miR-130b在食管鳞癌中的表达及对食管鳞癌细胞增殖和迁移的影响

目的:检测微小RNA-130b(miR-130b)在食管鳞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)组织中的表达并探讨其对ESCC细胞增殖、迁移的影响.方法:microRNA(miRNA)芯片筛选ESCC组织中异常表达的miRNAs,TaqMan MGB探针法定量PCR检测19例ESCC组织及配对癌旁组织标本中miR-130b的表达;通过脂质体转染模拟物miR-130b mimics(miR-130bm)促进ESCC细胞Eca109中miR-130b的表达,转染抑制物miR-130b inhibitor(miR-130bi)抑制Eca109细胞中miR-130b的表达;进一步采用CCK-8法和Transwell迁移实验检测ESCC细胞增殖、迁移的变化;生物学信息预测miR-130b的靶基因,双荧光素酶报告基因验证其靶向作用;采用SYBR Green定量PCR和Western blot检测靶基因mRNA和蛋白表达.结果:miR-130b在ESCC组织中的表达明显高于癌旁组织(P<0.01);转染miR-130bm可有效增加ESCC细胞Eca109中miR-130b的表达,进而促进Eca109细胞的增殖和迁移,平均迁移细胞数明显多于对照(112.9±2.4vs54.3±1.8,P<0.01);转染miR-130bi则降低细胞中miR-130b的表达;进而抑制细胞的增殖和迁移,平均迁移细胞数较对照明显减少(33.9±2.3vs56.2±1.9,P<0.01).miR-130b可作用于PTEN3'非翻译区抑制其表达.miR-130b可负向调控PTEN蛋白表达,并促进Akt磷酸化,但对PTENmRNA表达无明显影响.结论:miR-130b在ESCC组织中表达上调,增加其表达促进ESCC细胞Eca109增殖和迁移,降低其表达则抑制Eca109细胞增殖和迁移;miR-130b可在转录后水平负向调控PTEN的表达并促进Akt磷酸化.提示miR-130b有望成为ESCC治疗的新靶点.

miR-130b在肝细胞癌中的表达及临床病理意义

目的探讨miR-130b在人肝细胞癌(HCC)中的表达、与临床病理特征的关系及可能机制。方法用实时定量PCR(qRT-PCR)检测miR-130b在86例HCC及癌旁组织、不同肝癌细胞系的表达;免疫组织化学染色检测miR-130b不同表达水平的HCC组织中上皮钙黏素(E-cadherin)、波形蛋白(vimentin)及过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)的表达情况;qRT-PCR检测miR-130b在LO2人正常永生化肝细胞及Hep G2、Hep3B、SMMC-7721、Hu7肝癌细胞系的表达水平;应用人工合成的miR-130b抑制物转染SMMC-7721细胞,TranswellTM实验检测SMMC-7721细胞侵袭能力变化;应用人工合成的miR-130b抑制物及PPARγ小干扰RNA(siRNA)转染SMMC-7721人肝癌细胞,qRT-PCR检测癌细胞中miR-130b、PPARγ、E-cadherin、vimentin的mRNA水平,Western blot法检测癌细胞中PPARγ、E-cadherin、vimentin的蛋白水平。结果 miR-130b在HCC组织中表达水平显著高于对应癌旁组织;肝癌组织中miR-130b异常表达与门静脉侵犯、原发肿瘤分级、肿瘤TNM分期显著相关;miR-130b在不同肝癌细胞系中表达均高于LO2细胞;miR-130b高表达组PPARγ及E-cadherin蛋白水平显著低于miR-130低表达组,而vimentin水平显著高于miR-130b低表达组,相关性分析结果显示肝癌组织中miR-130b与PPARγ蛋白、E-cadherin蛋白水平呈显著负相关,与vimentin蛋白水平呈显著正相关;抑制miR-130b水平,可上调PPARγ蛋白的水平,E-cadherin蛋白的表达显著增加,而vimentin蛋白表达显著降低,SMMC-7721细胞的侵袭能力降低。PPARγsiRNA可部分逆转miR-130b抑制物对SMMC-7721细胞的作用。结论 miR-130b在HCC组织中表达上调并与HCC恶性临床病理特征有关,miR-130b可能通过抑制PPARγ表达及诱导上皮间质转化促进肝癌细胞侵袭。

miR-130a/b与肿瘤关系的研究进展

目的:总结国内外miR-130a和miR-130b在肿瘤学领域研究的现状。方法 :应用PubMed和中国知网数据库检索系统,以"microRNA、miR-130a、miR-130b和肿瘤"等为关键词,联合检索1993-01—2013-12的相关文献。纳入标准:1)microRNA在肿瘤研究中的新进展;2)miR-130a;3)miR-130b;4)肿瘤。根据纳入标准,符合分析的文献47篇。结果:miR-130a和miR-130b是高度同源的microRNA,通过干扰靶mRNA转录或降解靶基因来调控基因表达,它们在不同的肿瘤中差异表达,并在多种肿瘤细胞的增殖、凋亡、转移和肿瘤耐药方面发挥着重要作用。结论:miR-130a/b在肿瘤发生发展中发挥促癌或抑癌的作用,其在肿瘤耐药方面的研究可以为多重耐药的患者提供新的视角。

miR-21和miR-130b靶向性人工设计circRNA抑制肝癌细胞上皮间质转化

目的探讨人工改造的CDR1as(M-CDR1as)是否可通过特异性结合miR-21和miR-130b,体外抑制小鼠Hepa1-6肝癌细胞的上皮间质转化(EMT)。方法将CDR1as中miR-7结合位点替换为特异性结合mmu-miR-21或mmu-miR-130b的碱基序列。将小鼠Hepa1-6肝癌细胞分为对照组,空质粒组(NC)和M-CDR1as组。采用RT-qPCR检测Hepa1-6细胞内M-CDR1as的水平及其对靶miR-21和miR-130b水平的影响。利用RT-qPCR和Western blot法检测各组肝癌细胞中EMT相关Vimentin,E-cadherin及N-cadherin的mRNA水平和蛋白表达量。结果仅M-CDR1as组可在阈值以上检测到M-CDR1as。M-CDR1as组miR-21水平较对照组和NC组有所下降(P>0.05),M-CDR1as组miR-130b水平较对照组及NC组均明显下调(P<0.001)。Vimentin和N-cadherin mRN水平较对照组和NC组明显下降(P<0.01),E-cadherin mRNA较对照组和NC组明显升高(P<0.01)。Vimentin和N-cadherin蛋白表达量较对照组和NC组明显下降(P<0.01);而E-cadherin较对照组和NC组表达明显升高(P<0.01)。结论 M-CDR1as可通过结合吸附miR-21和miR-130b体外抑制小鼠Hepa1-6肝癌细胞的EMT。

MiR-130b调控巨噬细胞极化的分子机制研究

目的:研究miR-130b对巨噬细胞极化的调控作用及机制。方法:选用人白血病单核THP-1细胞,通过PMA使其诱导为Mφ巨噬细胞,然后加入LPS诱导为M1或加入IL-4诱导为M2巨噬细胞;流式细胞仪检测标记物比例;应用Real-time PCR和Western blot方法检测特异性标志物和目的蛋白的mRNA和蛋白表达水平;ELISA法检测特异性分泌因子的表达水平。结果:与Mφ巨噬细胞比较,LPS诱导的巨噬细胞中CD86高表达,TNFα和IL-1β表达和分泌水平均增多,符合M1巨噬细胞特征;IL-4诱导的巨噬细胞中CD206的阳性表达率升高,CCL22、CCL17表达和分泌水平均增多,符合M2巨噬细胞特征;M1细胞中miR-130b表达明显高于M2细胞(P<0.05);miR-130b过表达后的M2细胞中,CCL22 mRNA和蛋白表达减少,IL-1βmRNA和蛋白表达增多,PPAR-γ的蛋白表达降低。结论:MiR-130b可能通过靶向抑制PPAR-γ表达调节巨噬细胞极化。

lncRNA MAGI2-AS3靶向调控miR-130a-5p对柯萨奇病毒B3诱导的大鼠心肌细胞H9C2损伤的影响

目的:探讨lncRNA MAGI2-AS3靶向miR-130a-5p调控柯萨奇病毒B3(CVB3)诱导的大鼠心肌细胞H9C2损伤的分子机制。方法:对照组,用不含药物、病毒的DMEM处理H9C2细胞48 h。CVB3组,用含有100倍半数组织培养感染剂量CVB3的DMEM处理H9C2细胞48 h(感染)。CVB3+sh-NC组,H9C2细胞转染sh-NC慢病毒后感染CVB3。CVB3+sh-MAGI2-AS3组,H9C2细胞转染sh-MAGI2-AS3慢病毒后感染CVB3。CVB3+miR-NC组,H9C2细胞转染miR-NC后感染CVB3。CVB3+miR-130a-5p组,H9C2细胞转染miR-130a-5p mimic后感染CVB3。sh-MAGI2-AS3+抗miR-NC组,sh-MAGI2-AS3、抗miR-NC共转染H9C2细胞后感染CVB3。sh-MAGI2-AS3+抗miR-130a-5p组,sh-MAGI2-AS3、抗miR-130a-5p共转染H9C2细胞后感染CVB3。qRT-PCR检测MAGI2-AS3、miR-130a-5p相对表达量;Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡率;ELISA法检测TNF-α、IL-6分泌水平;双荧光素酶报告实验验证MAGI2-AS3与miR-130a-5p靶向关系;Western blot检测Bcl-2、Cleaved-Caspase-3蛋白相对表达量。结果:与对照组比较,CVB3组MAGI2-AS3相对表达量、细胞凋亡率、Cleaved-Caspase-3蛋白表达水平及TNF-α、IL-6分泌水平升高,而miR-130a-5p相对表达量、Bcl-2蛋白表达水平降低(P<0.05)。分别与CVB3+sh-NC组、CVB3+miR-NC组相比,CVB3+sh-MAGI2-AS3组、CVB3+miR-130a-5p组细胞凋亡率、Cleaved-Caspase-3蛋白表达水平及TNF-α、IL-6分泌水平降低,Bcl-2蛋白表达水平升高(P<0.05)。MAGI2-AS3可靶向调控miR-130a-5p表达。与sh-MAGI2-AS3+抗miR-NC组比较,sh-MAGI2-AS3+抗miR-130a-5p组细胞凋亡率、Cleaved-Caspase-3蛋白表达水平及TNF-α、IL-6分泌水平升高,Bcl-2蛋白表达水平降低(P<0.05)。结论:沉默MAGI2-AS3可通过上调miR-130a-5p而抑制细胞凋亡、炎症反应,进而减轻CVB3诱导的H9C2细胞损伤。

骨肉瘤组织中miR-494、miR-130b下游靶基因的探究

目的:研究骨肉瘤组织中miR-494、miR-130b的表达量并探究下游靶基因。方法:收集在延安大学附属医院手术切除的骨肉瘤组织,另取同期关节置换术后的正常骨组织作为对照;抽提miRNA后测定miR-494、miR-130b的表达量,抽提RNA后测定增殖基因、侵袭基因的mRNA表达量,抽提蛋白后测定血管新生分子的蛋白含量。结果:骨肉瘤组织中miR-494、Runx3、ELL2、p16、RECK、TIMP1的表达量以及TSSC3的蛋白含量显著低于正常骨组织,miR-130b、β-catenin、CyclinD1、Sox9、ADAMTS18、CatD、STMN1的表达量以及CEACAM6、VEGF、Ang-2的蛋白含量显著高于正常骨组织;骨肉瘤组织中miR-494与Runx3、ELL2、p16、RECK、TIMP1、TSSC3呈正相关,与β-catenin、CyclinD1、Sox9、ADAMTS18、CatD、STMN1、CEACAM6、VEGF、Ang-2呈负相关,miR-130b与Runx3、ELL2、p16、RECK、TIMP1、TSSC3呈负相关,与β-catenin、CyclinD1、Sox9、ADAMTS18、CatD、STMN1、CEACAM6、VEGF、Ang-2呈正相关。结论:骨肉瘤组织中miR-494的低表达以及miR-130b的高表达能够调控增殖、侵袭基因的表达及血管新生分子的生成。

miR-130b对胃癌细胞BGC823迁移和侵袭能力的影响

目的探讨microRNA-130b(miR-130b)对胃癌细胞迁移和侵袭能力的影响及作用机制。方法体外培养BGC-823胃癌细胞,通过Lipofectamine2000试剂盒将培养基、miR-130b错义链、miR-130b抑制剂,分别转染进入正常组、对照组、抑制组肿瘤细胞株中。应用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐实验法(MTT)检测转染后胃癌细胞存活率增殖能力变化,划痕实验(wound-healing assay)和侵袭实验(Transwell invasion chamber assay)检测肿瘤细胞迁移、侵袭能力变化,western blot实验检测肿瘤细胞迁移、侵袭相关蛋白分子(Slug、matrix metalloproteinase-9(MMP-9))表达变化情况。结果BGC-823胃癌细胞转染后,与正常组和对照组比较,抑制组细胞增殖能力、迁移和侵袭能力均明显降低(P<0.01)。同时,抑制组细胞迁移、侵袭能力相关蛋白表达水平较正常组和对照组降低(P<0.05)。结论靶向抑制miR-130b可以降低BGC-823胃癌细胞的增值、迁移和侵袭能力。

1,25(OH)_(2)D_(3)对miR-130b转染的高糖条件下HMC细胞TGF-β1/Smad3及Col-Ⅳ表达的影响

目的观察高糖环境下1,25(OH)_(2)D_(3)对miR-130b转染肾小球系膜细胞TGF-β1/Smad3、Col-IV表达水平的变化,探索1,25(OH)_(2)D_(3)是否可通过miR-130b改善糖尿病肾病肾脏纤维化的过程。方法HMC细胞传代培养,miR-130b mimics及miR-130b inhibitor经LipofectamineTM 2000转染肾小球系膜细胞,依据分组加入1,25(OH)_(2)D_(3)1.0×10^(-8) mol/L,37℃、5%CO_(2)饱和湿度条件下继续培养48 h,共分为6组:①空白对照组;②细胞+无水乙醇组(A组);③细胞+miR-130b mimics+无水乙醇组(B组);④细胞+miR-130b mimics+1,25(OH)_(2)D_(3)组(C组);⑤细胞+miR-130b inhibitor+无水乙醇组(D组);⑥细胞+miR-130b inhibitor+1,25(OH)_(2)D_(3)组(E组)。以实时荧光定量PCR检测细胞miR-130b及TGF-β1、Smad3、Col-IVmRNA的表达水平,以Western blot方法检测细胞TGF-β1、Smad3、Col-IV蛋白的表达水平。采用多组间比较的单因素方差分析及组内两两比较采用LSD、Dunnett s T3法比较各组数据。结果空白对照组与A组细胞miR-130b、TGF-β1、Smad3、Col-IV表达水平,差异无统计学意义(P>0.05),与A组相比,B组miR-130b、TGF-β1、Smad3、Col-IV表达水平明显升高(P<0.05),D组miR-130b、TGF-β1、Smad3、Col-IV表达水平明显降低(P<0.05)。经1,25(OH)_(2)D_(3)治疗发现,与B组相比,C组miR-130b、TGF-β1、Smad3、Col-IV表达水平明显降低(P<0.05),与D组相比,E组miR-130b、TGF-β1、Smad3、Col-IV表达水平明显降低(P<0.05)。结论1,25(OH)_(2)D_(3)可降低miR-130b转染肾小球系膜细胞miR-130b及纤维化相关因子TGF-β1、Smad3、Col-IV的表达水平,1,25(OH)_(2)D_(3)可能通过miR-130b改善糖尿病肾病肾脏纤维化的过程。

miR-10b、miR-18b及miR-130b在肺癌中的表达研究

目的探讨miR-10b、miR-18b及miR-130b在肺癌中的表达特征及其在肺癌发生发展过程中的作用。方法收集47例肺癌住院患者的癌组织和癌旁组织,利用Trizol提取总RNA,实时荧光定量PCR检测基因相对表达量。结果肺癌组织与癌旁组织中miR-10b(t=2.83,P<0.05)、miR-18b(t=2.88,P<0.05)及miR-130b(t=2.46,P<0.05)表达量均差异存在显著性。比较鳞癌、腺癌和癌旁组织中miR-10b(F=7.16,P<0.05)、miR-18b(F=4.11,P<0.05)及miR-130b(F=3.43,P<0.05)的表达量也有显著性。癌组织中miR-10b与pri-miR-10b表达量存在负相关关系(r=-0.50,P<0.05)。癌组织与临床指标之间的关系中miR-18b、miR-130b与KI67呈正相关(P<0.05),pri-miR-10b与TOPOⅡ、pri-miR-130b与MRP呈负相关(P<0.05)。结论 miR-10b、miR-18b及miR-130b在癌组织中表达量上调,可能具有促进肺癌发生发展的作用。

miR-130b调控RAB34的表达在胰腺癌发生发展中的作用

目的探讨miR-130b调控Ras相关蛋白34(Ras-related proteins in brain 34,RAB34)在胰腺癌中的表达。方法收集22例胰腺癌及其癌旁组织标本,采用免疫组织化学、Western blot和q RT-PCR法检测RAB34的表达;q RT-PCR法检测miR-130b表达;细胞转染法检测miR-130b调控RAB34表达,双荧光素酶报告基因检测系统验证miR-130b结合RAB34的3’UTR的靶位点。结果与癌旁组织对比,RAB34在胰腺癌组织中显著高表达,且miR-130b显著低表达;转染miR-130b mimics可抑制RAB34的表达;RAB34是mi R-130b作用的靶基因。结论 RAB34是胰腺癌的分子标志物,miR-130b可调控其表达。

抑制miR-130b-3p通过上调PTEN和灭活PI3K-AKT及整合素β1/FAK信号通路抑制膀胱癌细胞增殖

miR-130家族在癌的进展中发挥作用;然而,其家族成员在膀胱癌中的作用尚罕见报告。本研究证明,抑制miR-130家族成员miR-130b-3p表达促进PTEN表达,诱导细胞凋亡,抑制膀胱癌细胞增殖。首先,我们采用微阵列对来自膀胱癌患者的4对膀胱癌和癌旁组织进行了miRNA和mRNA组学分析,发现miR-130b-3p和miR-106b-3p在膀胱癌组织高表达,而miR-99a-3p、miR-199a-5p和miR-145-3p低表达。RT-q PCR检测30对膀胱癌组织5种miRNA的表达与微阵列中的表达状况一致。此外,我们在mRNA组学分析中还发现,miR-130b-3p在膀胱癌组织的高表达与PTEN表达呈负相关。为此,在后续研究中集中探索了miR-130b-3p在膀胱癌中的作用及其作用机制。生物信息学及荧光素酶报告结果证明,miR-130b-3p可直接结合PTEN的3'-UTR,靶向抑制PTEN的表达。转染结合CCK-8、EDU、流式分析、划痕及Transwell小室实验显示,转染miR-130b-3p模拟物可明显促进膀胱癌T24细胞的增殖、迁移及侵袭能力;相反,转染miR-130b-3p抑制物可明显诱导T24细胞凋亡。鬼笔环肽染色揭示,转染miR-130b-3p模拟物可促进细胞骨架形成,而转染miR-130b-3p抑制物抑制细胞骨架形成。Western印迹证明,转染miR-130b-3p可下调PTEN在T24细胞的表达,上调p-PI3K、p-AKT、p-FAK和整合素β1的表达;而转染miR-130b-3p抑制物上调PTEN的表达,下调p-PI3K、p-AKT、p-FAK和整合素β1的表达。上述结果提示,miR-130b-3p通过抑制PTEN表达,激活PI3K-AKT及整合素β1/FAK信号通路,在膀胱癌中发挥癌基因样作用;相反,抑制miR-130b-3p可上调PTEN表达,抑制PI3K-AKT及整合素β1/FAK信号通路的激活,诱导凋亡,抑制膀胱癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力。我们的结果还提示,miR-130b-3p作为可能的临床标志物,对膀胱癌的诊断、靶向治疗具有潜在的应用价值。

血清miR-130b与糖尿病肾病患者肾脏损伤及远期预后的相关性研究

目的:探讨血清miR-130b与糖尿病肾病患者肾脏损伤及远期预后的相关性。方法:选择在杭州师范大学附属医院诊治的糖尿病肾病患者134例为观察组,同期选择杭州师范大学附属医院门诊正常体检者118例为对照组,测定两组miR-130b水平,分析miR-130b水平与BMI、蛋白尿定量、空腹血糖、糖尿病病程、血肌酐及eGFR水平的关系,分析肾脏损伤程度与miR-130b的关系。结果:观察组miR-130b水平低于对照组(P<0.05);BMI、蛋白尿定量、空腹血糖、糖尿病病程、血肌酐水平越高,eGFR水平越低,血清miR-130b表达水平越低(P<0.05);随着肾脏损伤程度的加重,肾小球分级、IFTA评分、间质炎症评分的增加,血清miR-130b水平逐渐降低(P<0.01);miR-130b与肾小球分级、IFTA评分、间质炎症评分负相关明显(P<0.05);IFTA评分、miR-130b两者的AUC相近,皆小于eGFR,miR-130b、IFTA评分诊断糖尿病肾病的灵敏度、特异度相近(P>0.05),皆小于eGFR(P<0.05);ESRD组血清miR-130b水平低于非ESRD组(P<0.05),ESRD组血清miR-130b低表达率高于非ESRD组,miR-130b低水平组相对于高水平进入ESRD的风险升高13.020倍(P<0.05)。结论:miR-130b低表达能加速糖尿病患者肾脏损伤程度,降低糖尿病肾病患者预后;miR-130b可作为判定糖尿病肾病的生物学标志物,值得在临床上推广应用。

miR-130b促进小鼠胚胎发育过程中大脑皮质神经元的迁移

目的通过胚胎在体电转染技术,在胚胎小鼠大脑皮质神经元中过表达miR-130b,探讨其对神经元迁移的影响。方法利用miR-130b过表达载体,在昆明小鼠E15.5胚胎大脑中电转染,并于E17.5处死母鼠,取胚胎进行冰冻切片,于荧光显微镜下观察阳性神经元的迁移情况。结果过表达miR-130b的小鼠胚胎,大脑皮质神经元的迁移速率上升,最终迁移到达MZ层的神经元占总阳性神经元的75.1%,远高于对照组的22.1%;且停留在VZ/SVZ层的神经元(7.9%)远低于对照组(69.3%)。结论 miR-130b在神经发育过程中能够促进神经元的迁移。在未来的研究中需要进一步探索其深层机制。

miR-130b靶向STAT3参与家兔非特异性消化道紊乱型肠炎的调节

【目的】肠炎是家兔最常见且死亡率最高的消化道代谢疾病,给家兔养殖业带来巨大的经济损失。圆小囊作为家兔特有的免疫器官,在家兔肠炎中起重要的调节作用。本试验通过研究家兔圆小囊中microRNAs(miRNAs)的表达差异,探究miRNAs与家兔肠炎发生和调节的分子机制。【方法】本试验以60只新西兰兔为试验样本,采用低纤维饲料(纤维素CF 9%、木质素ADF 13%)诱导家兔非特异性消化道紊乱型肠炎发生,通过临床症状和切片观察将试验样本分为4组(n=9),即健康对照组、诱导健康组、轻微组、严重组;检测家兔圆小囊中miR-130b以及相关炎症因子白介素-22(IL-22)、肿瘤坏死因子(TNF-α)和白介素-18(IL-18)的表达,通过miRBase、targetscan等预测miR-130b与STAT3的靶向关系,同时利用q PCR检测STAT3的表达量。【结果】圆小囊中,IL-22、TNF-α、IL-18表达量上调,严重组显著高于其他组(P<0.05),miR-130b表达随着炎症程度的加深表达显著下调,2个患病组极显著低于2个健康组(P<0.01);STAT3随着炎症程度加深表达量显著上调,2个患病组极显著高于2个健康组(P<0.01);在4个分组中,miR-130b和STAT3呈显著的负相关(r=0.635,P<0.01)。【结论】在家兔非特异性消化道紊乱型肠炎发生过程中,圆小囊中的miR-130b通过靶向STAT3参与炎症的发生并发挥作用。

miR-21和miR-130b靶向性人工改造circRNA抑制原发性肝癌的肺转移

目的:人工改造小脑变性相关蛋白1反义转录物(CDR1as),通过同时结合肝癌细胞中癌基因miR-21和miR-130b,抑制肝癌的肺转移。方法:将CDR1as中miR-7结合位点替换为特异性结合mmu-miR-21或mmu-miR-130b的碱基序列,建立携带小鼠端粒酶逆转录酶(mTERT)启动子的M-CDR1as重组慢病毒。利用致癌剂二乙基亚硝胺(DEN)和促癌剂四氯化碳(CCl4)诱导C57BL/6小鼠原发性肝癌模型。利用肝组织HE染色验证肝癌是否造模成功以及干预后肺转移情况。qRT-PCR检测干预后各组肿瘤组织内M-CDR1as的含量。结果:成功建立了C57BL/6小鼠原发性肝癌模型,qRT-PCR检测到仅治疗组肝癌组织M-CDR1as的表达,M-CDR1as重组慢病毒改善肝癌肺转移。结论:M-CDR1as体内可抑制肝癌的肺转移,有望成为肝癌治疗的新方向。

糖尿病合并代谢综合征病人血清miR-126a、miR-130b水平及与骨质疏松的关系

目的:探讨2型糖尿病合并代谢综合征(MS)病人血清miRNA-126a、miRNA-130b水平及其与骨质疏松的关系。方法:选取162例2型糖尿病病人为研究对象,其中72例单纯糖尿病病人为对照组,90例糖尿病合并MS病人为观察组,同时根据是否发生骨质疏松将2型糖尿病合并MS病人分为骨质疏松组(52例)与非骨质疏松组(38例)。实时定量聚合酶链反应法检测病人血清miR-126a、miR-130b相对表达量;检测各项实验室指标及骨质疏松症相关因子水平。Pearson法分析骨质疏松病人血清miR-126a、miR-130b表达水平与骨质疏松症相关因子的相关性;多因素logistic回归分析法分析影响骨质疏松发生的相关因素。结果:观察组血清miR-126a、miR-130b表达水平均高于对照组(P<0.05);骨质疏松组病人体质量指数(BMI)、血红蛋白(Hb)、骨钙素、骨密度(BMD)、胰岛素样生长因子-1(IGF-1)均低于非骨质疏松组(P<0.05),而总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、糖化血红蛋白(HbA1c)、血清Ⅰ型前胶原氨基端肽原(P1NP)及血清miR-126a、miR-130b表达水平均升高(P<0.05);miR-126a、miR-130b均与BMI、Hb、骨钙素、BMD、IGF-1呈明显负相关关系(P<0.01),而与TC、TG、HDL-C、HbAlc、PINP呈明显正相关关系(P<0.01);logistic分析显示BMI、Hb、IGF-1及miR-126a、miR-130b表达水平均为骨质疏松发生的影响因素(P<0.05~P<0.01)。结论:2型糖尿病合并MS病人血清miR-126a、miR-130b表达水平升高可促进骨质疏松发生,并可能作为预测骨质疏松发生的重要辅助指标。

OVCAR细胞转染miR-130b下调多梳基因-1蛋白表达增加对卡铂敏感性

目的观察miR-130b对卡铂抗卵巢癌的增敏作用,探讨其相关的作用机制。方法 OVCAR细胞Lipofectiamine 2000转染miR-130b模拟物和无miR-130b基因功能的miR-130b阴性对照,荧光定量PCR检测转染效果。转染细胞给予对倍稀释卡铂100,50,25,12.5,6.25,3.12,1.56和0.78μmo.lL-1处理68 h。MTT法检测OVCAR细胞存活;Western印迹法检测多梳基因-1(Bmi-1)蛋白表达。结果 荧光定量PCR结果显示,正常对照组、miR-130b模拟物转染组和阴性对照组miR-130b表达的相对值分别为0.22±0.08,0.46±0.12和0.23±0.10,miR-130b模拟物转染组显著高于正常对照组和阴性对照组(P<0.01),正常对照组和阴性对照组之间无统计学差异。卡铂对正常对照组、miR-130b模拟物转染组和阴性对照组卵巢癌OVCAR细胞的IC50值分别为32.4±4.6,14.7±2.1和(31.4±4.2)μmo.lL-1,miR-130b模拟物转染组IC50值显著低于正常对照组和阴性对照组(P<0.01)。正常对照组、miR-130b模拟物转染组和阴性对照组细胞多梳基因-1蛋白的相对表达量分别为0.75±0.16,0.21±0.12和0.77±0.18,miR-130b模拟物转染组显著降低(P<0.01)。结论 OVCAR细胞转染miR-130b可以显著增加卡铂对其敏感性,下调多梳基因-1蛋白表达可能是miR-130b增敏的作用机制之一。

miR-130b靶向PPARγ抑制家兔前体脂肪细胞分化

旨在探究miR-130b是否可通过靶向PPARγ抑制家兔前体脂肪细胞的分化。采集初生新西兰仔兔肾周脂肪细胞进行原代培养,鸡尾酒法诱导分化后,用RT-qPCR分别测定前体脂肪细胞分化第0、第2、第6、第10天miR-130b表达量及PPARγ(Peroxisome Proliferators-Activated Receptorγ,PPARγ)和C/EBPα(CCAAT/enhancer binding proteinα,C/EBPα)mRNA的表达量,生物信息学软件鉴定miR-130b的同源性,预测miR-130b的靶基因;前体脂肪细胞转染miR-130bmimic和miR-130binhibitor后,检测miR-130b、PPARγ和C/EBPα的表达差异,用油红O染色鉴定前体脂肪细胞分化程度。结果表明:1)在前体脂肪细胞分化过程中,miR-130b、PPARγ和C/EBPα表达量存在差异;分化第8天时,油红染色发现大量橘红色脂滴;生物信息学软件预测PPARγ可作为miR-130b的靶基因,且miR-130b在哺乳动物中具有较高的同源性。2)过表达miR-130b后,mimic组PPARγ和C/EBPα的表达量极显著低于NC组(P<0.01)。3)抑制表达miR-130b后,inhibitor组PPARγ的表达量极显著高于inhibitor NC组(P<0.01),inhibitor组C/EBPα表达量显著高于inhibitor NC组(P<0.05)。4)油红O染色显示分化程度:inhibitor组>NC组>mimic组。综上所述,miR-130b在家兔前体脂肪细胞分化过程中差异表达,且可通过靶向PPARγ抑制前体脂肪细胞分化。

miR-130b在人视网膜母细胞瘤中的表达及促癌机制研究

目的:检测miR-130b在人视网膜母细胞瘤(RB)中的表达并初步探究其促癌机制。。方法:采用qRT-PCR检测miR-130b在人RB癌组织及癌旁组织、人RB细胞系(HXO-Rb44与Y79)中的表达;采用qRT-PCR、Western Blot及免疫荧光实验检测miR-130b过表达及干扰前后HXO-Rb44与Y79细胞中PTEN的表达水平;采用双荧光素酶报告基因试验验证miR-130b与PTEN的靶向关系;采用共转染实验考察PTEN与miR-130b影响RB细胞系PI3K/Akt信号通路表达的关系。结果:miR-130b在RB癌组织中的表达水平显著高于癌旁组织(P<0. 05)。与ACBRI-181细胞比较,miR-130b在HXO-Rb44与Y79细胞中的表达水平显著增高(P <0. 05)。与RB癌组织比较,PTEN在其癌旁组织中的表达水平显著增高(P<0. 05); miR-130b表达水平与PTEN表达水平呈负相关性(P<0. 001)。过表达miR-130b后的HXO-Rb44细胞PTEN mRNA与蛋白表达水平均显著降低,而干扰miR-130b后的Y79细胞PTEN mRNA与蛋白表达水平均显著升高(P<0. 05)。与miR-130b mimics+PTEN-NC组比较,miR-130b mimics+wt-PTEN组荧光素酶活性明显降低(P<0. 05)。共转染miR-130b mimics+PTEN-NC HXO-Rb44细胞p-Akt 308与p-Akt 473蛋白表达水平显著增高(P<0. 05),PTEN蛋白表达水平显著降低(P<0. 05);共转染miR-130b mimics+PTEN HXO-Rb44细胞中,以上三种蛋白表达水平均未发生明显改变。结论:miR-130b在RB组织及细胞系中呈高水平表达,PTEN为miR-130b的靶基因,miR-130b可能是经负向调控PTEN对PI3K/Akt信号通路的表达产生影响,最终发挥促癌作用。