METTL3调控miR-126-5p对人肾小球系膜细胞焦亡的影响及机制研究

目的:研究甲基转移酶样蛋白3(METTL3)调控miR-126-5p对人肾小球系膜细胞(HRMC)焦亡的影响并探讨潜在机制。方法:将HRMC分为7组,即对照组、高糖处理组、pcD-null组、pcD-METTL3组、pcD-METTL3+miR-126-5p抑制剂(inhibitor)组、pcD-METTL3+inhibitor-NC组、pcD-METTL3+inhibitor+AKT抑制剂(AZD5363)组。用流式细胞仪检测细胞焦亡,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-126-5p表达,western blotting检测METTL3、Gasdermin D、NLRP3、磷酸化(p-)AKT、p-NF-κB表达。用RNA甲基化免疫沉淀技术(Me-RIP)测定miR-126-5p前体的m6A修饰水平。结果:与对照组比较较,高糖处理组细胞焦亡增多,miR-126-5p前体N6-甲基腺苷(m6A)修饰增加,p-AKT和p-NF-κB表达水平升高,METTL3和miR-126-5p表达水平降低(均P<0.05)。转染METTL3过表达载体后,高糖处理的细胞上述指标发生了显著逆转(均P<0.05)。而在过表达METTL3的基础上加入miR-126-5p inhibitor后,miR-126-5p表达下调,细胞焦亡增多,p-AKT、p-NF-κB表达上调(均P<0.05),但METTL3表达水平和miR-126-5p前体m6A修饰无显著变化(P>0.05)。在过表达METTL3的基础上加入AZD5363后,细胞焦亡减少(P<0.05),p-AKT、p-NF-κB表达下调,METTL3和miR-126-5p表达及miR-126-5p前体m6A修饰无显著改变(P>0.05)。结论:METTL3促进miR-126-5p的m6A甲基化,并通过抑制AKT/NF-κB信号通路减少高糖诱导的肾小球系膜细胞焦亡。

LINC00943调节miR-126-5p/HOXB2轴对食管鳞癌细胞增殖、凋亡和侵袭的影响

目的探讨LINC00943调节miR-126-5p/HOXB2轴对食管鳞癌(ESCC)细胞增殖、凋亡和侵袭的影响。方法qRT-PCR检测45例ESCC组织和细胞系中LINC00943表达;MTT法、流式细胞仪、Transwell小室检测敲低LINC00943对KYSE30细胞增殖、凋亡、侵袭的影响;Western blot检测增殖细胞核抗原(PCNA)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、细胞抗凋亡因子B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、切割型半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3(Cleaved Caspase-3)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、MMP-9、HOXB2表达;双荧光素酶报告基因实验验证miR-126-5p与LINC00943和HOXB2的关系;体内构建ESCC裸鼠模型,分为si-NC、si-LINC00943组,测量肿瘤质量、肿瘤体积、移植瘤组织中miR-126-5p、HOXB2表达及肿瘤肿瘤组织细胞凋亡率。结果在ESCC组织和细胞系中LINC00943 mRNA表达升高(P<0.05);与si-NC组比较,si-LINC00943组KYSE30细胞增殖活力、迁移与侵袭细胞数、HOXB2、PCNA、MMP-2、MMP-9、Bcl-2蛋白表达降低,miR-126-5p、Bax、Cleaved Caspase-3表达及细胞凋亡率升高(P<0.05);下调miR-126-5p,可减弱LINC00943敲低对KYSE30细胞恶性行为的抑制作用(P<0.05);双荧光素酶报告基因实验证实miR-126-5p与LINC00943、miR-126-5p与HOXB2存在靶向调控关系(P<0.05);体内实验显示,抑制LINC00943表达可显著降低移植瘤质量、体积及HOXB2表达,升高miR-126-5p表达和肿瘤组织细胞凋亡率(P<0.05)。结论LINC00943在ESCC组织及细胞系中高表达,敲低LINC00943可能通过上调miR-126-5p表达,抑制HOXB2表达,促进ESCC细胞凋亡,抑制其增殖、迁移与侵袭。

miR-126-5p通过靶向TRAF3抑制糖氧剥夺再灌注介导的HT22细胞凋亡和炎症

目的探讨miR-126-5p通过靶向肿瘤坏死因子受体相关因子3(tumor necrosis factor receptor-associated factor 3,TRAF3)对糖氧剥夺再灌注(oxygen-glucose deprivation/reperfusion,OGD/R)介导的小鼠海马神经元细胞HT22细胞凋亡和炎症的影响。方法模拟缺血/再灌注损伤(ischemia/reperfusion,I/R)损伤在体外建立氧糖剥夺/复氧(oxygen-glucose deprivation/reperfusion,OGD/R)细胞模型,分析miR-126-5p与TRAF3靶向关系及对HT22细胞凋亡和炎症反应的影响。结果与对照组比较,OGD/R组中miR-126-5p下调而TRAF3 mRNA及蛋白水平上调,细胞存活率及Bcl-2蛋白水平降低,乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)释放量、细胞凋亡率、Bax及Cleaved caspase-3蛋白水平升高(P均<0.05)。与OGD/R+mimic-NC组比较,OGD/R+miR-mimic组、OGD+miR-mimic+pcDNA组TRAF3蛋白水平、LDH释放量、细胞凋亡率、Bax及Cleaved caspase-3蛋白水平明显降低,细胞存活率及Bcl-2蛋白水平升高,而OGD+miR-mimic+pcDNA-TRAF3组各指标升高,细胞存活率明显下降(P均<0.05)。结论miR-126-5p通过靶向TRAF3,抑制OGD/R介导的HT22细胞凋亡和炎症反应,从而对神经元细胞发挥保护作用。

miR-126-5p靶向MAPK1对甲状腺癌顺铂耐药细胞增殖和侵袭的影响

目的:研究miR-126-5p对甲状腺癌细胞顺铂耐药性和耐药细胞增殖侵袭的影响及机制。方法:RT-qPCR检测细胞miR-126-5p和MAPK1 mRNA表达水平。将细胞分为对照组、miR-126-5p mimic组、miR-NC组、miR-126-5pmimic+pc-MAPK1组和miR-126-5pmimic+pc-NC组。CCK-8法测定细胞顺铂抗性和增殖情况,Transwell测定细胞侵袭,双荧光素酶报告验证靶向关系,免疫印迹检测MAPK1蛋白表达水平。结果:与正常组织和细胞相比,甲状腺癌组织和细胞中miR-126-5p水平显著下调;与甲状腺癌细胞系TPC-1相比,甲状腺癌顺铂耐药细胞系TPC-1/CDDP中miR-126-5p mRNA表达显著下调。TPC-1细胞、TPC-1/CDDP细胞中,与对照组相比,miR-126-5pmimic组细胞CDDP的IC50值、细胞增殖和每视野侵袭细胞数目均显著降低,miR-126-5p靶向下调MAPK1。过表达MAPK1逆转miR-126-5p过表达对细胞顺铂抗性的IC50值、细胞增殖和每视野侵袭细胞数。结论:miR-126-5p过表达通过靶向下调MAPK1增强TPC-1和TPC-1/CDDP细胞顺铂敏感性,并抑制细胞增殖和侵袭。

基于miR-126-5p/Bcl-2/mPTP通路探究稳心汤对缺氧/复氧诱导H9c2心肌细胞损伤修复的作用机制

目的:观察稳心汤对缺氧/复氧诱导的H9c2心肌细胞损伤的影响,并基于miR-126-5p/Bcl-2/心肌细胞线粒体通透性转换孔(mPTP)调控通路明确其作用机制。方法:使用5%CO_(2)、1%O_(2)、94%N 2培养箱构建H9c2心肌细胞缺氧/复氧模型,并通过细胞转染技术达到miR-126-5p的过表达与抑制。待干预结束后观察心肌细胞上清液乳酸脱氢酶(LDH)释放水平、心肌细胞活性氧(ROS)含量;原位末端转移酶标记技术(TUNEL)检测心肌细胞凋亡;流式细胞仪检测心肌细胞线粒体mPTP开放水平;蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测细胞色素C(Cyt-C)释放水平与Bcl-2、Caspase-3、Caspase-9蛋白表达水平;实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测miR-126-5p及Bcl-2、Caspase-3、Caspase-9的RNA表达水平。结果:与miR-126-5p低表达组比较,miR-126-5p过表达可显著降低LDH释放水平;减少心肌细胞ROS含量;改善心肌细胞凋亡率;提高心肌细胞CalceinAM水平,减少mPTP开放。miR-126-5p过表达可以减少H9c2心肌细胞Cyt-C释放水平,miR-126-5p低表达可部分减少H9c2心肌细胞Cyt-C释放水平。miR-126-5p过表达可上调Bcl-2蛋白与基因表达,下调Caspase-3与Caspase-9蛋白与基因表达。miR-126-5p低表达可部分上调miR-126-5p表达水平与Bcl-2蛋白与基因表达;部分下调Caspase-3与Caspase-9蛋白与基因表达。结论:稳心汤改善缺氧/复氧诱导的H9c2心肌细胞损伤可能与调控miR-126-5p/Bcl-2/mPTP信号通路有关,从而减轻氧化应激反应,降低线粒体膜通透性,抑制心肌细胞凋亡,延缓心肌损伤。

circDUSP16调节miR-126-5p/SHH轴对结直肠癌细胞增殖、凋亡和上皮间质转化的影响

目的:探究circDUSP16对结直肠癌(CRC)细胞增殖、凋亡和上皮间质转化(EMT)的影响及其作用机制。方法:qRT-PCR检测circDUSP16、miR-126-5p、SHH表达水平,CCK-8法测定细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测SHH、PCNA、Bcl-2、Bax、E-cadherin、N-cadherin蛋白表达,荧光素酶实验检测circDUSP16和miR-126-5p/SHH的靶向关系。结果:沉默circDUSP16组SW480细胞circDUSP16、SHH mRNA表达、OD450值(24 h、48 h、72 h)、Bcl-2和N-cadherin蛋白表达降低,miR-126-5p、凋亡率、Bax、E-cadherin蛋白水平升高(P<0.05);下调miR-126-5p减弱了沉默circDUSP16对SW480细胞的增殖、EMT发生的抑制,降低了细胞的凋亡能力;circDUSP16靶向负调控miR-126-5p表达,miR-126-5p靶向负调控SHH表达。结论:沉默circDUSP16可能通过上调miR-126-5p并下调SHH抑制SW480细胞增殖和EMT发生,促进凋亡。

sVCAM-1、NT-pro BNP、miR-126-5p在不稳定性心绞痛中的表达及相关性研究

目的探讨可溶性VCAM-1分子(sVCAM-1)、N末端脑钠肽前体(NT-pro BNP)、微小核糖核苷酸126-5p(miR-126-5p)在不稳定性心绞痛中的表达及相关性研究。方法选取2021年3月至2022年3月我院收治的胸痛患者160例,其中不稳定性心绞痛患者90例作为研究组,另外70例为对照组。对比两组临床特征病例特征的相关性;分析对比研究组和对照组sVCAM-1、NT-pro BNP、miR-126-5p的水平;比较sVCAM-1、NT-pro BNP、miR-126-5p在不同冠状病变血管支数与不同Gensini评分的相关性,并采用ROC曲线分析sVCAM-1、NT-pro BNP、miR-126-5p的诊断价值。结果研究组总胆固醇(CHOL)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平明显高于对照组(P<0.05);研究组sVCAM-1、NT-pro BNP水平均高于对照组,而miR-126-5p的表达低于对照组(P<0.05);三支病变组患者sVCAM-1、NT-pro BNP水平明显高于双支病变组、单支病变组,且双支病变组高于单支病变组,而miR-126-5p表达低于双支病变组、单支病变组,且双支病变组低于单支病变组(P<0.05);高分组sVCAM-1、NT-pro BNP水平明显高于低分组、中分组,且中分组高于低分组,而miR-126-5p表达低于低分组、中分组,且中分组低于低分变组(P<0.05);ROC曲线分析结果显示,sVCAM-1、NT-pro BNP、miR-126-5p联合检测在不稳定型心绞痛具有较高的诊断价值。结论sVCAM-1、NT-pro BNP表达水平与不稳定心绞痛患者病变情况及严重程度呈正相关,而与miR-126-5p的表达水平呈负相关,联合检测具有较高的诊断价值。

肺炎支原体肺炎患儿血清miR-126-5p、SPP1表达水平与病情严重程度的相关性分析

目的探讨肺炎支原体肺炎(MPP)患儿血清微小RNA-126-5p(miR-126-5p)、分泌性磷蛋白1(SPP1)表达及与病情严重程度的相关性。方法回顾性选取2018年6月至2021年10月在北大荒集团总医院治疗的199例MPP患儿作为观察对象,急性期106例,缓解期93例,根据临床肺部感染评分(CPIS)将急性期MPP患儿分为轻症组(CPIS≤6分)59例和重症组(CPIS>6分)47例,另选取同期健康体检儿童50例作为对照组。采用RT-qPCR检测血清miR-126-5p水平;酶联免疫吸附试验检测血清SPP1、超敏C反应蛋白(hs-CRP)、白细胞介素(IL)-6、IL-1β水平;Pearson法分析急性期MPP患儿血清miR-126-5p、SPP1与hs-CRP、IL-6、IL-1β水平的相关性;Spearman法分析miR-126-5p、SPP1水平与CPIS评分的相关性;采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-126-5p、SPP1对重症MPP患儿的预测价值。结果对照组、缓解期组、急性期组观察对象血清miR-126-5p、SPP1、hs-CRP、IL-6、IL-1β水平比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。与轻症MPP患儿比较,重症MPP患儿血清miR-126-5p、SPP1、hs-CRP、IL-6、IL-1β水平及CPIS评分显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。相关性分析显示,急性期MPP患儿血清miR-126-5p与SPP1呈正相关,且miR-126-5p、SPP1与hs-CRP、IL-6、IL-1β水平及CPIS评分呈正相关(P<0.001)。血清miR-126-5p、SPP1联合诊断重症MPP患儿曲线下面积为0.935,敏感度为86.79%,特异度为91.53%。结论MPP患儿血清miR-126-5p、SPP1水平升高,与患儿疾病严重程度有关,可作为MPP患儿病情评估的标志物。

CRNDE调节miR-126-5p减弱患儿脓毒症脑损伤的机制研究

目的探讨长链非编码RNA(long noncoding RNA)结直肠肿瘤差异表达(colorectal neoplasia differentially expressed,CRNDE)和微小RNA-126-5p(miR-126-5p)在脓毒症相关性脑损伤中的作用机制。方法选择符合脓毒症诊断标准同时无中枢神经系统疾病30例患者作为研究对象,在体外构建LPS诱导的星形胶质细胞模型。采用RT-PCR检测脓毒症患儿血清和LPS诱导的星形胶质细胞中CRNDE和miR-126-5p的水平;采用生物信息法和荧光素酶法推测和证实二者间的相互关系;MTT法检测细胞的增殖;western blot检测凋亡相关蛋白(Bax、Bcl2)、NF-κB、Keap1、Nrf2的水平;采用ELISA检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)的水平。结果LPS显著降低了星形胶质细胞细胞中CRNDE的表达水平(P<0.05)。在LPS诱导的星形胶质细胞中过表达CRNDE后,星形胶质细胞的增殖水平上调(P<0.05)。上调LPS诱导的星形胶质细胞中CRNDE的水平后,细胞中Bax的水平显著下调,而Bcl2的水平上调。ELISA和western blot结果显示,上调CRNDE后,LPS介导的星形胶质细胞中TNF-α、IL-1β、NF-κB、MDA、Keap1的水平下调,而SOD和Nrf2的水平上调(P<0.05)。双荧光素酶报告试验表明,miR-126-5p模拟物可降低含CRNDE-wt的荧光素酶报告体的荧光素酶活性,而对CRNDE-mut载体的荧光素酶活性没有显著影响。CRNDE与miR-126-5p相互作用且能负向调节其表达。结论CRNDE能够靶向miR-126-5p减弱脓毒症患儿脑损伤。

长链非编码RNA PRNCR1通过靶向miR-126-5p调控非小细胞肺癌增殖、迁移、侵袭的生物学特性

目的研究长链非编码RNA PRNCR1对非小细胞细肺癌增殖、迁移、侵袭的影响。方法将si-con组(转染si-con)、si-PRNCR1组(转染si-PRNCR1)、miR-130b-3p组(转染miR-130b-3p mimics)、miR-NC组(转染miR-NC)、si-PRNCR1+anti-miR-NC组(共转染si-PRNCR1和anti-miR-NC)、si-PRNCR1+anti-miR-126-5p组(共转染si-PRNCR1和anti-miR-126-5p),用脂质体法转染至H1299细胞;实时荧光定量-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测各组细胞和非小细胞肺癌细胞H1299、正常人支气管上皮细胞HBE中前列腺癌非编码RNA(PRNCR)1、miR-126-5p的表达;四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测各组细胞的增殖;Transwell法检测各组细胞的迁移和侵袭;双荧光素酶报告基因检测实验检测各组细胞的荧光活性。结果H1299组PRNCR1表达水平显著高于HBE组(P<0.05),H1299组miR-126-5p表达水平显著低于HBE组(P<0.05)。si-PRNCR1组H1299细胞中PRNCR1表达水平显著低于si-NC组(P<0.05),且48 h和72 h时细胞活性显著低于si-NC组(P<0.05)。与si-NC组相比,si-PRNCR1组H1299细胞的迁移细胞数和侵袭细胞数均显著降低(P<0.05)。miR-126-5p组H1299细胞中miR-126-5p表达水平显著高于miR-NC组(P<0.05),48 h、72 h时细胞活性、迁移细胞数和侵袭细胞数均显著低于miR-NC组(P<0.05)。si-PRNCR1组细胞中miR-126-5p表达是si-NC组的约1.66倍,pcDNA-PRNCR1组细胞中miR-126-5p表达是pcDNA组的约0.47倍(P<0.05)。si-PRNCR1+anti-miR-126-5p组48、72 h时细胞活性、迁移细胞数和侵袭细胞数显著高于si-PRNCR1+anti-miR-NC组(P<0.05)。结论长链非编码RNA PRNCR1可促进非小细胞细肺癌增殖、迁移、侵袭,其机制可能与靶向miR-126-5p有关,将可为非小细胞细肺癌的治疗提供新靶点。

LncRNA HOTAIR靶向miR-126-5p对IL-1β诱导的肾小球系膜细胞增殖、凋亡的影响

目的:探讨长链非编码RNA(LncRNA)HOTAIR对人白细胞介素1β(IL-1β)诱导的肾小球系膜细胞HRMC增殖、凋亡的调控机制。方法:将HRMC细胞随机分为NC组(用于IL-1β等量的PBS处理48 h)、IL-1β组(10 ng/mL IL-1β处理48 h)、si-NC+IL-1β组(转染si-NC后再用10 ng/mL IL-1β处理)、si-HOTAIR+IL-1β组(转染si-HOTAIR后用10 ng/mL IL-1β处理)、miRNC+IL-1β组(转染miR-NC后用10 ng/mL IL-1β处理)、miR-126-5p+IL-1β组(转染miR-126-5p mimics后用10 ng/mL IL-1β处理)、si-HOTAIR+anti-miR-NC+IL-1β组(共转染si-HOTAIR和anti-miR-NC后用10 ng/mL IL-1β处理)、si-HOTAIR+anti-miR-126-5p+IL-1β组(共转染si-HOTAIR和anti-miR-126-5p后用10 ng/mL IL-1β处理);运用实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)法检测不同处理的HRMC细胞中HOTAIR、miR-126-5p的含量。脂质体法将各个质粒或DNA转染至HRMC。流式细胞术、蛋白质免疫印迹(Western blotting)、细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞的凋亡、增殖率和细胞周期蛋白(CyclinD1)、裂解的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Cleaved-caspase-3)蛋白表达;双荧光素酶报告基因实验检测细胞中HOTAIR与miR-126-5p的结合力。结果:与NC组相比,IL-1β组HRMC细胞中HOTAIR表达显著升高,miR-126-5p表达显著降低,细胞增殖率显著升高,细胞凋亡率显著降低,CyclinD1蛋白发生上调,Cleaved-caspase-3蛋白发生下调(P<0.05);si-HOTAIR+IL-1β组或miR-126-5p+IL-1β组细胞增殖率显著降低,细胞凋亡率显著升高,CyclinD1蛋白发生下调,Cleaved-caspase-3蛋白发生上调(P<0.05)。HOTAIR与miR-126-5p之间具有靶向关系,并且低表达miR-126-5p可逆转低表达HOTAIR对IL-1β诱导的HRMC细胞增殖、凋亡的影响。结论:LncRNA HOTAIR可通过靶向miR-126-5p参与IL-1β诱导的HRMC细胞的增殖促进和凋亡抑制作用。

miR-126-5p在沙子岭猪睾丸组织差异表达分析及功能预测

利用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测miR-126-5p在沙子岭猪睾丸组织8个不同发育时期(E90、D1、D30、D60、D90、D120、D150、D180)表达量,以了解其在动物睾丸发育及精子生成中的作用。利用miRanda、TargetScan和mirWalk 3个数据库预测miR-126-5p靶基因并取交集,利用David在线软件分析miR-126-5p靶基因的生物功能。结果表明,miR-126-5p在胚胎期(E90-D1)睾丸组织中高表达,而在生长期(D1-D90)表达量下调,但在沙子岭猪性成熟(D120)后表达量又上调,其中D1表达量最高,D90表达量最低,且二者与其他7个时期均差异极显著(P<0.01);D30、E90、D180相互之间差异不显著(P>0.05),且分别与其余各时期差异极显著(P<0.01);D120与D30差异显著(P<0.05),与其余各时期差异极显著(P<0.01);D150与D60之间差异不显著(P>0.05),二者分别与其余各时期差异极显著(P<0.01)。miR-126-5p靶基因参与细胞增殖、凋亡、分化、细胞通讯、迁移及蛋白质转运等生物学过程(P<0.001);靶基因分子功能包括蛋白二聚体活性、配体依赖性核受体活性(P<0.001);KEGG分析显示miR-126-5p靶基因参与TGF-β、MAPK、细胞黏附等信号通路(P<0.01)。结合miR-126-5p在睾丸组织不同发育时期表达差异结果及其靶基因功能预测结果,miR-126-5p可能参与沙子岭猪生殖细胞分化及精子生成调控,本研究为miR-126-5p在动物精子生中的作用及其调控机制的研究提供依据。

miR-126-5p靶向抑制ERCC1增加结肠癌细胞对奥沙利铂化疗的敏感性

目的探讨miR-126-5p通过靶向抑制切除修复交叉互补基因1(excision repair cross complement 1,ERCC1)促进结肠癌细胞对奥沙利铂(oxaliplatin,L-OHP)的敏感性及其分子机制。方法利用L-OHP浓度梯度递增法处理结肠癌细胞HCT116,建立耐L-OHP的人结肠癌细胞株HCT116/L-OHP。CCK-8法检测并计算L-OHP作用后的半数抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC)值。qRT-PCR法检测miR-126-5p和ERCC1在HCT116和HCT116/L-OHP细胞株中的表达。利用Lipofectamine~?2000转染miR-126-5p mimics(miR-126-5p mimics组)和miR-NC质粒(miR-NC组)后,CCK-8法检测HCT116/L-OHP细胞对L-OHP的敏感性的变化,流式细胞术检测细胞凋亡率。利用双荧光素酶报告实验验证miR-126-5p和ERCC1的相互作用机制。Western blot法观察miR-126-5p mimics转染后ERCC1蛋白的表达变化。结果与HCT116细胞比较,HCT116/L-OHP细胞miR-126-5p表达水平下调(P<0.05)。不同浓度L-OHP(0、50、100、150和200μg/mL)处理48 h后,miR-126-5p mimics组细胞IC值低于miR-NC组和HCT116/L-OHP未转染组,miR-126-5p mimics的转染降低了HCT116/L-OHP细胞的增殖活性(均P<0.05)。转染48 h后,miR-126-5p mimics组较miR-NC组ERCC1蛋白表达下降(P<0.05)。双荧光素酶靶标实验表明,ERCC1是miR-126-5p的直接作用靶点。结论上调miR-126-5p表达可逆转HCT116/L-OHP细胞株对L-OHP的耐药性,其作用机制可能与负性调控ERCC1表达有关。

miR-126-5p靶向Notch2对结肠癌SW480细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响

目的:探讨miR-126-5p对结肠癌SW480细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响及其作用机制。方法:用miR-126 mimic和pcDNA Notch2(pc-Notch2)等分别或同时转染结肠癌SW480细胞,用qPCR法检测miR-126-5p和Notch2的表达;荧光素酶报告实验观察miR-126-5p和Notch2的靶向关系;CCK-8法、划痕愈合实验、Transwell小室法和Annexin V/PI染色流式细胞术分别检测转染细胞的增殖、迁移、侵袭和凋亡,Western blotting检测Notch2、增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen, PCNA)、cleaved Caspase-3、MMP-2和MMP-9的表达。结果:转染miR-126 mimic能显著升高SW480细胞miR-126-5p的表达水平(P<0.01)和显著抑制SW480细胞Notch2的表达(P<0.01),同时证实Notch2上存在miR-126-5p的结合位点。上调miR-126-5p显著抑制SW480细胞增殖并降低PCNA的表达水平(P<0.01)、升高细胞凋亡率和cleaved Caspase-9的表达水平(均P<0.01),pc-Notch2显著减弱miR-126 mimic对SW480细胞增殖和凋亡的调控作用;miR-126 mimic显著降低SW480细胞划痕愈合率和穿膜细胞数(均P<0.01)、抑制MMP-2和MMP-9的表达(P<0.01);pc-Notch2显著减弱miR-126 mimic对SW480细胞迁移、侵袭及MMP-2、MMP-9表达的抑制作用(均P<0.01)。结论:miR-126-5p通过抑制Notch2表达,降低结肠癌SW480细胞增殖、迁移和侵袭能力。

急性心肌梗死患者外周血miR-126-5p表达与心肌损伤的相关性

目的观察急性心肌梗死患者外周血mir-126-5p表达情况,分析外周血miR-126-5p表达与患者心肌损伤的相关性。方法选取2018年2月至2019年8月期间医院收治的31例急性心肌梗死患者,将其纳为心肌梗死组;同期选取于我院确诊的不稳定性心绞痛患者30例,将其纳为不稳定性心绞痛组;同期选取于我院确诊的稳定性心绞痛患者30例,将其纳为稳定性心绞痛组;同期再选取于我院接受健康检查的35例健康人,将其纳为健康对照组。检测并比较4组血清心肌标志物肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)、心肌肌钙蛋白T(cTnI)和外周血miR-126-5p,经相关性分析检验急性心肌梗死患者外周血miR-126-5p与心肌损伤标志物的相关性。结果 4组中,健康对照组人群血清CK、CK-MB、LDH、cTnI水平最低,后由低至高依次为稳定性心绞痛组、不稳定性心绞痛组、急性心肌梗死组,健康对照组与稳定性心绞痛组各指标水平比较差异无统计学意义(P>0.05);其他各组间比较差异有统计学意义(P<0.05);4组中,健康对照组人群血清miR-126-5p表达最低,后由低至高依次为稳定性心绞痛组、不稳定性心绞痛组、急性心肌梗死组,组间比较差异有统计学意义(P<0.05);急性心肌梗死患者外周血miR-126-5p表达与患者心肌损伤各标志物水平均呈显著正相关(r>0,P<0.05)。结论急性心肌梗死患者外周血miR-126-5p表达与其心肌损伤明显相关,患者miR-126-5p高表达可能是加重心肌损伤的主要原因,在未来可考虑将miR-126-5p表达的监测用于预测急性心肌梗死患者心肌损伤程度。

lncRNA VIM-AS1靶向miR-126-5p调控肺癌细胞放射敏感性分子机制研究

目的研究lncRNA VIM-AS1对肺癌A549细胞放射敏感性的影响和潜在的分子机制。方法qRT-PCR检测lncRNA VIM-AS1和miR-126-5p在正常肺上皮细胞BEAS-2B及肺癌细胞A549、SPC A1和HCI-H596中的表达水平,克隆形成实验测定不同放射剂量(0、2、4、6、8 Gy)处理后A549细胞存活分数和存活率,流式细胞术检测细胞凋亡率,双荧光素酶报告系统验证VIM-AS1与miR-126-5p的靶向关系。结果与正常肺上皮细胞BEAS-2B组比较,肺癌细胞A549、SPC A1和HCI-H596组中VIM-AS1含量均显著升高(P<0.05),miR-126-5p的含量均显著降低(P<0.05);沉默lncRNA VIM-AS1后,放射处理(2、4、6、8 Gy)的A549细胞存活分数逐渐下降(P<0.05),细胞凋亡率也显著升高(P<0.05),放射增敏比为1.776;VIM-AS1靶向负调控miR-126-5p的表达;抑制miR-126-5p表达同时沉默VIM-AS1后A549细胞细胞存活分数显著升高(P<0.05),凋亡率显著降低(P<0.05),细胞增敏比为0.598。结论LncRNA VIM-AS1通过靶向miR-126-5p调控A549细胞的凋亡和放射敏感性,VIM-AS1可能是肺癌的放射增敏靶点。

血清miR-126-5p和白细胞介素6水平对急性胰腺炎患者早期目标体液疗效评估价值

目的探讨血清miR-126-5p和白细胞介素6(IL-6)水平对急性胰腺炎患者早期目标体液疗效的评估价值。方法选取自2017年4月至2020年3月海安市人民医院收治的171例急性胰腺炎患者为研究对象。所有患者均接受早期目标体液治疗,根据治疗效果将患者分为显效组(n=45)、有效组(n=65)和无效组(n=61),检测患者血清miR-126-5p、IL-6、C反应蛋白(CRP)及肿瘤坏死因子(TNF-α)等水平,分析血清miR-126-5p和IL-6相关性,并通过其水平评估急性胰腺炎患者早期目标体液疗效。结果3组患者miR-126-5p相对表达量分别为(2.04±0.36)、(10.22±3.34)和(25.06±4.91),3组间两两比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。有效组和无效组患者的IL-6、CRP、TNF-α水平均高于显效组,差异有统计学意义(P<0.05);无效组患者IL-6、CRP、TNF-α水平均高于有效组,差异有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关性分析结果显示,血清miR-126-5p与IL-6水平呈正相关(r=0.724,P<0.05)。结论血清miR-126-5p、IL-6水平可评估急性胰腺炎早期目标体液疗效,且血清miR-126-5p及IL-6水平降低表示早期目标体液疗效较好。

hsa-miR-126-5p靶基因预测及功能分析

目的:通过生物信息学方法预测hsa-miR-126-5p的靶基因及其靶基因的可能功能。方法:首先通过miRbase在线数据库对hsa-miR-126-5p的碱基序列及序列在各物种间的保守性进行分析,再通过miR Gator V3.0在线数据库查看hsa-miR-126-5p在各个组织器官中的表达丰富度;应用TargetS can 7.2和miR DB在线数据库预测hsa-miR-126-5p的靶基因取交集;将预测得到的两个数据库的靶基因交集用DAVID在线数据库进行功能富集分析和信号转导通路富集分析。

miR-126-5p通过靶向Peli2影响糖尿病肾病肾小管上皮细胞上皮-间质转化发生

目的探讨微小RNA-126-5p(miR-126-5p)通过靶向pellino E3泛素蛋白连接酶家族成员2(Peli2)影响糖尿病肾病肾小管上皮细胞上皮-间质转化(EMT)发生的分子机制。方法本研究起止时间为2018年12月至2019年12月。体外培养人肾小管上皮细胞HK-2(美国ATCC),分别使用5 mmol/L、30 mmol/L的D-葡萄糖处理细胞48 h,分别记作对照组、模型组。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)与蛋白免疫印迹法(Western blot)分别检测miR-126-5p、Peli2的表达水平。利用脂质体转染法分别将miR-126-5p寡核苷酸模拟物(miR-126-5p mimics)及阴性对照mimic NC序列(miR-NC)、Peli2小分子干扰RNA(si-Peli2)及其阴性对照(si-NC)转染至HK-2细胞,使用30 mmol/L的D-葡萄糖处理细胞48 h。Western blot检测上皮型钙黏蛋白(E-Cadherin)、神经型钙黏蛋白(N-Cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、锌指蛋白(Snail)表达量;双荧光素酶报告实验验证miR-126-5p与Peli2的靶向关系。结果与对照组相比,模型组miR-126-5p[(1.00±0.10)比(0.32±0.03)]、E-Cadherin[(0.86±0.09)比(0.35±0.04)]的表达水平显著降低(P<0.05),Peli2[(0.42±0.04)比(1.05±0.11)]、N-Cadherin[(0.45±0.05)比(0.99±0.10)]、Vimentin[(0.32±0.03)比(0.92±0.09)]、Snail[(0.22±0.02)比(0.75±0.08)]的表达水平显著升高(P<0.05);转染miR-126-5p mimics,与转染miR-NC相比,E-Cadherin[(0.34±0.03)比(0.75±0.08)]的表达水平显著升高(P<0.05),N-Cadherin[(1.02±0.11)比(0.53±0.05)]、Vimentin[(0.95±0.10)比(0.48±0.05)]、Snail[(0.72±0.07)比(0.36±0.04)]的表达水平显著降低(P<0.05);转染si-Peli2后,与转染si-NC相比,E-Cadherin[(0.24±0.03)比(0.70±0.07)]的表达水平显著升高(P<0.05),N-Cadherin[(1.05±0.12)比(0.50±0.05)]、Vimentin[(0.96±0.10)比(0.38±0.04)]、Snail[(0.74±0.07)比(0.40±0.04)]的表达水平显著降低(P<0.05);miR-126-5p能够特异性结合Peli2,Peli2是miR-126-5p的靶基因;Peli2过表达后可明显逆转miR-126-5p过表达对高糖诱导的HK-2细胞EMT的影响。结论miR-126-5p通过靶向Peli2抑制糖尿病肾病肾小管上皮细胞EMT发生。

血清miR-126-5p检测在肺癌诊治中的临床价值

目的通过检测微小miR-126-5p在肺癌患者血清中的表达,研究其与肺癌患者临床病理特征的相关性,并探讨其能否作为肺癌早期诊断的潜在肿瘤标志物的可能性。方法应用RT-qPCR分析法对55例肺癌患者组和包括21例健康人、32例肺部良性疾病患者的非肺癌组血清中的miR-126-5p水平进行检测,采用方差方程的Levene检验及均值方程的t检验进行统计学比较。用R0c曲线对指标的诊断效能进行分析和评价。结果肺癌组患者血清中的miR-126-5p肿瘤标志物水平明显高于非肺癌组,FC值为5.57,差异有统计学意义(F=14.81P<0.001;t=-3.91df=78.9双侧P<0.001)。ROC曲线下面积AUC为0.666,本研究的灵敏度为66.1%,特异度为71.7%。结论检测微小miR-126-5p在肿瘤患者中出现高表达,对肺癌的诊断有一定的临床价值,并有较高的灵敏度和特异度,可作为诊断肺癌较为理想的指标之一。