溃疡性结肠炎组织中NF-κB,COX-2和iNOS表达的意义

目的:转录因子NF-κB的诱导,调控着免疫和炎症反应中众多基因的表达。溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)存在上皮细胞、淋巴细胞、巨噬细胞的异常激活及细胞因子的表达失调。我们检测了UC组织中NF-κBp65,及两种启动子含NF-κB结合位点的蛋白COX-2和iNOS的表达和分布,探讨他们在UC发病机制中的作用,及三者之间的关系。 方法:用免疫组化SP法检测39例活动期溃疡性结肠炎内镜活检标本及30例正常对照石蜡包埋组织中NF-κBp65,COX-2和iNOS的表达情况。 结果:UC组p65,COX-2和iNOS均为阳性表达,主要分布于上皮细胞,固有层炎性细胞及血管内皮细胞也有程度不同的表达。对照组均为阴性或弱阳性表达。三者在UC组的表达与对照组相比,差异均有非常显著性(P<0.01)。p65的表达与内镜及病理分级有关,内镜Ⅱ级与Ⅰ级比较(5.8±2.6 vs 3.6±1.9),差异显著(P<0.05)。病理Ⅱ,Ⅲ级与Ⅰ级比较(6.1±2.4,7.3±2.5 vs 4.0±2.3),差异显著(P<0.05,P<0.01)。iNOS的表达与病理分级有关,Ⅲ级与Ⅰ,Ⅱ级比较(7.8±2.5 vs 4.6±2.3,5.0±1.6),差异显著(P<0.01,P<0.05),COX-2的表达在病情轻重,内镜及病理分级间差异无显著性(p>0.05)。p65与COX-2,iNOS表达显著相关(r_s^1分别为0.713,0.706;P<0.01),COX-2与iNOS表达显著相关(r_s^1=0.

醛固酮降低新生大鼠心肌成纤维细胞iNOS表达和NO含量

目的为探讨醛固酮诱导心肌成纤维细胞(CFs)增殖及其对诱导型一氧化氮合酶 一氧化氮(iNOS NO)系统活性的影响。方法用胰酶消化法分离、培养新生SD大鼠CFs,采用MTT比色法、硝酸还原酶法、分光光度法和半定量RT PCR技术,观察不同浓度醛固酮对CFs的增殖、NO含量、iNOS活性和iNOSmRNA表达的影响。结果醛固酮(10 -11～10 -7mol/L)能剂量依赖性促进CFs的增殖,降低CFs的NO含量、iNOS活性及iNOSmRNA的表达(均P <0 .0 5 ) ,且螺内酯能逆转醛固酮的上述作用。醛固酮干预下CFs增殖数目与NO含量和iNOS活性呈显著负相关(r分别为- 0 . 94 2、- 0 . 978,均P <0 . 0 1)。结论醛固酮能剂量依赖性降低CFs的iNOS -NO系统活性,促进CFs增殖;螺内酯能逆转此作用。

大鼠应激性溃疡胃黏膜nNOS/iNOS表达对细胞凋亡的影响

目的:探讨细胞间信息传递因子NO在胃黏膜遭受应激损伤时的变化及与细胞凋亡发生的关系. 方法:原位末端标记(TUNEL)法检测大鼠水浸-束缚应激(WRS)结束前后不同时间点细胞凋亡的发生;免疫组化的方法检测胃黏膜组织nNOS/iNOS蛋白表达的变化;检测不同剂量的NO合成抑制剂L-NAME对细胞凋亡的影响. 结果:iNOS蛋白表达与细胞凋亡的变化呈显著正相关; nNOS蛋白表达与细胞凋亡变化呈负相关;与对照组比较, 小剂量L-NAME(2.0 mg/kg)可降低凋亡细胞发生率34.6% (P<0.01);大剂量L-NAME(20.0 mg/kg)明显增加凋亡细胞发生率25.8%(P<0.05). 结论:正常生理状态下及应激初期,胃黏膜以nNOS表达为主.若应激源持续存在,nNOS表达受抑制,iNOS表达增强,诱导合成大量NO,有明显细胞毒作用,促进细胞凋亡发生.

幽门螺杆菌感染与慢性胃炎胃黏膜组织中COX-2、iNOS表达的相关性研究

目的:探讨幽门螺杆菌(Hpylori)感染对慢性胃炎胃黏膜环氧化酶-2(COX-2)、一氧化氮合酶(iNOS)表达以及对胃上皮细胞增生与凋亡的影响,阐明Hpylori可能的致癌机制. 方法:22例经胃镜及病理确诊为慢性浅表性胃炎患者,采用快速尿素酶及改良Giemsa染色法检测H pylori;采用半定量RT-PCR和免疫组化法检测胃黏膜中COX-1、COX- 2和iNOS的表达;以染色法原位检测胃上皮细胞的凋亡;以免疫组化法检测胃上皮细胞的增生. 结果:与正常对照组相比,H pylori相关性胃炎胃黏膜组织COX-2和iNOS表达明显增高,增生、凋亡指数差异显著;H pylori感染导致的COX-2和iNOS表达程度与胃黏膜上皮细胞增生、凋亡呈正相关(r=0.716,0.603,P<0.01; r=0.665,0.572,P<0.01). 结论:H pylori感染导致胃黏膜COX-2和iNOS的高表达, 与胃上皮细胞的增生与凋亡失衡有关,从而参与致癌.

大鼠脑挫伤后GFAP和iNOS表达与损伤时间关系的实验研究

目的 观察大鼠实验性脑挫伤后胶质纤维酸性蛋白 (GFAP)和诱导型—氧化氮合成酶 (iNOS)的表达及其时相性的关系 ,试图寻找法医学脑损伤时间的推断方法。方法 建立脑挫伤的动物模型 ,采用免疫组织化学技术 (SABC法 )观察大鼠脑挫伤后GFAP及iNOS在伤后不同时间的表达。染色结果用计算机彩色图像分析技术作定量统计分析处理。结果 ( 1)伤后 3h时GFAP阳性表达细胞开始增多 ,1d和 5d组单个阳性细胞染色强度达峰值 ,但在 3d组相对邻近组却下降 ,呈现出一双峰波形 ,7d达最大值 ;阳性物质总面积自 3h时表达增多开始后一直增加 ,直到 7d时达高峰。 ( 2 )伤后 12h组可见iNOS活性增高 ,并随伤后存活时间的延长 ,iNOS阳性细胞数目 (或阳性物质总面积 )逐渐增多 ,单个细胞染色强度逐渐加深。伤后 1d至 3d组阳性物质总面积达到高峰 ,5d后开始下降 ,但 7d时仍维持较高水平 ;而单个细胞染色强度随伤后存活时间的延长而加深 ,于 5d时达高峰后显著下降 ,但高于起始水平。结论 脑挫伤后GFAP和iNOS在损伤局部的染色变化有一定的时间规律性 ,可以用于脑挫伤的时间推断。

丁酸钠对结肠癌HT-29细胞的增殖抑制作用及iNOS表达的影响

背景与目的:研究证明丁酸钠在体外对多种肿瘤细胞有抑制作用。本研究观察丁酸钠对结肠癌细胞株HT-29的生长抑制情况,以及对诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)表达水平及其对一氧化氮(NO)分泌的影响。方法:采用不同浓度的丁酸钠对HT-29细胞进行干预,分别运用MTT法检测HT-29细胞株的增殖抑制情况,免疫细胞化学染色技术(SP法)对HT-29细胞胞浆内iNOS蛋白进行染色,图像分析系统检测胞浆内iNOS吸光度值(A值),Griess法检测HT-29细胞NO的分泌。结果:丁酸钠对HT-29细胞株增殖作用呈浓度、时间依赖性。在不同作用时间下,丁酸钠的IC50值不同(12h为15.4mmol/L,24h为5.7mmol/L,36h为2.5mmol/L,48h为0.9mmol/L)。丁酸钠也降低了HT-29细胞胞浆内iNOS的表达以及NO的分泌,亦呈浓度、时间依赖性。结论:丁酸钠能够抑制iNOS的表达水平,减少NO的分泌。这可能是它抑制结肠癌HT-29细胞增殖的作用机制之一。

幽门螺杆菌相关慢性胃炎患者iNOS表达水平分析

幽门螺杆菌（Helicobacter pylori，Hp）感染是慢性胃炎的重要致病原因，可引起不同类型的慢性胃炎。一氧化氮合酶（iNOS）为诱导型酶，其表达水平与慢性胃炎的发生密切相关。本实验观察了2002～2005年间我院80例Hp阳性的慢性胃炎患者Hp治疗前后iNOS表达水平的变化，以探讨Hp感染与iNOS表达的相关性。现将结果报道如下。

脑必通胶囊对局灶性脑缺血大鼠脑血流量及内皮细胞iNOS表达的影响

目的观察脑必通胶囊对局灶性脑缺血大鼠脑血流量及内皮细胞诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达的影响。方法采用大鼠永久性大脑中动脉阻塞(pMCAO)模型观察脑必通胶囊350、175、87.5 mg/kg对大鼠局部脑血流量的影响。建立人脐静脉内皮细胞(HUVEC)缺氧缺糖模型,采用Real time PCR技术检测HUVEC iNOS mRNA的表达;应用免疫组织化学法及Western-blotting法检测HUVEC缺氧后iNOS蛋白水平的变化及脑必通胶囊含药血清对HUVECiNOS蛋白水平的影响。结果缺血模型组动物脑血流量较假手术组动物及pMCAO前明显减少。脑必通胶囊可显著增加大鼠的基础脑血流量及pMCAO后大鼠缺血部位的脑血流量。Real time PCR结果表明,HUVEC细胞缺氧3 h后,iN-OS mRNA出现表达高峰。免疫荧光法证明:对照组HUVEC细胞缺氧后12 h,iNOS阳性细胞显著增多。Western-blot-ting亦显示,HUVEC细胞缺氧后,iNOS蛋白水平明显增加,12 h达高峰。结论脑必通胶囊对大鼠局灶性脑缺血脑血流量有明显增加作用,其作用机制可能与上调血管内皮细胞iNOS表达有关。

精氨酸与瘦素联合用药对急性胰腺炎大鼠组织NO生成及iNOS表达的影响

急性胰腺炎（acute panereatitis,AP）是临床上一种常见的疾病,起病急、病情重、病死率高,因此受到广泛的关注,其机制不单纯是胰酶自身的消化,还存在胰腺微循环障碍。一氧化氮（NO）在血管和神经内皮细胞合成，参与胰腺功能与血流改变，而诱先型一氧化氮合酶（iNOS）影响NO的活性，

三九胃泰颗粒对急性胃粘膜损伤修复及iNOS表达的影响

目的观察三九胃泰颗粒对胃粘膜损伤修复的影响。方法采用无水乙醇1ml胃饲诱发急性胃粘膜损伤大鼠模型并用三九胃泰颗粒治疗，免疫组织化学技术检测胃上皮细胞的增殖改变，参与催化生成胃粘膜损伤修复信号分子一氧化氮(NO)的诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达。结果三九胃泰颗粒、胃苏颗粒、养胃冲剂及丽珠得乐治疗组大鼠胃粘膜损伤的指数(UI)均显著低于无水乙醇模型组及自然恢复组，尤以三九胃泰颗粒治疗后为甚(P<0．05)；免疫组织化学显示三九胃泰颗粒、胃苏颗粒、养胃冲剂及丽珠得乐治疗组大鼠胃粘膜PCNA标记的阳性细胞量、iNOS的阳性表达均有高于无水乙醇模型组及自然恢复组趋势，尤以三九胃泰颗粒治疗后为甚(P<0．05)。结论三九胃泰颗粒能促进急性胃粘膜损伤的修复。

TNF-αⅠ型受体对小鼠脑血管内皮细胞iNOS和HO-1基因表达的影响

目的探讨TNFαⅠ型受体(TNFR1)对小鼠脑血管内皮细胞iNOS、HO1基因表达水平的影响。方法体外培养TNFR1基因敲除的小鼠脑血管内皮细胞(BVECTNFR1)和野生型小鼠脑血管内皮细胞(BVEC),分别给予5ngmLTNFα刺激24h后,用实时荧光定量PCR技术及Westernblot方法检测两种细胞iNOS基因和HO1mRNA和蛋白表达量。结果给予TNFα刺激后,iNOSmRNA和蛋白表达仅在野生型脑血管内皮细胞内明显增高,而在受体敲除脑血管内皮细胞无明显变化。HO1mRNA和蛋白表达量在野生型小鼠脑血管内皮细胞和受体敲除小鼠脑血管内皮细胞均明显增高。结论TNFα可能作用于脑血管内皮细胞TNFR1,增加iNOS表达,HO1表达增高并非由TNFR1介导,而由TNFα的其他受体介导。

右冠状动脉急性缺血/再灌注时窦房结细胞凋亡与iNOS蛋白的表达

目的 观察在体兔右冠状动脉急性缺血/再灌注(L/R)时窦房结细胞凋亡与诱导型一氧化氮合酶(iNOS)蛋白表达的关系。方法 在体兔右冠状动脉根部结扎或放松制作窦房结缺血/再灌注模型,健康成年新西兰兔70只分7组:假手术对照组、I2h组、I2hR2h组、I2h+NS(生理盐水)组、I2h+SMT(iNOS抑制剂Smethylisothiourea,SMT)组、I2hR2h+NS组和I2hR2h+SMT组。采用末端标记TUNEL法、SP免疫组化法结合彩色图像分析技术,检测窦房结细胞凋亡指数(AI)及iNOS蛋白表达的积分光密度(A)值。结果 ①I2hR2h组AI及iNOS A值明显高于12h组(P<0.01);②应用iNOS抑制剂后,I2h+SMT组、I2hR2h+SMT组AI及iNOS A值均明显低于I2h组和I2hR2h。组(P<0.05或P<0.01)。结论 缺血诱导窦房结细胞凋亡,再灌注加重细胞凋亡和增加iNOS表达,且细胞凋亡指数与iNOS表达变化相一致。提示iNOS生成增多可能与缺血再灌注窦房结细胞凋亡密切相关。

iNOS、CD34、PCNA在肛周尖锐湿疣皮损中的表达及其意义

目的:探讨诱导型一氧化氮合酶(induciblenitricoxidesynthase,iNOS)在尖锐湿疣(CA)中的表达及皮损中细胞增殖和血管增生的相关性。方法:采用免疫组化方法检测了17例尖锐湿疣组织及10例正常包皮组织中iNOS、CD34、增殖性细胞核抗原(proliferatingcellnuclearantigen,PCNA)的表达。结果:(1)CA皮损中iNOS表达较其在正常人表皮中的表达显著增强(P<0.05),正常人表皮中仅基底层弱阳性表达,而CA皮损区iNOS表达为基底层至角质层下方。(2)CA皮损真皮乳头微血管数较正常人表皮显著增多(P<0.05)。(3)CA皮损中iNOS的表达水平与PCNA标记指数(PCNAlabelindex,PLI)、血管密度计数(microvesseldensity,MVD)均呈显著正相关(R=-0.5910,P<0.01;R=-0.782,P<0.05)。结论:iNOS在尖锐湿疣皮损中表达异常,高水平的iNOS表达可能促进尖锐湿疣细胞增殖及真皮乳头血管形成,参与其发病。

短尖灯心草中具LPs-iNOS表达抑制作用的新的菲类化合物

对埃及产短尖灯心草Juncusa acutus L．的根茎进行植化研究，分离出一个新的菲类化合物juncutol（1）和3个相关的化合物（2～4）。首次研究了它们对脂多糖（LPS）刺激的鼠RAW264．7巨噬细胞株中诱生型一氧化氮合酶（iNOS）蛋白表达的抑制作用，从而证明了在远东将灯心草属草药作为传统的解热药和抗炎药与其抗炎活性的相关性。

紫景天黄酮对大鼠实验性牙周炎中iNOS的影响

牙周炎患者众多,机制尚不明确,治疗方法有限。诱导性一氧化氮合酶(iNOS)在牙周炎患者的牙龈组织中的表达明显高于正常人,其表达强度与慢性牙周炎症程度密切相关本研究采用免疫组化方法检测紫景天黄酮对大鼠实验性牙周炎牙周组织中iNOS表达的影响。

过表达INO1基因提高酿酒酵母乙醇耐受性

为获得燃料乙醇生产菌株,通过基因工程改造,构建能够利用能源甘蔗汁发酵、乙醇产率高的酿酒酵母工程菌株。即过表达肌醇-3-磷酸合成酶基因ino1,敲除kanMX抗性基因,获得重组菌。对过表达菌株的乙醇耐受性进行分析。利用甘蔗汁进行发酵培养,采用气相色谱(GC)对发酵产物乙醇进行检测。结果显示过表达菌株YI2-1能够耐19%(V/V)的乙醇,利用20oBx甘蔗汁厌氧发酵乙醇积累量为13.10%(V/V),较出发菌提高了8.55%。而过表达菌株YI2-1△KP的最大乙醇积累量为13.17%(V/V),较出发菌提高了9.16%。研究表明通过过表达酿酒酵母ino1基因能够有效提高菌株细胞活力、乙醇耐受性。构建的工程菌可利用甘蔗汁发酵,具有较高的乙醇产量。