癫痫患者脑电图异常与血液miR-130b-3p和miR-7及FGL2表达特征的关系

目的探讨癫痫患者脑电图异常与血液miR-130b-3p、miR-7及纤维蛋白原样蛋白2(FGL2)表达特征的关系。方法选取接受治疗的癫痫患者124例作为观察组(癫痫发作轻度患者36例、中度患者51例及重度患者37例,脑电图轻度异常患者65例、中度异常35例及重度异常24例),同时选取体检健康者120例作为对照组;比较观察组和对照组、不同程度癫痫发作患者、不同程度脑电图异常的癫痫患者血液miR-130b-3p、miR-7及FGL2表达差异,分析癫痫患者血液miR-130b-3p、miR-7及FGL2与疾病程度和脑电图异常的相关性。结果观察组miR-130b-3p、FGL2高于对照组(P<0.05),miR-7低于对照组(P<0.05);癫痫发作重度患者miR-130b-3p、FGL2高于轻度和中度患者(P<0.05),miR-7低于轻度和中度患者(P<0.05);全面性癫痫发作患者miR-130b-3p、FGL2高于部分性发作患者(P<0.05);脑电图重度异常癫痫患者miR-130b-3p、FGL2高于脑电图轻度和中度异常患者(P<0.05),miR-7低于轻度和中度异常患者(P<0.05);脑电图中度异常癫痫患者miR-130b-3p、FGL2高于脑电图轻度异常患者(P<0.05),miR-7低于轻度异常患者(P<0.05);癫痫患者miR-130b-3p及FGL2与疾病严重程度、脑电图异常程度呈正相关(P<0.05),miR-7与疾病严重程度、脑电图异常程度呈负相关(P<0.05)。结论癫痫患者血液miR-130b-3p及FGL2表达上调,而miR-7下调,3项指标均与与癫痫患者疾病严重程度、脑电图异常程度存在相关关系。

RNA XIST、mir-130b-3p在乳腺癌组织中的表达及与其预后相关性

目的 探讨RNA XIST、mir-130b-3p在乳腺癌组织中的表达及与其临床病理特征及预后的相关性。方法选择120例乳腺癌患者,收集其癌组织和癌旁正常组织,采用免疫组化染色法测定RNA XIST、mir-130b-3p水平及其与乳腺癌临床病理学特征的关系;从治疗起对所有患者随访60个月,记录总生存率,并建立Logistic多元回归方程分析乳腺癌患者死亡高危因素。结果 RNA XIST在乳腺癌组织中表达量高于癌旁正常组织(P<0.05),mir-130b-3p在乳腺癌组织的表达量低于癌旁正常组织(P<0.05);RNA XIST与mir-130b-3p在乳腺癌组织中表达呈显著负相关关系(P<0.05);RNA XIST、mir-130b-3p表达量与患者年龄、肿瘤直径、肿瘤分期、淋巴结转移、分化程度显著相关(P<0.05);所有患者均从治疗起随访60个月,6例于治疗后24~36个月复发,8例全身转移,54例死亡,存活患者RNA XIST表达量低于死亡患者(P<0.05)、mir-130b-3p表达量高于死亡患者(P<0.05);年龄≥55岁、肿瘤直径>5 cm、肿瘤Ⅲ~Ⅳ期、淋巴结转移、RNA XIST高表达、mir-130b-3p低表达为乳腺癌患者死亡危险因素(P<0.05)。结论 RNA XIST、mir-130b-3p与乳腺癌患者预后显著相关,且两者在癌细胞中的表达量呈负相关关系,可对其进行监测作为早期筛查乳腺癌生物标志物和治疗靶点。

miR-130b-3p在肾癌中表达及PI3K/AKT途径参与的机制研究

目的探究miR-130b-3p调节PI3K/AKT途径对肾癌细胞生物学行为的影响及作用机制。方法临床收集肾癌患者78例,检测肿瘤组织和癌旁组织中miR-130b-3p和PTEN蛋白水平,分析miR-130b-3p与肾癌病理特征的关系。通过相关性分析探究肾癌组织中miR-130b-3p与PTEN蛋白的相关性。786-O细胞分为NC、miR-130b-3p、PTEN和miR-130b-3p+PTEN组,分别转染NC、miR-130b-3p mimic和/或pcDNA 3.1 PTEN来过表达miR-130b-3p和/或PTEN。分别检测各组细胞活力、凋亡率、侵袭能力以及PI3K/AKT通路水平。结果肾癌组织中miR-130b-3p水平显著高于癌旁组织(P<0.05)。miR-130b-3p表达水平与性别、年龄、肿瘤直径无关,高水平的miR-130b-3p与高临床分期和淋巴转移有关(P<0.05)。miR-130b-3p与PTEN靶向结合(P<0.05)。与NC组比较,miR-130b-3p组的PTEN蛋白和凋亡率显著降低,增殖活力、侵袭能力和PI3K/AKT通路显著升高(P<0.05);PTEN组的PTEN蛋白和凋亡率显著升高,增殖活力、侵袭能力和PI3K/AKT通路显著抑制(P<0.05)。miR-130b-3p+PTEN组的PTEN蛋白和凋亡率显著高于miR-130b-3p组且显著低于PTEN组,而增殖活力、侵袭能力和PI3K/AKT通路显著低于miR-130b-3p组且显著高于PTEN组(P<0.05)。结论miR-130b-3p在肾癌组织中上调,高水平的miR-130b-3p与肾癌患者的高临床分期和转移有关,miR-130b-3p可调控PI3K/AKT途径,抑制PTEN蛋白表达,促进肾癌细胞的侵袭并抑制凋亡。

癫痫患者外周血CD69、miR-130b-3p表达水平及其临床意义

目的探讨CD69、miR-130b-3p在癫痫患者外周血中的表达水平及其临床意义。方法选取2018年2月至2019年2月该院神经内科收治的95例癫痫患者作为癫痫组,根据病情严重程度分为轻度31例,中度22例,重度42例。另选取同期来该院进行健康体检的健康者60例作为对照组。采用流式细胞仪检测两组外周血CD69表达水平,采用实时荧光定量聚合酶链反应检测两组外周血miR-130b-3p表达水平;采用Pearson相关分析癫痫患者外周血CD69与miR-130b-3p表达水平的相关性;采用Logistic回归分析影响癫痫发生的影响因素。结果与对照组比较,癫痫组外周血CD69、miR-130b-3p表达水平明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。外周血CD69、miR-130b-3p表达水平在轻度、中度、重度癫痫患者中依次升高,两两比较,差异有统计学意义(P<0.05)。癫痫患者外周血CD69与miR-130b-3p表达水平呈正相关(r=0.546,P<0.05)。外周血CD69、miR-130b-3p表达水平升高是癫痫发生的危险因素(P<0.05)。结论癫痫患者外周血CD69、miR-130b-3p呈高表达,二者均与患者病情严重程度有关。

糖尿病肾病相关miR-130b-3p靶点的生物信息学预测

目的:预测miR-130b-3p靶基因,并对靶基因的分子功能、生物学进程和信号通路进行富集分析,为深入研究糖尿病肾病相关miR-130b-3p的靶基因功能提供理论基础。方法:通过NCBI和miRbase数据库检索基因。应用Vector NTI软件进行miR-130b-3p序列分析,应用Target Scan,pic Tar,RNA22,PITA和miRanda软件预测靶基因,通过DAVID和KEGG数据库进行靶基因功能与信号通路富集分析。结果:已知成熟的不同物种miR-130b-3p核酸序列高度保守。靶基因主要富集在核质和细胞溶质,分子功能主要富集在蛋白绑定和转录因子激活。经典的miR-130b-3p靶基因集合明显富集于KEGG数据库中的TGF-β、AMPK和内吞作用等7个信号转导通路。疾病富集分析与糖尿病高度相关。结论:成功预测miR-130b-3p靶基因,部分靶基因参与的功能及信号通路与糖尿病肾病发生发展过程密切相关。

miR-130b-3p通过靶向作用于INTS6促进肝细胞癌生长和转移

目的探讨miR-130b-3p在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中的表达水平、临床意义及生物学功能,并初步探讨整合因子复合体亚基6(integrator complex subunit 6,INTS6)是否是其潜在的作用靶点。方法收集65例HCC组织和对应的癌旁组织标本,用real-time PCR检测miR-130b-3p在HCC组织和癌旁组织中的表达;用real-time PCR检测miR-130b-3p在人正常肝细胞(LO2)与肝癌细胞系中的表达; GEO数据库(GSE36915)分析miR-130b-3p在HCC和癌旁组织中的表达;分析miR-130b-3p的表达水平与HCC临床病理特征的相关性;分别应用miR-130b-3p类似物(miR-130b-3p mimics)和miR-130b-3p抑制剂(miR-130b-3p inhibitors)上调和下调MHCC-97L细胞中miR-130b-3p的表达,实验分组包括miR-130b-3p类似物组和相应的对照组以及miR-130b-3p抑制剂组和相应的阴性对照组。Transwell迁移和侵袭实验检测miR-130b-3p对HCC细胞迁移与侵袭能力的影响; MTT实验检测miR-130b-3p对HCC细胞增殖能力的影响;生物信息学工具预测INTS6是否是miR-130b-3p的下游靶点,用荧光素酶报告基因实验以及Western blot分析miR-130b-3p对潜在靶点INTS6的调节作用。结果与癌旁组织相比,miR-130b-3p在HCC组织中的表达明显升高(P <0. 001);与正常肝细胞相比,miR-130b-3p在HCC细胞系中的表达明显升高; GEO数据库(GSE36915)数据显示与癌旁组织相比,miR-130b-3p在HCC组织中表达显著上调(P=0. 035 6); miR-130b-3p的表达水平与肿瘤大小(P=0. 015)、静脉侵犯(P=0. 028)以及TNM分期(P=0. 045)显著相关;下调或者上调MHCC-97L细胞的miR-130b-3p表达后,细胞的迁移、侵袭和增殖能力显著被抑制或者增强;生物信息学分析发现,INTS6可能是miR-130b-3p的作用靶点;荧光素酶报告基因实验显示,miR-130b-3p能够负向调节INTS6-3'UTR的荧光素酶活性;此外,miR-130b-3p抑制剂(miR-130b-3p inhibitors)和miR-130b-3p类似物(miR-130b-3pmimics)分别能上调或者下调MHCC-97L细胞中INTS6的表达水平。结论 miR-130b-3p通过靶向作用于INTS6增强HCC细胞的迁移、侵袭及增殖能力,进而促进HCC的发生发展。

狼疮肾炎患者循环miRNA表达谱研究及循环miR-130b-3p的临床意义

目的研究探讨狼疮肾炎患者外周循环miRNA表达变化及其可能存在的临床意义,为狼疮肾炎的临床治疗提供更多的客观依据。方法方便选取2013年9月—2015年9月于该院诊治的50例狼疮肾炎患者,同时另选同期于该院体检的50名健康者作为对照组。在100例研究对象中随机选取15例患者做循环miRNA的表达谱检测筛选(检测组),85例患者做循环miRNA的表达谱验证筛选(验证组),同时应用循环miR-130b-3p为验证对象,观察与比较狼疮肾炎患者与对照组患者的血清总RNA水平及检测组中两组患者的血清miRNA水平、验证组中miR-130b-3p的水平,并进行数据统计学分析及相关性分析。结果在验证组中,与对照组相比较(3.7±1.6)ng/μL,狼疮肾炎组患者的循环血清中miR-130b-3p的表达水平(9.8±1.4)ng/μL显著上升,其差异有统计学意义(P<0.05);在检测组中,与对照组相比较(28.6±2.4)ng/μL,狼疮肾炎组患者循环表达的miRNA水平(46.8±5.6)ng/μL明显上升,其差异具有统计学意义(P<0.05)。结论狼疮肾炎患者循环miRNA表达水平可能随着肾功能的进一步下降而出现表达下调,其循环miR-130b-3p的表达与肾脏功能、血脂水平呈现明显的相关性,这在狼疮肾炎的疾病发生发展中可能起着重要的作用。

miR-130b-3p靶定AMPK基因抑制糖饥饿诱导的宫颈癌细胞自噬性死亡

目的探究miR-130b-3p对糖饥饿诱导宫颈癌细胞自噬性死亡的影响及机制。方法将宫颈癌细胞分别置于低糖(0.1 mmol/L)和正常糖含量(5 mmol/L)、低糖+DMSO和低糖+雷帕霉素的培养液中培养,利用碘化丙啶(propidium iodide,PI)染色实验、GFP-LC3B自噬泡形成检测实验、实时荧光半定量PCR(RT-qPCR)实验和Western blot实验,依次检测细胞死亡、自噬水平,细胞内miR-130b-3p、腺苷单磷酸激活激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)mRNA和AMPK蛋白水平;分别转染miR-130b-3p抑制物及AMPK过表达质粒,再利用自噬抑制剂SBI-0206965(SBI)检测miR-130b-3p、ampk对细胞死亡和自噬的影响;生物信息学工具预测miR-130b-3p的靶基因并利用荧光报告基因实验进行验证。结果低糖诱导宫颈癌细胞发生自噬、miR-130b-3p水平升高,AMPK表达水平降低(均P<0.05),死亡率无显著变化(均P>0.05);与低糖+DMSO组相比,低糖+雷帕霉素使得宫颈癌细胞死亡率显著增加(均P<0.05);转染miR-130b-3p抑制物后,低糖条件下宫颈癌细胞自噬水平和自噬性死亡率显著增加(均P<0.05);过表达AMPK能促进宫颈癌细胞自噬和自噬性死亡率显著升高(均P<0.05);荧光报告基因表达水平检测结果证实,AMPK是miR-130b-3p的直接靶基因(P<0.05)。结论低糖条件下,miR-130b-3p靶定AMPK基因抑制宫颈癌细胞自噬性死亡。

基于生物信息学分析miR-130b-3p在肾透明细胞癌中的表达、靶基因及预后价值

目的:采用生物信息学方法分析miR-130b-3p在肾透明细胞癌(KIRC)组织中的表达,预测其靶基因,并探究其预后价值,为进一步研究miR-130b-3p在KIRC中的调控机制和临床应用提供理论依据。方法:采用miRBase分析miR-130b-3p的保守性;dbDEMC2.0数据库评估miR-130b-3p在人肿瘤组织和正常组织中的表达,采用UCSC数据库的RNA-seq数据分析miR-130b-3p在KIRC组织中的表达;Stabase3.0和UALCAN数据库预测和确定miR-130b-3p在KIRC的靶基因,并采用Metascape对miR-130b-3p靶基因进行GO功能及KEGG通路富集分析;Kaplan-Meier Plotter分析miR-130b-3p表达与患者总生存期的关系,评估其在KIRC患者的预后意义。结果:miR-130b-3p序列在物种间高度保守,在肾癌(KDCA)等多种肿瘤中表达上调,且在KDCA高分级中较低分级明显上调;进一步分析其在KDCA最常见类型,即KIRC组织中的表达,结果显示,miR-130b-3p在KIRC组织中明显上调;预测获得miR-130b-3p在KIRC中的靶基因集包含87个靶基因;富集分析结果显示,靶基因主要富集于细胞自噬、顶树突发育、磷脂酰肌醇生物合成过程、肌动蛋白细胞骨架形成等生物过程和甲状腺激素合成、肌动蛋白细胞骨架调节及Ras等信号通路;生存分析显示,miR-130b-3p与KIRC患者不良预后显著相关。结论:miR-130b-3p在KIRC中表达异常,且涉及多个生物学过程和信号转导通路,可作为KIRC潜在的预后生物标志物。

miR-130b-3p有望作为人膀胱癌的标志物

目的进一步了解miRNA在膀胱癌中的潜在机制。方法芯片分析4对人膀胱癌组织和相邻正常组织中的miRNA的表达。并用RT-q PCR来验证两个最上调的miRNA及其靶基因的表达是否符合miRNA/mRNA芯片结果。通过相关性分析和双荧光素酶报告实验推断并验证miR-130b-3p可以靶向PTEN。应用CCK8、EDU、流式细胞术、划痕、Transwell和细胞骨架等实验证明miR-130b可以影响膀胱癌细胞的增殖、凋亡、迁移和侵袭。用Western blot检测PI3K/AKT和整合素β1/FAK信号通路的关键靶蛋白。结果人膀胱癌中miR-130b-3p表达高于癌旁且与PTEN表达呈负相关。miR-130b-3p可下调PTEN表达,导致PI3K/AKT和整合素β1/FAK信号通路的激活,且与膀胱癌EJ细胞的增殖、迁移和侵袭相关。细胞转染miR-130b-3p抑制剂时,可以重排细胞骨架。结论本结果揭示miR-130b/PTEN有望用于人膀胱癌诊断和治疗的标志物。

MiR-130b-3p在非小细胞肺癌患者血液中的表达及潜在意义

目的 探讨miR-130b-3p在NSCLC患者血液中的表达水平及潜在临床意义。方法 本研究使用癌症基因组图谱(TCGA)、基因表达谱数据库(GEO)以及序列片段归档数据库(SRA)下载了NSCLC相关的miRNAs表达谱,并提取miR-130b-3p在各个纳入的数据集中的表达量。计算标准化均数差(SMD)综合展示miR-130b-3p在NSCLC患者血液中的表达水平,进行诊断试验以探讨差异表达的miR-130b-3p对NSCLC患者和健康人的鉴别潜力。通过对miRwalk 2.0中12个数据库的预测结果进行交集,筛选出miR-130b-3p的下游靶基因,并采用富集分析探讨miR-130b-3p下游靶基因调控NSCLC的潜在信号通路。结果 共7项研究的300例NSCLC患者血液样本被纳入。miR-130b-3p在LUAD(SMD=-1.45,95%CI:-2.66~-0.23)以及LUSC(SMD=-0.46,95%CI:-0.84~-0.09)这两种NSCLC患者血液中的表达水平较对照组明显下调。诊断试验提示miR-130b-3p具有良好的区分NSCLC患者和健康人的潜力(AUC=0.85:95%CI:0.82~0.88)。47个基因被鉴定为miR-130b-3p的下游靶基因,这些靶基因显著富集于Renin-angiotensin system通路。结论在NSCLC患者血液中表达下调的miR-130b-3p有望用于NSCLC的筛查。

gga-miR-130b-3p对鸡MDCC-MSB1细胞中肿瘤相关基因表达的影响

为鉴定MD淋巴瘤转化细胞中gga-miR-130b-3p调控的肿瘤相关基因,本研究在MDV转化的鸡淋巴细胞系MDCC-MSB1中过表达该miRNA,转染48 h后收集并提取RNA,利用高通量测序获得过表达gga-miR-130b-3p组和阴性对照组(Negative control,NC)的转录组数据,筛选这些数据中的差异表达基因(Differential expressed genes,DEGs),对DEGs进行基因本体GO功能富集分析、信号通路分析以及基因集富集分析,筛选过表达ggamiR-130b-3p前后基因表达变化可能参与的信号通路,并对两组中的差异可变剪切进行分析。结果表明:1)与NC组相比,过表达gga-miR-130b-3p组中共鉴定出117个DEGs,其中83个DEGs显著上调,34个DEGs显著下调。其中MCM10、KCNA3、PTK2、FGL2、GPAM、BMP4、LOXL3、DDO和KRAS等基因可能影响MD肿瘤转化。2)DEGs注释到46个GO条目中,其中生物过程包含免疫系统过程等在内的22个条目,分子功能包括10个条目,细胞组分包括14个条目。3)mimics NC和mimics转染组中的DEGs以及微效基因富集到7个与肿瘤发生相关的通路,其中主要是通过甲状腺激素信号途径、胆碱代谢等通路发挥抑癌作用。4)过表达gga-miR-130b-3p后差异可变剪切类型最多的是外显子跳跃(Exon skipped,ES),其次是内含子滞留(Intron retained,IR),最少的是外显子互斥(Mutually exclusive exon,MXE)。综上,gga-miR-130b-3p高表达会引起MSB1细胞中的部分基因差异表达,这些DEGs通过抑癌信号通路抑制MD的肿瘤发展进程,该研究可为解析miRNA在MD肿瘤转化过程中的作用机制提供理论依据。

miR-519b-3p调控IL-6/STAT3通路对宫颈癌细胞凋亡、迁移、侵袭的影响

目的探讨miR-519b-3p调控IL-6/信号转导和转录激活因子3(STAT3)通路对宫颈癌细胞(SiHa)凋亡、迁移、侵袭的影响。方法qRT-PCR检测miR-519b-3p在宫颈癌组织中的表达。SiHa细胞分为miR-NC组、miR-519b-3p组、miR-NC+RhIL-6组、miR-519b-3p+RhIL-6组。流式细胞术评估SiHa细胞凋亡率,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭情况。Western blotting检测B细胞淋巴瘤-2基因(Bcl-2)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-cadherin、Bcl相关x蛋白(Bax)、STAT3和p-STAT3蛋白水平。结果与癌旁组织比较,宫颈癌组织miR-519b-3p表达下调(P<0.05)。SiHa细胞凋亡率、Bax和E-cadherin蛋白水平miR-519b-3p组高于miR-NC组,miR-NC+RhIL-6组低于miR-NC组,miR-519b-3p+RhIL-6组低于miR-519b-3p组(P<0.05)。SiHa细胞迁移数、侵袭数、Bcl-2、N-cadherin、p-STAT3蛋白水平miR-519b-3p组低于miR-NC组,miR-NC+RhIL-6组高于miR-NC组,miR-519b-3p+RhIL-6组高于miR-519b-3p组(P<0.05)。结论miR-519b-3p通过抑制IL-6/STAT3通路来抑制宫颈癌细胞迁移和侵袭,并增加细胞凋亡。

miR-15b-3p靶向CMTM6对胃癌细胞上皮-间充质转化的影响

目的探讨miR-15b-3p靶向趋化素样因子超家族6(CMTM6)对胃癌细胞上皮-间充质转化(EMT)的影响。方法采用实时荧光定量PCR法检测人胃癌细胞SGC-7901、BGC-823、MKN-1及人正常胃黏膜上皮细胞GES-1中miR-15b-3p和CMTM6表达水平。采用双荧光素酶报告基因实验检测miR-15b-3p和CMTM6的靶向关系。将BGC-823细胞随机分为对照组(不做处理)、miR-15b-3p抑制剂组(转染miR-15b-3p抑制剂)、miR-15b-3p抑制剂+shRNA-CMTM6组(转染miR-15b-3p抑制剂和shRNA-CMTM6)。分别采用MTT实验、细胞划痕愈合实验、Transwell实验检测细胞的增殖、迁移和侵袭能力。采用蛋白质印迹法检测EMT相关蛋白表达水平。结果与GES-1细胞相比,SGC-7901、BGC-823和MKN-1细胞中miR-15b-3p和CMTM6 mRNA的相对表达量均显著升高(P均<0.05)。双荧光素酶报告基因实验检测结果显示,与miR-NC+CMTM6-WT组相比,miR-15b-3p抑制剂+CMTM6-WT组细胞的相对荧光素酶活性显著降低(P<0.05)。与对照组相比,miR-15b-3p抑制剂组细胞中miR-15b-3p和CMTM6mRNA的相对表达量均显著降低(P均<0.05);与miR-15b-3p抑制剂组相比,miR-15b-3p抑制剂+shRNA-CMTM6组细胞中miR-15b-3p的相对表达量无显著变化(P>0.05),而CMTM6 mRNA的相对表达量显著降低(P<0.05)。与对照组相比,miR-15b-3p抑制剂组的细胞增殖抑制率升高,细胞划痕愈合率降低,细胞侵袭数目减少,N-cadherin和Vimentin蛋白表达水平均降低,E-cadherin蛋白表达水平升高,差异均具有统计学意义(P均<0.05)。与miR-15b-3p抑制剂组相比,miR-15b-3p抑制剂+shRNA-CMTM6组的细胞增殖抑制率升高,细胞划痕愈合率降低,细胞侵袭数目减少,N-cadherin和Vimentin蛋白表达水平均降低,E-cadherin蛋白表达水平升高,差异均具有统计学意义(P均<0.05)。结论miR-15b-3p表达下调可通过靶向CMTM6而抑制胃癌细胞的增殖、迁移、侵袭能力及EMT进程。

miR-19b-3p靶向IGF-1参与绒毛膜癌发生发展的机制研究

目的探究miR-19b-3p靶向胰岛素样生长因子-1(IGF-1)参与绒毛膜癌增殖、侵袭和转移的机制。方法以人绒毛膜癌细胞系JEG-3为研究对象,A组:miR-19b-3p mimics组,B组:miR-19b-3p mimics NC组,C组:miR-19b-3p inhibitor组,D组:miR-19b-3p inhibitor NC组,E组:空白对照组。A组、B组、C组、D组按照分组情况进行相应转染,E组不做任何处理。分别用Real-time PCR和Western blot检测五组miR-19b-3p RNA和IGF-1蛋白表达水平,采用CCK-8法测定细胞增殖,采用划痕实验和Transwell小室侵袭实验测定细胞迁移和侵袭能力,并进行比较;采用双荧光素酶(Dualluciferase)报告实验验证miR-19b-3p对IGF-1的靶向关系。结果与E组的(0.98±0.13)相比,A组miR-19b-3p mRNA表达水平(2.23±0.16)明显上调,C组miR-19b-3p mRNA表达水平(0.73±0.08)明显下调(P<0.05)。与E组的(1.03±0.03)nmol/L相比,A组IGF-1蛋白表达水平(1.48±0.12)nmol/L明显上调,C组IGF-1蛋白表达水平(0.76±0.05)nmol/L明显下调(P<0.05)。72 h时,与E组的(5.03±0.14)%相比,A组细胞增殖活力(10.34±0.87)%明显增加,C组细胞增殖活力(2.42±0.13)%明显下调(P<0.05);与E组的(1.09±0.07)mm相比,A组细胞划痕迁移距离(1.45±0.08)mm明显增加,C组细胞划痕迁移距离(0.73±0.07)mm明显减少(P<0.05)。与E组的(103.00±7.00)个相比,A组侵袭细胞数(173.00±4.00)个明显增加,C组侵袭细胞数(82.00±1.00)个明显减少(P<0.05)。双荧光素酶报告实验结果显示:miR-19b-3p转染WT-IGF-1的细胞荧光素酶活性(0.57±0.08)Kat低于miR-NC的(0.95±0.06)Kat(P<0.05);miR-19b-3p转染MUT-IGF-1的细胞荧光素酶活性(0.98±0.05)Kat与miR-NC的(0.96±0.06)Kat比较无明显差异(P>0.05)。结论miR-19b-3p靶向上调IGF-1促进绒毛膜癌JEG-3细胞增殖、侵袭、迁移。

miR-26b-3p靶向CREB1调控神经胶质瘤细胞的增殖、迁移及侵袭

目的探讨miR-26b-3p靶向调控环磷酸腺苷效应元件结合蛋白1(CREB1)表达水平影响胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭能力的分子机制。方法运用RT-qPCR和Western blotting检测不同级别胶质瘤中miR-26b-3p和CREB1的表达情况;生物信息学方法分析miR-26b-3p与CREB1结合的靶向序列。采用双荧光素酶报告基因检测miR-26b-3p对CREB1的靶向调控机制;将胶质瘤U251细胞分为对照组、miR-26b-3p mimic组及miR-26b-3p inhibitor组,采用Western blotting检测CREB1的表达变化,采用CCK-8法检测各组细胞增殖能力的影响,采用划痕实验检测各组细胞迁移能力的影响,采用Transwell检测各组细胞侵袭能力的影响,采用流式细胞术检测各组细胞凋亡的影响。结果miR-26b-3p的表达随着胶质瘤级别的增加而降低(P<0.05),而CREB1的表达则逐渐增加,差异有统计学意义(P<0.05);双荧光素酶报告基因结果显示miR-26b-3p可显著影响CREB13′UTR表达载体的荧光素酶活性,CREB1是miR-26b-3p下游靶基因。抑制miR-26b-3p表达可上调CERB1的表达,进而抑制细胞凋亡,促进胶质瘤细胞的增殖和侵袭。过表达miR-26b-3p可下调CERB1的表达,促进细胞凋亡,抑制胶质瘤细胞的增殖和侵袭(P<0.05)。结论miR-26b-3p可靶向调控CREB1的表达调节胶质瘤细胞的凋亡、增殖、迁移和侵袭,进而参与胶质瘤的发生发展。

miR-421和miR-196b-3p在胃癌癌前病变和早期胃癌诊断中的潜在价值

目的研究血浆miR-421和miR-196b-3p作为诊断胃癌癌前病变和早期胃癌新型潜在生物标志物的临床意义。方法(1)发现集:于2018年12月1日至12月31日采集早期胃癌患者(早期胃癌组)、癌前病变患者(癌前病变组)和健康志愿者(NC组)的血浆标本各3例,用作miRNA微阵列分析。借用TCGA数据证实候选miRNA在癌症组织中的表达。(2)验证集:于2019年1月1日至2023年1月1日共采集90例胃癌患者(胃癌组)、89例癌前病变患者(癌前病变组)和45例健康志愿者(NC组)的血浆标本。通过定量实时聚合酶链反应测定候选miRNA水平。比较各组候选miRNA及常规肿瘤标志物[铁蛋白、甲胎蛋白(AFP)、癌胚抗原(CEA)、CA211、CA50、CA125、CA199、CA153、CA242、CA724]水平;通过受试者工作特征(ROC)曲线分析比较候选miRNA与常规肿瘤标志物的诊断价值。结果(1)发现集:通过miRNA微阵列筛选,与NC组相比,miR-421和miR-196b-3p水平在早期胃癌组和癌前病变组明显上调(P<0.05)。TCGA数据证实,与正常胃黏膜相比,miR-421在胃癌组织中呈高表达(P<0.001)。(2)验证集:与NC组相比,癌前病变组和胃癌组血浆miR-421、miR-196b-3p水平明显上调(P<0.05),且胃癌组血浆miR-421、miR-196b-3p水平高于癌前病变组(P<0.001)。ROC曲线分析结果显示,血浆miR-421对胃癌的诊断价值最高,曲线下面积(AUC)为0.931(95%CI:0.889~0.972),高于CEA、CA125、CA199、CA724、CA211、CA50诊断胃癌的AUC(P<0.05);miR-196b-3p诊断胃癌的AUC[0.804(95%CI:0.733~0.875)]也高于CEA、CA125、CA199和CA724诊断胃癌的AUC(P<0.05);miR-421和miR-196b-3p也可用于早期胃癌诊断,AUC分别为0.942(95%CI:0.886~0.997)和0.809(95%CI:0.708~0.910);血浆miR-421和miR-196b-3p诊断癌前病变的AUC分别为0.788(95%CI:0.714~0.863)和0.648(0.556~0.741),miR-421诊断癌前病变的AUC均高于miR-196b-3p、铁蛋白、CA50诊断癌前病变的AUC(P<0.05)。血浆miR-421和miR-196b-3p在胃癌Ⅰ期病例中的水平与Ⅱ、Ⅲ/Ⅳ期相比,差异无统计学意义(P>0.05),但在胃癌发病早期(Ⅰ~Ⅱ期)的水平明显高于NC组和癌前病变组(P<0.05)。结论血浆miR-421和miR-196b-3p在早期胃癌患者中过表达,有希望成为诊断癌前病变和早期胃癌的新型生物标志物。

miR-302b-3p调控GALNT3及FGF23/PI3K/AKT通路在主动脉瓣膜钙化的作用机制分析

目的探讨miR-302b-3p调控GALNT3及FGF23/PI3K/AKT通路在主动脉瓣膜钙化的作用机制。方法进行人心脏瓣膜间质细胞培养与钙化诱导,设置对照组(Control)、钙化模型组(Model)、模型组+miR-302b-3p mimics NC组(miR-302b-3p mimics NC)、模型组+miR-302b-3p mimics组(miR-302b-3p mimics)、模型组+miR-302b-3p inhibitor NC组(miR-302b-3p inhibitor NC)、模型组+miR-302b-3p inhibitor组(miR-302b-3p inhibitor),共6组。通过细胞转染、茜素红染色、碱性磷酸酶(ALP)染色、MTT检测细胞活性、实时荧光定量PCR、Western blot及双荧光素酶报告基因检测实验,检测相关分子的表达水平与活性变化。结果与Control组比较,Model组中miR-302b-3p、骨桥蛋白(OPN)、骨钙素(OCN)、Runt相关转录因子2(RUNX2)、p-PI3K和p-AKT蛋白的表达水平升高(P均<0.05),细胞增殖活性以及导致ALP和钙结节的能力升高,N-乙酰氨基半乳糖转移酶3(GALNT3)和成纤维细胞生长因子23(FGF23)蛋白的表达水平降低(P均<0.05)。与Model组比较,miR-302b-3p mimics组miR-302b-3p和FGF23蛋白的表达水平升高(P均<0.05),OPN、OCN、RUNX2、GALNT3、p-PI3K和p-AKT蛋白的表达水平降低(P均<0.05),细胞增殖活性以及导致ALP和钙结节的能力降低。miR-302b-3p inhibitor组则呈现相反的变化。双荧光素酶报告基因检测实验结果显示,与miR-302b-3p mimics+wt组相比,miR-302b-3p mimics NC+wt组相对荧光素酶活性升高(P<0.05),miR-302b-3p mimics+mut组与miR-302b-3p mimics NC+mut组相比,相对荧光素酶活性差异无统计学意义(P>0.05)。结论miR-302b-3p可抑制细胞钙化及增殖,通过负向调控GALNT3的表达水平,调控FGF23/PI3K/AKT通路来影响主动脉瓣膜的钙化过程。

CircFoxo3调节miR-130a-5p/TEAD1轴对心力衰竭大鼠心肌细胞凋亡影响的实验研究

目的探讨环状RNA叉头框蛋白O3(CircFoxo3)调节miR-130a-5p/TEA域转录因子1(TEAD1)轴对心力衰竭(HF)大鼠心肌细胞凋亡的影响。方法将SD大鼠分为对照组、HF组、si-NC组、si-CircFoxo3组、agomir NC组、miR-130a-5p agomir组、si-CircFoxo3+antagomir NC组、si-CircFoxo3+miR-130a-5p antagomir组,每组18只。除对照组外,其他组大鼠均通过腹腔注射盐酸阿霉素的方法构建HF大鼠模型。建模成功后进行药物处理,每3 d给药一次,持续3周。应用反转录实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)法检测心肌组织中CircFoxo3、miR-130a-5p表达水平。应用彩色多普勒超声仪检测大鼠左室收缩末期内径(LVESD)、左室舒张末期内径(LVEDD)、左室射血分数(LVEF)水平。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测大鼠血清人基质裂解素2(ST_(2))、N端脑钠肽前体(NT-pro BNP)水平。应用HE染色、Masson染色检测大鼠心肌组织病理变化和心肌纤维化情况。通过TUNEL染色检测心肌细胞凋亡水平。应用Western blot法检测大鼠心肌组织TEA域转录因子1(TEAD1)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、裂解的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(cleaved caspase-3)蛋白表达水平。通过双荧光素酶报告基因实验验证CircFoxo3与miR-130a-5p、miR-130a-5p与TEAD1的关系。结果与对照组比较,HF组大鼠心肌组织病理损伤、心肌纤维化严重,LVESD、LVEDD水平上升,心肌组织CircFoxo3及TEAD1、Bax、cleaved caspase-3蛋白表达水平升高,血清ST_(2)、NT-pro BNP水平升高,心肌细胞凋亡率升高,LVEF、miR-130a-5p和Bcl-2蛋白水平降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与HF组、si-NC组比较,si-CircFoxo3组大鼠心肌组织病理损伤减轻,LVESD、LVEDD水平降低,心肌组织CircFoxo3及TEAD1、Bax、cleaved caspase-3蛋白表达水平降低,血清ST_(2)、NT-pro BNP水平降低,心肌细胞凋亡率降低,LVEF、miR-130a-5p及Bcl-2蛋白水平升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与HF组、agomir NC组比较,miR-130a-5p agomir组大鼠心肌组织病理损伤、心肌纤维化有所改善,LVESD、LVEDD水平降低,心肌组织TEAD1、Bax、cleaved caspase-3蛋白表达水平降低,血清ST_(2)、NT-pro BNP水平降低,心肌细胞凋亡率降低,LVEF、miR-130a-5p及Bcl-2蛋白水平升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与si-CircFoxo3组、si-CircFoxo3+antagomir NC组比较,si-CircFoxo3+miR-130a-5p antagomir组大鼠心肌组织病理损伤、心肌纤维化加剧,LVESD、LVEDD水平升高,心肌组织TEAD1、Bax、cleaved caspase-3蛋白表达水平升高,血清ST_(2)、NT-pro BNP水平升高,心肌细胞凋亡率升高,LVEF、miR-130a-5p、Bcl-2蛋白水平降低,差异有统计学意义(P<0.05)。CircFoxo3与miR-130a-5p、miR-130a-5p与TEAD1存在靶向关系。结论沉默CircFoxo3可能通过海绵化上调miR-130a-5p来抑制TEAD1表达,进而抑制HF大鼠心肌细胞凋亡。

妊娠糖尿病患者血清miR130b-3-p、miR181a-5-p表达与妊娠结局的关系

目的 探究妊娠糖尿病患者血清微小RNA(miRNA)miR-130b-3p、miR-181a-5p表达与妊娠结局的关系。方法 选取2020年6月至2022年8月在北京航天总医院及北京妇产医院诊治的124例妊娠糖尿病患者作为研究组,根据妊娠结局分为良好组和不良组;采用实时荧光定量PCR法检测血清miR-130b-3p、miR-181a-5p表达;采用Pearson法分析血清miR-130b-3p、miR-181a-5p及二者与血脂和血糖的相关性;采用Logistic回归分析妊娠糖尿病患者不良妊娠结局的影响因素。结果 研究组总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(FINS)、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、miR-130b-3p相对表达水平高于对照组(P<0.05),miR-181a-5p相对表达水平低于对照组(P<0.05)。不良组TC、TG、LDL-C、FBG、FINS、HOMA-IR、miR-130b-3p相对表达水平高于良好组(P<0.05),miR-181a-5p相对表达水平低于良好组(P<0.05)。根据Pearson相关性分析可知,血清miR-130b-3p与miR-181a-5p相对表达水平呈负相关(P<0.05),血清miR-130b-3p与TC、TG、LDL-C、FBG、FINS、HOMA-IR均呈正相关(P<0.05),miR-181a-5p与TC、TG、LDL-C、FBG、FINS、HOMA-IR均呈负相关(P<0.05)。根据Logistic回归分析得知,miR-130b-3p、TC、TG、LDL-C、FBG、FINS高水平,miR-181a-5p低相对表达水平均为妊娠糖尿病不良妊娠结局的危险因素(P<0.05)。结论 妊娠糖尿病患者血清miR-130b-3p相对表达水平升高,miR-181a-5p相对表达水平降低,二者与妊娠结局密切相关。