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Spectrum-effect relationship of immunologic activity of Ganoderma lucidum by UPLC-MS/MS and component knock-out method 被引量:7
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作者 Changqin Li Yiping Cui +5 位作者 Jie Lu Lijun Meng Changyang Ma Zhenhua Liu Yan Zhang Wenyi Kang 《Food Science and Human Wellness》 SCIE 2021年第3期278-288,共11页
This study was designed to elucidate the immunoregulation of Ganoderma lucidum.HPLC fingerprint and spectrum-effect relationship of G.lucidum were established to predict the active compounds and BP neural network mode... This study was designed to elucidate the immunoregulation of Ganoderma lucidum.HPLC fingerprint and spectrum-effect relationship of G.lucidum were established to predict the active compounds and BP neural network model was established to predict the efficacy.Then the target compounds were identified by high resolution mass spectrometry.The results indicated that there are both enhanced immunity and immunosuppressive components in G.lucidum.BP neural network was trained with the common peak area and immune effi cacy index of G.lucidum fi ngerprint as samples,and a combined evaluation system of G.lucidum fi ngerprint effi cacy was established.The correlation coeffi cient R of BP network model was 0.98643,and the error of pharmacodynamic prediction results was in the ideal range.Eight compounds were identifi ed by high resolution mass spectrometry.The compounds related to immune activity in G.lucidum were determined in this study. 展开更多
关键词 Ganoderma lucidum RAW 264.7 cell Spectrum-effect relationships Component knock-out BP neural network
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RF knock-out extraction in HITFiL 被引量:1
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作者 石健 杨建成 +5 位作者 夏佳文 原有进 李杰 柴伟平 宋明涛 张小虎 《Chinese Physics C》 SCIE CAS CSCD 2012年第10期1004-1008,共5页
A compact facility for cancer therapy has been designed and is presently under construction. A slow beam extraction system using the RF-Knock Out method and 3rd-order resonance is adopted in the synchrotron of this fa... A compact facility for cancer therapy has been designed and is presently under construction. A slow beam extraction system using the RF-Knock Out method and 3rd-order resonance is adopted in the synchrotron of this facility. Eight sextupoles are used, four of them are for correcting the chromaticity and the rest for driving the 3rd-order resonance. In order to save the aperture of vacuum chamber, a 3-magnet bump is adopted during the extraction process. The extraction phase space map and the last 3 turns’ particle trajectory before extraction are given. The matching betatron functions with HEBT (high energy beam transport) are also presented. 展开更多
关键词 RF-knock out slow extraction 3rd order resonance cancer therapy
原文传递
Studies on the temporal,structural,and interacting features of the clubroot resistance gene Rcr1 using CRISPR/Cas9-based systems
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作者 Hao Hu Fengqun Yu 《Horticultural Plant Journal》 SCIE CAS CSCD 2024年第4期1035-1048,共14页
Clubroot disease is a severe threat to Brassica crops globally,particularly in western Canada.Genetic resistance,achieved through pyramiding clubroot resistance(CR)genes with different modes of action,is the most impo... Clubroot disease is a severe threat to Brassica crops globally,particularly in western Canada.Genetic resistance,achieved through pyramiding clubroot resistance(CR)genes with different modes of action,is the most important strategy for managing the disease.However,studies on the CR gene functions are quite limited.In this study,we have conducted investigations into the temporal,structural,and interacting features of a newly cloned CR gene,Rcr1,using CRISPR/Cas9 technology.For temporal functionality,we developed a novel CRISPR/Cas9-based binary vector,pHHIGR-Hsp18.2,to deliver Rcr1 into a susceptible canola line(DH12075)and observed that early expression of Rcr1 is critical for conferring resistance.For structural functionality,several independent mutations in specific domains of Rcr1 resulted in loss-offunction,highlighting their importance for CR phenotype.In the study of the interacting features of Rcr1,a cysteine protease gene and its homologous allele in canola were successfully disrupted via CRISPR/Cas9 as an interacting component with Rcr1 protein,resulting in the conversion from clubroot resistant to susceptible in plants carrying intact Rcr1.These results indicated an indispensable role of these two cysteine proteases in Rcr1-mediated resistance response.This study,the first of its kind,provides valuable insights into the functionality of Rcr1.Further,the new vector p HHIGR-Hsp18.2 demonstrated an inducible feature on the removal of add-on traits,which should be useful for functional genomics and other similar research in brassica crops. 展开更多
关键词 Clubroot resistance Brassica crops CANOLA Rcr1 CRISPR/Cas9 system Gene knock-out Timing control Non-synonymous mutation Protein-protein interaction
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利用CRISPR/Cas9基因编辑技术探究团头鲂mdh基因功能
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作者 郭丹丹 郑国栋 +1 位作者 陈杰 邹曙明 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第11期35-43,共9页
苹果酸脱氢酶基因(mdh)与肌肉的生长密切相关,可以通过影响骨骼肌的能量代谢来调节肌纤维的生长及类型转化,为探索mdh基因在团头鲂中的功能及作用,实验利用CRISPR/Cas9技术对团头鲂mdh进行敲除,并对敲除突变体的表型及基因表达变化进行... 苹果酸脱氢酶基因(mdh)与肌肉的生长密切相关,可以通过影响骨骼肌的能量代谢来调节肌纤维的生长及类型转化,为探索mdh基因在团头鲂中的功能及作用,实验利用CRISPR/Cas9技术对团头鲂mdh进行敲除,并对敲除突变体的表型及基因表达变化进行了研究。结果显示,CRISPR/Cas9可成功应用于团头鲂mdh基因的敲除,与对照组相比,敲除突变体个体大小明显小于对照组,生长性状数据显示,其体重、体长均发生显著变化。qPCR结果显示,敲除突变体中mdh的表达水平显著低于对照组,同时,在敲除突变体中,生肌决定因子及肌纤维类型因子基因MyoG、 MyHCⅡa的表达水平随着mdh表达水平的下降显著降低,而MyHCⅡb的表达未发生显著变化。研究表明,CRISPR/Cas9可用于团头鲂基因的高效、快速编辑,也证明mdh基因敲除后可能会抑制团头鲂的生长,在团头鲂的生长过程中起着促进作用。这一研究结果为团头鲂的生长性状研究提供了一定的理论基础,有利于mdh基因在团头鲂分子育种中的合理应用。 展开更多
关键词 团头鲂 基因敲除 CRISPR/Cas9 MDH 肌肉生长
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基于CRISPR/Cas9技术构建IDO1基因敲除的THP-1细胞株及其表型研究
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作者 李雪银 吴传新 +3 位作者 刘慧玲 李丽 程莎 孙航 《免疫学杂志》 CAS CSCD 2024年第1期87-95,共9页
目的 采用CRISPR/Cas9技术构建吲哚胺-2,3-双加氧酶1(IDO1)基因敲除的THP-1细胞株,为研究IDO1在巨噬细胞中的作用提供细胞模型。方法 设计靶向IDO1基因的3条向导RNA(guide RNA,gRNA),分别构建IDO1-gRNA重组质粒,酶切及测序鉴定后,包装成... 目的 采用CRISPR/Cas9技术构建吲哚胺-2,3-双加氧酶1(IDO1)基因敲除的THP-1细胞株,为研究IDO1在巨噬细胞中的作用提供细胞模型。方法 设计靶向IDO1基因的3条向导RNA(guide RNA,gRNA),分别构建IDO1-gRNA重组质粒,酶切及测序鉴定后,包装成Lenti-IDO1-gRNA慢病毒。利用Cas9慢病毒感染THP-1细胞获得稳定表达Cas9蛋白的细胞株,再经Lenti-IDO1-gRNA慢病毒感染敲除IDO1基因,有限稀释法获得单克隆细胞株。T7E1酶切检测gRNA打靶效率,PCR产物测序和Western blot鉴定IDO1基因敲除效果。CCK8法检测IDO1基因敲除对THP-1细胞增殖活性的影响,流式细胞术检测对巨噬细胞标志物CD11b、CD68和CD14表达的影响,中性红法检测巨噬细胞吞噬功能。结果 成功构建了3种IDO1-gRNA重组质粒,3条gRNA均能有效编辑IDO1基因,以gRNA2编辑效率最高。经PCR产物测序和Western blot验证获得了3株THP-1 IDO1-KO单克隆细胞株,并发现IDO1基因敲除可抑制THP-1细胞增殖,下调THP-1巨噬细胞CD11b、CD68表达,上调CD14表达,增强THP-1巨噬细胞吞噬功能。结论 成功构建IDO1基因敲除的THP-1细胞株;IDO1对THP-1细胞增殖活性、分化调节以及THP-1巨噬细胞吞噬功能调节有重要作用,为后续进一步探讨IDO1基因在巨噬细胞中的功能及机制研究奠定基础。 展开更多
关键词 CRISPR/Cas9 吲哚胺-2 3-双加氧酶1 基因敲除 THP-1细胞 巨噬细胞
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CRISPR/Cas9系统敲除山羊CDK2基因载体构建及转染效率检测
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作者 万苗苗 阳倩 +5 位作者 陈吉璐 陈丹丹 毛林 班谦 陈胜 惠文巧 《中国草食动物科学》 CAS 北大核心 2024年第2期27-31,共5页
细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶-2(CDK2)是细胞通过和进入S期所必须的细胞周期调节激酶,与许多癌细胞的生长有关。然而,目前在山羊上关于CDK2基因敲除及相关功能的研究尚未见报道。研究采用CRISPR/cas9系统,首先设计CDK2基因的sgRNA片段,... 细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶-2(CDK2)是细胞通过和进入S期所必须的细胞周期调节激酶,与许多癌细胞的生长有关。然而,目前在山羊上关于CDK2基因敲除及相关功能的研究尚未见报道。研究采用CRISPR/cas9系统,首先设计CDK2基因的sgRNA片段,在合成CDK2 sgRNA核苷酸序列后,构建能够同时表达sgRNA和Cas9 D10A的质粒PYSY-CDK2 sgRNA,连接并转化至大肠杆菌DH5α感受态细胞,对转化子进行验证,最后转染HEK293T细胞,检测细胞荧光和细胞增殖。酶切和测序结果证明,CDK2基因敲除载体构建正确;荧光显微镜检测显示,细胞转染效率在75%以上;细胞增殖检测表明,山羊CDK2敲除质粒不会对人源细胞增殖产生影响。说明采用CRISPR/Cas9构建的载体,可为后续获得山羊CDK2基因缺失型细胞系,研究支原体肺炎感染引发的细胞凋亡分子机制提供理论依据。 展开更多
关键词 CRISPR/Cas9 山羊 CDK2 基因敲除
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射血分数保留的心力衰竭小鼠端粒缩短的研究
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作者 黄舒影 陈骁楠 +1 位作者 张俊峰 张绘莉 《国际心血管病杂志》 2024年第4期231-236,共6页
目的:探讨端粒缩短与射血分数保留的心力衰竭(HFpEF)间的关系。方法:野生型C57BL/6J小鼠、第二代端粒酶敲除(mTRG2)和第三代mTRKO(mTRG3)小鼠简单随机抽样法分为对照组和HFpEF组,每组各8只。对照组给予标准饲料和饮水,HFpEF组给予60%高... 目的:探讨端粒缩短与射血分数保留的心力衰竭(HFpEF)间的关系。方法:野生型C57BL/6J小鼠、第二代端粒酶敲除(mTRG2)和第三代mTRKO(mTRG3)小鼠简单随机抽样法分为对照组和HFpEF组,每组各8只。对照组给予标准饲料和饮水,HFpEF组给予60%高脂饲料和含0.5 g/L N-硝基-L-精氨酸甲酯(L-NAME)的饮水,造模16周。造模开始后每2周检测小鼠左室射血分数(LVEF)、二尖瓣口舒张早期和晚期血流速度峰值的比值(E/A)、舒张早期二尖瓣口血流速度峰值和二尖瓣环运动速度峰值的比值(E/e')、左室整体纵向应变(GLS)、舒张末期左室前壁厚度(LVAWd)和舒张末期左室后壁厚度(LVPWd),评估左室收缩与舒张功能及心室重构情况。造模16周后,评估小鼠收缩期血压(SBP)、舒张期血压(DBP)和血脂水平。结果:高脂饮食和L-NAME饮水诱导造模的16周期间,各组LVEF差异无统计学意义,HFpEF组野生型小鼠在第8周出现了E/e'、E/A、LVAWd和LVPWd上升及GLS的下降(P<0.05),提示舒张功能降低和左室肥厚,即出现HFpEF表型。HFpEF组mTRG2小鼠、mTRG3小鼠分别在第6周和第4周出现了HFpEF表型。造模16周后,HFpEF组各基因型小鼠的血脂、收缩压、舒张压均较对照组同基因型小鼠明显升高(P<0.05)。结论:端粒缩短可以促进由高脂饮食和L-NAME饮水联合诱导的小鼠HFpEF早期发生和形成。 展开更多
关键词 射血分数保留的心力衰竭 端粒缩短 基因敲除
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小白链霉菌中CRISPR-Cas9基因敲除系统的构建与优化
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作者 开朗 杨昊 +1 位作者 朱道君 陈旭升 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2024年第14期10-17,共8页
小白链霉菌(Streptomyces albulus)是工业上生产ε-聚赖氨酸的主要菌株。为提高S.albulus的ε-聚赖氨酸合成能力,基于诱变和抗性筛选的传统育种方法被普遍应用。然而,由于传统育种存在“疲劳效应”,当前S.albulus的育种陷入了瓶颈。为... 小白链霉菌(Streptomyces albulus)是工业上生产ε-聚赖氨酸的主要菌株。为提高S.albulus的ε-聚赖氨酸合成能力,基于诱变和抗性筛选的传统育种方法被普遍应用。然而,由于传统育种存在“疲劳效应”,当前S.albulus的育种陷入了瓶颈。为利用代谢工程方法进一步提高S.albulus的ε-聚赖氨酸合成能力,亟需建立基于CRISPR-Cas9的基因编辑方法。为此,该文以S.albulus GS114为研究对象,以ε-聚赖氨酸合成酶基因pls为靶基因,构建了CRISPR-Cas9基因敲除系统,成功敲除了pls,编辑效率为100%。为进一步提高获得的敲除株数量,对S.albulus GS114结合转移条件进行了系统优化,获得的最优结合转移条件为:供受体比例1∶1,镁离子浓度30 mmol/L,55℃热激孢子10 min,培养20 h后覆盖抗生素。在最优转移条件下,结合转移效率达到2.5×10^(-8),较优化前提高了78%。该研究结果一方面为后续S.albulus的代谢工程改造提供了重要工具,另一方面为其他工业链霉菌构建CRISPR-Cas系统提供了重要参考。 展开更多
关键词 放线菌 小白链霉菌 CRISPR-Cas9系统 基因敲除
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基于“敲除策略”筛选高良姜乙酸乙酯部位抗幽门螺杆菌胃炎活性成分
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作者 罗鑫 郑吴殷晓 +6 位作者 詹健婷 杨敬宇 马浩然 干国平 尤朋涛 叶晓川 刘丹 《医药导报》 CAS 北大核心 2024年第9期1387-1392,共6页
目的筛选高良姜乙酸乙酯部位抗幽门螺杆菌胃炎活性成分。方法联合“敲除策略”与高效液相色谱(HPLC)检测对高良姜乙酸乙酯部位的组分(成分)进行分离,同时得到不含该组分(成分)的阴性样品;构建幽门螺杆菌感染人胃黏膜上皮细胞(GES-1)胃... 目的筛选高良姜乙酸乙酯部位抗幽门螺杆菌胃炎活性成分。方法联合“敲除策略”与高效液相色谱(HPLC)检测对高良姜乙酸乙酯部位的组分(成分)进行分离,同时得到不含该组分(成分)的阴性样品;构建幽门螺杆菌感染人胃黏膜上皮细胞(GES-1)胃炎模型,采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测细胞上清液中白细胞介素(IL)-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-8和IL-1β水平。结果总黄酮组分、不含二苯基庚烷的阴性组分、不含5-羟基-7-(4-羟基-3-甲氧基)苯基-1-苯基-3-庚酮(DHPA)的阴性组分以及高良姜素(给药浓度8μg·mL^(-1)作用24 h),均能够显著降低幽门螺杆菌胃炎细胞上清液中IL-6水平;总黄酮组分浓度为16μg·mL^(-1)时可显著抑制幽门螺杆菌感染GES-1胃炎细胞IL-6、TNF-α、IL-8和IL-1β的释放。结论总黄酮组分是高良姜乙酸乙酯部位抗幽门螺杆菌胃炎的主要活性组分,该研究结果为进一步阐释高良姜抗幽门螺杆菌胃炎药效物质基础奠定了基础。 展开更多
关键词 高良姜 幽门螺杆菌胃炎 敲除 活性组分 活性成分
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利用CRISPR/Cas9技术敲除水稻Pi21基因的效率分析 被引量:19
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作者 王芳权 范方军 +4 位作者 李文奇 朱金燕 王军 仲维功 杨杰 《中国水稻科学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期469-478,共10页
利用CRISPR/Cas9技术,针对Pi21基因的两个靶位点(靶位1和靶位2),构建基因敲除载体,转化水稻品种南粳9108。经PCR鉴定,获得了28株T0代阳性转基因植株。对靶位点酶切检测发现,靶位1突变效率为78.57%,靶位2突变效率为92.86%;靶位1和靶位2... 利用CRISPR/Cas9技术,针对Pi21基因的两个靶位点(靶位1和靶位2),构建基因敲除载体,转化水稻品种南粳9108。经PCR鉴定,获得了28株T0代阳性转基因植株。对靶位点酶切检测发现,靶位1突变效率为78.57%,靶位2突变效率为92.86%;靶位1和靶位2同时突变的效率为78.57%,突变效率较高。通过对靶位点进行测序,发现靶位点突变类型较多,包括碱基缺失、碱基插入、碱基缺失后插入其他碱基和大片段DNA缺失等类型。对突变株系进行氨基酸预测,发现大部分株系都存在移码突变现象而使基因突变彻底,少数株系表现为部分氨基酸的缺失或变异。成功敲除了水稻Pi21基因,并对突变效率和类型进行了分析,为进一步验证Pi21基因功能、培育广谱抗稻瘟病的水稻新品系奠定了基础。 展开更多
关键词 CRISPR/Cas9 稻瘟病 Pi21 基因敲除
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大肠杆菌ptsG基因敲除及其缺陷株生长特性研究 被引量:26
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作者 韩聪 张惟材 +1 位作者 游松 黄留玉 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期16-20,共5页
在大肠杆菌磷酸转移酶系统中 ,葡萄糖主要由ptsG基因编码的酶ⅡCBGlc转运入细胞。利用代谢工程技术构建ptsG基因缺陷株 ,有望降低葡萄糖的摄取速率 ,减少乙酸累积 ,促进菌体生长。运用PCR技术 ,扩增出两翼与ptsG基因上下游序列同源 ,中... 在大肠杆菌磷酸转移酶系统中 ,葡萄糖主要由ptsG基因编码的酶ⅡCBGlc转运入细胞。利用代谢工程技术构建ptsG基因缺陷株 ,有望降低葡萄糖的摄取速率 ,减少乙酸累积 ,促进菌体生长。运用PCR技术 ,扩增出两翼与ptsG基因上下游序列同源 ,中间为氯霉素抗性基因的DNA片段。经电转化 ,将外源DNA片段分别转入EscherichiacoliDH5α、JM10 9中。在Red重组酶的作用下 ,外源DNA片段与染色体上同源区域重组 ,将基因ptsG敲除 ,构建ptsG基因缺陷株DH5αP、JM10 9P。在LB培养基中 ,ptsG基因缺陷株的生长状况与亲株无明显差异。在含有葡萄糖的LB培养基中 ,DH5αP、JM10 9P的最高菌密度分别是对照菌株DH5α、JM10 9的 3 4 7倍和 4 2 5倍 ,ptsG基因缺陷株对葡萄糖的摄入量也明显高于对照菌株。重组蛋白肿瘤坏死因子 (TNF)在DH5αP、JM10 9P中的表达量分别占全菌蛋白的2 4 3%、2 0 8% ,A6 0 0 分别为 8 2 8、7 6 2 ,TNF在缺陷株中单位体积的表达量明显高于对照菌株。以上结果说明 ,大肠杆菌ptsG基因缺陷株具有良好的生长能力和表达外源蛋白的能力 ,在大肠杆菌高密度发酵研究方面具有良好的应用前景。 展开更多
关键词 大肠杆菌 ptsG基因 缺陷株 生长特性 基因敲除 代谢工程
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黄连解毒汤对高脂饮食apoE^(-/-)小鼠全身和主动脉血管局部免疫反应影响的研究 被引量:23
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作者 马雅銮 王蓓蓓 +7 位作者 韩俊燕 李蕊 张卫梅 李彤 陈冰 苏静 王宪波 曾辉 《中国中西医结合杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第11期1520-1525,共6页
目的观察黄连解毒汤对高脂饮食喂养的apoE基因敲除(apoE-/-)小鼠全身和主动脉血管局部免疫反应的影响。方法以8只野生型C57BL6小鼠为野生普食组,24只apoE-/-小鼠随机分为apoE-/-普食组、apoE-/-高脂组、apoE-/-高脂加中药组,每组8只。... 目的观察黄连解毒汤对高脂饮食喂养的apoE基因敲除(apoE-/-)小鼠全身和主动脉血管局部免疫反应的影响。方法以8只野生型C57BL6小鼠为野生普食组,24只apoE-/-小鼠随机分为apoE-/-普食组、apoE-/-高脂组、apoE-/-高脂加中药组,每组8只。普食组与高脂组分别给予普食和高脂饮食4周。ApoE-/-高脂加中药组同时给予黄连解毒汤5 g/(kg·d)灌胃,其他小鼠采用等量纯净水灌胃。4周后,检测血脂水平、外周血单核细胞比例及其表面Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)和清道夫受体CD36的表达;检测主动脉病理变化和主动脉血管局部细胞因子表达水平;进一步采用脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)刺激检测血浆细胞因子的水平。结果 (1)与野生普食组比较,apoE-/-普食组TC、TG和LDL-C水平显著升高(P<0.05,P<0.01);与apoE-/-普食组比较,apoE-/-高脂组TC和LDL-C水平显著增高(P<0.05);apoE-/-高脂组与apoE-/-高脂加中药组血脂各项指标比较,差异无统计学意义(P>0.05)。(2)与野生普食组比较,apoE-/-普食组外周血单核细胞比例无明显变化,TLR4表达水平显著增多(P<0.05);与apoE-/-普食组比较,apoE-/-高脂组小鼠外周血单核细胞比例及TLR4表达水平显著增多(P<0.05);与apoE-/-高脂组比较,apoE-/-高脂加中药组外周血单核细胞比例及其表面TLR4表达显著降低,清道夫受体CD36表达水平亦显著降低(P<0.05)。(3)LPS刺激3 h后,与野生普食组比较,apoE-/-普食组血浆TNF-α和IL-10表达显著增加(P<0.05);与apoE-/-普食组比较,apoE-/-高脂组小鼠血浆IL-12、TNF-α、MCP-1和IL-10表达增加,但差异无统计学意义(P>0.05);黄连解毒汤干预4周后,与apoE-/-高脂组比较,apoE-/-高脂加中药组MCP-1表达显著下调,而IL-10水平进一步显著上升,差异有统计学意义(P<0.05)。(4)与野生普食组比较,apoE-/-普食组主动脉血管壁炎症因子IFN-γ、MCP-1、TNF-α和IL-1βmRNA水平显著升高,抑炎因子IL-10亦显著升高(P<0.05,P<0.01);与apoE-/-普食组比较,apoE-/-高脂组主动脉血管壁不仅IFN-γ、MCP-1、TNF-α和IL-1β水平进一步显著升高,且抑炎因子IL-12、IL-10和TGF-β亦显著升高(P<0.05,P<0.01);黄连解毒汤干预4周后,与apoE-/-高脂组比较,apoE-/-高脂加中药组主动脉血管壁炎症因子MCP-1、TNF-α、IL-1β和IL-12显著降低(P<0.05,P<0.01)。结论高脂饮食引发apoE-/-小鼠全身性炎症反应和血管局部炎症反应,血管局部炎症反应程度超过全身性炎症反应。黄连解毒汤干预后能够减轻炎症反应,并且对血管局部的作用更为显著,同时增强全身抗炎反应。 展开更多
关键词 黄连解毒汤 APO E基因敲除小鼠 高脂血症 单核细胞 细胞因子
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泽泻萜类化合物对ApoE基因敲除动脉粥样硬化小鼠肝脏基底膜HSPG的调节作用 被引量:23
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作者 秦建国 王亚红 +3 位作者 梁晋普 张莹 王硕仁 郭维琴 《中华中医药学刊》 CAS 2007年第4期696-698,共3页
目的:观察泽泻萜类化合物对ApoE基因敲除小鼠实验性动脉粥样硬化肝脏基底膜硫酸乙酰肝素蛋白多糖的调节作用。方法:将8周龄C57/BL小鼠12只设为正常对照组,8周龄ApoE基因缺陷小鼠36只随机分为3组:模型组、中药组、舒降之阳性对照组。正... 目的:观察泽泻萜类化合物对ApoE基因敲除小鼠实验性动脉粥样硬化肝脏基底膜硫酸乙酰肝素蛋白多糖的调节作用。方法:将8周龄C57/BL小鼠12只设为正常对照组,8周龄ApoE基因缺陷小鼠36只随机分为3组:模型组、中药组、舒降之阳性对照组。正常对照组、模型组予0.9%生理盐水灌胃,给药组正常人每kg体重的10倍量灌胃90天后,全自动生化仪测定血清血脂含量,用免疫印记法测定各组肝脏基底膜硫酸乙酰肝素蛋白多糖的表达,用Quantity One 6.0软件进行光密度分析。结果:中药组、阳性对照药组与模型组比较,总胆固醇、低密度脂蛋白水平均明显降低。中药组、阳性对照药组肝脏基底膜HSPG表达与模型组比较明显上调,但与正常对照组比较则明显下调。结论:泽泻萜类化合物对apoE-基因敲除高脂饲料喂养所致动脉粥样硬化小鼠具有降低血清总胆固醇、低密度脂蛋白的作用,对该模型小鼠的肝脏基底膜HSPG表达有调节作用。 展开更多
关键词 中药学 泽泻萜类化合物 血脂 硫酸乙酰肝素蛋白多糖(HSPG) 动脉粥样硬化 APOE基因敲除小鼠
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Red重组系统及在微生物基因敲除中的应用 被引量:20
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作者 胡堃 史兆兴 +1 位作者 赛道建 黄留玉 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期628-632,共5页
在完成了对各种微生物基因组的测序以后,功能基因学的研究变得尤为重要。研究基因功能最直接的方法便是将待研究的基因失活。最初构建基因突变体是采用大肠杆菌的RecA系统,但是RecA重组系统操作复杂,重组效率低。最近建立了Red重组系统... 在完成了对各种微生物基因组的测序以后,功能基因学的研究变得尤为重要。研究基因功能最直接的方法便是将待研究的基因失活。最初构建基因突变体是采用大肠杆菌的RecA系统,但是RecA重组系统操作复杂,重组效率低。最近建立了Red重组系统,该系统由3个蛋白组成:α蛋白(即λ核酸外切酶),β蛋白,Gam蛋白。应用Red系统进行基因敲除,可以直接利用线性打靶DNA,两侧同源臂长度在35~60bp即可发生同源重组,且重组效率高。 展开更多
关键词 RED重组系统 基因敲除 抗药性基因 微生物
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银杏内酯B对ApoE基因敲除小鼠动脉粥样硬化的影响 被引量:18
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作者 刘熹昀 赵革新 +3 位作者 鲍利 陈北冬 吴伟 齐若梅 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期81-84,共4页
目的探讨银杏内酯B(ginkgolide B,GB)对ApoE基因敲除(ApoE-/-)小鼠动脉粥样硬化的影响。方法 12只8周龄C57BL/6J小鼠为正常组,24只8周龄♂ApoE-/-小鼠为阳性模型组以及药物组;药物组每天给予GB 0.6 mg灌胃。8周后处死小鼠,用病理学方法... 目的探讨银杏内酯B(ginkgolide B,GB)对ApoE基因敲除(ApoE-/-)小鼠动脉粥样硬化的影响。方法 12只8周龄C57BL/6J小鼠为正常组,24只8周龄♂ApoE-/-小鼠为阳性模型组以及药物组;药物组每天给予GB 0.6 mg灌胃。8周后处死小鼠,用病理学方法观察小鼠动脉斑块、脂质沉积以及巨噬细胞表达。用ELISA方法测定血浆RAN-TES含量。结果电镜结果显示模型组动脉斑块较大,血管内膜损伤明显,而GB组小鼠动脉内表面损伤明显减轻,斑块较小。HE染色显示了同样的结果,模型组斑块较大,GB组斑块较小。血浆RANTES测定正常组为123.81 ng.L-1,模型组为359.16 ng.L-1,GB组为193.36 ng.L-1,各组之间差异存在统计学意义(P<0.01)。结论 GB能有效地减轻ApoE-/-小鼠的动脉粥样硬化损伤,并降低血浆RANTES含量,其药理学机制可能与抑制血小板功能相关。 展开更多
关键词 银杏内酯B APOE基因敲除小鼠 动脉粥样硬化 RANTES PAF受体拮抗剂 血小板释放
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沉淀敲出法快速发现霍山产铁皮石斛生物碱及其组分抗氧化活性在线测定 被引量:13
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作者 陈存武 陈乃东 +2 位作者 孟云飞 张艳 胡建 《天然产物研究与开发》 CAS CSCD 北大核心 2014年第7期1000-1003,1013,共5页
为了给霍山产铁皮石斛药效物质基础研究及抗氧化活性物质快速发现提供依据,在预实验基础上,采用鲁米诺-双氧水发光体系作为羟自由基清除活性评价平台,HPLC-UV-CL联用在线测定了铁皮石斛生物碱部位各组分清除自由基活性。以磷钼酸、碘-... 为了给霍山产铁皮石斛药效物质基础研究及抗氧化活性物质快速发现提供依据,在预实验基础上,采用鲁米诺-双氧水发光体系作为羟自由基清除活性评价平台,HPLC-UV-CL联用在线测定了铁皮石斛生物碱部位各组分清除自由基活性。以磷钼酸、碘-碘化钾为沉淀试剂敲出总生物碱提取物中生物碱组分,对比敲出前后HPLC图谱变化,确定铁皮石斛的生物碱组分。结果表明,在本实验条件下,霍山产铁皮石斛中检出的5种生物碱中有4种可降低鲁米诺-双氧水发光体系的发光值。HPLC-UV-CL可用于铁皮石斛生物碱清除自由基活性快速测定。实验结果可为铁皮石斛质量控制、抗氧化活性成分定向分离的研究提供依据。 展开更多
关键词 铁皮石斛 沉淀敲出 高效液相色谱-化学发光联用法 生物碱
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解毒活血中药配伍对载脂蛋白E基因敲除小鼠主动脉NF-κB与MMP-9表达的调控作用 被引量:36
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作者 张京春 陈可冀 +4 位作者 郑广娟 张文高 史大卓 殷惠军 刘龙涛 《中国中西医结合杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期40-44,共5页
目的观察解毒活血中药配伍对载脂蛋白E基因敲除小鼠[apolipoprotein E knocked-out mice, ApoE(-/-)mice]主动脉核因子-κB(NF-κB)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达水平的调控作用。方法13周龄ApoE(-/-)小鼠分为高脂组(给予高脂饲料)和... 目的观察解毒活血中药配伍对载脂蛋白E基因敲除小鼠[apolipoprotein E knocked-out mice, ApoE(-/-)mice]主动脉核因子-κB(NF-κB)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达水平的调控作用。方法13周龄ApoE(-/-)小鼠分为高脂组(给予高脂饲料)和普通饲料组(给予普通饲料),同时设13周龄C57 BL/6J小鼠对照组(给予普通饲料)。19周后进行干预,普通饲料模型组、C57BL/6J小鼠对照组灌服生理盐水,高脂组随机分为解毒组[灌服虎杖苷26.6 mg/(kg·d)],活血组[灌服芎芍胶囊110 mg/(kg·d)],解毒活血配伍高剂量组[灌服虎杖提取物53.2 mg/(kg·d),芎芍胶囊220 mg/(kg·d)];解毒活血配伍中剂量组[灌服虎杖提取物26.6 mg/(kg·d),芎芍胶囊110 mg/(kg·d)];解毒活血配伍低剂量组[灌服虎杖提取物13.3 mg/(kg·d),芎芍胶囊55 mg/(kg·d)],洛伐他汀组[灌服洛伐他汀3.3 mg/(kg·d)],高脂饲料模型组(灌服生理盐水)。17周后,取主动脉做常规石蜡切片,免疫组化观察其NF-κB和MMP-9表达的程度。结果模型组ApoE(-/-)小鼠主动脉及粥样斑块NF-κB和MMP-9表达明显增加,虎杖苷、芎芍胶囊、洛伐他汀及解毒活血配伍治则的虎杖苷与芎芍胶囊配伍均可降低其主动脉NF-κB和MMP-9表达(P<0.01),且以解毒活血配伍高剂量组疗效最好(P<0.01)。结论解毒活血配伍可降低ApoE(-/-)小鼠主动脉NF-κB和MMP-9表达,且优于单纯解毒和活血组。 展开更多
关键词 解毒活血配伍 载脂蛋白E基因敲除小鼠 核因子-ΚB 基质金属蛋白酶-9 动脉粥样硬化 易损斑块 芎芍胶囊
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解毒活血配伍方药对载脂蛋白E基因敲除小鼠血清超敏C反应蛋白的影响 被引量:24
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作者 张京春 陈可冀 +5 位作者 刘剑刚 张文高 史大卓 刘龙涛 殷惠军 徐浩 《中国中西医结合杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期330-333,共4页
目的观察解毒活血配伍方药对载脂蛋白E基因敲除[apolipoprotein E gene knock-out,ApoE(-/-)mice]小鼠血清超敏C反应蛋白(hs-CRP)的影响。方法13周龄110只ApoE(-/-)小鼠分为高脂饲料组(98只,给予高脂饲料),普通饲料组(12只,给予普通饲... 目的观察解毒活血配伍方药对载脂蛋白E基因敲除[apolipoprotein E gene knock-out,ApoE(-/-)mice]小鼠血清超敏C反应蛋白(hs-CRP)的影响。方法13周龄110只ApoE(-/-)小鼠分为高脂饲料组(98只,给予高脂饲料),普通饲料组(12只,给予普通饲料),同时设13周龄C57BL/6J小鼠作为正常对照组(12只,给予普通饲料)。19周后随机抽取高脂饲料ApoE(-/-)小鼠2只确认易损斑块形成后,剩余96只随机分为8组(模型组、解毒组、活血组、解毒活血配伍高、中、低剂量组、洛伐他汀组和血脂康组),每组12只。造模成功后每天给予药物干预,解毒组予虎杖提取物26·6mg/kg;活血组予芎芍胶囊110mg/kg;配伍高剂量组予虎杖提取物53·2mg/kg,芎芍胶囊220mg/kg;配伍中剂量组给予虎杖提取物26·6mg/kg,芎芍胶囊110mg/kg;配伍低剂量组给予虎杖提取物13·3mg/kg,芎芍胶囊55mg/kg;洛伐他汀组给予洛伐他汀3·3mg/kg;血脂康组给予血脂康0·2g/kg;以上药物根据剂量蒸馏水溶解,混匀后灌胃,每次0·4mL。模型组、普通饲料组、C57BL/6J小鼠对照组均灌服生理盐水0·4mL。用药17周后,下腔静脉取血,全自动酶标仪检测血清hs-CRP浓度。结果模型组血清hs-CRP水平显著高于正常对照组和普饲组(P<0·05,P<0·01);各给药组中,洛伐他汀组、解毒组和配伍高剂量组hs-CRP水平下降,与模型组比较,差异有统计学意义(P<0·01);配伍高剂量组hs-CRP水平低于洛伐他汀组、血脂康组、单纯解毒或活血组及配伍中、低剂量组;解毒组hs-CRP水平低于活血组(P<0·01)。结论解毒活血配伍方药可降低ApoE(-/-)小鼠血清hs-CRP水平。 展开更多
关键词 解毒活血配伍方药 载脂蛋白E基因敲除小鼠 超敏C反应蛋白 动脉粥样硬化 易损斑块
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SIRT1基因敲除对骨关节炎小鼠VEGF/AKT信号通路的影响 被引量:9
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作者 于斐 曾晖 +3 位作者 雷鸣 熊奡 肖德明 袁昊 《中国骨质疏松杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期30-35,40,共7页
目的通过研究沉默信息调节因子1(SIRT1)基因敲除对骨关节炎小鼠VEGF/AKT通路的作用,探讨骨关节炎关节软骨退变的可能机制。方法将小鼠分为两组:SIRT1^(+/+)小鼠骨关节炎模型组(A组,n=6);SIRT1^(-/-)小鼠骨关节炎模型组(B组,n=6)。荧光... 目的通过研究沉默信息调节因子1(SIRT1)基因敲除对骨关节炎小鼠VEGF/AKT通路的作用,探讨骨关节炎关节软骨退变的可能机制。方法将小鼠分为两组:SIRT1^(+/+)小鼠骨关节炎模型组(A组,n=6);SIRT1^(-/-)小鼠骨关节炎模型组(B组,n=6)。荧光定量聚合酶链反应检测SIRT1基因表达情况;HE染色、番红O-固绿双染色观察膝关节软骨形态结构改变,Mankin评分评价膝关节关节软骨退变,免疫组化染色检测膝关节软骨细胞中SIRT1、VEGF和AKT蛋白水平。结果 B组SIRT1 m RNA表达量为2.24417±1.316569,明显低于A组(P<0.01)。HE染色和番红O-固绿双染色结果显示,B组膝关节关节软骨退变明显,Mankin评分分值为9.8333±1.94079分,明显高于A组(P<0.05),B组SIRT1、VEGF和AKT免疫组化染色积分分别为3.3333±1.96638、10.0000±2.44949和1.3333±1.21106,B组SIRT1蛋白表达与A组相比差异不显著(P>0.05);B组VEGF蛋白表达明显高于A组(P<0.05);B组AKT蛋白表达明显低于A组(P<0.01)。结论 SIRT1基因敲除可能通过激活VEGF/AKT通路加重骨关节炎关节软骨的退变,因此SIRT1基因可能对骨关节炎起到保护作用。 展开更多
关键词 沉默信息调节因子1(SIRT1) 血管内皮生长因子(VEGF) 蛋白激酶B(AKT) 基因敲除 骨关节炎 动物实验研究
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利用Red同源重组系统进行牛β酪蛋白基因敲除 被引量:8
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作者 薛可 李峰 +2 位作者 罗光彬 黄玮玮 陈学进 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期570-574,共5页
利用EL350基因工程菌进行同源重组,成功进行基因敲除已有报道,但利用该系统进行乳腺生物反应器质粒构建的研究却未见报道。实验采用含有完整的牛β酪蛋白基因的CSN2质粒作为基因打靶的载体,设计不同的同源臂,成功地敲除了β酪蛋白基因... 利用EL350基因工程菌进行同源重组,成功进行基因敲除已有报道,但利用该系统进行乳腺生物反应器质粒构建的研究却未见报道。实验采用含有完整的牛β酪蛋白基因的CSN2质粒作为基因打靶的载体,设计不同的同源臂,成功地敲除了β酪蛋白基因的编码区。并且同时利用同源重组技术对敲除不同大小的DNA片段的效率进行了研究。为进一步利用CSN2质粒两端的调控序列,插入新的基因,研究其表达功能,或者进行乳腺生物反应器的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 同源重组 牛β酪蛋白基因 Cre-loxP重组系统 基因敲除
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