miR-15b-3p靶向CMTM6对胃癌细胞上皮-间充质转化的影响

目的探讨miR-15b-3p靶向趋化素样因子超家族6(CMTM6)对胃癌细胞上皮-间充质转化(EMT)的影响。方法采用实时荧光定量PCR法检测人胃癌细胞SGC-7901、BGC-823、MKN-1及人正常胃黏膜上皮细胞GES-1中miR-15b-3p和CMTM6表达水平。采用双荧光素酶报告基因实验检测miR-15b-3p和CMTM6的靶向关系。将BGC-823细胞随机分为对照组(不做处理)、miR-15b-3p抑制剂组(转染miR-15b-3p抑制剂)、miR-15b-3p抑制剂+shRNA-CMTM6组(转染miR-15b-3p抑制剂和shRNA-CMTM6)。分别采用MTT实验、细胞划痕愈合实验、Transwell实验检测细胞的增殖、迁移和侵袭能力。采用蛋白质印迹法检测EMT相关蛋白表达水平。结果与GES-1细胞相比,SGC-7901、BGC-823和MKN-1细胞中miR-15b-3p和CMTM6 mRNA的相对表达量均显著升高(P均<0.05)。双荧光素酶报告基因实验检测结果显示,与miR-NC+CMTM6-WT组相比,miR-15b-3p抑制剂+CMTM6-WT组细胞的相对荧光素酶活性显著降低(P<0.05)。与对照组相比,miR-15b-3p抑制剂组细胞中miR-15b-3p和CMTM6mRNA的相对表达量均显著降低(P均<0.05);与miR-15b-3p抑制剂组相比,miR-15b-3p抑制剂+shRNA-CMTM6组细胞中miR-15b-3p的相对表达量无显著变化(P>0.05),而CMTM6 mRNA的相对表达量显著降低(P<0.05)。与对照组相比,miR-15b-3p抑制剂组的细胞增殖抑制率升高,细胞划痕愈合率降低,细胞侵袭数目减少,N-cadherin和Vimentin蛋白表达水平均降低,E-cadherin蛋白表达水平升高,差异均具有统计学意义(P均<0.05)。与miR-15b-3p抑制剂组相比,miR-15b-3p抑制剂+shRNA-CMTM6组的细胞增殖抑制率升高,细胞划痕愈合率降低,细胞侵袭数目减少,N-cadherin和Vimentin蛋白表达水平均降低,E-cadherin蛋白表达水平升高,差异均具有统计学意义(P均<0.05)。结论miR-15b-3p表达下调可通过靶向CMTM6而抑制胃癌细胞的增殖、迁移、侵袭能力及EMT进程。

联合microRNA测序及体外实验探究miR-15b介导PINK1/Parkin线粒体自噬通道在心力衰竭过程中的作用机制

目的:探究miR-15b介导PINK1/Parkin线粒体自噬通道在心力衰竭过程中的作用机制,寻找防治心衰的新靶点。方法:通过高通量测序检测心衰患者与健康志愿者体内表达差异microRNA;体外实验培养HL-1心肌细胞,通过AngII诱导心肌细胞损伤模型,采用细胞转染技术过表达和抑制miR-15b水平,利用qRT-PCR检测miR-15b转染效能及在各组的表达水平;使用双荧光素酶报告基因实验验证miR-15b与PINK1靶标关系;运用WesternBlot检测自噬蛋白Beclin-1、LC3B及线粒体自噬通道蛋白PINK1、Parkin等表达水平;运用免疫荧光法检测心肌细胞PINK1、Parkin蛋白表达情况。结果:心衰患者和健康志愿者外周血中microRNA表达存在明显差异,其中心衰患者外周血清miR-15b水平上调明显[log2(Fold_change)>1;P<0.01],通过对miR-15b靶基因进行预测,发现PINK1是其靶标,并通过双荧光素酶报告基因实验进一步确定miR-15b与PINK1之间的靶向关系。细胞实验中,与空白组相比,模型组miR-15b的表达增多(P<0.05),自噬蛋白LC3B、Beclin-1水平下降(P<0.01),线粒体自噬通道蛋白PINK1、Parkin水平下降(P<0.01);与模型组相比,转染miR-15b mimics后上述趋势显著增强(P<0.05);转染miR-15b inhibitor后可逆转上述趋势(P<0.01)。结论:miR-15b可通过介导PINK1/Parkin线粒体自噬水平信号通道调控自噬水平,可能成为心力衰竭潜在的治疗靶点。

唾液miR-15b与口腔鳞状细胞癌cleaved caspase-3表达及临床意义

目的 分析口腔鳞状细胞癌(OSCC)患者唾液miR-15b和组织cleaved caspase-3表达及与预后的关系。方法 收集2016年5月至2020年6月期间我院收治的OSCC患者154例(OSCC组),另收集103例健康志愿者作为对照组。分别采用实时荧光定量PCR(qPCR)及免疫组化染色法检测唾液miR-15b水平及组织cleaved caspase-3表达。受试者工作特征(ROC)曲线分析唾液miR-15b表达诊断OSCC的效能。分析唾液miR-15b表达与口腔鳞癌临床病理特征的关系,采用多因素Cox回归分析影响OSCC预后的因素。结果 OSCC患者唾液miR-15b水平显著低于对照组(0.72±0.33 vs. 1.00±0.23,P<0.001)。ROC曲线分析唾液miR-15b水平诊断OSCC的曲线下面积为0.760(0.703~0.817)。与癌旁组织比较,OSCC组织中caspase-3、cleaved caspase-3蛋白表达水平显著升高(P<0.001)。经Spearman相关性分析,OSCC患者的唾液miR-15b水平与OSCC组织cleaved caspase-3蛋白表达呈负相关(r=-0.321,P<0.001)。唾液miR-15b表达与肿瘤直径和预后有关(P<0.05)。miR-15b低表达组患者5年DFS率和5年OS率分别为28.57%和44.16%,高表达组患者5年DFS率和5年OS率分别为62.34%和81.82%,差异有统计学意义(P<0.001)。多因素Cox风险比例回归模型结果显示TNM分期、根治性手术、唾液miR-15b水平均是影响OSCC患者OS的独立预后因素(P<0.05)。结论 OSCC患者唾液miR-15b水平与组织cleaved caspase-3相关,可作为预测OSCC患者预后的生物标志物。

支气管肺发育不良早产儿血浆miR-15b、VEGF水平变化及临床意义

目的分析支气管肺发育不良早产儿血浆miR-15b、血管内皮生长因子(VEGF)水平变化及临床意义。方法收集2020年3月—2022年3月首都医科大学附属北京儿童医院新生儿内科收治的早产儿148例,根据是否存在支气管肺发育不良分为支气管肺发育不良组(不良组)65例和发育正常组(正常组)83例。实时荧光定量聚合酶链反应检测血浆miR-15b表达,酶联免疫吸附试验检测血浆VEGF水平,收集相关临床资料。Pearson相关系数描述血浆miR-15b与VEGF之间相关性,多因素Logistic回归分析影响早产儿支气管肺发育不良的因素。受试者工作特征曲线(ROC)分析血浆miR-15b、VEGF辅助诊断早产儿支气管肺发育不良的价值。结果不良组血浆miR-15b表达高于正常组,VEGF水平低于正常组(t/P=12.754/<0.001、31.023/<0.001),血浆miR-15b表达与VEGF呈负相关(r/P=-0.617/<0.001)。胎龄大、氧分压高、VEGF高是早产儿支气管肺发育不良的保护因素,miR-15b高是危险因素[OR(95%CI)=0.899(0.845~0.958)、0.521(0.356~0.764)、0.600(0.442~0.814)、1.540(1.220~1.945)]。血浆miR-15b、VEGF及二者联合诊断早产儿支气管肺发育不良的曲线下面积分别为0.728、0.756、0.931,且二者联合高于单独诊断(Z/P=4.543/<0.001、4.207/<0.001)。结论支气管肺发育不良早产儿血浆miR-15b表达上调,VEGF水平降低,miR-15b可能负向调控VEGF参与支气管肺发育不良过程。

miR-15b通过靶向ABCG2信号通路抑制胶质瘤干细胞迁移及侵染

背景:mi R-15b在肿瘤起始和发展过程中发挥重要作用,于是作者推测miR-15b可能参与调解胶质瘤干细胞细胞的迁移和侵染,而这目前尚无相关报道,并且其机制也不清楚。目的:探讨mi R-15b对胶质瘤干细胞迁移和侵染的影响及相关分子机制。方法:实时荧光定量PCR检测胶质瘤组织、正常成人脑组织,胶质瘤干细胞及非胶质瘤干细胞中mi R-15b的表达情况。(1)分别以ABCG2特异性si RNA、对照si RNA转染胶质瘤干细胞;(2)分别以mi R-15抑制物、mi R-15模拟物及mi R-对照分别转染胶质瘤干细胞。转染后48 h,Transwell检测细胞迁移和侵染能力,ELISA法和明胶酶谱实验检测细胞培养上清中基质金属蛋白酶2/9蛋白量及活性变化。将胶质瘤干细胞及非胶质瘤干细胞分别注入裸鼠皮下,30 d内观察成瘤情况。结果与结论:(1)与正常脑组织相比,胶质瘤中mi R-15b的表达明显较低且与胶质瘤所处阶段呈负相关性。与非胶质瘤干细胞相比,胶质瘤干细胞中mi R-15b的表达显著下调;(2)与mi R-对照组比较,mi R-15b模拟物组细胞迁移及侵染能力显著下降(P<0.01),mi R-15b抑制物组细胞迁移及侵染能力显著增加(P<0.01);Target Scan生物学软件预测表明ABCG2为mi R-15b潜在的靶基因;(3)与对照si RNA组比较,ABCG2 si RNA组细胞迁移及侵染能力显著下降(P<0.01);(4)ELISA检测表明,上调mi R-15b基因表达显著抑制基质金属蛋白酶2/9蛋白的表达;(5)ELISA法和明胶酶谱实验检测结果表明,ABCG2 si RNA转染可显著抑制基质金属蛋白酶2/9蛋白的活性,但不影响其表达量;(6)裸鼠体内实验表明,胶质瘤干细胞具有更强的成瘤能力;(7)结果表明,mi R-15b通过靶作用于ABCG2调控胶质瘤干细胞的迁移和侵染,上调mi R-15b表达可抑制胶质瘤干细胞的迁移和侵染。

口腔鳞状细胞癌组织中miR-15b的表达及意义

目的探讨microRNA-15b(miR-15b)在口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)组织及其对应癌旁组织中的表达及其临床诊断意义。方法收集46例经病理证实为OSCC组织及对应的癌旁组织,分别提取组织内的mRNA,采用qRT-PCR技术检测组织中miR-15b的表达;分析OSCC癌灶组织内miR-15b表达及与临床病理参数的相关性。结果 OSCC癌灶组织内miR-15b表达与对应癌旁组织相比明显下降(P=0.004 1);OSCC癌灶组织内miR-15b表达与患者WHO病理分级有关(P=0.042),而与患者性别、年龄、TNM分期、吸烟、淋巴结转移及癌灶组织内炎症细胞浸润均无相关性(P>0.05)。结论 miR-15b在OSCC癌灶组织内低表达,且与肿瘤分化相关;miR-15b有望成为OSCC早期诊断的潜在指标。

miR-15b-5p靶向HDGF抑制胃癌细胞增殖并促进凋亡

目的:研究miR-15b-5p和HDGF对胃癌细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法:采用qRT-PCR法检测胃癌细胞中miR-15b-5p的表达;通过软件预测miR-15b-5p的下游靶基因;将对数生长期AGS细胞随机分为miR-15b-5p组(转染miR-15b-5p模拟物)、miR-NC组(转染阴性对照)、Scramled组(转染阴性对照)、shHDGF组(转染质粒pcDNA3.1-shHDGF)、Vector+miR-15b-5p组(miR-15b-5p模拟物和pcDNA3.1载体共转染)、HDGF+miR-15b-5p组(miR-15b-5p模拟物和HDGF共转染),均以脂质体法转染;MTT法和流式细胞术检测各组细胞的增殖和凋亡变化;Western blot法和双荧光素酶报告基因实验分析miR-15b-5p对HDGF的靶向调控作用。结果:与正常胃黏膜上皮细胞GES-1相比,胃癌细胞SGC-7901和AGS中miR-15b-5p低表达,且过表达miR-15b-5p可抑制AGS细胞的增殖并促进凋亡。HDGF是miR-15b-5p的潜在靶标,miR-15b-5p能够抑制HDGF表达。而回补HDGF可逆转miR-15b-5p抑制胃癌细胞增殖与促进凋亡的作用。结论:miR-15b-5p可抑制胃癌细胞的增殖并促进凋亡,其作用机制可能与靶向抑制HDGF有关,提示miR-15b-5p可能成为胃癌诊断与治疗的潜在靶点。

miR-15b在急性脑梗死患者血清中的表达及临床意义

目的探讨miR-15b在急性脑梗死患者血清中的表达及临床意义。方法选取2018年1~12月广西中医药大学第一附属医院(以下简称“我院”)收治的98例急性脑梗死患者为急性脑梗死组,同期选取我院98例健康体检者为对照组。采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测两组血清miR-15b表达;受试者工作特征曲线(ROC)评价miR-15b诊断急性脑梗死的价值;分析血清miR-15b表达与急性脑梗死临床病理特征的关系。结果两组血清miR-15b分别为(1.28±0.38)、(2.33±0.72),急性脑梗死组血清miR-15b表达高于对照组(P<0.05)。miR-15b诊断急性脑梗死的ROC曲线下面积为0.817,95%CI=0.721~1.438,敏感度为91.06%,特异度为79.35%。不同性别、年龄患者血清miR-15b表达差异无统计学意义(P>0.05);不同梗死程度、梗死体积及预后患者血清miR-15b表达差异有统计学意义(P<0.05)。结论miR-15b在急性脑梗死患者血清中呈高表达,且与梗死程度、梗死体积及预后可能有关,是诊断急性脑梗死的潜在血清学标志物。

急性脑梗死患者血清中miR-15b表达变化及临床意义

目的:探讨急性脑梗死患者血清中miR-15b表达变化及临床意义。方法:选取2016年3月至2017年9月,在我院神经内科住院治疗的急性脑梗死患者165例,同期,从体检中心选取健康体检者50例作为对照组,根据美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分将患者分为轻型组(n=72)、中型组(n=69)和重型组(n=24),根据全脑数字减影血管造影(DSA)检查将患者分为侧支循环未完全组(n=67)和侧支循环建立组(n=98),依据影像学检查结果分为小梗死组(n=57)、中梗死组(n=69)和大梗死组(n=39),实时荧光定量PCR术检测血清中miR-15b表达,酶联免疫吸附试验(ELISA法)检测血清中血管内皮生长因子(VEGF)和血管生成素2(Ang-2)浓度。结果:急性脑梗死患者血清中miR-15b相对表达量、VEGF和Ang-2浓度均高于对照组(P<0. 05);侧支循环建立组患者血清中miR-15b相对表达量低于侧支循环未完全组,而VEGF和Ang-2浓度高于侧支循环未完全组(P<0. 05);与轻型组比较,中型组和重型组患者血清中miR-15b相对表达量升高,而VEGF和Ang-2浓度降低,与中型组比较,重型组患者血清中miR-15b相对表达量升高,而VEGF和Ang-2浓度降低,差异均有统计学意义(P<0. 05);与小梗死组比较,中梗死组和大梗死组患者血清中miR-15b相对表达量升高,而VEGF和Ang-2浓度降低(P<0. 05),与中梗死组比较,大梗死组患者血清中miR-15b相对表达量升高,而VEGF和Ang-2浓度降低(P<0. 05)。结论:miR-15b在急性脑梗死患者血清中呈高表达,可能通过靶蛋白VEGF而参与侧支循环建立,且与患者病情严重程度及脑梗死体积呈正相关。

新生儿缺氧缺血性脑病血清miR-15b、miR-424表达水平及其临床意义

目的检测新生儿缺氧缺血性脑病(HIE)患儿血清中miR-15b、miR-424表达水平,探讨二者与HIE发生发展和预后的关系。方法选取2015年4月—2017年4月我院儿科收治的68例HIE患儿为试验组,根据患儿临床HIE分度标准分为轻度组、中度组和重度组;另选取68名在本院同期分娩的正常足月健康婴儿为对照组。收集两组临床资料,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测HIE患儿和健康新生儿血清中miR-15b、miR-424表达水平;分析HIE患儿血清miR-15b、miR-424水平与各生化指标的相关性。出生后28 d测定新生儿神经行为量表(NBNA)评分,评估新生儿神经行为,分析miR-15b、miR-424表达水平与HIE患儿NBNA评分、预后的关系。结果HIE患儿血清miR-15b、miR-424表达水平均低于健康婴儿(P<0.05);重度组、中度组HIE患儿血清miR-15b、miR-424表达水平均低于轻度组(P<0.05),重度组HIE患儿血清miR-15b、miR-424表达水平均低于中度组(P<0.05)。重度组、中度组HIE患儿出生后28 d NBNA评分低于轻度组(P<0.05),重度组HIE患儿出生后28 d NBNA评分低于中度组(P<0.05)。相关性分析显示,血清miR-15b、miR-424表达水平与HIE患儿出生后28 d NBNA评分均呈正相关(P<0.05);预后良好的HIE患儿血清miR-15b、miR-424高表达率均明显高于预后不良的患儿(P<0.05)。结论HIE患儿血清miR-15b、miR-424表达水平均明显下调,与HIE临床分度、出生后28 d NBNA评分有关,且可影响患儿的预后。

lncRNA XIST靶向miR-15b-5p调控细胞凋亡及自噬参与帕金森病发病机制研究

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)X染色体失活特异转录本(XIST)对帕金森病(PD)的潜在分子机制。方法用1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)诱导建立PD模型。用爬杆和转棒法检测小鼠行为变化。四甲基偶氮唑盐法和流式细胞术检测人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y细胞)活力和凋亡。双荧光素酶报告基因法、实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)、Western blot、免疫组化探讨lncRNA XIST在PD中的分子机制。结果PD体内外模型XIST表达上调,miR-15b-5p表达下调。沉默XIST(si-XIST)可缩短小鼠准备向下爬行的时间,延长停留时间。此外,si-XIST也可增加酪氨酸羟化酶阳性(TH+)神经元数。miR-15b-5p是XIST的靶基因。结论si-XIST可通过调控miR-15b-5p抑制PD的自噬和凋亡。

miR-15b在荣昌猪不同体组织中的表达差异及其在C_(2)C_(12)细胞中的动态表达分析

为探究miR-15b在荣昌猪不同体组织中的表达差异及其在C_(2)C_(12)细胞不同发育时期的动态表达变化,本研究采用RT-qPCR方法检测miR-15b在荣昌猪心脏、肝脏、脾脏、肺、肾脏、胃、肌肉、胸腺和小肠组织及其在C_(2)C_(12)细胞增殖和分化过程中的表达水平。结果表明:miR-15b在荣昌猪各组织中均有表达,其中在心脏和胸腺中的表达量最高,在肝脏和肾脏中的表达量最低;miR-15b的表达量在C_(2)C_(12)细胞的整个增殖过程中均显著升高,在C_(2)C_(12)细胞的整个分化过程中先显著升高再显著降低。综上所述,miR-15b在荣昌猪各组织广泛表达,其表达量在C_(2)C_(12)细胞的增殖和早期分化中显著升高,推测miR-15b在C_(2)C_(12)细胞的增殖以及分化早期发挥重要功能。

miR-15b在内皮细胞的功能及其与血管相关性疾病的关系

微小RNA(MicroRNA,miRNA)是长度为22个核苷酸的小片段非编码RNA,作为RNA干扰的参与者之一,其通过在转录后水平调节各种基因的表达,进而对细胞的生命活动产生广泛影响。mi R-15b是mi R-15/16家族一员,是一类在机体各系统、特别是血管内皮系统广泛表达的微小RNA,主要影响细胞的增殖、凋亡、侵袭、成管等行为。文章主要对mi R-15b及相关家族成员在各类细胞、特别是血管内皮细胞的生物学行为、作用机制及mi R-15b在心血管相关疾病的发生、发展及预后等过程中的作用进行了详细阐述。同时,文章对mi R-15b相关家族成员在以胎盘内皮发育异常为病理基础的妊娠期高血压疾病如子痫前期的发病机制中的作用进行了探讨。

循环miR-338-5p、miR-15b-5p和miR-21-5p作为肝细胞癌的潜在肿瘤标记物

目的筛查血浆中能作为肝细胞癌肿瘤标记物的miRNA。方法分为4个阶段：1miRNA芯片筛查肝细胞癌组织中异常表达的miRNA,并根据文献和miRNA芯片结果确定候选miRNA。213对术前和术后7~10 d肝细胞癌患者血浆用定量逆转录-聚合酶链反应（quantitative reverse transcriptionpolymerase chain reaction,qRT-PCR）检测候选miRNA的表达水平,术后表达水平下降的miRNA定为目的miRNA。339例肝细胞癌患者、32例肝硬化患者、25例健康人员血浆进行qRT-PCR,验证目的miRNA在3组人群中的表达差异。4分析目的 miRNA作为肝细胞癌肿瘤标记物的诊断价值,绘制受试者工作曲线并分析其与临床参数的相关性。结果癌组织中40种miRNA表达量增加（〉2倍）,52种miRNA表达量明显下降（〈0.5倍）。结合文献,选取miR-15b-5p、miR-21-5p、miR-338-5p作为候选miRNA。术后3种miRNA表达水平下降,定为目的 miRNA。3组人群测量结果显示miR-15b-5p、miR-21-5p、miR-338-5p在肝细胞癌患者血浆中表达水平明显高于肝硬化患者和健康对照人群。其中miR-338-5p在肝细胞癌与肝硬化、健康人群鉴别时,曲线下面积（area under the curve,AUC）分别为0.762 4（灵敏度：64.10%,特异度：87.50%）和0.906 4（灵敏度：89.74%,特异度：84.00%）。miR-21-5p和miR-338-5p进行联合诊断,特异度可达92.98%。即使在甲胎蛋白（α-fetoprotein,AFP）判定为阴性的肝细胞癌患者,3种miRNA判定为肝细胞癌的灵敏度都比较高。相关性分析结果显示,血浆miR-338-5p水平与AFP水平呈负相关（r=-0.344,P=0.032）。结论循环miR-338-5p、miR-15b-5p、miR-21-5p具有作为肝细胞癌的肿瘤标记物的潜力。

miR-15b-5p靶向CDK4抑制脉络膜黑色素瘤细胞增殖

目的探讨miR-15b-5p通过靶向抑制细胞周期素依赖性激酶4 (CDK4)的表达进而发挥负向调节脉络膜黑色素瘤细胞增殖的作用。方法使用荧光素酶报告分析检测miR-15b-5p与CDK4结合情况。体外培养人眼侵袭性脉络膜黑色素瘤细胞系MUM-2B,分别转染negative control RNA、miR-15b-5p mimics、inhibitor nc RNA和miR-15b-5p inhibitor;采用实时定量PCR检测转染后miR-15b-5p的表达水平;采用Western blotting检测4组细胞中CDK4蛋白的表达量;采用CCK8检测4组细胞的增殖能力;采用流式细胞术检测4组细胞周期情况。结果荧光素酶报告基因分析验证miR-15b-5p能够与CDK4 m RNA 3’UTR结合。与阴性对照组相比,mimics组miR-15b-5p表达显著增加(t=25.01,P <0.000 1),CDK4的蛋白表达水平降低,细胞增殖能力降低,细胞G1期比例增高。而与inhibitor nc组相比,inhibitor组miR-15b-5p表达减少,CDK4表达水平升高,细胞增殖能力增强,细胞G1期比例降低。结论miR-15b-5p能够靶向抑制CDK4的表达,造成肿瘤细胞发生G1期阻滞,从而有效抑制脉络膜黑色素瘤细胞增殖。

过表达miR-15b对斑马鱼血管发育的影响

该研究利用斑马鱼全胚胎原位杂交技术和转基因(VEGFR2:GFP)斑马鱼模式生物,评估miR-15b对斑马鱼早期胚胎发育和后期血管生成的影响。实验结果表明:miR-15b可能是母源性分子,在斑马鱼早期胚胎中高表达,而过表达miR-15b导致斑马鱼血管发育畸形。蛋白免疫印迹和双荧光素酶报告基因检测实验结果显示,miR-15b通过结合VEGFR2 m RNA 3’UTR区降低VEGFR2基因的表达水平,从而调控斑马鱼的血管生成。综上所述,miR-15b在斑马鱼胚胎发育过程中具有重要的作用,特别是对血管系统发育产生影响。该结果可为进一步研究miR-15b在斑马鱼胚胎发育过程的功能提供参考。

LncRNA HOXC-AS3通过miR-15b-5p/E2F3生物学轴促进胃癌细胞的增殖和迁移

背景与目的:胃癌是一种发病率和死亡率均较高的恶性肿瘤。长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)是一类具有调控功能的大分子非编码RNA,在胃癌的转移中发挥着重要的作用。探讨lncRNA HOXC-AS3(lnc-HOXC-AS3)在胃癌中的表达模式,以及通过miR-15b-5p/E2F3生物学轴促进胃癌细胞增殖和转移的分子机制。方法:根据生物信息学分析的方法寻找收集2017年4月—2018年12月安徽医科大学第一附属医院收治并经病理学检查诊断为胃癌的90例患者的胃癌组织中异常表达的lncRNA,并且利用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)检测lnc-HOXC-AS3的表达水平;在对lnc-HOXC-AS3功能的研究中,采用细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)和transwell等方法确定了lnc-HOXC-AS3对胃癌细胞(MGC803)增殖和迁移的影响;在机制上,采用双荧光素酶报告基因检测lnc-HOXC-AS3、miR-15b-5p和E2F3的靶向调控关系。结果:Lnc-HOXC-AS3在胃癌组织和胃癌细胞系中异常高表达。功能上,lnc-HOXC-AS3促进胃癌细胞增殖和迁移,相反,敲低lnc-HOXC-AS3则明显抑制胃癌细胞增殖和迁移。在机制的探讨中,通过双荧光素酶报告基因和一系列体外实验证实lnc-HOXC-AS3通过靶向下调miR-15b-5p的表达,进而解除miR-15b-5p对E2F3的抑制作用,促进了胃癌细胞增殖和迁移。结论:Lnc-HOXC-AS3在胃癌中异常高表达,并通过调控miR-15b-5p/E2F3生物学轴促进胃癌细胞增殖和迁移,渴望成为研究胃癌早期诊断和治疗的靶点。

miR-15b靶向LPAR3对食管癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响

目的探讨miR-15b靶向LPAR3调控食管癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响。方法取对数生长期的人食管癌Eca109细胞分为对照组、miR-15b mimic组、miR-NC组、miR-15b mimic+pcDNA3.1组、miR-15b mimic+pcDNA-LPAR3组;另设对数期生长的人食管上皮细胞HEEpiC为空白组。采用qRT-PCR检测各组细胞中miR-15b和LPAR3 mRNA的表达;应用MTT法、划痕实验和Transwell小室实验分别检测各组细胞的增殖、迁移和侵袭情况;Western blot检测Eca109细胞中LPAR3和增殖、迁移、侵袭相关蛋白(Cyclin D1、MMP-2、MMP-9)的表达。结果与空白组相比,对照组Eca109细胞中miR-15b水平明显降低(1.00±0 vs 0.42±0.03,t=33.486,P<0.01),LPAR3 mRNA水平显著升高(1.00±0 vs 2.33±0.15,t=15.358,P<0.01);与对照组相比,miR-15b mimic组细胞miR-15b水平显著升高(0.42±0.03 vs 4.61±0.38,t=19.039,P<0.01),LPAR3 mRNA(2.33±0.15 vs 1.29±0.13)和蛋白(1.12±0.13 vs 0.35±0.03)水平、细胞增殖率(100.00±0 vs 64.57±6.11)、划痕愈合率(63.45±7.20 vs 36.52±4.29)、Eca109细胞进入Transwell小室下层的数量(155.31±14.23 vs 101.33±11.45)、Cyclin D1(0.85±0.10 vs 0.38±0.05)、MMP-2(0.76±0.08 vs 0.33±0.04)、MMP-9(0.94±0.10 vs 0.41±0.05)蛋白表达均显著降低(t=9.075、9.996、10.044、5.565、5.119、7.281、8.327、8.211,P<0.01);使用pcDNA-LPAR3过表达LPAR3能明显逆转miR-15b mimic对细胞增殖、迁移和侵袭的抑制能力。结论食管癌中过表达miR-15b可能通过下调LPAR3表达,抑制食管癌细胞增殖、迁移和侵袭。

血清miR-15b、miR-29a和CysC在妊娠高血压疾病肾脏损害中的临床诊断价值

目的观察血清miR-15b、miR-29a和胱抑素C(CysC)在妊娠高血压疾病(HDCP)肾脏损害中的临床诊断价值。方法选择2017年1月-2018年12月在上海中医药大学附属第七人民医院妇产科诊治的HDCP患者108例作为HDCP组。根据病情的严重程度分为妊娠高血压组39例、子痫前期轻度组35例和子痫前期重度组34例。选择同期正常妊娠在医院行体检孕妇和健康体检女性分别作为正常妊娠组和健康对照组,每组各30例。采用qRTPCR法检测各组血清miR-15b和miR-29a表达,并分析miR-15b、miR-29a、CysC与HDCP严重程度、肾功能异常、肾功能损害严重程度的关系,分析其诊断肾功能损伤的敏感度和特异度。结果 HDCP组血清miR-15b、CysC和β2-MG表达水平明显高于正常妊娠组、健康对照组(P <0.01),而血清miR-29a表达水平明显低于正常妊娠组、健康对照组(P<0.01)。HDCP患者肾功能异常亚组血清miR-15b、CysC和β2-MG水平明显高于肾功能正常亚组(P<0.01),血清miR-29a水平明显低于肾功能正常亚组(P <0.01)。血清miR-15b、CysC和β2-MG水平随HDCP严重程度、肾功能分期升高而升高,而血清miR-29a水平随HDCP严重程度、肾功能分期升高而降低(P <0.01)。HDCP患者血清miR-15b、miR-29a和CysC表达水平诊断HDCP肾功能损害的效能明显高于β2-MG(P <0.05),而各指标之间差异无统计学意义(P>0.05),三者联合检测HDCP患者肾功能损害的AUC为0.993,敏感度为95.1%,特异度为100%,明显优于单项指标(P <0.01)。结论 miR-15b、miR-29a和CysC参与了妊娠高血压疾病肾脏损害的发生发展过程,联合miR-15b、miR-29a和CysC指标诊断HDCP肾损害具有较高的敏感度和特异度。

miR-15b-5p通过靶向LATS2基因调控前列腺癌细胞侵袭、迁移以及凋亡的分子机制

目的探讨miR-15b-5p靶向大肿瘤抑制分子(LATS2)基因对前列腺癌PC-3细胞侵袭、迁移及凋亡的影响及机制。方法将anti-miR-15b-5p及anti-miR-15b-5p+si-LATS2(同时抑制miR-15b-5p和LATS2表达)转染前列腺癌PC-3细胞,48 h后,通过qRT-PCR检测miR-15b-5p mRNA表达,Transwell小室检测细胞侵袭和迁移能力;膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶(Annexin V-FITC/PI)双染细胞凋亡试剂盒检测细胞凋亡率。双荧光素酶报告系统检测miR-15b-5p与LATS2的靶向关系。Western blotting检测LATS2、β-catenin、MMP-2和Bax蛋白表达。结果 PC-3细胞转染anti-miR-15b-5p后,miR-15b-5p mRNA表达明显降低,细胞侵袭和迁移能力明显降低,细胞凋亡率明显升高(P <0. 05)。miR-15b-5p与LATS2存在靶向关系,抑制LATS2表达后可明显减弱anti-miR-15b-5p对PC-3细胞侵袭、迁移、凋亡及β-catenin、MMP-2和Bax蛋白表达的影响(P <0. 05)。结论抑制miR-15b-5p可明显降低前列腺癌PC-3细胞的侵袭和迁移能力,并诱导细胞凋亡,其机制与靶向LATS2抑制Wnt/β-catenin信号通路有关。