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Cloning,Functional Characterization and Expression Analysis of the elovl4a Gene in the Large Yellow Croaker(Larimichthys crocea)
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作者 ZHANG Meng LI Wanbo +2 位作者 ZHU Yangyang WANG Weijia WANG Zhiyong 《Journal of Ocean University of China》 SCIE CAS CSCD 2021年第6期1515-1527,共13页
Elovl4 is a fatty acyl elongase which participates in the biosynthesis of long-chain polyunsaturated fatty acids(LCPUFA).Herein we isolated and functionally characterized the elovl4a gene in the large yellow croaker L... Elovl4 is a fatty acyl elongase which participates in the biosynthesis of long-chain polyunsaturated fatty acids(LCPUFA).Herein we isolated and functionally characterized the elovl4a gene in the large yellow croaker Larimichthys crocea,and investigated the regulatory effects of transcription factors Hnf4α,Lxrα,Pparαon the activity of elovl4a promoter.Tissue expression pattern revealed that elovl4a was widely expressed in several tissues and predominantly in brain.Heterologous expression in yeast showed that L.crocea Elovl4a could effectively elongate both C18 and C20 PUFA substrates to C22 fatty acid.In addition,the affinity of large yellow croaker Elovl4a to n-6 series fatty acids is weak and cannot prolong 18:2n-6 and 18:3n-6.Moreover,L.crocea elovl4a reporter activities were elevated by 1.31-,1.39-and 1.48-fold via over-expression of Lxrα,Pparαand Hnf4α,respectively.The above findings can enrich the knowledge of biosynthesis pathway of LC-PUFA in the large yellow croaker and contribute to elucidate the LC-PUFA anabolism mechanism in fish. 展开更多
关键词 Larimichthys crocea elovl4a long-chain polyunsaturated fatty acids PROMOTER
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基于转录组分析揭示斑马鱼elov4b在LC-PUFAs生物合成过程中的作用
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作者 张思源 赵岩 高坚 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第11期1915-1925,共11页
为探究脂肪酸延长酶4b(elovl4b)基因在淡水鱼长链多不饱和脂肪酸(LC-PUFAs)合成中的作用机制,研究首先使用CRISPR/Cas9(Clustered regularly interspaced short palindromic repeats/CRISPR-associated systems)系统成功构建elovl4b基因... 为探究脂肪酸延长酶4b(elovl4b)基因在淡水鱼长链多不饱和脂肪酸(LC-PUFAs)合成中的作用机制,研究首先使用CRISPR/Cas9(Clustered regularly interspaced short palindromic repeats/CRISPR-associated systems)系统成功构建elovl4b基因第2外显子上缺失2个碱基的基因突变纯合子模型(elovl4b^(-/-)),并分析elovl4b基因敲除后斑马鱼肝脏的脂肪酸组成变化。分析发现,相比于野生型(WT)斑马鱼,elovl4b^(-/-)斑马鱼肝脏总脂肪酸占比、C22PUFA占比显著上升,多种LC-PUFAs组成占比出现显著变化。进一步进行斑马鱼肝脏的转录组测序,创建基因文库,筛选出差异表达基因进行富集分析和数据库功能注释分析,用qPCR技术对KEGG通路中的差异表达基因(P<0.05)进行验证。结果显示,基因表达谱变化显著,共有809个基因表达出现显著性差异(485个下调,324个上调),包括磷酸戊糖途径在内的多条通路显著富集。脂肪酸合成等通路显著上调,花生四烯酸代谢、初级胆汁酸合成等通路显著下调。随机选取12条基因通过qPCR(Real-time Quantitative PCR)进行验证,基因的表达趋势与转录组测序所得结果基本一致。上述结果说明elovl4b缺失后,机体内各类LC-PUFAs的组成及包括花生四烯酸代谢、脂肪酸代谢、脂肪生成和代谢在内的许多重要的机体生命过程发生了相应性的变化,进一步揭示了elovl4b在LC-PUFAs合成过程中的作用,能为相关的心血管、慢性肥胖等疾病的治疗提供理论依据。 展开更多
关键词 elovl4b LC-PUFAs 生物合成 肝脏转录组测序 斑马鱼
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Elovl4 mRNA在小鼠视网膜发育过程中的表达分布
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作者 林婴 黎静 +5 位作者 刘小琦 胡建斌 杨洋 鲁芳 杜琼 杨正林 《实用医院临床杂志》 2007年第5期26-28,共3页
目的本研究旨在观察Elovl4基因mRNA在发育期小鼠眼中的分布。方法在EST和HTGS信息库查寻Elovl4同源基因。用小鼠Elovl4探针在小鼠眼冰冻部位进行原位杂交。结果小鼠视网膜Elovl4在胚胎发育的第15天(E15)开始表达并持续到出生后各阶段。... 目的本研究旨在观察Elovl4基因mRNA在发育期小鼠眼中的分布。方法在EST和HTGS信息库查寻Elovl4同源基因。用小鼠Elovl4探针在小鼠眼冰冻部位进行原位杂交。结果小鼠视网膜Elovl4在胚胎发育的第15天(E15)开始表达并持续到出生后各阶段。在出生后1~3天(P1-P3),Elovl4主要在视网膜神经节细胞中表达,第七天(P7)主要在视网膜外核层表达,最后的表达聚集在感光体内部节段上。结论在视网膜发育期中Elovl4的表达呈动态图谱变化。胚胎期以及出生后早期主要在神经节细胞中表达,逐步转换至后期主要在感光体内部节段上表达。 展开更多
关键词 Elovl4基因 小鼠视网膜 基因表达
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卵形鲳鲹脂肪酸延长酶(Elovl4-like)基因特征与功能研究 被引量:1
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作者 宋岭 朱克诚 +2 位作者 郭华阳 江世贵 张殿昌 《南方水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期76-86,共11页
长链脂肪酸延长酶(elongases of very long chain fatty acids, Elovls)是长链多不饱和脂肪酸(long chain polyunsaturated fatty acid, LC-PUFA)生物合成途径中的关键限速酶,能够延长PUFA的碳链。为探究Elovl4在卵形鲳鲹(Trachinotus o... 长链脂肪酸延长酶(elongases of very long chain fatty acids, Elovls)是长链多不饱和脂肪酸(long chain polyunsaturated fatty acid, LC-PUFA)生物合成途径中的关键限速酶,能够延长PUFA的碳链。为探究Elovl4在卵形鲳鲹(Trachinotus ovatus) PUFA生物合成中的功能,该研究克隆了卵形鲳鲹Elovl4基因的cDNA序列,命名为ToElovl4-like,其开放阅读框(ORF)为792 bp,编码263个氨基酸。生物信息学分析结果表明,编码的氨基酸包含Elovl家族的显著结构特征如组氨酸盒子、多个跨膜区和ER滞留信号等。序列比对结果显示,卵形鲳鲹Elovl4-like基因高度保守,且该基因编码的蛋白序列与其他鱼类的相似度为73%~86%,其中与大西洋鳕(Gadus morhua)的相似度最高(86%)。系统进化分析表明,Elovl4主要聚为Elovl4a、Elovl4b和Elovl4-like 3类。其中ToElovl4-like与其他鱼类的Elovl4-like亲缘关系最近。实时荧光定量PCR表明ToElovl4-like基因在各组织中均有表达,其中在性腺和脾中mRNA表达量最高,在脑中mRNA表达量最低。酵母异源表达分析表明,ToElovl4-like可以分别将亚油酸(18:2n-6)、二十碳五烯酸(20:5n-3)延长为二十碳二烯酸(20:2n-6)和二十二碳五烯酸(22:5n-3)。研究结果为了解鱼类长链多不饱和脂肪酸(LC-PUFA)的生物合成提供了理论基础。 展开更多
关键词 卵形鲳鲹 Elovl4-like 异源表达 功能鉴定
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ELOVL4基因过表达对n3和n6超长链多不饱和脂肪酸生物合成效率的影响 被引量:1
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作者 余曼 林伟 +1 位作者 陈波 吴峥峥 《国际眼科杂志》 CAS 2014年第8期1386-1390,共5页
目的:ELOVL4是常染色体显性Stargardt氏黄斑变性的致病基因,ELOVL4蛋白酶参与n3和n6超长链多不饱和脂肪酸(very long chain polyunsaturated fatty acid,VLC-PUFA)的合成,比较两者的生物合成效率,对治疗Stargardt氏黄斑变性有指导意义... 目的:ELOVL4是常染色体显性Stargardt氏黄斑变性的致病基因,ELOVL4蛋白酶参与n3和n6超长链多不饱和脂肪酸(very long chain polyunsaturated fatty acid,VLC-PUFA)的合成,比较两者的生物合成效率,对治疗Stargardt氏黄斑变性有指导意义。方法:构建携带ELOVL4基因和绿色荧光蛋白的重组腺病毒,转入培养的PC12细胞,将细胞分成三组:PC12、PC12+Ad-GFP和PC12+Ad-ELOVL4,前两组为对照组,通过qRT-PCR定量分析ELOVL4基因的表达量,Western Blot检测ELOVL4蛋白的表达;等浓度(1∶1)加入EPA(n3PUFA)和AA(n6 PUFA),孵育48h之后进行脂肪酸提取,通过气相色谱-质谱法(gas chromatography-mass spectrometry,GC-MS)分析超长链脂肪酸的成分。结果:GC-MS检测到分别用EPA和AA处理后的PC12+Ad-ELOVL4的细胞中有n3 VLC-PUFA的表达,34∶5n3和36∶5n3是20∶5n3/EPA的主要产物,分别为0.71%和1.6%;34∶4n6和36∶4n6是20∶4n6/AA的主要产物,分别为0.46%和0.61%;EPA所产生的n3 VLC-PUFAs总和是AA所产生的n6 VLC-PUFAs总和的2倍。结论:在ELOVL4蛋白作用下,EPA合成VLC-PUFAs的效率高于AA,饮食中给予适当比例的n3/n6 PUFAs,可能是治疗STGD3疾病的方式之一。 展开更多
关键词 二十碳五烯酸 花生四烯酸 ELOVL4基因 STARGARDT病 超长链多不和脂肪酸
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DHA与EPA合成超长链多不饱和脂肪酸的效率比较 被引量:2
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作者 余曼 陈波 +1 位作者 张瑞帆 吴峥峥 《实用医院临床杂志》 2014年第5期24-27,共4页
目的比较在ELOVL4蛋白酶催化作用下,DHA和EPA合成超长链多不饱和脂肪酸VLC-PUFA的效率。方法构建携带ELOVL4基因和绿色荧光蛋白的重组腺病毒,转入培养的PC12细胞,通过qRT-PCR定量分析ELOVL4基因的表达量,WB检测ELOVL4蛋白的表达;1∶1加... 目的比较在ELOVL4蛋白酶催化作用下,DHA和EPA合成超长链多不饱和脂肪酸VLC-PUFA的效率。方法构建携带ELOVL4基因和绿色荧光蛋白的重组腺病毒,转入培养的PC12细胞,通过qRT-PCR定量分析ELOVL4基因的表达量,WB检测ELOVL4蛋白的表达;1∶1加入DHA和EPA,孵育48 h之后进行脂肪酸提取,通过气相质谱GC-MS分析超长链脂肪酸的成分。结果 GC-MS检测到分别用DHA及EPA处理后的PC12+Ad-ELOVL4的细胞中有n3 VLC-PUFA的表达,34:5n3和36:5n3分别为0.85%和1.11%;34:6n3和36:6n3分别为0.16%和0.29%;EPA所产生的五烯酸总和是DHA所产生的六烯酸总和的4倍。结论 EPA合成VLC-PUFA的效率远远高于DHA,为患者提供更高比例的EPA,而非DHA,可能是治疗STGD3疾病的方式之一。 展开更多
关键词 二十二碳六烯酸 二十碳五烯酸 ELOVL4基因 STARGARDT病 超长链多不和脂肪酸
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Stargardt病Ⅲ型致病基因ELOVL4在脂肪酸代谢中的功能研究
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作者 余曼 陈波 +1 位作者 张瑞帆 吴峥峥 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第8期712-717,共6页
背景研究证实,超长链脂肪酸延伸酶4(ELOVIA)基因是Stargardt病的致病基因,且ELOVIA可能是c≥28的超长链脂肪酸的延伸酶,而常染色体显性遗传Stargardt病Ⅲ型(STGD3)的发病可能与视网膜中c≥28的超长链脂肪酸的代谢有关。探讨ELOVL... 背景研究证实,超长链脂肪酸延伸酶4(ELOVIA)基因是Stargardt病的致病基因,且ELOVIA可能是c≥28的超长链脂肪酸的延伸酶,而常染色体显性遗传Stargardt病Ⅲ型(STGD3)的发病可能与视网膜中c≥28的超长链脂肪酸的代谢有关。探讨ELOVL4在STGD3发病中的作用及其与超长链脂肪酸代谢的关系有望对STGD3的治疗提供新的思路。目的探讨ELOVIA基因在STGD3发病和进展中的作用及机制。方法将腺病毒(Ad)转染重组病毒质粒36h的人胚肾293细胞(HEK293)以纯化病毒,构建携带ELOVIA基因和绿色荧光蛋白(GFP)的重组腺病毒载体并转人培养的大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞株(PCI2),将培养的PCI2细胞分成PCI2组、PCI2+Ad5一GFP组和PCI2+Ad5一ELOVL4组,根据分组情况分别将Ad-GFP和Ad-ELOVL4病毒质粒按1×10~2×10。噬斑形成单位(pfu/m1)的滴度加入含质量分数2%胎牛血清(FBS)的细胞培养液转导24h,采用实时定量PCR法(qRT—PCR)定量分析各组细胞中ELOVIAmRNA的相对表达量;采用Westernblot法检测细胞中ELOVL4蛋白的表达。分别在各组培养基中加入花生四烯酸(AA或20:4n6)、二十碳五烯酸(EPA或20:5n3)和二十二碳六烯酸(DHA或22:6n3),孵育48h后进行脂肪酸提取,通过气相色谱一质谱联用仪(GC-MS)分析各组细胞中超长链脂肪酸产物。结果PCI2+Ad-ELOVL4组、PCI2+Ad-GFP组和PCI2组间细胞中ELOVL4mRNA表达水平(ELOVIAmRNA/RPLl9mRNA)分别为0.833±0.138、0.027±0.002、0.024±O.002,3个组的总体差异有统计学意义(F=102.700,P=0.000),其中PCI2+Ad5一ELOVL4组PCI2细胞中ELOVIAmRNA表达水平是PCI2组和PCI2+Ad5-GFP组的30~40倍;Westernblot法检测结果证实,PCI2+Ad5-ELOVIA-组PCI2细胞中ELOVL4蛋白呈阳性表达。GC-MS法检测发现PCI2+Ad5-ELOVL4组PCI2细胞中有C28-C38多不饱和脂肪酸的合成,其中均以C34和C36多不饱和脂肪酸合成量最多。结论ELOVL4蛋白酶可催化C28-C38多不饱和脂肪酸的合成,这个结论为STGD3患者的治疗提供了新的思路。 展开更多
关键词 不饱和脂肪酸 生物合成 黄斑变性 遗传性 大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞株 气相色谱一质谱联用仪 免疫印迹法 实时定量PCR ELOVL4基因 Stargardt黄斑营养不良
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基于Cre/loxP系统的睾丸组织特异性敲除Elovl4基因小鼠模型的构建及敲除效率检测 被引量:1
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作者 杨仕赛 赵瑄 +3 位作者 王雨虹 郑红梅 甘婷 朱贵明 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第8期2912-2927,共16页
极长链多不饱和脂肪酸(very long chain polyunsaturated fatty acids,VLC-PUFAs)是哺乳动物视网膜、睾丸等极少数组织中特有的脂肪酸,其生物合成的关键酶为极长链脂肪酸延长酶4(very long chain fatty acid elongase 4,Elovl4)。建立... 极长链多不饱和脂肪酸(very long chain polyunsaturated fatty acids,VLC-PUFAs)是哺乳动物视网膜、睾丸等极少数组织中特有的脂肪酸,其生物合成的关键酶为极长链脂肪酸延长酶4(very long chain fatty acid elongase 4,Elovl4)。建立组织特异性敲除Elovl4基因的动物模型有利于深入研究VLC-PUFAs的生物学功能,因此,本研究基于Cre/loxP系统,先分别构建了Stra8-Cre小鼠和Elovl4 floxed小鼠,通过杂交获得(Elovl4[flox/+],Stra8-Cre)杂合子基因敲除小鼠,再选择雌鼠与Elovl4 floxed纯合子雄鼠即Elovl4[flox/flox]雄鼠杂交,通过基因型鉴定筛选获得(Elovl4[flox/flox],Stra8-Cre)纯合子小鼠。利用RT-PCR、qRT-PCR、Western blotting、免疫组化和免疫荧光检测Elovl4在睾丸组织中的敲除效率,结果表明,无论是杂合子还是纯合子基因敲除小鼠,其睾丸组织中Elovl4的表达在mRNA及蛋白水平显著下调,但其他组织未受影响。本研究成功构建了睾丸组织特异性敲除Elovl4基因小鼠,为后续研究VLC-PUFAs对雄性小鼠生殖功能的影响及相关分子机制提供可靠的动物模型。 展开更多
关键词 Cre/loxP 睾丸 Elovl4 Stra8-Cre 特异性敲除
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