miR-132-3p/CAMTA1对I-125粒子处理的面神经损伤大鼠施万细胞的调控作用

目的探讨miR-132-3p通过钙调素结合转录因子1(CAMTA1)对I-125粒子处理的面神经损伤大鼠(FNI)中施万细胞的调控作用。方法用I-125粒子辐射大鼠施万细胞,并在细胞中转染miR-132-3p mimic、miR-132-3p inhibitor以及sh-CAMTA1。免疫荧光检测S100B和β-TubulinⅢ荧光强度。RT-qPCR检测miR-132-3p的表达,Western blot检测CAMTA1蛋白表达。EdU染色评估细胞增殖,Transwell检测细胞迁移。同时,构建FNI大鼠模型并在大鼠面部植入I-125粒子,HE、LFB染色以及IF染色评估大鼠面神经组织的病理损伤。StarBase v2.0数据库和双荧光素酶报告实验验证miR-132-3p和CAMTA1的靶向关系。结果S100B和β-TubulinⅢ在大鼠施万细胞中显著表达。I-125粒子辐射组中miR-132-3p表达降低(P<0.001),抑制细胞的增殖(P<0.001)和迁移(P<0.001)。过表达miR-132-3p或敲降CAMTA1显著促进施万细胞的增殖(P<0.001)和迁移(P<0.05),敲降miR-132-3p则具有相反的作用。机制研究显示,miR-132-3p靶向负调控CAMTA1。体内实验结果显示,过表达miR-132-3p通过抑制CAMTA1的蛋白表达,减弱I-125粒子对FNI大鼠面神经损伤的促进作用。结论过表达miR-132-3p抑制CAMTA1的表达,促进施万细胞的增殖和迁移,抑制I-125对FNI大鼠面神经损伤的促进作用。

糖尿病足感染患者外周血miR-155及miR-132表达水平及其与下肢血管病变程度的关系分析

目的:探究糖尿病足(DF)感染患者外周血miR-155及miR-132表达水平及其与下肢血管病变程度的关系。方法:选取2020年6月至2023年6月于我院就诊的62例单纯2型糖尿病(T2DM)患者,纳入T2DM组,选取同期于我院就诊的93例T2DM合并DF感染患者,纳入DF感染组。比较两组患者外周血miR-155、miR-132水平,分析DF感染患者外周血miR-155、miR-132水平与临床特征之间的关系。根据泛大西洋学会联盟(TASC)分级标准将DF感染患者A级、B级、C级、D级,比较不同下肢血管病变程度DF感染患者外周血miR-155、miR-132水平,采用Spearman法分析外周血miR-155、miR-132与下肢血管病变程度的相关性。结果:DF感染组miR-155水平高于T2DM组,miR-132水平低于T2DM组(P均<0.05);miR-155高表达组DF溃疡病程、创面面积、Wagner分级IV级占比大于低表达组,而miR-132高表达组DF病程、创面面积、Wagner分级IV级占比小于低表达组,8周后DF溃疡愈合率大于低表达组(P均<0.05);A级至D级DF感染患者miR-155水平依次升高,而miR-132水平依次降低(P均<0.05);Spearman分析显示,miR-155表达水平与下肢血管病变程度呈正相关,而miR-132表达水平与下肢血管病变程度呈负相关(P均<0.05)。结论:DF感染患者外周血miR-155高表达,与下肢血管病变程度呈正相关,miR-132低表达,与下肢血管病变程度呈负相关。

miR-132-3p靶向调控PTEN/Akt信号通路对缺氧/复氧诱导海马神经元HT22细胞损伤的影响

目的研究miR-132-3p靶向调控第10号染色体缺失的磷酸酶基因(PTEN)/蛋白激酶B(Akt)信号通路对缺氧/复氧(H/R)诱导海马神经元HT22细胞损伤的影响。方法体外培养HT22细胞并随机分为对照组、H/R组、阴性对照(miR-132-3p mimics阴性对照+空载质粒)组、miR-132-3p mimics组(miR-132-3p mimics)、PTEN敲低组(PTEN siRNA质粒)、miR-132-3p mimics+PTEN过表达组(miR-132-3p mimics+PTEN过表达质粒),除对照组外,其余各组进行H/R处理,同时进行分组转染,然后采用qRT-PCR实验、免疫印迹法检测各组细胞miR-132-3p与PTEN/Akt通路相关蛋白表达;采用MTT法、TUNEL染色分别检测各组细胞增殖与凋亡情况;采用试剂盒测量各组细胞活性氧(ROS)、乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、白细胞介素(IL)-6、IL-18水平;采用免疫印迹法检测各组细胞凋亡相关蛋白(Cleaved Caspase-3、Bax、Bcl-2)表达;采用双荧光素酶报告实验验证miR-132-3p对HT22细胞PTEN的靶向调控。结果与对照组相比,H/R组细胞miR-132-3p表达、p-Akt/Akt、GSH-Px与SOD水平、Bcl-2蛋白表达、细胞活力降低(P<0.05),细胞凋亡率、PTEN mRNA与蛋白表达、ROS相对水平、LDH产生水平、IL-6与IL-18水平、Bax与Cleaved Caspase-3蛋白表达升高(P<0.05)。与H/R组相比,miR-132-3p mimics组、PTEN敲低组p-Akt/Akt、GSH-Px与SOD水平、Bcl-2蛋白表达、细胞活力升高(P<0.05),细胞凋亡率、PTEN mRNA与蛋白表达、ROS相对水平、LDH产生水平、IL-6与IL-18水平、Bax与Cleaved Caspase-3蛋白表达降低(P<0.05);阴性对照组细胞各指标无明显变化(P>0.05)。与miR-132-3p mimics相比,miR-132-3p mimics+PTEN过表达组p-Akt/Akt、GSH-Px与SOD水平、Bcl-2蛋白表达、细胞活力降低(P<0.05),细胞凋亡率、PTEN mRNA与蛋白表达、ROS相对水平、LDH产生水平、IL-6与IL-18水平、Bax与Cleaved Caspase-3蛋白表达升高(P<0.05)。miR-132-3p可靶向下调HT22细胞PTEN表达。结论miR-132-3p可通过靶向下调PTEN表达而激活Akt信号,进而抑制H/R诱导的HT22细胞炎症与凋亡,缓解其细胞损伤。

PF-127水凝胶联合骨髓间充质干细胞外泌体来源miR-132诱导成骨分化修复牙槽骨缺损

目的:探究PF-127水凝胶联合骨髓间充质干细胞外泌体来源miR-132诱导成骨分化对牙槽骨缺损的修复作用。方法:培养骨髓间充质干细胞,(bone mesenchymal stem cells,BMSCs),并转染anti-miR-132、anti-miR-NC质粒。制备BMSCs来源外泌体(bone mesenchymal stem cells-exosomes,BMSCs-exo),蛋白质印迹法鉴定表达标志物。制备PF-127水凝胶和BMSCs-Exo复合物,PKH67标记法检测BMSCs的摄取;茜素红染色检测BMSCs的成骨能力;逆转录-聚合酶链反应(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)检测细胞中miR-132表达和碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、骨钙素(osteocalcin,OCN)、Runt相关转录因子2(Runt-related transcription factor 2,Runx2)mRNA表达。建立牙槽骨缺损大鼠模型,将大鼠随机分为PF-127水凝胶组、PF-127水凝胶+BMSCs-exo-anti-miR-NC组和PF-127水凝胶+BMSCs-exo-anti-miR-132组。微型计算机断层扫描(Micro-computed tomography,micro-CT)评估牙槽骨缺损情况;蛋白质印迹法检测牙槽骨组织中ALP、OCN、Runx2蛋白表达。结果:anti-miR-132组BMSCs中miR-132表达明显低于anti-miR-NC组(P<0.05),提示anti-miR-132成功转染至BMSCs中。BMSCs-exo-anti-miR-NC组和BMSCs-exo-anti-miR-132组中外泌体标志物CD9和CD63显著表达。和BMSCs-exo-anti-miR-NC组相比,BMSCs-exo-anti-miR-132组中miR-132表达明显降低(P<0.05)。和PF127水凝胶组相比,BMSC-exo-anti-miR-NC组、PF127水凝胶+BMSC-exo-anti-miR-NC组、PF127水凝胶+BMSC-exo-anti-miR-132组中miR-132表达均明显降低,茜素红染色相对活性、细胞中Runx2、ALP和OCN mRNA表达均明显增加,且PF127水凝胶+BMSC-exo-anti-miR-132组变化最显著(P<0.05)。和Control组相比,PF-127水凝胶+BMSCs-exo-anti-miR-NC组和PF-127水凝胶+BMSCs-exo-anti-miR-132组BV/TV比值、BMD、Tb.N和Tb.Th及细胞中Runx2、ALP、OCN蛋白表达均明显升高,Tb.Sp明显降低(P<0.05),且PF-127水凝胶+BMSCs-exo-anti-miR-132组变化最显著。结论:PF-127水凝胶联合骨髓间充质干细胞来源外泌体来源干扰miR-132表达可促进骨髓间充质干细胞的成骨分化,从而促进牙槽骨缺损大鼠的修复。

Circ-SMG6调节miR-132-3p/BTG2轴对缺氧/复氧诱导心肌细胞损伤的影响

目的探讨Circ-SMG6对缺氧/复氧诱导的心肌细胞损伤的影响及对miR-132-3p/BTG2轴的调节作用。方法心肌H9c2细胞分为:NC组(不做任何处理)、缺氧/复氧组、缺氧/复氧+si-NC组、缺氧/复氧+si-CircSMG6组、缺氧/复氧+si-Circ-SMG6+anti-NC组、缺氧/复氧+si-Circ-SMG6+anti-miR-132-3p组。RT-qPCR检测miR-132-3p、Circ-SMG6表达;Western blot检测BTG2、Bcl-2、Bax、cleaved-Caspase-3蛋白水平;ELISA法检测SOD、MDA以及IL-1β、IL-6、TNF-α水平CCK8法测定心肌细胞增殖;流式细胞术检测心肌细胞凋亡;双荧光素酶验证Circ-SMG6与miR-132-3p,miR-132-3p与BTG2靶向关系。结果与NC组相比,缺氧/复氧组、缺氧/复氧+si-NC组BTG2 mRNA及蛋白、Circ-SMG6水平、MDA、IL-1β、IL-6、TNF-α含量、凋亡率及Bax、cleavedCaspase-3蛋白水平显著增加(P<0.01),miR-132-3p水平、SOD含量、72 h的细胞活力、Bcl-2蛋白水平显著降低(P<0.01)。与缺氧/复氧组相比,缺氧/复氧+si-Circ-SMG6组BTG2蛋白、Circ-SMG6水平、MDA、IL-1β、IL-6、TNF-α含量、凋亡率及Bax、cleaved-Caspase-3蛋白水平显著降低(P<0.01),miR-132-3p水平、SOD含量、72 h的细胞活力、Bcl-2蛋白水平显著增加(P<0.01)。与缺氧/复氧+si-Circ-SMG6组相比,缺氧/复氧+si-Circ-SMG6+antimiR-132-3p组BTG2蛋白、MDA、IL-1β、IL-6、TNF-α含量、凋亡率及Bax、cleaved-Caspase-3蛋白水平显著增加(P<0.01),miR-132-3p水平、SOD含量、72 h的细胞活力、Bcl-2蛋白水平显著下降(P<0.01)。结论敲低CircSMG6可能通过调节miR-132-3p/BTG2轴减轻缺氧/复氧诱导的心肌细胞损伤。

荜茇酰胺通过miR-132-3p调控FOXO1改善脓毒症肾损伤机制研究

目的探究荜茇酰胺(PPL)对脓毒症肾损伤的作用及其可能机制。方法24只雄性C57BL/6小鼠随机数字表法分为四组:Sham组、盲肠结扎穿刺(CLP)组、CLP+PPL-L组和CLP+PPL-H组,每组6只。使用CLP法构建脓毒症小鼠模型,CLP+PPL-L组和CLP+PPL-H组小鼠分别按5、10 mg/kg剂量灌胃PPL溶液,CLP组和Sham组小鼠灌胃等量生理盐水。随后使用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测小鼠外周血肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、单核细胞趋化因子1(MCP-1)表达情况以评估模型构建,苏木素-伊红(HE)染色观察小鼠肾组织形态。使用脂多糖(LPS)刺激人近端肾小管上皮细胞(HK-2)构建体外脓毒症细胞模型,随后使用CCK-8和流式细胞术分别检测细胞活性和凋亡水平,qRT-PCR检测miR-132-3p表达量,蛋白免疫印迹法检测叉头框蛋白O1(FOXO1)蛋白的表达情况。使用双荧光素酶实验检测miR-132-3p与FOXO1靶向结合关系。结果小鼠体内实验中,与Sham组比较,CLP组小鼠TNF-α[(13.26±2.15)ng/mL比(2.61±0.33)ng/mL,P<0.01]、IL-6[(6.56±0.84)ng/mL比(1.20±0.13)ng/mL,P<0.01]、MCP-1[(55.35±5.13)ng/mL比(20.85±2.09)ng/mL,P<0.01]表达上升,病理显示肾损伤显著,miR-132-3p表达显著上升[(2.84±0.24)比(1.00±0.03),P<0.01],FOXO1蛋白表达下降;与CLP组比较,CLP+PPL-L组和CLP+PPL-H组小鼠TNF-α[(9.55±0.57)ng/mL、(6.69±1.13)ng/mL比(13.26±2.15)ng/mL,P<0.01]、IL-6[(4.79±0.35)ng/mL、(3.24±0.35)ng/mL比(6.56±0.84)ng/mL,P<0.01]、MCP-1[(44.68±3.80)ng/mL、(29.79±4.10)ng/mL比(55.35±5.13)ng/mL,P<0.01]表达下降,病理显示肾损伤有所缓解,miR-132-3p表达显著下降[(2.36±0.28)、(1.44±0.18)比(2.84±0.24),P<0.05或P<0.01],FOXO1蛋白表达上升。在体外细胞模型中,PPL能显著提高LPS刺激下肾小管细胞活性[(67.11±3.48)%、(88.53±4.42)%比(50.23±4.44)%,P<0.05或P<0.01],抑制凋亡水平,并且过表达miR-132-3p会抑制PPL对LPS刺激下细胞的影响。同时,在体外细胞中证实了miR-132-3p对FOXO1的靶向调控作用。结论PPL可能通过miR-132-3p调控FOXO1的表达从而缓解脓毒症肾损伤。

轻型急性缺血性脑卒中患者血清miR-132水平变化与卒中后认知障碍的相关性

目的探讨轻型急性缺血性脑卒中(acute ischemic stroke,AIS)患者血清微小核糖核酸(microRNA,miR)-132水平变化与卒中后认知障碍(post stroke cognitive impairment,PSCI)的相关性。方法选取2020年5月至2022年12月承德市中心医院收治的127例轻型AIS患者为研究对象。在卒中发病后24 h内,采用实时定量聚合酶链式反应测定miR-132在血清中的相对表达水平,并收集患者基线临床信息和常规生化检查结果。卒中后10~14 d,根据北京版蒙特利尔认知评估量表(Montreal Cognitive Assessment scale,MoCA)评分分为PSCI组(<26分,n=79)和非PSCI组(≥26分,n=48)。对比两组临床资料,采用Pearson相关性分析探讨miR-132与MoCA评分之间的关系,多因素Logistic回归分析评估miR-132对轻型AIS患者发生PSCI的独立预测作用,受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic curve,ROC)评估血清miR-132水平对轻型AIS患者并发PSCI的预测价值。结果PSCI组年龄、体质指数、高血压比例、超敏C反应蛋白和肌酐高于非PSCI组(P<0.05),miR-132低于非PSCI组(P<0.05)。Pearson相关性分析显示,轻型AIS患者血清miR-132水平与MoCA评分呈正相关(r=0.768,P<0.05)。多因素Logistic回归分析显示,miR-132(OR=0.850,95%CI=0.758~0.952,P<0.05)是轻型AIS患者发生PSCI的独立预测因子。ROC曲线分析显示,血清miR-132预测轻型AIS患者发生PSCI的曲线下面积为0.831(95%CI=0.753~0.892,P<0.05),当血清miR-132预测PSCI的约登指数为0.587时,对应的截断值为1.05,敏感度为81.58%,特异度为77.08%。结论轻型AIS患者发生PSCI与血清miR-132水平降低有关,低水平的miR-132可作为PSCI的预测指标。

lncRNA KCNQ1OT1靶向调控miR-132-5p对帕金森病细胞损伤的保护机制

目的探究长链非编码RNA KCNQ1OT1(lncRNA KCNQ1OT1)靶向调控微小RNA-132-5p(miR-132-5p)对帕金森病细胞损伤的保护机制。方法SH-SY5Y细胞通过1-甲基-4-苯基吡啶阳离子(MMP+)诱导建立帕金森病细胞模型,检测SH-SY5Y细胞中lncRNA KCNQ1OT1、miR-132-5p表达、活性氧(ROS)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平、凋亡率及Bcl-2、Bax蛋白表达,验证lncRNA KCNQ1OT1、miR-132-5p的调控关系。结果与Con组相比,MMP+组lncRNA KCNQ1OT1、miR-132-5p表达量较高(P<0.05)。低表达lncRNA KCNQ1OT1、干扰miR-132-5p表达均可减轻MMP+诱导的SH-SY5Y细胞氧化应激及炎性损伤,抑制细胞死亡,lncRNA KCNQ1OT1靶向正调控miR-132-5p表达,miR-132-5p过表达逆转了lncRNA KCNQ1OT1低表达对MMP+诱导SK-N-SH细胞氧化应激、炎症损伤及凋亡。结论lncRNA KCNQ1OT1通过靶向抑制miR-132-5p表达减轻了MMP+诱导SK-N-SH细胞氧化应激、炎症损伤,抑制了细胞凋亡。

LncRNA MIR22HG调节miR-132-3p/TLR2轴对急性心肌梗死小鼠心肌细胞凋亡和心室重构的影响

目的:探讨长链非编码RNA miR-22宿主基因(lncRNA MIR22HG)调节miR-132-3p/Toll样受体2(TLR2)轴对急性心肌梗死(AMI)小鼠心肌细胞凋亡和心室重构的影响。方法:取C57BL/6J小鼠随机分为sham组、AMI组、AMI+sh-NC组、AMI+shMIR22HG组、AMI+sh-MIR22HG+antagomir-NC组、AMI+sh-MIR22HG+antagomir-132-3p组,每组10只,除去sham组外,其它组都进行冠状动脉左前降支结扎,sham组只开胸不结扎冠状动脉,其中AMI+sh-NC组、AMI+sh-MIR22HG组、AMI+shMIR22HG+antagomir-NC组、AMI+sh-MIR22HG+antagomir-132-3p组小鼠分别相对应的对尾静脉注射sh-NC、sh-MIR22HG、sh-MIR22HG+antagomir-NC、sh-MIR22HG+antagomir-132-3p。超声心动图评估小鼠心室重构和心脏功能;HE染色和Masson染色观察心肌组织病理学变化及纤维化;RT-qPCR检测心肌组织MIR22HG、miR-132-3p表达;TUNEL法检测心肌细胞凋亡;Western blotting检测心肌组织B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、激活型半胱氨酸蛋白酶-3(cleved caspase-3)/半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)、Ⅰ型胶原蛋白(collagenⅠ)、collagenⅢ和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达;双荧光素酶报告基因实验分别验证MIR22HG和miR-132-3p、miR-132-3p和TLR2的关系。结果:与sham组比较,AMI组小鼠心功能显著降低,心肌组织损伤、心肌纤维化加重,心肌细胞凋亡率、MIR22HG、TLR2、cleved caspase-3/caspase-3、collagenⅠ、collagenⅢ和α-SMA蛋白表达水平显著升高,miR-132-3p和Bcl-2蛋白表达降低(P<0.05);与AMI+sh-NC组比较,AMI+sh-MIR22HG组小鼠心功能改善,心肌组织损伤、心肌纤维化减轻,心肌细胞凋亡率、MIR22HG、TLR2、cleved caspase-3/caspase-3、collagenⅠ、collagenⅢ和α-SMA蛋白表达水平显著降低,miR-132-3p和Bcl-2蛋白表达上升(P<0.05);下调miR-132-3p减弱了敲减MIR22HG对心肌组织的保护作用;双荧光素酶报告基因实验结果显示,MIR22HG靶向调控miR-132-3p表达,miR-132-3p靶向负调控TLR2表达。结论:抑制MIR22HG表达可通过调节miR-132-3p/TLR2轴抑制AMI小鼠心肌细胞凋亡,改善小鼠心室重构。

lncRNA SNHG5和miR-132-3p在子痫前期病人胎盘组织中的表达关系研究

目的:观察长链非编码RNA小核仁RNA宿主基因5(lncRNA SNHG5)和miR-132-3p在子痫前期(PE)病人胎盘组织中的表达,分析二者的相关性及对PE的诊断价值。方法:选取112例PE病人作为研究对象,根据PE严重程度分为重度组58例和轻度组54例,另外选取同期健康妊娠孕妇60例作为对照组。采用实时荧光定量PCR检测胎盘组织中lncRNA SNHG5和miR-132-3p表达;Pearson相关分析观察PE病人胎盘组织中lncRNA SNHG5与miR-132-3p的相关性,及lncRNA SNHG5、miR-132-3p与临床指标的相关性;ROC曲线分析lncRNA SNHG5和miR-132-3p水平对PE的诊断价值。结果:轻度组和重度组PE病人24 h尿蛋白、收缩压以及舒张压水平均高于对照组(P<0.05);重度组收缩压、舒张压均高于轻度组(P<0.05)。轻度组、重度组lncRNA SNHG5水平低于对照组(P<0.05),miR-132-3p水平高于对照组(P<0.05);重度组lncRNA SNHG5水平低于轻度组(P<0.05)。胎盘组织中lncRNA SNHG5、miR-132-3p表达与PE病人24 h尿蛋白、收缩压和舒张压均有相关关系(P<0.05~P<0.01),与年龄、孕周和体质量指数无明显相关关系(P>0.05)。PE病人胎盘组组织中lncRNA SNHG5与miR-132-3p表达呈负相关关系(r=-0.509,P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,胎盘组织中lncRNA SNHG5、miR-132-3p诊断PE的曲线下面积分别为0.865、0.883,截断值分别为0.93、1.44,敏感度分别为87.9%、79.3%,特异性分别为71.7%、83.3%;二者联合诊断PE的曲线下面积为0.921,敏感度和特异性分别为89.7%、81.7%。结论:PE病人胎盘组织中lncRNA SNHG5呈低表达,miR-132-3p呈高表达,且二者呈负相关关系,为PE的诊断和靶向治疗提供了新的思路。

miR-132-3p靶向调节Ptch1减轻慢性压迫性神经损伤小鼠神经性疼痛

背景:神经病理性疼痛的发病机制复杂,病理过程繁多,miR-132在神经病理性疼痛传导通路中异常表达,影响疼痛的发生、发展过程。目的:探讨miR-132-3p在慢性压迫性神经损伤小鼠神经性疼痛中所发挥的作用及机制。方法:①小鼠小胶质细胞BV2经100μg/L脂多糖刺激建立活化模型,采用Western blot检测小胶质细胞激活标记物IBA1的表达,RT-qPCR检测miR-132-3p的表达。将miR-132-3p mimic或inhibitor分别转染至BV2细胞,采用Western blot检测IBA1以及P2X4R的表达。预测并验证miR-132-3p的靶向调节作用,将Ptch1表达载体pcDNA-Ptch1或si-Ptch1转染BV2细胞24 h后用脂多糖刺激培养24 h,采用Western blot检测IBA1、P2X4R以及Shh信号通路标记蛋白的表达。BV2细胞共转染miR-132-3p-mimic和pcDNA-Ptch124 h后用脂多糖刺激培养24 h,采用Western blot检测上述蛋白的表达。②30只C57BL/6小鼠随机分为对照组(n=6),假手术组(n=6),模型组(n=6),NC-mimic组(n=6),miR-132-3p-mimic组(n=6),后两组经鞘内注射NC-mimic和miR-132-3p-mimic,检测各组小鼠机械缩足反射阈值和热阈值,行为学检测后取背根神经节,采用RT-qPCR检测miR-132-3p的表达,Western blot检测Ptch1、P2X4R和Shh通路标记蛋白的表达,进一步验证miR-132-3p在慢性压迫性神经损伤小鼠神经性疼痛中发挥的作用及机制。结果与结论:①与对照组比较,脂多糖刺激促进BV2细胞的激活(P<0.05),下调miR-132-3p的表达(P<0.05);②miR-132-3p通过靶向调节Ptch1抑制Shh信号通路的激活,并进一步抑制BV2细胞的激活以及P2X4R的表达,过表达Ptch1可以逆转miR-132-3p-mimic的作用(P<0.05);③成功建立慢性压迫性神经损伤模型,与注射NC-mimic组相比,鞘内注射miR-132-3p-mimic下调Ptch1的表达(P<0.05),抑制Shh信号通路的激活(P<0.05),减少P2X4R的表达(P<0.05),并显著提高慢性压迫性神经损伤小鼠的机械缩足反射阈值和热阈值(P<0.01);④结果表明,miR-132-3p通过靶向调节Ptch1抑制Shh信号通路的激活,减轻慢性压迫性神经损伤小鼠的神经性疼痛。

精神分裂症患者血清miR-132-3p和miR-34a-5p表达水平与认知功能以及诊断的相关性研究

目的探讨血清微小核糖核酸(micro RNA,miR)-132-3p,miR-34a-5p表达与精神分裂症患者认知功能的关系,分析其诊断精神分裂症的价值。方法选择2019年2月~2021年10月武汉钢铁(集团)公司第二职工医院收治的208例精神分裂症患者(精神分裂症组)和同期71例健康体检者(对照组)。检测血清miR-132-3p和miR-34a-5p表达,Pearson相关性分析其与精神分裂症患者阳性和阴性症状量表(positive and negative symptom scale,PANSS)、精神分裂症认知功能成套测验(采用MATRICS consensus cognitive battery,MCCB)、Stroop色词测验评分相关性。受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线分析miR-132-3p和miR-34a-5p诊断精神分裂症的价值。结果精神分裂症组血清miR-132-3p(3.26±0.84),miR-34a-5p(5.02±1.39)表达均高于对照组(1.05±0.33,1.62±0.5),差异有统计学意义(t=21.782,20.276,均P<0.05);精神分裂症组MCCB,Stroop色词测验评分均低于对照组(t=6.651~16.778,均P<0.05)。精神分裂症患者血清miR-132-3p,miR-34a-5p表达与PANSS总分呈正相关(r=0.502,0.477,均P<0.05),与连线测验、持续操作测验、语言记忆、Stroop单词测验评分呈负相关(r_(miR-132-3p)=-0.501~-0.368,r_(miR-34a-5p)=-0.483~-0.317,均P<0.05)。miR-132-3p,miR-34a-5p诊断精神分裂症的最佳截断值为2.16,3.35,曲线下面积为0.694,0.712,联合miR-132-3p和miR-34a-5p诊断精神分裂症的曲线下面积为0.895,大于单独miR-132-3p,miR-34a-5p诊断(Z=5.747,5.665,均P<0.05)。结论miR-132-3p和miR-34a-5p表达上调,与精神分裂症症状加重以及认知功能受损有关,miR-132-3p和miR-34a-5p联合检测在精神分裂症诊断中具有较高价值。

不同强度超声波联合加巴喷丁治疗神经病理性疼痛的临床疗效及对miR-132和miR-34a表达的影响

目的 探讨不同强度超声波联合加巴喷丁治疗神经病理性疼痛的临床疗效及对miR-132和miR-34a表达的影响。方法 选取2018年12月至2019年12月间河北大学附属医院收治的180例神经病理性疼痛患者,根据使用超声波强度的不同将其分为低、中、高强度超声波组,每组各60例。3组患者均在使用超声波的基础上联合加巴喷丁进行治疗,疗程为3个月。比较治疗前后3组的睡眠干扰、疼痛数字分级评分法评分、疼痛介质(前列腺素E2、5-羟色胺、内皮素1、P物质)水平、复发状况、临床疗效及miR-132和miR-34a的表达水平。结果 治疗前3组睡眠干扰评分、疼痛数字分级评分法评分、疼痛介质水平及miR-132和miR-34a表达水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。治疗后,3组上述检测数值与治疗前比较均有降低,差异有统计学意义(P<0.05);高强度超声波组的检测数值低于中、低强度超声波组,差异有统计学意义(P<0.05)。高强度超声波组临床总有效率为98.3%,中强度超声波组为93.3%,低强度超声波组为86.7%,3组间比较差异具有统计学意义(P<0.05)。低强度超声波组、中强度超声波组、高强度超声波组不良反应发生率分别为8.3%、11.7%、13.3%,3组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。随访调查表明,高强度超声波组、中强度超声波组、低强度超声波组复发率分别为0、5.0%、13.3%,3组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论 不同强度超声波联合加巴喷丁治疗神经病理性疼痛效果显著;随着超声波强度的增加,联合治疗发挥的作用越明显;高强度超声波可有效提高其睡眠质量,显著降低miR-132、miR-34a表达水平,显著改善患者疼痛程度。

下丘脑室旁核miR-132对心力衰竭大鼠外周交感神经兴奋性的影响

目的观察下丘脑室旁核(PVN)灌注miR-132特异抑制剂对心力衰竭(HF)大鼠外周交感神经兴奋性、下丘脑谷氨酸(Glu)含量及心脏功能的影响。方法雄性SD大鼠随机分为正常对照(Ctrl)+人工脑脊液(ACSF)组、HF+ACSF组、HF+miR-132抑制剂组。结扎心脏左冠状动脉前降支制造HF动物模型,HF+miR-132抑制剂组侧脑室插管向PVN内灌注miR-132特异抑制剂,Ctrl+ACSF组和HF+ACSF组灌注等量ACSF,灌注后4 w进行心脏功能指标检测;镜下观察心肌结构变化;检测肾脏交感神经放电(RSNA)、HF标志物脑钠肽(BNP)和外周交感神经兴奋标志物去甲肾上腺素(NE)在血浆中的含量;检测Glu在下丘脑PVN的含量。结果与Ctrl+ACSF组相比,HF+ACSF组心功能指标恶化、外周交感神经兴奋性增强、下丘脑PVN Glu含量升高、心肌组织病理改变明显(P<0.05);HF+miR-132抑制剂组与HF+ACSF组比较,HF大鼠上述检测指标均显著改善(P<0.05)。结论下丘脑PVN miR-132可影响HF大鼠的外周交感神经兴奋性和心脏功能。

MiR-132-3p调控FZD4/Wnt/β-catenin通路抑制类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞增殖和侵袭

目的探究miR-132-3p对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞(RA-FLSs)增值和侵袭的影响及调控机制。方法运用qRT-PCR分析miR-132-3p和卷曲类蛋白受体4(FZD4)RNA表达。将miR-132-3p模拟物、模拟物阴性对照、pcDNA3.1(+)载体以及FZD4过表达载体转染RA-FLSs后分析细胞活力、增殖、侵袭以及Wnt/β-catenin通路相关蛋白表达。再运用双荧光素酶报告实验鉴定miR-132-3p和FZD4关系。结果miR-132-3p在类风湿关节炎患者滑膜组织中的表达低于在正常滑膜组织中的表达,且在RA-FLSs中的表达低于在正常纤维样滑膜细胞中的表达,差异均有统计学意义(P<0.05);miR-132-3p模拟物转染后能抑制WT-FZD43’UTR组的荧光素酶活性,差异有统计学意义(P<0.05),但miR-132-3p模拟物对WT-FZD43'UTR组的荧光素酶活性无影响,差异无统计学意义(P>0.05);miR-132-3p转染组的RA-FLSs活力、EdU阳性细胞数、侵袭细胞数和β-catenin、c-Myc和CyclinD1蛋白表达明显低于miR-NC转染组,差异均有统计学意义(P<0.05),但是这些指标在miR-132-3p和FZD4共转染组中的表达又明显高于miR-132-3p和pcDNA共转染组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论MiR-132-3p通过抑制FZD4/Wnt/β-catenin通路激活来调控RA-FLSs增殖和侵袭。

circ-BRWD1靶向调控作用miR-132-3p介导FOXO1成骨

目的:环状RNA-BRWD1(circ-BRWD1)是否靶向调控miR-132-3p介导FOXO1成骨。方法:PMOP组和对照组分别取骨,建立BMSCs的体外培养体系后,鉴定BMSCs,以检测BMSCs成骨能力,检测对照组和PMOP组BMSCs的circ-BRWD1、miR-132-3p、FOXO1相对表达值,网上找到circ-BRWD1与miR-132-3p、miR-132-3p与FOXO1的结合靶点,荧光素酶报告基因实验进一步验证。将pc-circ-BRWD1与agomiR-132-3p(模拟物)共转染入BMSCs后检测FOXO1的表达水平:RT-qPCR分析检测各组中FOXO1的相对表达。将pc-circ-BRWD1与agomiR-132-3p或sh-FOXO1共转染BMSCs后检测特异性成骨分化相关因子Runx2的表达水平。结果:ARS、ALP逐渐升高。对照组和PMOP组BMSCs的相对表达值:circ-BRWD1、FOXO1降低,miR-132-3p升高。荧光素酶报告基因示miR-132-3p可显著抑制pMIR-circ-BRWD1-WT的荧光素酶活性,miR-132-3p可显著抑制pMIR-FOXO1-WT的荧光素酶活性,过表达miR-132-3p显著下调FOXO1表达,而过表达circ-BRWD1则上调FOXO1表达。Runx2的表达水平在过表达circ-BRWD1中升高,在共转染过表达circ-BRWD1+miR-132-3p中降低,在共转染过表达circ-BRWD1+敲除FOXO1中降低。结论:circ-BRWD1可以靶向调控miR-132-3p并增强FOXO1的表达,从而增强成骨,预防骨质疏松症。

川崎病患儿外周血LncRNA SNHG5 miR-132的差异表达及临床意义

目的研究川崎病(KD)患儿外周血长链非编码RNA(LncRNA)SNHG5、微小RNA(miR)-132的差异表达及临床意义。方法选择2016年1月至2020年12月在苏州市中西医结合医院儿科确诊的62例KD患儿作为KD组,另选取同期进行健康体检的80例健康儿童作为对照组。采用荧光定量聚合酶链式反应检测两组受试者外周血LncRNA LINC00999、miR-6780、LncRNA PSORS1C3、miR-216a、LncRNA SNHG5、miR-132、miR-92的表达水平,采用超声心动图评估KD患儿的冠状动脉病变(CAL)情况并分为CAL组和无CAL(NCAL)组;采用Pearson检验分析LncRNA SNHG5与miR-132的相关性;采用受试者工作特征(ROC)曲线分析lncRNA SNHG5及miR-132对KD及KD合并CAL的诊断价值。结果KD组外周血中LncRNA SNHG5的表达水平高于对照组,miR-132的表达水平低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。LncRNA LINC00999、miR-6780、LncRNA PSORS1C3、miR-216a、miR-92表达水平与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05);KD组外周血中LncRNA SNHG5与miR-132的表达水平呈负相关(r=-0.527,P<0.001);KD组中CAL组患儿外周血中LncRNA SNHG5的表达水平高于NCAL组,miR-132的表达水平低于NCAL组,差异有统计学意义(P<0.05)。经ROC曲线分析,LncRNA SNHG5及miR-132的表达水平对KD(截断值分别为1.205、0.871,灵敏度分别为86.25%、75.00%,特异度分别为88.71%、85.48%)及KD合并CAL(截断值分别为1.138、0.643,灵敏度分别为63.46%、67.31%,特异度分别为80.00%、80.00%)均具有诊断价值。结论KD患儿外周血中LncRNA SNHG5表达增加、miR-132表达降低,两者可作为诊断KD及KD合并CAL的标志物。

miR-132靶向调控Ezrin抑制卵巢癌细胞增殖、促进凋亡的实验研究

目的:探讨微小核糖核酸分子(miRNA)-132在卵巢癌中生物学作用和作用靶点。方法:收集22例卵巢癌及癌旁非肿瘤组织标本,RT-PCR检测miR-132表达量;RT-PCR检测人正常卵巢上皮细胞和卵巢癌细胞系中miR-132表达量;选择miR-132表达量最高或最低的卵巢癌细胞株,分别转染阴性对照质粒(NC)和miR-132 mimic质粒,RT-PCR检测转染后miR-132表达量;CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,Western blot检测Ezrin蛋白表达。结果:卵巢癌组织中miR-132表达量显著低于癌旁非肿瘤组织,而卵巢癌细胞系中miR-132表达量显著低于正常卵巢上皮细胞,差异均有统计学意义(P<0.05);选择卵巢癌细胞株中miR-132表达量最低卵巢癌SKOV3细胞株进行基因转染,与转染阴性对照质粒相比,转染miR-132 mimic质粒后miR-132表达量显著上升,细胞增殖显著降低,细胞凋亡显著增加,差异均有统计学意义(P<0.05);Western blot结果显示,上调miR-132表达后,卵巢癌SKOV3细胞株中Ezrin蛋白表达显著上升(P<0.05)。结论:在卵巢癌中,miR-132可能作为一种抑癌基因通过靶向调控Ezrin抑制卵巢癌细胞增殖、促进凋亡。

miR-132诱导动脉粥样硬化中血管内皮细胞的促炎症过程

目的:探讨miR-132能否调控动脉粥样硬化的促炎性过程。方法:用miR-132模拟物和抑制剂转染人脐静脉内皮细胞,然后根据实验要求用或不用肿瘤坏死因子α(TNFα)处理,分从mRNA和蛋白水平检测SIRT1及其下游基因的表达量。结果:与对照组相比,转染miR-132的内皮细胞中,3′UTR荧光素酶活性(0.338±0.036)显著下降(P=0.000)。在人脐静脉内皮细胞中,miR-132能在mRNA水平及蛋白水平抑制SIRT1的表达(P<0.01)。同样,SREB、脂肪酸合酶及HMGCR的表达均出现下降。结论:miR-132直接作用于SIRT1的mRNA。在人脐静脉内皮细胞中,miR-132通过抑制SIRT1、SREBP-1c及其下游调控基因包括FASN和HMGCR的表达,控制脂肪生成和胆固醇生成。miR-132抑制SIRT1的表达,参与内皮细胞中脂质代谢依赖性的促炎性过程。miR-132可能是种新型的靶向治疗AS的方法。

Hsa-miR-132通过靶向FOXA1基因影响食管癌细胞的增殖和侵袭

目的:探讨hsa-miR-132(miR-132)对人食管癌细胞增殖和侵袭的影响及其可能的机制。方法:构建pCDNA3.1(+)-miR-132表达载体并转染高转移潜能的人食管癌细胞KYSE150,G418筛选稳定过表达miR-132的KYSE150细胞。软琼脂克隆形成实验和Transwell小室实验检测KYSE150细胞的增殖和侵袭,Real-time PCR和Western blotting检测miR-132和叉头框蛋白A1基因(forkhead box protens A1,FOXA1)在KYSE150细胞中的表达,双荧光素酶报告基因分析和Western blotting检测过表达miR-132对FOXA1的调控作用。结果:成功构建pCDNA3.1(+)-miR-132质粒,获得稳定过表达miR-132的KYSE150细胞。亲本KYSE150细胞中miR-132低表达,而FOXA1蛋白高表达。与转染空载体和未转染KYSE150细胞相比,转染pCDNA3.1(+)-miR-132不影响KYSE150细胞的增殖(13.9±0.33 vs 15.4±0.11、17.1±0.20,P>0.05),但细胞体积较小且表面比较光滑;其可显著降低KYSE150细胞的侵袭能力[(55±1.6)vs(129.0±3.1)、(124.0±2.8)个细胞,P<0.01]。miR-132能够作用于FOXA1 3'-UTR,从而抑制内源性FOXA1的表达。结论:食管癌KYSE150细胞低表达miR-132,外源性过表达miR-132可负向调控FOXA1的表达,从而抑制KYSE150细胞的侵袭能力。