微小RNA-124-3p靶向胰岛素样生长因子2 mRNA结合蛋白1对子宫内膜癌细胞生物学行为的影响

目的探讨微小RNA-124-3p(miR-124-3p)靶向胰岛素样生长因子2 mRNA结合蛋白1(IGF2BP1)对子宫内膜癌细胞生物学行为的影响。方法选取2015年1月—2021年1月磐石市医院保存的子宫内膜癌组织及癌旁组织20例,分析miR-124-3p在癌组织、癌旁组织中的表达及与患者临床病理特征的关系。用子宫内膜癌MFE-280细胞进行miR-124-3p沉默和过表达转染,分为空白组、miR-124-3p-inhibitor组、miR-124-3p-mimic组,分析调控miR-124-3p表达对子宫内膜癌MFE-280细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭等生物学行为的影响。采用双荧光素酶报告实验预测miR-124-3p的靶基因,分析miR-124-3p对子宫内膜癌MFE-280细胞IGF2BP1表达量的影响。结果子宫内膜癌组织miR-124-3p表达量(1.01±0.09)低于癌旁组织(1.89±0.25),差异有统计学意义(t=14.810,P<0.05)。miR-124-3p与FIGO分期、组织学分级、淋巴结转移、肌层浸润深度有关,miR-124-3p在Ⅳ期、G3分级、有淋巴结转移、肌层浸润≥1/2的患者中表达降低(均P<0.05)。miR-124-3p-inhibitor组72 h细胞增殖率[(52.31±3.44)%vs.(40.12±2.32)%]、迁移率[(57.63±7.89)%vs.(45.65±6.72)%]、细胞穿膜数[(348.97±40.76)个vs.(245.63±24.53)个]高于空白组,差异均有统计学意义(t=9.290、3.655、6.869,均P<0.05),miR-124-3p-inhibitor组凋亡率[(20.12±1.12)%vs.(31.45±6.49)%]低于空白组,差异有统计学意义(t=6.394,P<0.05)。miR-124-3p-mimic组72h细胞增殖率[(17.89±1.54)%vs.(52.31±3.44)%]、迁移率[(16.87±1.12)%vs.(57.63±7.89)%]、细胞穿膜数[(55.64±6.91)个vs.(348.97±40.76)个]低于miR-124-3p-inhibitor组,差异均有统计学意义(t=28.880、16.170、22.440,均P<0.05),凋亡率[(77.16±10.25)%vs.(20.12±1.12)%]高于miR-124-3p-inhibitor组,差异有统计学意义(t=17.490,P<0.05)。双荧光素酶报告实验发现:miR-124-3p可抑制WT-IGF2BP1的3’-UTR荧光素酶活性,对MUT-IGF2BP1的3’-UTR荧光素酶活性无影响,且相关性分析显示miR-124-3p与IGF2BP1在子宫内膜癌中呈负相关(r=-0.409,P<0.05)。miR-124-3p-inhibitor组IGF2BP1表达量(2.31±0.19 vs.1.34±0.14)高于空白组,差异有统计学意义(t=13.000,P<0.05);miR-124-3p-mimic组IGF2BP1表达量(0.68±0.10 vs.2.31±0.19)低于miR-124-3p-inhibitor组,差异均有统计学意义(t=24.010,P<0.05)。结论miR-124-3p在子宫内膜癌中低表达,过表达处理后经靶向调控IGF2BP1表达而影响子宫内膜癌细胞的增殖、迁移、侵袭,促进凋亡。

长链非编码RNA胃癌高表达转录本1、胰岛素样生长因子2 mRNA结合蛋白1在结直肠癌中的表达及预后影响

目的观察长链非编码RNA胃癌高表达转录本1(lncRNA GHET1)、胰岛素样生长因子2 mRNA结合蛋白1(IGF2BP1)在结直肠癌(CRC)组织中的表达,探讨其与CRC患者预后的相关性。方法选取2014年1月至2015年1月于上海交通大学附属第六人民医院南院行手术治疗、具有完整病理及临床资料的CRC患者组织标本90例,设为研究组,另取该组手术患者癌旁正常组织标本作为对照组。实时荧光定量PCR法(qPCR)及免疫组织化学法检测两组标本中GHET1、IGF2BP1的表达情况;分析CRC组织GHET1、IGF2BP1表达情况与患者临床病理特征的关系;Kaplan-Meier法分析GHET1、IGF2BP1在CRC组织中的表达情况与预后情况的关系;Cox回归分析影响CRC预后情况的因素。结果研究组标本中的GHET1 mRNA水平及IGF2BP1蛋白阳性表达率均高于对照组(P<0.05);GHET1、IGF2BP1表达情况与肿瘤组织分化程度、浸润深度、TNM分期、淋巴结转移均有关(P<0.05);Kaplan-Meier分析结果显示,GHET1 mRNA高表达及IGF2BP1蛋白阳性患者生存率均低于GHET1 mRNA低表达及IGF2BP1蛋白阴性患者(32.80%vs 75.00%,Log-rankχ^(2)=17.775,P<0.05;33.33%vs 80.00%,Log-rankχ^(2)=13.615,P<0.05);多因素Cox分析显示,GHET1 mRNA高表达、IGF2BP1蛋白阳性表达是影响CRC预后情况的危险因素(P<0.05)。结论CRC患者癌组织中存在GHET1 mRNA水平及IGF2BP1蛋白阳性高表达,且与患者的不良预后密切相关。

泛素特异性蛋白酶21对胆管癌细胞增殖及迁移的影响及机制

目的:探究泛素特异性蛋白酶21(USP21)在胆管癌(CCA)中的表达及其对CCA细胞增殖与迁移的作用及其机制。方法:通过生物信息学方法和免疫组化及WB法检测CCA组织及细胞中USP21的表达情况。利用体外克隆形成、EdU及Transwell实验检测敲低USP21对CCA细胞QBC939和RBE增殖及迁移的影响。通过RNA测序、质谱、免疫共沉淀(Co-IP)及WB法探究USP21的促癌机制。结果:TCGA等数据库分析结果显示,USP21 mRNA在CCA组织中呈高表达(均P<0.05)。USP21蛋白在CCA组织和细胞中呈高表达(P<0.05或P<0.001或P<0.0001)。敲低USP21后,QBC939和RBE细胞的增殖和迁移能力均显著降低(P<0.01或P<0.001)。RNA测序结果表明,敲低USP21可以通过抑制PI3K/AKT信号通路抑制CCA细胞的增殖和迁移能力(P<0.05)。质谱鉴定发现,USP21与胰岛素样生长因子2 mRNA结合蛋白1(IGF2BP1)相结合。Co-IP和WB实验结果表明,USP21与IGF2BP1结合并通过泛素化途径调控IGF2BP1的蛋白表达(P<0.001或P<0.0001)。结论:USP21在CCA组织和细胞中均呈高表达,其通过IGF2BP1/PI3K/AKT信号通路增强CCA细胞的增殖及迁移能力。

子宫内膜癌组织中IGF2BP1mRNA,PEG10mRNA表达及与增殖基因表达的相关性和预后研究

目的研究子宫内膜癌(endometrial carcinoma,EC)组织中胰岛素样生长因子2 mRNA结合蛋白1(insulinlike growth factor 2 mRNA binding protein 1,IGF2BP1)mRNA,父系表达遗传印记基因10(patrilineal expression of genetic imprinting gene 10,PEG10)mRNA表达及与增殖基因表达的相关性及预后。方法选取2017年1月~2019年1月湖北理工学院附属妇幼保健院诊治的100例EC患者。实时荧光定量PCR检测EC癌组织和癌旁组织中IGF2BP1 mRNA,PEG10 mRNA及增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)mRNA,细胞周期素D1(cyclin D1)mRNA,细胞周期蛋白依赖激酶4(cyclin dependent kinase 4,CDK4)mRNA表达。免疫组织化学检测IGF2BP1,PEG10蛋白表达。相关性采用Pearson相关分析。Kaplan-Meier曲线分析不同IGF2BP1,PEG10表达组EC患者的预后差异。COX回归分析EC患者的预后影响因素。结果EC癌组织中IGF2BP1 mRNA(1.84±0.33),PEG10 mRNA(2.12±0.40),PCNA mRNA(3.14±0.42),cyclinD1 mRNA(2.81±0.36),CDK4 mRNA(2.37±0.34)高于癌旁组织(0.78±0.21,0.91±0.25,0.74±0.13,0.67±0.21,0.59±0.18),差异具有统计学意义(t=25.652~54.588,均P<0.05)。癌组织中IGF2BP1(70.00%),PEG10(72.00%)蛋白阳性率高于癌旁组织(100%,9.00%),差异具有统计学意义(χ^(2)=75.000,82.363,均P<0.05)。EC中IGF2BP1 mRNA,PEG10 mRNA表达与PCNA mRNA,cyclinD1 mRNA,CDK4 mRNA表达呈正相关(r=0.562~0.625,均P<0.05)。EC中IGF2BP1 mRNA与PEG10 mRNA表达呈显著正相关(r=0.663,P<0.05)。FIGO分期Ⅲ期、并发淋巴结转移EC癌组织中IGF2BP1(86.49%,87.50%),PEG10(89.19%,90.63%)阳性率高于FIGO分期Ⅰ~Ⅱ期(60.32%,61.90%)、无淋巴结转移(61.77%,63.24%),差异具有统计学意义(χ^(2)=6.863~8.608,均P<0.05)。IGF2BP1阳性组患者三年总体生存率70.00%(49/70)低于阴性组的90.00%(27/30);PEG10阳性组患者三年总体生存率为69.44%(50/72),低于阴性组的92.86%(26/28),差异具有统计学意义(Log-rankχ^(2)=4.133,5.491,P=0.042,0.019)。FIGO分期Ⅲ期(OR=1.449,95%CI:1.148~1.830)、并发淋巴结转移(OR=1.442,95%CI:1.124~1.850),IGF2BP1阳性(OR=1.637,95%CI:1.239~2.163)及PEG10阳性(OR=1.576,95%CI:1.136~1.187)是影响EC患者生存预后的独立危险因素(均P<0.05)。结论EC中IGF2BP1,PEG10表达升高,两者与增殖基因表达呈正相关,是EC预后评估的肿瘤标志物。

IGF_(2)BP_(1)调控lncRNA NEAT1在类风湿关节炎中的作用

目的:类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)是一种常见的全身性自身免疫疾病,可能导致关节变形和功能障碍。本研究旨在探索胰岛素样生长因子-2 mRNA结合蛋白1(insulin like growth factor 2 mRNA binding protein 1,IGF_(2)BP_(1))在RA中的表达水平,以及其对长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)核丰富转录本1(nuclear paraspeckle assembly transcript 1,NEAT1)稳定性的影响和在RA发病机制中的作用。方法:通过GEO(Gene Expression Omnibus)数据库获取RA数据集,并将其分为正常对照组和RA组,使用R软件分析获取N^(6)-甲基腺苷(N^(6)-methyladenosine,m^(6)A)相关的甲基化酶的表达量并进行差异分析。分析差异表达的m^(6)A甲基化酶与lncRNA NEAT1的相关性。通过在线网站ENCORI预测与lncRNA NEAT1结合的蛋白质,并与lncRNA NEAT1表达相关的m^(6)A甲基化酶取交集,从而获取关键基因。通过RNA蛋白质相互作用分析实验(RNA pull-down)验证在RA滑膜细胞中NEAT1与关键基因结合的情况。通过蛋白质印迹法验证关键基因在正常滑膜细胞和RA滑膜细胞中的表达水平。在RA滑膜细胞中转染关键基因的小干扰RNA,通过real-time RT-PCR检测NEAT1在滑膜细胞中的表达水平。结果:差异分析结果显示:与正常对照组相比,共有8个m^(6)A甲基化基因在RA组中存在差异表达,其中IGF_(2)BP_(1)、甲基转移酶样蛋白14(methyltransferase 14,N^(6)-adenosine-methyltransferase subunit,MEEEL14)与lncRNA NEAT1存在相关性;ENCORI预测结果显示:共有23个蛋白质能够与lncRNA NEAT1结合,与NEAT1共表达m^(6)A甲基化酶取交集,获得NEAT1相关m^(6)A甲基化蛋白IGF_(2)BP_(1)。蛋白质印迹法显示:与正常对照组相比,RA组中IGF_(2)BP_(1)蛋白在RA滑膜细胞中表达升高(P<0.05);RNA pull-down结果显示IGF_(2)BP_(1)蛋白与NEAT1结合;real-time RT-PCR的结果表明:敲减IGF_(2)BP_(1)可显著降低NEAT1 mRNA表达水平(P<0.01)。结论:IGF_(2)BP_(1)可能通过稳定lncRNA NEAT1表达参与RA发病,调控IGF_(2)BP_(1)水平可能是一种新的治疗RA的方法。

LINC01234通过调控IGF2BP1 c-Myc对急性髓系白血病细胞增殖侵袭迁移的影响

目的:探讨LINC01234通过调控胰岛素样生长因子2 mRNA结合蛋白1(insulin-like growth factor 2 mRNA binding protein 1,IGF2BP1)/c-Myc对急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)细胞增殖、侵袭、迁移的影响。方法:分析2019年3月至2021年9月在湖北省恩施州中心医院确诊的31例AML患者和在本院体检的24例健康志愿者的外周血标本。通过实时定量PCR(real-time quantitative PCR,qRT-PCR)检测分析LINC01234在AML标本和细胞系(MV-4-11、NB4、KG-1、THP-1、HL-60)中的表达模式。HL-60细胞随机记为空白对照(blank control,BC)组、sh-control组、sh-LINC01234组、sh-LINC01234+pcDNA-control组、 sh-LINC01234+pcDNA-c-Myc组。qRT-PCR检测细胞中LINC01234、IGF2BP1和c-Myc的表达。细胞计数试剂盒-8实验、transwell迁移和侵袭实验用于细胞增殖能力、细胞侵袭和迁移功能的研究。通过RNA免疫沉淀和RNA pulldown实验证实LINC01234、IGF2BP1和c-Myc在AML细胞中的调节相关性。结果:与健康志愿者标本和人骨髓基质细胞HS-5相比,LINC01234在AML标本和5种细胞系中表达均升高(P<0.05)。sh-LINC01234下调HL-60细胞中LINC01234水平后,OD值显著降低,侵袭、迁移细胞数目显著减少(P<0.05)。LINC01234结合IGF2BP1,促进IGF2BP1与c-Myc mRNA的相互作用,从而促进c-Myc mRNA的稳定性(P<0.05)。c-Myc过表达逆转了LINC01234沉默对HL-60细胞增殖、转移的阻碍作用(P<0.05)。结论:LINC01234是一种新型AML相关的lncRNA,通过竞争性结合IGF2BP1促进c-Myc mRNA的稳定性,进而促进AML细胞增殖、侵袭和迁移。

m^(6)A阅读蛋白IGF2BP1对食管鳞状细胞癌细胞生物学行为的影响及其机制探讨

本研究旨在探讨胰岛素样生长因子-2 mRNA结合蛋白1(insulin like growth factor 2 mRNA binding protein 1,IGF2BP1)对食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)细胞体外功能的影响及其作用机制。利用TIMER2.0数据库、免疫组化及实时定量PCR(real-time quantitative PCR,RT-qPCR)分析IGF2BP1在ESCC组织和癌旁组织中的蛋白及mRNA水平。采用siRNA敲低IGF2BP1在KYSE30和TE-1细胞中的表达,利用CCK-8实验、平板集落形成实验、划痕愈合实验、Transwell实验以及流式细胞术检测敲低IGF2BP1对细胞功能的影响。利用Western blot检测敲低IGF2BP1对上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关蛋白及PI3K/AKT通路磷酸化水平的影响。利用STRING、GEPIA数据库筛选出与IGF2BPl蛋白互作的其余N^(6)-甲基腺嘌呤(N^(6)-methyladenosine,m^(6)A)甲基化酶并进行差异表达分析。通过RM2Target、SRAMP数据库预测下游靶基因及其m^(6)A修饰位点。结果显示,IGF2BP1在ESCC组织和细胞中高表达(P<0.05或P<0.001);敲低IGF2BP1后KYSE30和TE-1细胞增殖、迁移和侵袭能力减弱(P<0.05或P<0.001),细胞凋亡增多(P<0.05或P<0.001),同时促进E-cadherin的表达(P<0.05或P<0.01),抑制N-cadherin、Vimentin的表达(P<0.05或P<0.01)以及PI3K/AKT通路的磷酸化(P<0.05或P<0.01);锌指CCCH结构域蛋白13(zinc finger CCCH domain containing protein 13,ZC3H13)与IGF2BP1蛋白互作且在ESCC中的表达水平与IGF2BP1正相关;ZC3H13和IGF2BP1共同调控的潜在靶基因CNNM2、KIAA1549、SP3均具有高可信度的m^(6)A修饰位点。本研究提示,IGF2BP1可能通过m^(6)A依赖的方式与其余m^(6)A甲基化酶协调作用,激活PI3K/AKT通路的磷酸化而促进ESCC细胞的增殖、迁移、侵袭,抑制细胞凋亡,并促进EMT进程,发挥致癌作用。

miR-383-5p调控IGF2BP1抑制直肠癌细胞EMT及侵袭迁移的研究

目的探究microRNA-383-5p(miR-383-5p)在直肠癌的表达及其对直肠癌转移的调控机制。方法体外培养人直肠癌细胞SW837、SW1463、HR-8348和人正常结直肠黏膜细胞FHC,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测细胞中miR-383-5p、胰岛素样生长因子2 mRNA结合蛋白1(IGF2BP1)mRNA表达水平。取对数生长期的SW837细胞,分成对照组(NC组,不进行任何转染)、mimic-NC组(转染miR-383-5p mimic阴性对照)、miR-383-5p过表达组(转染miR-383-5p mimic)、miR-383-5p过表达+pcDNA3.1-NC组(miR-383-5p mimic和pcDNA3.1-IGF2BP1阴性对照空载体质粒共转染)、miR-383-5p过表达+pcDNA3.1-IGF2BP1组(miR-383-5p mimic和pcDNA3.1-IGF2BP1共转染),转染48h后,RT-qPCR检测转染效果;CCK-8法检测细胞增殖活力;划痕愈合实验和Transwell小室实验检测细胞迁移、侵袭能力;Western Blot检测细胞中IGF2BP1和上皮-间质转化(EMT)相关蛋白的表达;双荧光素酶报告基因验证miR-383-5p与IGF2BP1的靶向关系。结果直肠癌细胞中miR-383-5p的表达显著低于人正常结直肠黏膜细胞FHC,而IGF2BP1 mRNA在直肠癌细胞中呈高表达(P<0.05)。与NC组相比,miR-383-5p过表达组细胞中miR-383-5p、E-钙黏蛋白(E-cadherin)的表达显著升高,IGF2BP1 mRNA和蛋白的表达、细胞增殖活性、划痕愈合率、进入Transwell小室下层的细胞数量、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(VIM)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达显著降低(P<0.05);且在过表达miR-383-5p的基础上,上调IGF2BP1的表达,miR-383-5p过表达对SW837细胞增殖、迁移和侵袭以及EMT的抑制作用被减弱。双荧光素酶报告基因检测结果显示,miR-383-5p的高表达可显著抑制转染IGF2BP1-WT的细胞荧光素酶活性(P<0.05)。结论miR-383-5p过表达可能通过靶向下调IGF2BP1,抑制直肠癌细胞EMT及侵袭迁移。

miRNA-196b靶向抑制IGF2BP1对肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响及机制研究

目的探讨miRNA-196b通过靶向调控胰岛素样生长因子2 mRNA结合蛋白1(IGF2BP1)的表达抑制肝癌HepG2细胞增殖并诱导其凋亡的机制。方法将miRNA-196b模拟物(mimics)和阴性对照转染至肝癌HepG2 细胞,分别作为阴性对照组和mimics-196b 组,未处理的细胞作为空白对照组。采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测3 组肝癌HepG2 细胞miRNA-196b 和IGF2BP1 mRNA的相对表达量,蛋白质印迹法(Western blot)检测IGF2BP1 和caspase 3 蛋白的相对表达量,噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖能力,流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果 mimics-196b组细胞miRNA-196b相对表达量均高于阴性对照组和空白对照组细胞,IGF2BP1 mRNA相对表达量均低于阴性对照组和空白对照组细胞,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。mimics-196b 组细胞光密度(OD)值和IGF2BP1 蛋白的相对表达量均低于阴性对照组和空白对照组细胞,细胞凋亡率和caspase 3 蛋白相对表达量均高于阴性对照组和空白对照组细胞,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。空白对照组和阴性对照组OD值、细胞凋亡率、IGF2BP1和caspase 3蛋白相对表达量比较,差异均无统计学意义(P﹥0.05)。结论 miRNA-196b 可能通过靶向抑制IGF2BP1 的表达,抑制肝癌HepG2 细胞的增殖并促进其凋亡。

IMP1对人乳腺癌细胞增殖的影响

目的观察胰岛素样生长因子ⅡmRNA结合蛋白1(IMP1)的表达对人乳腺癌细胞增殖能力的影响。方法取对数生长期的人乳腺癌细胞株MDA231-IMP1-GFP和MDA231-GFP细胞,用10%胎牛血清DMEM培养液制成相同浓度的细胞悬液,加入培养板中分别培养24、48、72 h后,采用细胞计数板计数法及MTT检测法进行计数及比较。结果 IMP1的表达对细胞形态没有影响。在不同时间点,细胞计数板计数法及MTT法均显示,MDA231-IMP1-GFP细胞的增殖率低于MDA231-GFP(P均<0.01)。结论 IMP1的表达对人乳腺癌细胞MDA231的增殖具有抑制作用。

miR-339通过靶向调控IGF2BP1抑制肺动脉平滑肌细胞的增殖

目的:本研究旨在探讨微小RNA-339(miR-339)在肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)增殖中的作用并探讨其潜在机制。方法:利用不同浓度的血管紧张素Ⅱ处理PASMCs 48 h,通过转染miR-339模拟物(miR-339mimic)和miR-339抑制物(miR-339 inhibitor)分别使miR-339过表达或低表达,利用CCK-8法和活细胞计数检测细胞的增殖能力;利用RT-qPCR检测miR-339和PCNA mRNA的表达水平;利用Western blot检测蛋白水平;萤光素酶报告试验分析证实miR-339和IGF2BP1之间的相互作用。结果:血管紧张素II浓度依赖性地增加PASMCs的增殖和PCNA的mRNA表达,并降低miR-339的表达(P <0. 05)。miR-339过表达抑制PASMCs增殖和PCNA mRNA表达(P <0. 05),而miR-339表达下调则促进PASMCs的增殖和PCNA的mRNA表达(P <0. 05)。miR-339表达上调可以抑制血管紧张素II处理后的PASMCs的增殖(P <0. 05)。生物信息学分析以及萤光素酶报告试验检测证实胰岛素样生长因子2 mRNA结合蛋白1(IGF2BP1)的3’-UTR为miR-339靶点,进一步用RT-qPCR及Western blot实验发现miR-339负调控PASMCs中IGF2BP1的表达(P <0. 05)。IGF2BP1的过表达减弱了miR-339对PASMCs增殖和PCNA mRNA表达的抑制作用(P <0. 05)。miR-339 mimic转染可以抑制磷酸化p38蛋白的水平(P <0. 05),对p38蛋白的水平没有影响。结论:miR-339对PASMCs的增殖起抑制作用,这种抑制作用可能是部分通过调控IGF2BP1以及p38 MAPK信号通路来实现的。

子宫内膜癌组织中miR-145-5p、IGF2BP1 mRNA表达变化及与患者预后的关系

目的探讨子宫内膜癌(EC)组织中微小RNA-145-5p(miR-145-5p)、胰岛素样生长因子2 mRNA结合蛋白1(IGF2BP1)mRNA表达变化及与患者预后的关系。方法选取2018年5月—2021年5月于南通市肿瘤医院行手术切除的EC组织及对应癌旁组织标本115例份,采用实时荧光定量PCR法检测EC组织及癌旁组织中miR-145-5p、IGF2BP1 mRNA表达,Pearson相关法分析miR-145-5p与IGF2BP1 mRNA表达的相关性。根据EC组织中miR-145-5p、IGF2BP1 mRNA表达的中位数将患者分为高/低表达组,Kaplan-Meier法绘制高/低miR-145-5p、IGF2BP1 mRNA表达的EC患者生存曲线;多因素Cox回归分析影响EC患者预后的因素。结果与癌旁组织比较,EC组织中miR-145-5p表达降低,IGF2BP1 mRNA表达升高(t分别为-22.201、19.038,P均<0.05)。miR-145-5p与IGF2BP1 mRNA表达呈负相关(r=-0.748,P<0.05)。EC组织中miR-145-5p、IGF2BP1 mRNA表达与组织分化程度、国际妇产科联盟(FIGO)分期和淋巴结转移有关(P均<0.05)。115例EC患者3年总生存率为67.83%(78/115)。miR-145-5p高表达组3年总生存率高于miR-145-5p低表达组,IGF2BP1 mRNA高表达组3年总生存率低于IGF2BP1mRNA低表达组(χ^(2)分别为13.484、11.755,P均<0.05)。EC患者死亡的独立危险因素为组织分化程度低分化、FIGO分期Ⅲ期、有淋巴结转移、IGF2BP1 mRNA表达≥1.53(OR分别为5.434、6.092、4.327、5.339,95%CI分别为1.735~17.021、1.930~19.225、1.424~13.154、1.515~18.811),独立保护因素为miR-145-5p表达≥0.74(OR=0.298,95%CI:1.515~18.811)。结论EC组织中miR-145-5p低表达,IGF2BP1 mRNA高表达,与组织分化程度、FIGO分期、淋巴结转移和患者预后有关。

SRPK1促进肺腺癌进展的机制研究

目的探究丝氨酸-精氨酸蛋白激酶1(serine-arginine protein kinase 1,SRPK1)在肺腺癌中的表达及其促进肺腺癌恶性进展的机制。方法检索Human Protein Atlas数据库,比较SRPK1在正常肺组织和肺腺癌组织的表达水平;检索Kaplan Meier Plotter数据库,分析SRPK1的表达水平与肺腺癌患者生存预后的关系。采用慢病毒感染法在肺腺癌细胞A549、H1299中稳定过表达SRPK1,通过RT-qPCR和Western blot检测对照组和SRPK1过表达组细胞中SRPK1的表达水平。检索文献寻找SRPK1影响肿瘤进展的可能机制,通过Western blot检测对照组和SRPK1过表达组细胞中黏着斑激酶(focal adhesion kinase,FAK)及pFAK(Y397)的表达水平;检索癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库中肺腺癌队列的RNA-Seq数据,对SRPK1和丝氨酸蛋白酶抑制剂mRNA结合蛋白1(serpine 1 mRNA binding protein 1,SERBP1)的表达进行皮尔森相关性分析。通过细胞免疫荧光实验鉴定A549和H1299细胞中SRPK1和SERBP1的共定位情况;通过co-IP实验鉴定A549和H1299细胞中SRPK1和SERBP1的结合情况;采用慢病毒感染法在A549和H1299中稳定过表达SERBP1,通过RT-qPCR和Western blot检测对照组和SERBP1过表达组细胞中SERBP1的表达水平;通过RT-qPCR检测对照组和SERBP1过表达组细胞中SRPK1的表达水平;通过Western blot检测对照组和SERBP1过表达组细胞中SRPK1、FAK、pFAK(Y397)的表达水平。结果Human Protein Atlas数据库的数据显示,与正常肺组织相比,肺腺癌组织中SRPK1表达明显上调;Kaplan Meier Plotter数据库中数据显示,SRPK1表达水平越高,肺腺癌患者的预后越差(P=1.5×10-8)。RT-qPCR和Western blot结果显示,与对照组相比,SRPK1过表达组细胞SRPK1的表达水平上调(P<0.001);Western blot结果显示,与对照组相比,SRPK1过表达组细胞中FAK的表达基本不变,pFAK(Y397)的表达上调。皮尔森相关性分析显示,在TCGA数据库的肺腺癌队列数据中,SERBP1的基因表达与SRPK1的基因表达呈正相关(P=2.2×10-16)。细胞免疫荧光结果显示,在A549和H1299细胞中SRPK1和SERBP1存在共定位;co-IP结果显示,在A549和H1299细胞中SRPK1和SERBP1可以相互结合;RT-qPCR结果显示,与对照组相比,SERBP1过表达组细胞SERBP1和SRPK1的表达水平均上调(P<0.01);Western blot结果显示,与对照组相比,SERBP1过表达组细胞中SRPK1表达上调,FAK的表达基本不变,pFAK(Y397)的表达上调。结论在肺腺癌细胞中,SRPK1的表达异常升高,并可通过激活磷酸化FAK信号促进肺腺癌的恶性进展,SERBP1可以结合SRPK1并调控上述过程。

长链非编码RNA THOR在食管鳞状细胞癌中的表达及作用机制研究

目的:探究睾丸相关的高保守的致癌长链非编码RNA(LncRNA THOR)在食管鳞状细胞癌(ESCC)中的表达及对ESCC细胞功能的影响。方法:利用生物信息学结合qRT-PCR分析LncRNA THOR在ESCC中的表达情况。在ESCC细胞系TE1中,siRNA沉默LncRNA THOR后,使用CCK-8和划痕试验分别检测细胞增殖及迁移,qRT-PCR和Western blot检测IGF2BP1依赖基因GLI-1和MYC mRNA及蛋白质的表达。结果:UALCAN分析结果显示,LncRNA THOR在食管癌患者的表达显著高于正常人。qRT-PCR验证发现LncRNA THOR在ESCC组织的表达显著高于癌旁组织,在ESCC细胞系TE1和EC109中显著高于正常人食管鳞状上皮细胞HET-1A。在TE1中敲减LncRNA THOR后,CCK8实验显示细胞增殖被抑制,划痕实验显示细胞迁移能力降低。qRT-PCR和Western blot实验显示GLI-1和MYC mRNA及蛋白质都显著下调。结论:LncRNA THOR在ESCC癌组织和细胞中的表达显著升高,沉默LncRNA THOR可以抑制ESCC细胞增殖及迁移,暗示LncRNA THOR可能作为ESCC治疗的新靶标。

IGF2BP1在消化系统恶性肿瘤中的作用

胰岛素样生长因子-2 mRNA结合蛋白(IGF2BPs)是一类高度保守的RNA结合蛋白家族,能够调控RNA的加工和代谢,并参与各种细胞的病理和生理过程。作为IGF2BPs的一个亚型,IGF2BP1通过与癌症相关靶标mRNA结合并增强其稳定性,促进肿瘤细胞增殖、生长、侵袭和化疗耐药,并与较差的预后相关。该文就IGF2BP1的结构、功能以及在消化系统恶性肿瘤进展与肿瘤化疗耐药中的作用和相关分子机制进行综述,以期为IGF2BP1的临床分子靶向治疗提供理论依据。

长链非编码RNA LINC00520调控IGF2BP1介导肺腺癌细胞对紫杉醇化疗耐药的影响

目的观察长链非编码RNA LINC00520对肺腺癌(LUAD)增殖、凋亡和对紫杉醇化疗耐药的影响,并探讨其机制。方法实时荧光聚合酶链反应(RT-PCR)检测人支气管上皮细胞株(BEAS-2B)和LUAD细胞中LINC00520的表达水平;生物信息学分析获取LINC00520相关结合蛋白;在LUAD中抑制LINC00520表达后,RT-PCR、Western blot检测胰岛素样生长因子ⅡmRNA结合蛋白1(IGF2BP1)的表达水平;在LUAD细胞中抑制LINC00520后,再过表达IGF2BP1,应用CCK-8和Annexin V/PI双染评估细胞增殖和凋亡,以及对紫杉醇治疗的影响。结果与BEAS-2B相比,LUAD细胞中LINC00520的表达水平明显升高(P<0.05);IGF2BP1是LINC00520潜在的结合蛋白;抑制LINC00520表达后LUAD细胞中IGF2BP1的表达下调;LUAD细胞敲降LINC00520后,细胞增殖减少、凋亡增多,紫杉醇化疗敏感性增加(P<0.05),而过表达IGF2BP1后上述表现明显恢复(P<0.05)。结论LINC00520可通过上调IGF2BP1的表达促进LUAD细胞紫杉醇化疗耐药。

IGF2BP1与肿瘤

胰岛素样生长因子2 mRNA结合蛋白1(IGF2BP1)是机体发育过程中mRNA代谢和转运的关键调控因子。近年来研究发现,IGF2BP1在肝癌、肺癌、结肠癌、卵巢癌、乳腺癌等多种肿瘤中异常表达。IGF2BP1不仅与肿瘤细胞的增殖、迁移和侵袭有关,而且还与患者不良预后密切相关。进一步研究IGF2BP1在恶性肿瘤中的作用机制有望为肿瘤靶向治疗提供新的方法。