卜苷组50μg/mL亚组、100μg/mL亚组细胞凋亡率均高于对照组,且100μg/mL亚组细胞凋亡率高于50μg/mL亚组(P均<0.05)。对照组及胡萝卜苷组的50μg/mL亚组、100μg/mL亚组细胞中Bax蛋白相对表达量依次增高,Bcl-2、WNT3A、β-catenin蛋白相对表达量依次降低(P均<0.05)。结论胡萝卜苷可抑制HepG2细胞增殖并促进其凋亡,其机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路、调节凋亡相关蛋白表达有关。

木棉化学成分的研究（Ⅱ）

从木棉根中分离得到４种结晶成分，经理化常数和光谱分析分别鉴定为胡萝卜甙，齐墩果酸，橙皮甙和硝酸钾。

三棱的化学成分研究(Ⅰ)

目的研究黑三棱Sparganium stoloniferum的化学成分。方法用硅胶、Sephadex LH-20柱色谱等方法进行分离纯化,通过理化性质及光谱数据结合化学反应确定化合物的结构。结果分离得到9个化合物,分别鉴定为胡萝卜苷棕榈酸酯(Ⅰ)、β-谷甾醇棕榈酸酯(Ⅱ)、24-亚甲基环阿尔廷醇(Ⅲ)、6,7,10-三羟基-8-十八烯酸(Ⅳ)、香草酸(Ⅴ)、对羟基苯甲醛(Ⅵ)、α-棕榈酸单甘油酯(Ⅶ)、5-羟甲基糠醛(Ⅷ)、β-谷甾醇(Ⅸ)。结论化合物～和～均为首次从该属植物中分离得到。

青葙子化学成分研究

目的:对青葙子的化学成分进行研究。方法:采用溶剂法、硅胶柱层析、Sephadex LH-20柱层析及重结晶等方法进行成分分离及纯化,并利用UV、IR、IH-NMR、13C-NMR、MS等波谱技术鉴定提取物的化学结构。结果:从青葙子乙醇提取物的石油醚部位分离得到化合物1～3,分别鉴定为β-谷甾醇(β-sitosterol)、棕榈酸(palmitic acid)、豆甾醇(stigmasterol);从乙酸乙酯部位分离得到化合物4、5,分别鉴定为胡萝卜苷(daucosterol)和齐墩果酸(oleanolic acid)。结论:化合物3、4和5为首次从青葙子中分离得到。

常山胡柚皮的化学成分分离鉴定(英文)

目的:分析常山胡柚(Citrus changshan-huyouY.B.Chang)皮的化学成分。方法:利用反复硅胶柱色谱分离和纯化,并通过波谱分析鉴定化合物结构。结果:分离并鉴定了10个化合物结构,分别为胡柚皮甲素(Ⅰ)、3-羟基-4-甲氧基苯甲酸(Ⅱ)、3,4-二羟基苯甲酸(Ⅲ)、脂肪酸(Ⅳ)、甘油酯(Ⅴ)、6,7-二甲氧基香豆素(Ⅵ)、6′,7′-二羟基香柠檬亭(Ⅶ)、胡萝卜苷A(Ⅷ)、胡萝卜苷B(Ⅸ)和胡柚三萜(Ⅹ)。结论:胡柚皮甲素为新化合物;这10个化合物均为首次从该植物中分得。

菝葜化学成分研究

目的 :研究菝葜根茎乙醇提取物中的化学成分。方法 :采用硅胶柱层析、分配层析、制备薄层层析等分离方法从乙醇提取物的乙酸乙酯部位分得七个单体化合物 ,并应用化学方法和现代波谱分析方法鉴定其结构。结果 :化合物Ⅰ鉴定为 5 O β D 葡萄糖 二氢山柰酚 (dihydrokaempferol 5 O β D glucoside) ,化合物Ⅱ鉴定为 β 谷甾醇(β sitosterol) ,化合物Ⅲ鉴定为胡萝卜苷 (Daucosterol)。其余化合物的结构鉴定尚在进行中。结论 :化合物Ⅰ为首次报道的新化合物。

野生东北刺人参茎化学成分的研究

从野生东北刺人参茎中分离并鉴定了5种结晶性成分,分别为紫丁香甙,胡萝卜甙,β-谷甾醇,L-鼠李糖和蔗糖。