lncRNA DANCR靶向调控miR-193a-3p表达对缺氧诱导的神经细胞氧化损伤的影响

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)DANCR对缺氧诱导的大鼠肾上腺嗜铬细胞PC12氧化损伤的影响及其可能作用机制。方法:选取榆林市星元医院于2019年10月—2021年10月就诊的缺血性脑卒中病人40例为疾病组,以同期30名健康体检者为正常组,检测lncRNA DANCR、miR-193a-3p表达量,Pearson法分析血清lncRNA DANCR与miR-193a-3p的相关性;建立缺氧诱导的PC12细胞损伤模型,si-NC、si-DANCR、miR-NC、miR-193a-3p mimics分别转染至PC12细胞后缺氧处理24 h, si-DANCR+anti-miR-NC、si-DANCR+anti-miR-193a-3p分别共转染至PC12细胞后缺氧处理24 h;实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测lncRNA DANCR、miR-193a-3p表达量;试剂盒检测乳酸脱氢酶(LDH)漏出率、丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性;用凋亡试剂盒检测凋亡率;双荧光素酶报告实验检测lncRNA DANCR、miR-193a-3p靶向关系;蛋白质免疫印迹法(Western Blot)检测cleaved-Caspase-3、cleaved-Caspase-9蛋白表达量。结果:血清中lncRNA DANCR与miR-193a-3p表达呈负相关。缺氧处理后,PC12细胞中lncRNA DANCR表达量升高(P<0.05),miR-193a-3p表达量降低(P<0.05);分别与转染si-NC或miR-NC比较,转染si-DANCR或miR-193a-3p mimics后,缺氧诱导的PC12细胞LDH漏出率、MDA含量、凋亡率、cleaved-Caspase-3、cleaved-Caspase-9蛋白水平降低(P<0.05),SOD活性升高(P<0.05);与共转染si-DANCR+anti-miR-NC比较,共转染si-DANCR+anti-miR-193a-3p后,缺氧诱导的PC12细胞LDH漏出率、MDA含量、凋亡率、cleaved-Caspase-3、cleaved-Caspase-9蛋白水平升高(P<0.05),SOD活性降低(P<0.05)。结论:干扰lncRNA DANCR可通过促进miR-193a-3p表达而抑制氧化应激、细胞凋亡,从而减轻缺氧诱导的PC12细胞损伤,血清中lncRNA DANCR、miR-193a-3p水平对缺血性脑卒中病人具有预测价值,且联合诊断价值更高。

早期宫颈癌患者血清miR-193a-3p、miR-146b-5p的表达及对术后复发的预测效能

目的 探讨miR-193a-3p、miR-146b-5p在早期宫颈癌(ECC)血清中的表达量及其对术后复发的预测价值。方法 选取汉中市人民医院门诊收治的ECC患者(研究组)82例,另选取同期本院体检的健康女性(对照组)74例,比较2组血清miR-193a-3p、miR-146b-5p的表达量。根据是否复发将研究组分为复发亚组(n=23)和未复发亚组(n=59),单因素分析比较2亚组的临床资料和实验室指标;Logistic多因素回归分析影响术后复发的因素;ROC分析血清miR-193a-3p、miR-146b-5p表达量预测术后复发的价值。结果 研究组血清miR-193a-3p、miR-146b-5p表达量均低于对照组(P<0.05)。复发亚组高危型HPV阳性率、FIGO分期、宫颈浸润深度、淋巴结转移及鳞状细胞癌抗原(SCC-Ag)水平均高于未复发亚组(P<0.05),而血清miR-193a-3p和miR-146b-5p的表达量均低于未复发亚组(P<0.05);血清miR-193a-3p和miR-146b-5p的低表达、高危型HPV阳性、SCC-Ag均是影响术后复发的独立危险因素(P<0.05);血清miR-193a-3p、miR-146b-5p表达量预测术后复发的最佳截断值分别为0.57和2.12,二者联合预测的灵敏度、特异度和AUC分别为82.61%,96.61%和0.932。结论 血清miR-193a-3p、miR-146b-5p的表达在ECC患者呈低表达;二者均可作为预测ECC术后复发的敏感指标,且联合预测价值更高。

弥漫性大B细胞淋巴瘤组织中miR-193a-3p、miR-146b-5p的表达量及临床意义探究

目的:探讨分析弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)组织中miR-193a-3p、miR-146b-5p的表达量及临床意义。方法:选取DLBCL患者76例(纳入DLBCL组)及淋巴结反应性增生(RHL)患者70例(纳入RHL组),采用实时荧光定量PCR法检测所有患者淋巴组织中miR-193a-3p、miR-146b-5p的表达水平,并分析二者的表达水平与DLBCL临床特征的关系。结果:miR-193a-3p及miR-146b-5p在DLBCL组中的表达水平均低于RHL组(P<0.05),二者的表达水平与Ann-Arbo分期、国际预后指数(IPI)评分有关。miR-193a-3p、miR-146b-5p的表达水平与DLBCL的临床分期呈负相关,随着miR-193a-3p、miR-146b-5p表达水平的降低,DLBCL临床分期越高(P<0.05)。淋巴组织中miR-193a-3p、miR-146b-5p表达下调是DLBCL临床高分期的危险因子(OR>1,P<0.05)。结论:DLBCL组织中miR-193a-3p、miR-146b-5p表达水平下调,可能参与了DLBCL的发生、发展,二者的表达水平与DLBCL的临床分期有关,可作为DLBCL临床诊治的重要参考依据。

lncRNA ZFAS1靶向miR-193a-3p调控宫颈癌细胞Siha放射敏感性的分子机制研究

目的:探讨lncRNA ZFAS1对宫颈癌细胞放射敏感性的影响以及其作用机制。方法:实验设置pcDNA组、pcDNA-ZFAS1组、si-con组、si-ZFAS1组、IR+si-con组、IR+si-ZFAS1组、si-ZFAS1+anti-miR-con组、si-ZFAS1+anti-miR-193a-3p组、IR+si-ZFAS1+anti-miR-con组、IR+si-ZFAS1+anti-miR-193a-3p组。qRT-PCR检测miR-193a-3p和ZFAS1表达;Western blot检测蛋白表达;流式细胞术检测细胞凋亡;细胞克隆形成实验检测宫颈癌细胞的放射敏感性;双荧光素酶报告实验检测荧光活性。结果:宫颈癌放射抵抗组织和不同剂量射线照射后的宫颈癌细胞中ZFAS1高表达,miR-193a-3p低表达;沉默lncRNA ZFAS1可促进宫颈癌细胞凋亡并增加细胞放射敏感性,促进Cleaved Caspase-3、γ-H2AX表达,抑制Cyclin D1表达。ZFAS1靶向调节miR-193a-3p表达;抑制miR-193a-3p表达逆转了沉默ZFAS1对宫颈癌细胞的放射增敏和细胞凋亡促进作用。结论:lncRNA ZFAS1可增加宫颈癌细胞的放射敏感性,并促细胞凋亡,其机制可能与调控miR-193a-3p有关,为宫颈癌的放疗提供新靶点和新思路。

MiR-193a-3p通过调控S100A4表达对oxLDL诱导的血管内皮细胞损伤影响

目的探讨miR-193a-3p对氧化型低密度脂蛋白(oxLDL)诱导的血管内皮细胞损伤的影响及其作用机制。方法体外培养人脐静脉血管内皮细胞株(EVC-304),使用oxLDL处理EVC-304细胞。采用qRT-PCR与Western blot分别检测miR-193a-3p、S100钙结合蛋白A4(S100A4)的表达水平。分别将miR-NC、miR-193a-3p mimics、si-NC、si-S100A4、miR-193a-3p mimics与pcDNA、miR-193a-3p mimics与pcDNA-S100A4转染至oxLDL诱导的EVC-304细胞。采用硫代巴比妥酸法检测MDA含量,采用黄嘌呤氧化酶法检测SOD活性,检测GSH-Px活性;流式细胞术检测各组细胞凋亡率;双荧光素酶报告实验验证miR-193a-3p与S100A4的靶向关系;Western blot检测细胞中B淋巴细胞瘤-2相关蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)蛋白表达量。结果OxLDL处理后miR-193a-3p的表达水平降低(P<0.05),S100A4的表达水平升高(P<0.05),MDA的含量升高(P<0.05),SOD、GSH-Px的活性降低(P<0.05),Bcl-2蛋白水平降低(P<0.05),细胞凋亡率升高(P<0.05),Bax蛋白水平升高(P<0.05);转染miR-193a-3p mimics后可降低MDA含量、细胞凋亡率及Bax蛋白水平(P<0.05),提高SOD、GSH-Px活性及Bcl-2蛋白水平(P<0.05),而转染si-S100A4与其作用相似;双荧光素酶报告实验证实miR-193a-3p能够靶向结合S100A4;S100A4过表达能够明显减弱miR-193a-3p过表达对oxLDL诱导的血管内皮细胞损伤的作用。结论MiR-193a-3p可能通过靶向调控S100A4表达而减轻oxLDL诱导的血管内皮细胞氧化损伤,并抑制细胞凋亡。

下调lncRNA DNM3OS通过靶向miR-193a-3p增强人直肠癌细胞系SW-480的放疗敏感性

目的探讨lncRNA DNM3OS对直肠癌SW-480细胞的增殖、凋亡以及放射敏感性的影响及分子机制。方法选取30例直肠癌患者癌组织及癌旁组织,RT-qPCR检测DNM3OS和miR-193a-3p的表达水平;将抑制DNM3OS的表达载体、过表达miR-193a-3p载体转染至SW-480细胞,将DNM3OS与抑制miR-193a-3p的表达载体共转染至SW-480细胞,并用4 Gy射线照射;细胞集落形成实验检测细胞放射敏感性;四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测SW-480细胞增殖抑制率;流式细胞测量术检测SW-480细胞凋亡;双荧光素酶报告基因实验检测DNM3OS和miR-193a-3p的靶向调控。结果直肠癌组织中DNM3OS表达水平高于癌旁组织,miR-193a-3p表达水平低于癌旁组织(P<0.05)。抑制DNM3OS表达或过表达miR-193a-3p后,SW-480细胞增殖抑制率和凋亡率升高(P<0.05);经射线照射后细胞存活分数降低,细胞增殖抑制率和凋亡率升高(P<0.05)。DNM3OS靶向调控miR-193a-3p,干扰miR-193a-3p表达逆转了抑制lncRNA DNM3OS表达对直肠癌SW-480细胞增殖、凋亡及放射敏感性的影响。结论抑制lncRNA DNM3OS表达可通过靶向上调miR-193a-3p抑制SW-480细胞增殖,促进细胞凋亡以及增强细胞的放射敏感性。

miR-193a-3p抑制高糖诱导人视网膜血管内皮细胞凋亡

目的探讨miR-193a-3p对高糖诱导的人视网膜血管内皮细胞(HRECs)凋亡的影响和分子机制。方法体外培养HRECs细胞,建立高糖(葡萄糖浓度为30 mmol/L)HRECs细胞模型。设置对照组、模型组、anti-miR-NC、ani-miR-193a-3p组、模型+miR-NC组、模型+miR-193a-3p组、模型+LY294002。RT-qPCR检测miR-193a-3p的表达水平;Western blot检测活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(c-caspase-3)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、磷酸化的磷酸肌醇3激酶(p-PI3K)和磷酸化的蛋白激酶B(p-AKT)的表达水平;流式细胞仪检测细胞凋亡。结果模型组与对照组比较,miR-193a-3p、Bcl-2表达显著降低,凋亡率、c-caspase-3、p-PI3K和p-AKT表达显著升高(P<0.05)。低表达miR-193a-3p促进c-caspase-3、p-PI3K和p-AKT表达,抑制Bcl-2表达,促进细胞凋亡(P<0.05)。高表达miR-193a-3p可减轻高糖处理对HRECs凋亡、c-caspase-3和Bcl-2表达的影响(P<0.05)。抑制PI3K/AKT信号通路可减轻高糖处理对HRECs凋亡、c-caspase-3和Bcl-2表达的影响(P<0.05)。结论miR-193a-3p可能通过调控PI3K/AKT信号通路抑制高糖诱导HRECs凋亡。

血清miR-193a-3p,miR-337-5p和miR-483-5p在食管鳞状细胞癌诊断和预后中的应用

目的探讨miR-193a-3P,miR-337-5p和miR-483-5p在食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)患者血清中的表达水平,评估其临床应用价值。方法收集2011年6月~2014年5月南京军区南京总医院及徐州市肿瘤医院住院的63例ESCC患者术前、术后血清及随访信息,同时收集63例年龄、性别相匹配的健康体检者血清作为正常对照。利用TaqMan低密度芯片方法筛选出ESCC患者中异常表达的miRNA;实时荧光定量PCR法验证芯片检测到的ESCC中明显上调的miR-193a-3p,miR-337-5P以及文献报道在口腔鳞状细胞癌(OSCC)表达上调的miR-483-5P;最后评价它们的诊断和预后价值。结果与健康对照相比,ESCC患者血清miR-193a-3p(0.459±0.339 vs 0.195±0.084),miR-337-5p(5.686±5.211 vs 2.476±0.808)和miR-483-5p(32.545±22.479 vs 19.509±10.601)的相对含量均显著升高(U值分别为591,605和1037,P值均<0.0001),且在患者术后明显降低(P值均<0.05);三种miRNA的ROC AUC分别为0.851,0.848和0.739,三种miRNA组合在一起的AUC为0.873,均明显大于癌胚抗原;术后高表达miR-483-5p的患者较之低表这的生存期短(P=0.022)。结论血清miR-193a-3p,miR-337-5p和miR-483-5p可作为ESCC患者诊断或预后评估的潜在分子标志物。

肾透明细胞癌患者血清miR-193a-3p 水平增加及早期诊断价值

目的：检测肾透明细胞癌患者血清中 miR-193a-3p 的表达水平，探讨其作为肾透明细胞癌分子诊断指标的可能性。方法收集南京军区南京总医院2010-2014年期间107例住院肾透明细胞癌患者（TNM 分期Ⅰ期76例、Ⅱ期16例、Ⅲ期2例、Ⅳ期8例和未知5例）未经治疗前血清样本，实时荧光定量 PCR（qRT-PCR）方法检测 miR-193a-3p 含量，并以107例年龄、性别匹配的非癌健康人作对照。ROC 曲线分析血清 miR-193a-3p 水平对肾透明细胞癌的早期诊断价值。结果qRT-PCR 检测证实，miR-193a-3p 在总体患者血清中的含量显著高于对照组（3.294±1.526 vs 1.944±0.600，P＝0.000）。TNM Ⅰ期（3.411±1.676 vs 1.944±0.600，P ＝0.000）、Ⅱ期（2.926±0.927 vs 1.944±0.600，P ＝0.001）和Ⅳ期患者（2.926±0.894 vs 1.944±0.600，P ＝0.000）血清中 miR-193a-3p 的表达水平均明显高于对照组。用于诊断肾透明细胞癌早期（Ⅰ期）的血清 miR-193a-3p ROC 曲线下面积（AUCROC）为0.820（95％ CI，0.756-0.883），敏感度为80.3％，特异度为93.5％。结论miR-193a-3p 在肾透明细胞癌患者血清中的水平显著升高，并有较高的早期诊断准确性，有望作为该病早期诊断的血清学指标。

miR-193a-3p通过HR通路促进食管鳞癌细胞放射抵抗的初步研究

目的探讨miR-193a-3p对食管鳞癌细胞放射敏感性的影响及其相关作用机制。方法6MV-X射线照射4株食管鳞癌细胞,采用MTT法检测细胞相对存活比例;茎环引物实时定量PCR法检测miR-193a-3p在细胞中的表达水平;合成miR-193a-3p-mimic(3PM)和miR-193a-3p-antagomiR(3PA)并分别转染至细胞,MTT法和流式细胞分析术检测miR-193a-3p对放射耐受性的影响,细胞增殖实验检测miR-193a-3p对细胞增殖能力的影响;蛋白质印迹法检测r-H2AX及RAD51蛋白表达水平。结果筛选出放射敏感细胞株(KYSE150)及耐受细胞株(KYSE410)(4.3 Gy∶13.9 Gy);miR-193a-3p的表达水平在KYSE410中高于KYSE150,差异显著(1∶192);与对照组相比,过表达miR-193a-3p组食管鳞癌细胞放射敏感性降低(t=21.27,P<0.05),细胞凋亡比例下降11.10%,细胞增殖能力显著增加(P<0.05);抑制表达miR-193a-3p组食管鳞癌细胞放射敏感性增加(t=9.614,P<0.05),细胞凋亡比例增加3.63%,细胞增殖能力显著下降(P<0.05);蛋白质印迹法检测结果显示,在辐照后18 h,与对照组相比,上调miR-193a-3p表达,r-H2AX蛋白表达量减少(1.00∶0.85),抑制miR-193a-3p表达,r-H2AX蛋白表达量增加(1.00∶1.28),而RAD51蛋白表达量与之相反(1.00∶1.55;1.00∶0.63)。结论miR-193a-3p促进食管鳞癌细胞放射耐受性,其机制可能与促进DNA损伤后修复有关。

结直肠癌患者根治术前血清miR-193a-3p和CA19-9表达水平与临床病理特征及预后的关系

目的:探讨结直肠癌患者根治术前血清miR-193a-3p和糖类抗原19-9(CA19-9)表达水平与临床病理特征及预后的关系。方法:选取2010年1月至2012年6月在武汉大学人民医院行根治性切除术的216例结直肠癌患者作为研究组。另选取50例正常人作为对照组。采用实时荧光定量PCR(qPCR)法检测患者术前血清中miR-193a-3p的相对表达量,酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测CA19-9表达水平。分析miR-193a-3p、CA19-9表达水平与结直肠癌病理特征及预后的关系。结果:研究组患者miR-193a-3p相对表达量明显低于对照组,CA19-9表达水平明显高于对照组(均P<0.05)。术前miR-193a-3p呈低表达、CA19-9阳性的结直肠癌患者肿瘤分化程度较低、TNM分期较晚,且更易发生淋巴结转移和脉管浸润(P<0.05)。miR-193a-3p低表达组患者复发转移率明显高于miR-193a-3p高表达组,5年生存率明显低于miR-193a-3p高表达组;CA19-9阳性组患者复发转移率明显高于CA19-9阴性组,5年生存率明显低于CA19-9阴性组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论:结直肠癌患者根治术前血清miR-193a-3p呈低表达,CA19-9呈高表达;miR-193a-3p和CA19-9表达与肿瘤分化程度、临床分期、淋巴结转移等病理特征密切相关,且对患者生存预后有一定的预测作用。

miR-193a-3p通过富亮氨酸α2糖蛋白1/鞘氨醇激酶1信号通路抑制口腔鳞状细胞癌增殖与侵袭

目的:探究miR-193a-3p通过介导富亮氨酸α2糖蛋白1(LRG-1)/鞘氨醇激酶1(SPHK1)信号通路对口腔鳞状细胞癌生物作用机制作用。方法:选取本院2018年1月~2020年1月20例已确诊口腔鳞癌患者的癌组织与癌旁组织标本进行研究,分为口腔鳞癌组与癌旁组。HN4细胞分为3组,鳞癌组(鳞癌细胞常规培养)、转染NC组(转染miR-193a-3p-mimics-NC)、转染组(转染miR-193a-3p-mimics)。RT-PCR检测miR-193a-3p水平。CCK8检测增殖能力。Transwell小室检测侵袭能力。ELISA检测各组p53、caspase-3、Bcl-2、survivin水平。免疫印迹检测SPHK1、LRG-1水平。结果:口腔鳞癌组织中miR-193a-3p水平低于癌旁组织。鳞癌组miR-193a-3p水平与转染NC组较为接近;转染组miR-193a-3p水平高于鳞癌组、转染NC组。转染组在0 h时的OD值均较为接近;鳞癌组、转染NC组在不同时间点的OD值均较为接近;转染组在24、48、72 h时的OD值低于鳞癌组、转染NC组。鳞癌组癌细胞侵袭数量与转染NC组侵袭数量较为接近;转染组癌细胞侵袭数量较鳞癌组、转染NC组明显降低。鳞癌组与转染NC组SPHK1、LRG-1、caspase-3、p53、survivin和Bcl-2水平相比无差异;与鳞癌组相比,转染组、敲除LRG-1组、转染SPHK1组LRG-1、SPHK1、survivin、Bcl-2水平降低,caspase-3、p53水平升高,转染组、敲除LRG-1组和转染SPHK1组上述各指标水平对比无差异.结论:miR-193a-3p或通过降低SPHK1和LRG-1表达以抑制口腔鳞癌细胞的增殖及侵袭。

LncRNA LINC01138靶向miR-193a-3p对卵巢癌A2780细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响

目的:探讨长链非编码RNA LINC01138(LncRNA LINC01138)通过吸附微小RNA-193a-3p(miR-193a-3p)调控其表达,对卵巢癌细胞增殖、迁移、侵袭与凋亡的影响。方法:采用qRT-PCR法检测40例卵巢癌及相应癌旁正常卵巢组织、正常卵巢上皮细胞(HOSE)及3种卵巢癌细胞(A2780、SKOV3、OVCR3)中LINC01138与miR-193a-3p的表达水平。分别将si-con、si-LINC01138、si-LINC01138与anti-miR-con、si-LINC01138与anti-miR-193a-3p转染至A2780细胞,转染后48 h采用MTT法、Transwell小室实验分别检测细胞增殖、迁移及侵袭能力,Annexin V-FITC/PI染色后采用流式细胞术检测细胞凋亡率。结果:与癌旁正常卵巢组织相比,卵巢癌组织中LINC01138的表达升高,miR-193a-3p的表达降低(P<0.001);与正常卵巢上皮细胞HOSE比较,卵巢癌细胞A2780、SKOV3、OVCR3中LINC01138的表达升高,miR-193a-3p的表达降低(P<0.05),其中LINC01138在卵巢癌A2780细胞中的表达相对较高,选用卵巢癌A2780细胞进行后续实验。与si-con组比较,si-LINC01138组细胞增殖、迁移及侵袭能力降低,细胞凋亡率升高(P<0.05);与si-LINC01138+anti-miR-con组比较,si-LINC01138+anti-miR-193a-3p组细胞活力增强,迁移及侵袭细胞数增加,细胞凋亡率降低(P<0.05)。结论:抑制LINC01138可通过上调miR-193a-3p的表达进而减弱卵巢癌A2780细胞增殖、迁移、侵袭能力,诱导细胞凋亡。

黄芪多糖通过miR-193a-3p/STMN1轴对溃疡性结肠炎大鼠结肠细胞凋亡和氧化应激的影响

目的 研究黄芪多糖是否通过miR-193a-3p/STMN1轴对溃疡性结肠炎大鼠结肠细胞凋亡和氧化应激的影响。方法 将60只SD大鼠随机分为对照组和模型组,每组30只。模型组采用三硝基苯磺酸(TNBS)/乙醇复合法构建大鼠溃疡型结肠炎模型,对照组给予等量的50%乙醇,之后分离培养对照组和模型组大鼠结肠上皮细胞。溃疡型结肠炎大鼠结肠上皮细胞分别给予100、200、400μg/mL黄芪多糖,流式细胞术、免疫印迹实验(Western blot)和实时定量PCR(qRT-PCR)分别检测细胞凋亡、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、miR-193a-3p表达。试剂盒检测丙二醛(MDA)、乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平。在溃疡性结肠炎大鼠结肠上皮细胞中转染anti-miR-con、anti-miR-193a-3p模拟物、si-NC、si-STMN1过表达质粒,并给予400μg/mL黄芪多糖,分别记为APS+anti-miR-con组、APS+anti-miR-193a-3p组、APS+anti-miR-193a-3p+si-NC组、APS+anti-miR-193a-3p+si-STMN1组,采用上述方法检测溃疡性结肠炎大鼠结肠上皮细胞凋亡、氧化应激变化。生物信息学starbase预测和双荧光素酶报告实验验证miR-193a-3p与STMN1靶向作用。结果 与对照组比较,模型组大鼠结肠上皮细胞的凋亡率、Bax、STMN1蛋白表达量、MDA、LDH水平增加,Bcl-2蛋白、miR-193a-3p表达量、SOD、GSH-Px水平减少,差异有统计学意义(P<0.05)。与模型组比较,100、200、400μg/mL黄芪多糖减少溃疡性结肠炎大鼠结肠上皮细胞的凋亡率、Bax、STMN1蛋白表达量、MDA、LDH水平,提高Bcl-2蛋白、miR-193a-3p表达量、SOD、GSH-Px水平,均呈剂量依赖性,且差异有统计学意义(P<0.05)。与APS+anti-miR-con组比较,APS+anti-miR-193a-3p组溃疡性结肠炎大鼠结肠上皮细胞的miR-193a-3p表达量、凋亡率、Bax蛋白表达量、MDA、LDH水平升高,Bcl-2蛋白表达量、SOD、GSH-Px水平降低,差异有统计学意义(P<0.05)。miR-193a-3p直接靶向STMN1。与APS+anti-miR-193a-3p+si-NC组比较,APS+anti-miR-193a-3p+si-STMN1组溃疡性结肠炎大鼠结肠上皮细胞的STMN1、Bcl-2蛋白表达量、SOD、GSH-Px水平增加,凋亡率、Bax蛋白表达量、MDA、LDH水平减少,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 黄芪多糖通过上调miR-193a-3p靶向STMN1,减轻溃疡性结肠炎大鼠结肠上皮细胞的凋亡和氧化应激。

miR-193a-3p在胃癌中调节细胞凋亡的分子机制研究

目的探讨微小RNA 193-a-3p(miR-193a-3p)在胃癌中调节细胞凋亡的分子机制。方法运用实时荧光定量PCR在健康人胃黏膜细胞系GES-1、人胃癌细胞系MKN-45、SGC-7901、MGC-803、SNU16检测miR-193a-3p的相对表达水平;通过TargetScan在线分析和荧光素酶报告系统检测miR-193a-3p的靶基因;过表达或敲低miR-193a-3p后,免疫印迹试验检测靶基因和细胞凋亡标志蛋白的表达量以及细胞凋亡检测试验(Annexin V双染色法)检测细胞的凋亡水平。结果相比于健康人胃黏膜细胞系GES-1,miR-193a-3p在人胃癌细胞系MKN-45、SGC-7901、MGC-803、SNU16中低表达(P<0.05),并且MGC-803的表达量最低。miR-193a-3p靶向P21活化激酶4(PAK4)的3端非编码区。过表达miR-193a-3p后,PAK4的表达量降低,而凋亡标志蛋白cleaved-caspase3表达量升高,胃癌细胞MGC-803的凋亡水平上升(P<0.05)。敲低miR-193a-3p后,PAK4的表达量升高,而凋亡标志蛋白cleaved-caspase3表达量降低,胃癌细胞MGC-803的凋亡水平下降(P<0.05)。结论miR-193a-3p通过靶向调节PAK4促进胃癌细胞发生细胞凋亡。

miR-193a-3p在子宫内膜癌中的表达及临床病理的关系

目的探究miR-193a-3p在子宫内膜癌组织中相对表达及其对子宫内膜癌细胞株的生物学行为的影响。方法子宫内膜癌、正常子宫内膜组织样本均取自徐州医科大学附属医院2020年7月~2021年4月行手术切除的患者。实时荧光定量PCR(qPCR)检测子宫内膜癌组织和正常子宫内膜组织样本中miR-193a-3p的表达,分析miR-193a-3p的相对表达量与临床病理之间的关系。此研究选用Ishikawa细胞株作为研究,分为正常组(未作任何处理组)、对照组(转染miR-193a-3p-NC组)和过表达组(转染miR-193a-3p-mimics组),qPCR检测各组细胞miR-193a-3p的表达水平,CCK-8、Transwell小室检测各组处理前后Ishikawa细胞增值、迁移和侵袭差异性。结果正常子宫内膜组织、子宫内膜癌组织中miR-193a-3p相对表达量分别为1.00,0.50±0.11,子宫内膜癌组织中miR-193a-3p相对表达水平较正常子宫内膜组织明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。子宫内膜癌组织miR-193a-3p的表达水平与患者临床分期以及是否发生淋巴结转移相关(P<0.05),与年龄、病理分级和病理类型无关(P>0.05)。使miR-193a-3p过表达可减弱子宫内膜癌细胞的恶性生物学行为。结论miR-193a-3p的低表达可能起到促癌的作用,过表达miR-193a-3p可抑制癌的细胞的增殖、迁移和侵袭。

LncRNA MIR4697HG通过靶向miR-193a-3p调控HMGA2表达促进胶质瘤的发生发展

目的研究长链非编码RNA(LncRNA)MIR4697HG是否通过靶向微小RNA-193a-3p(miR-193a-3p)并调控HMGA2表达影响胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭。方法实时荧光定量-聚合酶链反应(qPCR)和Western印迹检测正常星形胶质细胞HA、胶质瘤细胞U-251MG中LncRNA MIR4697HG、miR-193a-3p、HMGA2 mRNA和HMGA2蛋白表达。生物信息学预测和双荧光素酶活性检测分析MIR4697HG与miR-193a-3p、miR-193a-3p与HMGA2的靶向关系。在U-251MG细胞中转染si-MIR4697HG或miR-193a-3p,观察其对细胞增殖、迁移和侵袭的影响。噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖,Transwell检测细胞迁移和侵袭,Western印迹检测细胞周期蛋白(Cyclin)D1、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9蛋白表达。共转染si-MIR4697HG与anti-miR-193a-3p,或共转染si-MIR4697HG与pcDNA-HMGA2,观察其在U-251MG细胞增殖、迁移和侵袭中的作用。结果与HA细胞比较,胶质瘤细胞U-251MG中LncRNA MIR4697HG、HMGA2 mRNA和HMGA2蛋白表达量明显升高(P<0.05),而miR-193a-3p表达量明显降低(P<0.05)。LncRNA MIR4697HG靶向调控miR-193a-3p表达,miR-193a-3p靶向调控HMGA2表达。低表达LncRNA MIR4697HG明显降低U-251MG细胞中HMGA2、CyclinD1、MMP-2和MMP-9蛋白表达量、细胞存活率、细胞迁移数量、细胞侵袭数量(P<0.05),提高miR-193a-3p表达量(P<0.05)。高表达miR-193a-3p明显减少HMGA2、CyclinD1、MMP-2和MMP-9蛋白表达量、细胞存活率、细胞迁移数量和细胞侵袭数量(P<0.05)。敲减miR-193a-3p可部分逆转MIR4697HG低表达对U-251MG细胞增殖、迁移、侵袭、HMGA2、CyclinD1、MMP-2、MMP-9蛋白表达的制作用。高表达HMGA2可部分逆转MIR4697HG低表达对U-251MG细胞增殖、迁移、侵袭、CyclinD1、MMP-2、MMP-9蛋白表达的抑制作用。结论LncRNA MIR4697HG通过靶向miR-193a-3p调控HMGA2表达促进胶质瘤细胞的增殖、迁移和侵袭。

NEAT1/miR-193a-3p通过TLR-4/NF-κB信号通路对脂多糖诱导的心肌H9c2细胞损伤的影响

目的研究NEAT1/miR-193a-3p对脂多糖(LPS)诱导的心肌H9c2细胞损伤的作用,并探讨其影响炎性损伤的潜在机制。方法采用双荧光素酶报告基因试验和RNA结合蛋白免疫沉淀试验研究NEAT1和miR-193a-3p相互关系。利用脂多糖诱导建立心肌细胞损伤模型,将pcDNA-NEAT1、miR-193a-3p mimic、阴性对照转染到H9c2细胞。采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡情况;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测炎性因子水平;通过实时定量聚合酶链式反应(PCR)法检测mRNA水平;通过蛋白质免疫印迹(Western Blot)法测定蛋白水平。结果双荧光素酶报告基因试验和RNA结合蛋白免疫沉淀试验研究证明NEAT1可以作为竞争性内源RNA(ceRNA)靶向结合miR-193a-3p。脂多糖诱导使H9c2细胞活力降低(P<0.01),miR-193a-3p mRNA水平明显降低(P<0.01),NEAT1 mRNA水平明显升高(P<0.01)。miR-193a-3p mRNA过表达可使NEAT1 mRNA的表达水平明显降低(P<0.01),NEAT1 mRNA过表达时可使miR-193a-3p mRNA的表达水平明显降低(P<0.01)。过表达miR-193a-3p可改善H9c2细胞因脂多糖刺激导致的细胞活力降低和细胞凋亡增加,而过表达NEAT1可逆转miR-193a-3p对细胞活力和凋亡的调节作用。过表达miR-193a-3p可降低H9c2细胞因脂多糖刺激导致的肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)和白细胞介素-8(IL-8)水平升高,而过表达NEAT1可逆转miR-193a-3p对TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-8水平的调节作用。过表达miR-193a-3p可降低H9c2细胞因脂多糖刺激导致的Toll样受体-4(TLR-4)、骨髓分化主要反应蛋白(MYD88)、磷酸酸化NF-κB p65(p-NF-κB p65)蛋白表达水平升高,而过表达NEAT1可逆转miR-193a-3p对TLR-4、MYD88和p-NF-κB p65蛋白表达水平的调节作用。结论NEAT1通过miR-193a-3p可影响脂多糖诱导的心肌细胞凋亡和炎症反应,提示NEAT1可作为竞争性内源RNA海绵miR-193a-3p参与心肌损伤过程,并且与调控TLR-4/NF-κB信号通路有关。

miR-193a-3p通过LGR4/ATF4信号的上调促进成骨细胞分化

目的:探讨miR-193a-3p通过LGR4/ATF4信号的上调促进成骨细胞分化的作用及分子靶向机制。方法:髂前上棘骨穿刺术取骨质疏松患者骨髓组织3~5 ml,建立体外骨髓间充质干细胞细胞模型(hBMSCs),将hBMSCs诱导分化为成骨细胞,实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)测定miR-193a-3p的表达水平。过转染AgomiR-193a-3p和AntagomiR-193a-3p的BMSCs,检测miR-193a-3p对碱性磷酸酶(ALP)活性和基质矿化的影响。检测过表达miR-193a-3p对成骨细胞标记基因Runx2的作用。生物信息学分析方法寻找miR-193a-3p的候选靶基因LGR4。荧光素酶报告试验验证miR-193a-3p针对LGR4。检测过表达miR-193a-3p对LGR4表达的调节作用。检测过表达miR-193a-3p对调节骨信息的LRG4下游靶点ATF4表达的调节作用。结果:①miR-193a-3p在成骨细胞分化过程中在第1天,第7天和第14天以时间依赖性的方式显著下调。②转染AgomiR-193a-3p的BMSCs水平上调,而转染AntagomiR-193a-3p的BMSCs水平下调。③miR-193a-3p的过表达下调了BMSCs的ALP活性,抑制了BMSCs的基质矿化。④miR-193a-3p的过表达下调Runx2的表达。⑤生物信息学分析方法发现LGR4 mRNA的3′-UTR对miR-193a-3p具有保守的结合位点。LGR4是骨形成的关键调节因子,被预测为miR-193a-3p的潜在靶基因。⑥荧光素酶报告试验表明,miR-193a-3p的过表达显著降低了含有WT结合位点的LGR43′-UTR荧光素酶报告者的荧光素酶活性;miR-193a-3p的过表达对含有miR-193a-3pMT结合位点的LGR43′-UTR荧光素酶记者没有明显影响。⑦miR-193a-3p的过表达显著下调LGR4的表达。结论:miR-193a-3p可通过LGR4/ATF4信号的上调促进成骨细胞分化。可通过调控其表达干预骨质疏松的发生和治疗。

首发精神分裂症患者外周血miR-92a-3p、miR-193a-3p表达及临床意义

目的:探究首发精神分裂症患者外周血miR-92a-3p、miR-193a-3p表达水平及临床意义。方法:选取笔者所在医院2018年4月-2019年9月收治的50例首发精神分裂症患者为病例组,另招募同期30例健康体检者为对照组,采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测外周血单核细胞miR-92a-3p、miR-193a-3p相对表达量,比较两组组外周血miR-92a-3p、miR-193a-3p表达水平,采用Pearson相关分析法探究miR-92a-3p、miR-193a-3p水平与精神分裂症患者阳性和阴性症状量表(PANSS)、社会功能缺陷筛选量表(SDSS)评分相关性,绘制ROC曲线评价miR-92a-3p、miR-193a-3p相对表达量对精神分裂症诊断价值。结果:病例组外周血miR-92a-3p、miR-193a-3p相对表达量均高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);Pearson相关性分析显示,患者外周血miR-92a-3p、miR-193a-3p表达水平均与PANSS评分、SDSS评分呈正相关(P<0.05);外周血miR-92a-3p、miR-193a-3p相对表达量及二者联合诊断精神分裂症的ROC曲线下面积分别为0.937、0.920、0.995。结论:首发精神分裂症患者外周血miR-92a-3p、miR-193a-3p表达水平上调,且与患者症状严重程度相关,二者联合检测对首发精神分裂症有较高诊断价值。