过表达miR-124-1基因的骨髓间充质干细胞外泌体调控小胶质细胞M2型极化对脑卒中的影响

目的探讨骨髓间充质干细胞(bone marrow derived mesenchymal stem cells,BMMSCs)外泌体(exosomes,Exo)过表达miR-124-1基因(Exo/124-1)调控小胶质细胞(microglia,MG)的M2型极化对脑卒中的影响。方法分离培养大鼠BMMSCs,收集其Exo(BMMSCs-Exo),采用流式细胞术、Western blot与透射电子显微镜(transmission electron microscope,TEM)分别对其进行检测鉴定。30只大鼠简单随机分为假手术组(Sham组)、模型组(MCAO/R组)、Exo移植组(Exo组)、空病毒(Empty lentivirus,Elv)转染Exo移植组(Exo-Elv组)及Exo/124-1移植组(Exo/124-1组),每组6只。Sham组仅行假手术,其余各组均复制大脑中动脉栓塞/再灌注(middle cerebral artery occlusion and reperfusion,MCAO/R)模型。模型复制1 d与14 d后,各移植组动物于右侧脑室植入相应移植物,Sham组、模型组注入相同剂量生理盐水作对照。术后2 h及1、3、7、14、21、28 d,分别对各组动物行改良神经系统严重程度评分(modified neurological severity scores,mNSS)。三苯基四氮唑(triphenyl tetrazolium chloride,TTC)染色检测其梗死体积。在基因与蛋白水平分别检测各组28 d脑组织MG的M1型分子[肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)]、M2型分子(CD206)的表达情况。结果成功获取并鉴定了BMMSCs及其Exo。Exo/124-1显著表达miR-124-1。所有动物(假手术组除外)术后出现神经功能缺损。术后7~28 d,Exo/124-1组的mNSS明显低于MCAO/R组(P<0.05)与Exo组、Exo-Elv组(P<0.01);术后28 d,Exo/124-1组的脑梗死体积、TNF-α的表达明显小于MCAO/R组(P<0.01)与Exo组、Exo-Elv组(P<0.01),CD206的表达显著高于MCAO/R组(P<0.01)与Exo组、Exo-Elv组(P<0.01)。结论BMMSCs-Exo携带miR-124-1基因可能调控MG的M2型极化,抑制M1型介导的炎症反应,促进脑卒中大鼠神经功能的恢复。

骨髓间充质干细胞外泌体介导miR-124-1对小胶质细胞M2型极化调控的影响

目的·探讨过表达miR-124-1基因的骨髓间充质干细胞(bone marrow derived mesenchymal stem cells,BMMSCs)外泌体(exosomes,Exo)对小胶质细胞(microglia,MG)M2型极化调控的影响。方法·分离、培养鼠BMMSCs,提取其Exo(BMMSCs-Exo),并分别对BMMSCs及BMMSCs-Exo行流式细胞术、透射电子显微镜(transmission electron microscope,TEM)与蛋白质印迹(Western blotting)检测及鉴定。合成miR-124-1基因,构建其慢病毒载体,观测过表达miR-124-1基因的BMMSCs及其Exo的miR-124-1基因的表达变化。将过表达miR-124-1基因的BMMSCs-Exo(BMMSCs-Exo+miR-124-1,Exo/124-1)与经脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)活化的HAPI小胶质细胞株(HAPI细胞)共培养。分别收集Exo组与Exo/124-1组细胞。用仅含LPS培养基培养的HAPI细胞(LPS组)与未处理的HAPI细胞(正常组)作对照。使用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)和Western blotting分别检测其M1型分子[白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)]和M2型分子(CD206、IL-10)的mRNA及其蛋白的表达变化。结果·成功分离、培养、鉴定了BMMSCs及BMMSCs-Exo。Exo/124-1明显表达miR-124-1基因。qPCR和Western blotting检测证实,BMMSCs-Exo能携带miR-124-1基因,其明显下调了HAPI细胞的IL-6(与正常组和LPS组比较,在基因水平分别下调了55.71%、73.04%,在蛋白水平分别为52.32%、76.95%)和TNF-α(与正常组和LPS组比较,在基因水平分别下调了51.95%、68.91%,在蛋白水平分别为52.14%、77.47%)。并且Exo/124-1上调了HAPI细胞的CD206(与正常组和LPS组比较,在基因水平分别上调了46.90%、76.99%,在蛋白水平分别为65.13%、85.11%)和IL-10(与正常组和LPS组比较,在基因水平分别上调了43.09%、72.36%,在蛋白水平分别为55.19%、78.18%)的表达。结论·BMMSCs-Exo可介导miR-124-1调控HAPI细胞向M2型极化。

水飞蓟素通过调控miR-124-3p/WEE1轴影响胶质瘤细胞恶性生长的机制研究

目的探讨水飞蓟素(SM)对胶质瘤细胞恶性生长的影响以及对miR-124-3p/WEE1轴的调控机制。方法将胶质瘤U87细胞分为对照组,SM低、中、高浓度组,SM高浓度+miR-124-3p抑制剂组(SM高+miR-124-3p inhibitor组)。采用CCK-8法检测细胞增殖活性,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力,流式细胞术检测细胞周期变化,Western blotting检测细胞中细胞周期蛋白D1(cyclin D1)及凋亡相关蛋白的表达,实时定量PCR检测细胞中miR-124-3p和WEE1 mRNA水平,荧光素酶活性实验验证miR-124-3p和WEE1之间的靶向关系,建立NOD/SCID小鼠颅内移植瘤模型并进行给药和分析。结果与对照组比较,不同浓度SM处理组的细胞增殖活性、迁移和侵袭细胞数、cyclin D1蛋白表达、WEE1 mRNA表达水平降低,G0/G1周期细胞数、cleaved caspase-8、cleaved caspase-9、cleaved caspase-3及miR-124-3p表达升高(P<0.05);进一步转染miR-124-3p inhibitor后发现,SM对胶质瘤细胞恶性行为的抑制作用被逆转。小鼠体内实验显示,SM处理组肿瘤的质量和体积均低于模型组(P<0.05),且小鼠体质量无显著变化(P>0.05)。结论SM可通过上调miR-124-3p靶向下调WEE1抑制胶质瘤细胞的恶性生长。

LINC00240调节miR-124-3p/UHRF1轴对食管癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的探讨LINC00240调节miR-124-3p/环指域泛素样蛋白1(UHRF1)轴对食管癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法qRT-PCR检测食管鳞状癌(ESCC)组织与癌旁组织,ESCC细胞系(ECA109、TE-13、EC9706和KYSE-150)与正常食管上皮HET-1A细胞中LINC00240、miR-124-3p、UHRF1 mRNA表达水平;以ECA109细胞为研究对象,分组分别为shRNA-NC组(转染shRNA阴性对照)、sh-LINC00240组(转染LINC00240 shRNA)、sh-LINC00240+miR-124-3p-inhibitor组(共转染sh-LINC00240与miR-124-3p-inhibitor)、sh-LINC00240+inhibitor-NC组(共转染sh-LINC00240与inhibitor-NC),并以未经处理的ECA109细胞为对照组,Western Blot检测P21、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、UHRF1蛋白表达;CCK-8检测细胞增殖;Transwell检测细胞侵袭及迁移;双荧光素酶验证miR-124-3p与LINC00240、UHRF1关系。通过裸鼠注射ECA109细胞建立裸鼠移植瘤实验,单细胞悬液(4×10^(6)细胞/ml)用一次性无菌注射器皮下注射到裸鼠背部,并依次分为模型组、NC组、干扰LINC00240组,分离肿瘤,分析肿瘤质量及成瘤个数。结果ESCC组织及细胞中LINC00240、UHRF1 mRNA表达显著增加,miR-124-3p表达显著降低(P<0.05)。sh-LINC00240组增殖率、侵袭与迁移数、LINC00240、MMP-2、UHRF1 mRNA及蛋白表达较对照组、shRNA-NC组显著降低,P21、miR-124-3p表达显著增加(P<0.05);sh-LINC00240+miR-124-3p-inhibitor组增殖率、侵袭与迁移数、MMP-2、UHRF1 mRNA及蛋白表达较sh-LINC00240+inhibitor-NC组显著增加,P21、miR-124-3p表达显著降低(P<0.05),LINC00240表达差异无统计意义(P>0.05)。miR-124-3p与LINC00240、UHRF1具有靶向关系。干扰LINC00240组较模型组、NC组肿瘤质量、成瘤个数显著减少(P<0.05)。结论干扰LINC00240可抑制食管癌细胞增殖、迁移和侵袭,可能与上调miR-124-3p/UHRF1轴有关。

miR-124-3p通过负调控Caveolin-1表达N2a/APPswe细胞凋亡率及细胞内钙离子浓度

目的:探讨在阿尔茨海默病(Alzheimer’s diseases,AD)细胞模型中miR-124-3p通过调控Caveolin-1的表达对细胞凋亡率及钙离子浓度的影响。方法:体外培养野生型N2a(N2a/WT)和N2a/APPswe细胞,real-time PCR及Western blot分别检测miR-124-3p与β-淀粉样蛋白前体蛋白(β-amyloid precursor protein,APP)m RNA及蛋白的表达。双荧光素酶报告实验分析miR-124-3p与Caveolin-1之间靶向调控关系。N2a/APPswe细胞瞬时转染miR-124-3p模拟物(mimics),real-time PCR、Western blot分别检测Caveolin-1 m RNA和蛋白的表达。N2a/APPswe细胞分别瞬时转染miR-124-3p模拟物(mimics)、pc DNA-Caveolin-1、Caveolin-1-si RNA,流式细胞仪分析细胞凋亡水平,测定细胞内游离钙离子浓度。结果:与WT组相比,APPswe组APP m RNA和蛋白水平表达都明显升高(分别为P=0.000,P=0.000),miR-124-3p表达明显降低(P=0.000)。双荧光素酶报告实验表明,和与突变型载体(p GL3-Caveolin-1 3’UTR MUT)共转染组相比,与野生型载体(p GL3-Caveolin-1 3’UTR WT)共转染组的相对荧光素酶活性和明显减弱(P=0.004);转染miR-124-3p mimics后,与空载体组比较,miR-124-3p mimcs转染组的Caveolin-1 m RNA和蛋白的表达明显下调(分别为P=0.000,P=0.000);分别转染miR-124-3p mimics、Caveolin-1-si RNA后,与空载体组比较,细胞凋亡率降低(分别为P=0.000,P=0.000),游离钙离子浓度降低(分别为P=0.000,P=0.000);转染pc DNA-Caveolin-1后,得到与上述相反的结果(分别为P=0.000,P=0.000)。结论:miR-124-3p可以通过靶向下调Caveolin-1的表达,抑制AD细胞凋亡,降低细胞中游离钙离子浓度,从而发挥神经保护作用,为AD的防治提供新的思路和靶点。

LncRNA PVT1/miR-124轴靶向Jagged-1/Notch通路抑制晶状体纤维化的分子机制研究

目的 探究环状LncRNA PVT1调节人晶状体上皮细胞(LECs)纤维化的作用及可能的分子机制。方法 收集新鲜晶状体前囊膜标本,包括前囊下白内障(ASC)手术眼和健康死后眼各9例。体外培养SRA01/04细胞,并分为空白组、TGFβ2组、si-control组、si-PVT1组、si-PVT1+miR-NC组、si-PVT1+miR-124-inhibitor组。除空白组外,其余各组在转染相应序列后,用5 ng·m LTGFβ2作用48 h。提取组织或细胞RNA并进行微阵列分析。应用实时荧光定量PCR法检测组织样本或细胞中LncRNA PVT1、miR-124表达。采用双荧光素酶报告系统和RNA结合蛋白免疫共沉淀(RIP)法分析LncRNA PVT1、miR-124、Jagged-1之间的靶向关系。Western blot法检测各组细胞Jagged-1、Notch-1、Notch-2、Notch-3、Snail、Slug、纤维蛋白(FN)、Ⅳ型胶原蛋白(ColⅣ)、肌动蛋白α (α-SMA)等蛋白表达。结果 LncRNA PVT1在ASC眼的前囊膜组织或TGFβ组SRA01/04细胞中表达上调,同时miR-124表达水平降低(P<0.05),且LncRNA PVT1与miR-124表达水平均呈负相关性(P<0.05)。与空白组相比,TGFβ2组和si-control组FN、α-SMA、ColⅣ、Snail、Slug蛋白表达上调;与TGFβ2组和si-control组比较,si-PVT1组和si-PVT1+miR-NC组上述蛋白表达下调,但si-PVT1+miR-124-inhibitor组可逆转si-PVT1对上述蛋白表达的下调作用(P<0.05)。双荧光素酶报告系统和RIP法分析结果显示,LncRNA PVT1通过“海绵吸附”miR-124,负性调节miR-124的表达。与空白组相比,TGFβ2组Jagged-1、Notch-1、Notch-2、Notch-3蛋白表达显著上调;与TGFβ2组和si-control组比较,si-PVT1组Jagged-1、Notch-1、Notch-2、Notch-3蛋白表达下调,同时si-PVT1+miR-124-inhibitor组可逆转si-PVT1对上述蛋白表达的下调作用(P<0.05)。结论 TGFβ2通过一种LncRNA PVT1依赖机制诱导LECs发生上皮—间充质转化,其机制可能是LncRNA PVT1通过“海绵吸附”miR-124负性调节其表达,进而诱导下游Jagged-1/Notch信号通路激活。

miR-124-3p靶向作用于calpain 1抑制氧化应激对脊髓损伤后神经元凋亡的影响

目的 :探究microRNA(miR)-124-3p作用于calpain 1抑制氧化应激对脊髓损伤后神经元凋亡的影响及其分子机制。方法:选取成年雄性SD大鼠40只,随机分成A组(miR-124-3p agomir组)、B组(agomir-NC组)、C组(model组)以及D组(sham组),每组10只。构建脊髓损伤模型前1d,采用改良的Sloane法向大鼠的脊髓组织T10段蛛网膜下腔注射miR-124-3p agomir(A组)、agomir-NC(B组)或生理盐水(C组、D组)。Allen法建立脊髓损伤模型,D组行手术处理但不进行脊髓撞击。脊髓损伤术前及术后1d进行Basso-Beai-Bresnehan(BBB)量表评分,qRT-PCR检测术前及术后1d、3d、5d模型大鼠T10段脊髓中miR-124-3p水平。通过TUNEL染色和Western blot检测脊髓组织神经元细胞凋亡情况以及caspase 3、68KD神经丝蛋白(neurofilament protein,NFP)的表达。利用Elisa试剂盒检测总活性氧(reactive oxygen species,ROS)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、过氧化氢酶(catalase,CAT)以及超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)。利用Targetscan和双荧光素酶报告实验预测并验证miR-124-3p下游靶点。通过流式细胞术和Western blot检测靶点蛋白对神经元细胞凋亡的影响。结果:A组术后1d的BBB评分(12.57±1.42)明显高于B组(6.31±1.03,P<0.05)和C组(6.18±1.15,P<0.05),A组脊髓组织中miR-124-3p表达水平(9.34±1.35)高于B组(0.81±0.16,P<0.05)和C组(0.85±0.18,P<0.05)。上调miR-124-3p表达水平显著降低了脊髓组织中凋亡神经元细胞数量(A组,28.31±5.43;B组,54.97±9.25;C组,56.31±8.11;D组,14.65±4.81)和激活的caspase 3水平(A组,1.65±0.17;B组,3.24±0.33;C组,3.26±0.34;D组,1.00±0.08),同时显著上调了68KD NFP水平(A组,0.69±0.08;B组,0.25±0.04;C组,0.23±0.03;D组,1±0.09,P<0.05)。进一步检测发现,上调miR-124-3p能够显著下调ROS (A组,1.29±0.10;B组,1.67±0.13;C组,1.65±0.12,P<0.05)和MDA水平(A组,1.43±0.12;B组,1.74±0.13;C组,1.77±0.16,P<0.05),明显提高SOD (A组,0.72±0.08;B组,0.34±0.05;C组,0.36±0.06,P<0.05)和CAT水平(A组,0.51±0.07;B组,0.26±0.03;C组,0.27±0.04,P<0.05)。Targetscan预测发现miR-124-3p和calpain 1 mRNA的3′UTR端存在序列结合。转染miR-124-3p agomir和calpain 1野生序列后,与转染agomir-NC和calpain 1野生序列相比,荧光强度显著降低(91-97位点:35.16±4.39 vs 101.25±9.98;467-473位点:55.41±8.16 vs 98.84±10.45,P<0.05)。下调calpain 1表达后,神经元细胞凋亡率和激活的caspase 3水平明显降低(shRNA-calpain1组,1.67±0.18;shRNA-con组,2.52±0.27;con组,1.00±0.12),而68KD NFP水平显著升高(shRNA-calpain1组,0.71±0.06;shRNA-con组,0.36±0.04;con组,1.00±0.14,P<0.05)。结论:miR-124-3p通过3′UTR抑制calpain 1表达,从而抑制氧化应激导致的神经元凋亡,减轻脊髓损伤。

hsa-miR-124-3p.1靶向TRAF6抑制人胃癌细胞的迁移和侵袭

目的观察hsa-miR-124-3p.1通过靶向肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)抑制转化生长因子β1(TGF-β1)对人胃癌细胞上皮间质转化、迁移和侵袭的影响。方法收集胃癌组织和癌旁正常组织各43例,培养人胃黏膜上皮细胞GES-1及胃癌细胞NCI-N87、MGC-803、BGC-823、SGC-7901、MKN-45,采用荧光定量PCR技术和蛋白印迹法检测组织和细胞中miR-124-3p.1、TRAF6的表达情况;采用双荧光素酶报告基因系统实验验证miR-124-3p.1和TRAF6的靶向关系;构建过表达miR-124-3p.1、TRAF6的SGC-7901细胞株,以TGF-β1诱导细胞,采用Transwell小室实验、划痕实验评估细胞侵袭和迁移能力。结果与癌旁正常组织相比,胃癌组织中miR-124-3p.1表达下调,TRAF6的mRNA和蛋白表达上调(P<0.05);与正常胃黏膜培养细胞比较,胃癌细胞中有类似变化。与对照组比较,TGF-β1组细胞中E-cadherin表达下调,N-cadherin和Vimentin表达上调,细胞侵袭率和迁移率增加(P<0.05);与TGF-β1组比较,转染miR-124-3p.1 mimic细胞中E-cadherin表达上调,N-cadherin和Vimentin表达下调,细胞侵袭率和迁移率降低(P<0.05)。与miR-124-3p.1 mimic组比较,TGF-β1+mimic+TRAF6组细胞侵袭率、迁移率增加,TRAF6、N-cadherin和Vimentin表达上调,E-cadherin表达下调(P<0.05)。结论 hsa-miR-124-3p.1在胃癌中呈低表达,过表达miR-124-3p.1可抑制TGF-β1诱导的上皮间质转化、细胞侵袭和迁移,其作用机制可能与靶向下调TRAF6表达有关。

低氧对SH-SY5Y细胞miR-124及BACE1蛋白表达的影响

目的研究低氧对培养细胞miR-124及β-淀粉样前体蛋白裂解酶1(BACE1)蛋白表达的影响。方法培养人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y),分为对照组、氧-糖剥夺组、Aβ1-42处理组、过表达或抑制miR-124组,用实时定量PCR方法检测miR-124表达,Western blot法检测BACE1蛋白表达。结果氧-糖剥夺处理48 h,细胞内miR-124表达水平明显下降,仅为对照组的46.9%(P<0.05),BAE1蛋白表达水平与较对照组增高36%(P<0.01);转染miR-124过表达组组细胞内miR-124表达水平较对照组增高245倍(P<0.01),为miR-124过表达对照组的219倍(P<0.01),BACE1蛋白表达水平较对照组下降了29%(P<0.05),较miR-124过表达对照组下降25%(P<0.05)。转染miR-124抑制剂组miR-124表达水平下降至对照组的45.4%(P<0.05),至miR-124抑制对照组的48%(P<0.05),BACE1表达水平较对照组升高21%(P<0.05),较miR-124抑制对照组升高40.3%(P<0.01);细胞经Aβ1-42处理24 h,miR-124表达水平较对照组下降52%(P<0.05),BACE1蛋白表达水平较对照组增高51%(P<0.05)。结论低氧通过降低SH-SY5Y细胞miR-124表达进而升高BAEC1蛋白表达,且可能在阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)早期发病中发挥作用。

高强度间歇运动通过miR-124-3p/ERN1轴抑制吸烟相关的老年慢性阻塞性肺疾病炎症反应的机制

目的探讨miR-124-3p/ERN1轴在运动改善慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者机体炎症反应中的作用机制。方法选择2020年11月15日—2021年11月30日于浦东新区公利医院呼吸科诊治的150例患者作为研究对象,分为非吸烟组(非吸烟且肺功能正常者,n=50)和吸烟非COPD组(吸烟且肺功能正常者,n=50)、COPD组(COPD患者,n=50)。COPD患者接受运动训练前后,检测并比较3组外周血清miR-124-3p、ERN1表达差异;用香烟烟雾提取物处理支气管上皮细胞建立细胞模型,检测miR-124-3p、ERN1及炎症因子的表达水平;采用CCK-8法和流式细胞术检测细胞活力和凋亡;利用生物信息学分析、荧光素酶报告分析和RT-qPCR检测并阐明miRNA和mRNA之间的相互关系。结果COPD患者血清中miR-124-3p表达水平低于吸烟者及非吸烟者,ERN1表达水平高于吸烟者及非吸烟者,运动训练后则可逆转以上因子的表达水平,差异均有统计学意义(P<0.001、P<0.05);上调miR-124-3p可抑制其下游靶标ERN1的表达,降低CSE刺激下支气管上皮细胞炎症因子水平。结论运动训练可增加COPD患者血清miR-124-3p表达水平,其机制可能与通过靶向ERN1途径减轻与吸烟相关的COPD炎症反应有关。

miR-124靶向镁转运蛋白1调控活化后人T细胞功能耗竭

目的研究miR-124靶向镁转运蛋白1(MagT1)可否调控活化后T细胞功能耗竭。方法1)分离外周血单个核细胞,用IFN-γ、IL-2、抗-CD3抗体、抗-CD28抗体和IL-1α活化T细胞;流式细胞仪检测T细胞活化标记分子CD25和CD69所占的比例。2)构建miR-124/miR-124 sponge慢病毒载体;包装慢病毒后感染活化T细胞,用RT-qPCR检测感染后T细胞内miR-124和MagT1基因表达。3)生物信息学分析miR-124与MagT1的靶向位点,并用双荧光素酶报告基因系统鉴定。4)Western blot法检测慢病毒感染前后T细胞MagT1和PD-1蛋白水平。5)CCK8法检测慢病毒感染前后T细胞增殖能力;ELISA法检测细胞T分泌细胞因子TNF-α和TGF-β的能力。结果流式细胞仪检测表明T细胞活化成功。RT-qPCR检测表明慢病毒构建成功,miR-124/miR-124 sponge载体分别显著上调或下调miR-124的表达(P<0.01)。双荧光素酶报告基因系统证实miR-124靶向MagT1 3′UTR并抑制其表达。Western blot表明miR-124过表达组MagT1蛋白水平低于对照组(P<0.05),PD-1蛋白水平高于对照组(P<0.05),抑制miR-124后,MagT1蛋白水平高于对照组(P<0.05),PD-1蛋白水平低于对照组(P<0.05)。miR-124过表达使T细胞增殖能力和分泌TNF-α能力显著降低,而抑制miR-124使T细胞增殖能力和分泌TGF-β能力显著升高(P<0.01)。结论miR-124可以负向调节靶基因MagT1的表达,并对活化后T细胞功能耗竭具有重要的调节作用。

MicroRNA-124靶向调控caveolin-1介导肝癌细胞恶性行为的研究

目的:检测miR-124、caveolin-1在肝癌组织及细胞系中的表达,探讨miR-124靶向调控caveolin-1对肝癌细胞增殖和侵袭的影响。方法:回顾性分析2012年8月至2014年7月32例于大连医科大学附属第一医院收治的行肝癌切除术患者的临床资料和标本,通过实时定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测肝癌、癌旁组织以及肝癌细胞系中miR-124、caveolin-1的表达;通过靶基因预测及双荧光素酶报告分析miR-124与caveolin-1的靶向关系;通过qRT-PCR、Western blot检测miR-124对caveolin-1表达的调控;分别用CCK8、平板克隆及Transwell检测细胞增殖和侵袭能力;通过绘制生存曲线,分析miR-124及caveolin-1表达与临床肝癌患者预后的相关性。结果:miR-124在肝癌组织中的表达低于癌旁组织,在高转移肝癌细胞MHCC97H中的表达低于低转移肝癌细胞MHCC97L,而caveolin-1呈现相反的趋势;caveolin-1为miR-124的靶基因,调控miR-124可影响caveolin-1水平;MHCC97H中导入miR-124 mimic可抑制该细胞增殖及侵袭能力,而上调caveolin-1促进该细胞增殖及侵袭能力;敲低低转移肝癌细胞MHCC97L中miR-124水平可增强该细胞的增殖及侵袭能力,下调caveolin-1抑制该细胞的增殖及侵袭能力;肝癌组织miR-124高水平、caveolin-1低水平的患者5年生存时间显著长于相应的miR-124低水平组、caveolin-1高水平组。结论:miR-124通过靶向调控caveolin-1介导肝癌的增殖与侵袭。

柴胡疏肝散对SH–SY5Y细胞内miR–124表达及其相关蛋白调控作用的研究

目的:探索中药柴胡疏肝散对人神经母细胞瘤细胞(SH–SY5Y)内微小RNA124(miR–124)的调控作用以及相关蛋白表达的影响,进一步阐明柴胡疏肝散调控神经细胞的具体作用机制和途径。方法:培养SH–SY5Y细胞,转染pCDNA3.1–miR–124质粒,并予柴胡疏肝散干预,提取细胞蛋白并酶解,同位素标记相对和绝对定量技术(iTRAQ)标记,采用高效液相色谱串联质谱法(LC–MS/MS)鉴定蛋白,软件Proteome Discoverer1.3处理数据,并进一步进行生物信息学分析,Western blot验证差异表达蛋白。结果:SH–SY5Y细胞经转染miR–124质粒后miR–124表达显著上升,而转染miR–124质粒细胞在柴胡疏肝散处理后,miR–124表达显著下降。表明对于SH–SY5Y细胞柴胡疏肝散可以下调miR–124表达。蛋白质组分析共鉴定出肽段15487个,蛋白3707个。免疫印迹检测差异蛋白NudE神经发育蛋白1(NDE1),在miR–124过量表达时NDE1蛋白表达量显著上升,而在柴胡疏肝散与miR–124共同作用时该蛋白表达量显著下调,说明柴胡疏肝散可通过下调miR–124表达,进而恢复NDE1的正常表达。结论:本研究表明柴胡疏肝散可能经miR–124调控下游相关蛋白表达以及信号通路,从而影响神经细胞的发育、增殖和分化等功能。

miR-124抑制胃癌细胞增殖和侵袭的机制研究

目的探讨miR-124抑制胃癌细胞增殖和侵袭的机制。方法构建鞘氨醇激酶1（SPHKl）3’UTR-荧光素酶报告载体，通过荧光素酶报告基因实验检测miR-124对SPHKl3’UTR-荧光素酶活性的影响。将miR-124模拟物转染胃癌细胞MGC-803，采用Westernblot检测SPHKl表达水平，采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）和Transwell侵袭实验检测miR-124与SPHKlsiRNA对MGC-803细胞生长、侵袭转移能力的影响。结果荧光素报告载体系统证实，SPHKl是miR-124直接调控的靶基因。Westernblot检测结果显示，miR-124可抑制SPHKI蛋白的表达。MTT法检测结果显示，转染12、24、48h后，对照组的A值分别为0．316±0．010、0．429±0．002和0．517±0．007，miR．124模拟物组的A值分别为0．152±0．003、0．216±0．001和0．242±0．020，SPHKlsiRNA组的A值分别为0．167±0．006、0．286±0．011和0．311±0．040，miR-124模拟物组和SPHKIsiRNA组与对照组差异均有统计学意义（均P〈0．05），且具有时间依赖性。Transwell侵袭实验显示，转染24h后，对照组、miR-124模拟物组和SPHKlsiRNA组的穿膜细胞数分别为（100．6±11．3）个、（47．8±6．6）个和（54．6±8．3）个，miR．124模拟物和SPHKlsiRNA能明显减缓MGC-803细胞的侵袭能力，与对照组差异均有统计学意义（均P〈0．05）。结论miR-124可通过靶向调控SPHKl的表达而抑制胃癌细胞的增殖和侵袭能力。

单羧酸转运蛋白1促进胰腺导管癌细胞浸润转移的机制研究

背景与目的:单羧酸转运蛋白1(monocarboxylate transporter 1,MCT1)是细胞转运乳酸、丙酮酸等代谢产物及能量物质的一种重要蛋白质,其在胰腺导管癌中的作用及机制鲜有研究报道。该研究旨在探讨MCT1在胰腺导管癌中的表达及临床病理学意义。方法:纳入78例胰腺导管癌患者的癌组织及癌旁正常组织,运用免疫组织化学技术检测MCT1在癌组织和癌旁正常组织中的表达水平并分析其临床病理学意义。在体外细胞系水平上,我们运用胰腺癌细胞系PANC-1和Capan-1,运用细胞克隆形成实验、细胞划痕和Transwell实验分析沉默MCT1后胰腺癌细胞增殖、迁移和浸润的改变。为明确MCT1的相关作用机制,我们通过生物信息学分析,预测miR-124-3p是MCT1的潜在调控微小RNA;为了进一步验证,我们运用双荧光素酶报告实验分析miR-124-3p对MCT1的调控效果;运用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)分别检测51对新鲜胰腺癌组织中MCT1和miR-124-3p的基因表达并分析两者的相关性。结果:MCT1的阳性表达主要位于细胞膜和细胞质。相比癌旁正常组织,MCT1在胰腺导管癌组织中显著高表达,其表达水平与胰腺导管癌的分化程度、临床分期、淋巴结转移和不良预后具有显著相关性。在体外细胞系水平上,沉默MCT1能够显著抑制胰腺癌细胞系PANC-1和Capan-1的增殖、迁移和浸润;miR-124-3p在胰腺癌组织中显著低表达,并且与MCT1 mRNA的表达具有显著负相关性,能够负调控MCT1的蛋白表达。结论:MCT1是胰腺导管腺癌的致癌基因,miR-124-3p能够负调控MCT1的表达。

miR-124-3p.1靶向PRDM2调节JAK/STAT通路对胰腺癌细胞增殖和凋亡的影响

[目的]研究miR-124-3p.1对胰腺癌细胞增殖、凋亡的影响,并探讨其作用机制。[方法]运用q RT-PCR法检测组织和细胞中miR-124-3p.1、PR结构域蛋白2(PRDM2)的表达;将mi R-124-3p.1mimics、miR-NC、anti-miR-124-3p.1 mimics、anti-miR-NC用脂质体法转染PANC-1细胞;Western blot检测细胞中PRDM2、p-JAK2、p-STAT3蛋白表达;MTT法检测细胞增殖。[结果]与人正常胰腺组织细胞相比,胰腺癌组织细胞中PRDM2表达显著性升高,miR-124-3p.1表达显著性降低(P<0.05);PRDM2为mi R-124-3p.1的靶标。过表达miR-124-3p.1可抑制胰腺癌细胞增殖、促进凋亡、抑制JAK/STAT通路。[结论] miR-124-3p.1可抑制胰腺癌细胞增殖和促进凋亡,可能与靶向PRDM2和抑制JAK/STAT通路有关。

SIRT1调控miR-124抗抑郁的机制研究进展

抑郁症是一类严重危害人类身心健康的重性精神疾病,其病理生理学机制极其复杂。沉默信息调节因子2相关酶Ⅰ(Sirtuin 1,SIRT1)的抗抑郁作用被广泛论证,但其作用机制仍不明确。同时研究发现miR-124的调控作用在抑郁发病中也具有重要意义。现旨在介绍SIRT1如何调控miR-124,缓解下丘脑-垂体-肾上腺轴(HPA轴)功能亢进及神经营养因子缺乏的病理改变,发挥抗抑郁的功能,该机制的阐述可以给抑郁症发病机制研究和药物研发提供重要线索。