一株裂解性鸡白痢沙门氏菌噬菌体的分离及生物学特性分析

为了分离一株裂解性鸡白痢沙门氏菌噬菌体,对抗多重耐药细菌,试验从健康鸡粪便中分离富集噬菌体,采用双层琼脂平板法纯化、增殖,超速离心法浓缩,利用透射电镜观察噬菌体形态,通过提取噬菌体基因组、酶切、电泳确定核酸类型,同时测定噬菌体的宿主谱、最佳感染复数、一步生长曲线、酸碱及热稳定性等生物学特性。结果表明:从鸡粪中分离得到1株裂解性噬菌体,命名为PSP2-22。该噬菌体头部直径为(60±5)nm,尾部长为(130±5)nm,为长尾噬菌体科;核酸类型为双链DNA。该噬菌体不仅能裂解鸡白痢沙门氏菌,还可裂解鼠伤寒沙门氏菌和奇异变形杆菌;最佳感染复数为0.1;平均裂解量约为136 pfu/cell,效价最高可达9.83 lg pfu/mL;在pH值6~11时相对稳定,70℃作用60 min之后仍具有一定活性。说明噬菌体PSP2-22是一株对不同温度和pH值有较强适应能力的双链DNA噬菌体,宿主谱相对较宽,具有潜在的应用价值。

鸡源大肠杆菌噬菌体的分离鉴定及组合应用

为探究大肠杆菌噬菌体的生物学特性及其混合制剂的应用效果,试验从山东地区分离纯化鸡源大肠杆菌及大肠杆菌噬菌体,对噬菌斑形态和大小差异较大的噬菌体进行了生物学特性(噬菌体效价、最适温度、最适pH值、最佳感染复数、一步生长曲线、最佳保存温度)测定,并测定了部分噬菌体的宿主谱,选取裂解率较高的10株噬菌体组合成噬菌体混合制剂,测定其对大肠杆菌(实验室保存的100株大肠杆菌、全国不同地区养鸡场分离的100株大肠杆菌)的裂解率。结果表明:从山东地区分离并纯化鸡源大肠杆菌195株,大肠杆菌噬菌体155株。挑取两株噬菌斑形态和大小差异较大的噬菌体(分别命名为PLCF1和PLCF72)进行了生物学特性测定,噬菌体PLCF1和PLCF72效价分别为4.5×10^(10) pfu/mL、1.5×10^(9) pfu/mL,在温度40℃以内可以保持较高的活性,最佳pH值为6~8,噬菌体PLCF1和PLCF72最佳感染复数分别为0.001,0.01;一步生长曲线显示噬菌体PLCF1的裂解性能强于噬菌体PLCF72;噬菌体适宜保存温度为-20℃或-80℃。选取83株噬菌体对282株大肠杆菌菌株进行裂解,裂解率可达78.01%,混合制剂对实验室保存的100株大肠杆菌的裂解率为62.00%,对全国不同地区采集的100株大肠杆菌的裂解率为41.00%。说明两株噬菌体生物学特性存在一定的差异,噬菌体混合制剂对不同来源的大肠杆菌裂解率不同。

果胶细菌诱导根瘤菌进入油菜根系结瘤的研究

用果胶细菌(Pecto bacterium)处理油菜幼根,使根瘤菌(Bradyrhizobium spp.Arachis)侵入油菜根系并结瘤。试验表明,根瘤菌侵入油菜根细胞,且形成含根瘤茵的根瘤,结瘤率为31.25％。从这些根瘤中分离出的菌株,成功地回接到原寄主之上;血清学方法测定油菜根瘤分离物与原接种的根瘤菌起凝集反应。根瘤石蜡包埋切片观察,结果是根瘤细胞内充满了细菌。乙炔还原法测定出低固氮酶活性(0.17～3.43nMC_2H_4/株/小时);酰脲分析结果其相对酰脲丰度为0.1％～3.58％。

猪牛血块超氧化物歧化酶提取工艺研究(1)——保护剂、溶膜剂和激活剂的选择

目的:研究保护剂、溶膜剂和激活剂对从猪、牛血块中分离提取超氧化物歧化酶(SOD)的影响,确定其种类和用量。方法:采用两因素、三因素试验设计。结果:猪血与牛血在SOD活性和产率上差异达到极显著水平(P<0.01);保护剂混合组合好于单用,混合组合以1.5%乳糖(a)+0.5%β-环糊精(b)+0.25%聚乙二醇(c)效果最好;溶膜剂:牛血以3%曲拉通X-100(d)+0.5%正丁醇(e),猪血以3%曲拉通X-100(d)效果较好;保护剂加量以血块质量的20%为最佳,溶膜剂加量以血块质量的15%￣20%为好,激活剂加量以2.5%最佳。结论:省去了采血加入抗凝剂和离心分离血球工艺,且采用溶膜剂及机械法溶血,效果好、成本较低,适合规模化生产。以此工艺获得的SOD活性在3000U/mg蛋白以上,且从牛血提取的SOD活性和产率均高于猪血。

一种通用型颤振珠磨式微生物快速裂解系统的设计与实现

目的开发一种结构简单、操作方便、运行平稳、成本较低的通用型颤振珠磨式微生物快速裂解系统,解决临床检验和诊断对微生物快速裂解的迫切需求。方法设计分析了传动机构和控制电路,然后加工装配制作系统样机。选择金黄色葡萄球菌作为裂解对象,通过平板培养统计裂解率,并探索裂解率与浓度、裂解时间和电机转速之间的关系。结果相同裂解条件下,低浓度的金黄色葡萄球菌的裂解率高于高浓度;电机转速相同时,不同浓度的金黄色葡萄球菌的裂解率均随裂解时间的增加而提高,呈"S"型变化;随着电机转速的增加,金黄色葡萄球菌的最终裂解率逐渐提高。结论裂解释放DNA的定量检测结果证明所设计系统能够有效裂解微生物样本,其裂解效能优于实验室常用裂解方式。

营养条件对噬藻体PP感染席藻动力学的影响

本试验设计了从正常的AA培养基(CK组)到N和P含量只有正常AA培养基1/600的6种培养基.在25℃、2000 lx条件下将宿主席藻在6种培养基中培养8个月后,用显微直接计数法测定了席藻的生长曲线以及噬藻体PP感染宿主席藻的裂解周期与致死率,用离心法测定了噬藻体PP对宿主席藻的吸附率,用一步生长曲线法测定了噬藻体PP的释放量和裂解周期.结果表明:提高N和P含量会促进宿主席藻的生长,统计分析也显示,在对数中期(第6天),高营养盐浓度中细胞密度显著高于低营养盐浓度中的密度;提高营养盐浓度噬藻体PP的吸附率会显著增高,主要表现为在AA中噬藻体PP的吸附率极显著高于其他组;同时6种培养基条件下噬藻体PP对席藻的致死率变化不大;随着营养水平的升高,噬藻体PP的潜伏期和裂解周期明显缩短,平均释放量显著增加,但裂解宿主的效率却没有显著变化.上述结果说明噬藻体PP对宿主藻的感染力会随着营养水平的提高而明显增强,并可能在水体富营养化进程中发挥着调控藻类种群更替的作用.