miR-20a-5p调控NFKBIB对人肾母细胞瘤细胞WiT49裸鼠移植瘤增殖的影响

目的探讨miR-20a-5p对人肾母细胞瘤细胞系WiT49裸鼠移植瘤的影响及作用机制。方法从GEO数据库下载基因表达芯片,应用GEO2R获得差异基因miR-20a-5p;通过cBioPortal数据库获得与miR-20a-5p表达具有正相关关系的NF-κB基因;通过targetscan数据库预测miR-20a-5p靶基因可能为NF-κB转录因子抑制蛋白家族的NFKBIB,并使用双荧光素酶实验进行验证;体外培养肾母细胞瘤细胞系WiT49,采用miR-20a-5p模拟物及其抑制基因构建慢病毒载体分别转染至WiT49细胞;将12只裸鼠随机分为3组,WiT49模型组、WiT49-miR-20a-5p过表达组、WiT49-miR-20a-5p敲低组;裸鼠成瘤实验检测各组瘤块质量及体积;应用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测各组瘤块中miR-20a-5p、NFKBIB及NF-κB表达情况;通过CCK-8细胞增殖实验验证各组瘤细胞增殖情况。结果miR-20a-5p在肾母细胞瘤中高表达,且与NF-κB表达呈正相关,miR-20a-5p与NFKBIB具有相互结合位点且存在结合作用;裸鼠成瘤实验中,WiT49-miR-20a-5p过表达组瘤块体积及质量较WiT49模型组均明显增加,差异有统计学意义(P<0.05);qRT-PCR实验中,WiT49-miR-20a-5p过表达组中miR-20a-5p及NF-κB表达均高于WiT49模型组,WiT49-miR-20a-5p过表达组中NFKBIB表达低于WiT49模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。CCK-8细胞增殖实验中WiT49-miR-20a-5p过表达组细胞24及48 h吸光度高于WiT49模型组,WiT49-miR-20a-5p敲低组细胞24、48及72 h吸光度均低于WiT49模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论miR-20a-5p可能是通过调控NFKBIB激活NF-κB通路促进人肾母细胞瘤细胞WiT49裸鼠移植瘤生长。

miR-20a在妇科常见恶性肿瘤中的作用机制

宫颈癌、子宫内膜癌及卵巢癌作为妇科最常见的三大恶性肿瘤,其发病率近年来在各年龄段中呈上升趋势,已严重威胁我国女性健康。尽管多种靶向药物的应用已使该类患者的生存期明显延长,但其仍是一类无法被精准诊断和治疗的疾病。miR-17-92基因簇作为最早被确定为癌基因的微小RNA(micro RNA,miRNA)家族,其作用机制一直被广泛关注。miR-20a是miR-17-92基因簇中的一员,可通过降低或上调表达的方式发挥转录后调控功能,进而影响下游基因通路,调控恶性肿瘤细胞的增殖、侵袭及转移,并最终实现恶性肿瘤的发生及进展。根据目前研究进展,miR-20a在宫颈癌、子宫内膜癌及卵巢癌中表达特异性升高通常与疾病的恶性进展有关,综述miR-20a在妇科常见三大恶性肿瘤发病机制中作用的最新研究。

miR-20a调控压力超负荷型心肌肥大

背景:心肌肥大是心脏对压力超负荷等生理和病理刺激所做出的适应性反应,早期具有代偿意义,若刺激持续进行可引起心肌病变导致心力衰竭。micro RNAs参与调控了心肌肥大的发生发展,然而mi R-20a在压力超负荷所致心肌肥大中的作用尚未见报道。目的:探究mi R-20a在压力超负荷所致心肌肥大中的作用及其机制。方法:横向主动脉缩窄术诱导心肌肥大小鼠模型,使用血管紧张素Ⅱ诱导心肌肥大H9c2细胞模型。体内实验在小鼠心脏原位注射mi R-20a过表达腺病毒,体外实验将mi R-20a mimic转染至H9c2细胞。通过检测心质量/体质量比值、细胞表面积、心肌纤维化等指标评估心肌肥大,实时荧光定量PCR法检测心房利钠肽、脑利钠肽、β-肌球蛋白重链和mi R-20a的表达水平,Mito Tracker法检测线粒体分裂情况,RNAhybrid软件预测miR-20a的下游靶基因。结果与结论:(1)在心肌肥大细胞模型和动物模型中,mi R-20a的表达水平均显著降低(P<0.05);(2)在动物水平,过表达miR-20a显著抑制了横向主动脉缩窄手术诱导的心肌肥大,包括抑制了肥大标志基因表达水平的升高(P<0.05),抑制了心脏体积的增大,抑制了心质量/体质量比值的升高(P<0.01),抑制了心肌横截面积的增大(P<0.05)以及减轻了心肌纤维化程度(P<0.01);(3)在细胞水平,过表达mi R-20a显著抑制了血管紧张素Ⅱ诱导的心肌细胞肥大,包括抑制了心房利钠肽(P<0.05)、脑钠肽(P<0.01)、β-肌球蛋白重链(P<0.05)等肥大标志基因表达水平的升高,抑制了蛋白质/DNA比值的升高(P<0.01),抑制了细胞表面积的增大(P<0.05);(4)过表达mi R-20a显著抑制了血管紧张素Ⅱ诱导的线粒体分裂(P<0.05);(5)RNAhybrid软件分析结果显示mi R-20a与蛋白质活化酶抑制剂αm RNA的3’非翻译区可以很好地互补配对,且预测的结合位点具有高度保守性;(6)结果表明,在压力超负荷心肌肥大模型中mi R-20a表达水平显著下调,过表达mi R-20a可在细胞水平和动物水平抑制心肌肥大表型,并减轻血管紧张素Ⅱ诱导的心肌细胞线粒体分裂。

红景天苷调控miR-20a-5p/TIMP2轴对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞增殖和迁移的影响

目的探讨红景天苷调控miR-20a-5p/金属蛋白酶组织抑制剂-2(TIMP2)轴对人类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞(HFLS-RA)功能和活化的影响。方法以HFLS-RA细胞为研究对象,将HFLS-RA细胞分为肿瘤坏死因子-α(TNF-α)组、对照组、红景天苷组、miR-20a-5p抑制物阴性对照(inhibitor NC)组、miR-20a-5p抑制物组、红景天苷+miR-20a-5p模拟物阴性对照(mimic NC)组、红景天苷+miR-20a-5p模拟物组。实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测HFLS-RA细胞中miR-20a-5p表达;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测HFLS-RA细胞上清液中白细胞介素(IL)-1β、IL-6水平;细胞计数试剂盒8(CCK-8)法、5-乙炔基-2’-脱氧尿苷(EdU)染色检测HFLS-RA细胞增殖;划痕实验检测HFLS-RA细胞迁移;免疫印迹实验(Western blot)检测HFLS-RA细胞中TIMP2、细胞周期素D1(CyclinD1)、基质金属蛋白酶(MMP)-9蛋白表达;双荧光素酶验证miR-20a-5p与TIMP2的关系。结果与对照组比较,TNF-α组miR-20a-5p表达、IL-1β、IL-6水平、吸光度(OD_(450))值、EdU阳性细胞率、划痕愈合率及CyclinD1、MMP-9蛋白上调,TIMP2蛋白下调(P<0.05);与TNF-α组相比,红景天苷组miR-20a-5p表达、IL-1β、IL-6水平、OD_(450)值、EdU阳性细胞率、划痕愈合率及CyclinD1、MMP-9蛋白下调,TIMP2蛋白上调(P<0.05);与inhibitor NC组、TNF-α组相比比较,miR-20a-5p抑制物组miR-20a-5p表达、IL-1β、IL-6水平、OD_(450)值、EdU阳性细胞率、划痕愈合率及CyclinD1、MMP-9蛋白下调,TIMP2蛋白上调(P<0.05);与红景天苷+mimic NC组、红景天苷组相比,红景天苷+miR-20a-5p模拟物组miR-20a-5p表达、IL-1β、IL-6水平、OD_(450)值、EdU阳性细胞率、划痕愈合率及CyclinD1、MMP-9蛋白表达升高,TIMP2蛋白表达降低(P<0.05)。miR-20a-5p与TIMP2存在靶向调控关系。结论红景天苷可能通过调控miR-20a-5p/TIMP2抑制TNF-α诱导的HFLS-RA细胞增殖、迁移及炎症反应。

肺炎支原体肺炎患儿外周血miR-106a、miR-20a表达与胸部X线表现及炎症的相关性

目的:探讨肺炎支原体肺炎(MPP)患儿外周血微小RNA(miR)-106a、miR-20a表达与胸部X线(CXR)表现及炎症的相关性。方法:选取2020年1月至2021年12月本院收治的393例MPP患儿作为研究对象。采用全自动血细胞分析仪检测白细胞计数、红细胞计数、血小板计数、中性分叶核白细胞等,免疫透射比浊法检测C反应蛋白(CRP)水平。采用实时定量聚合酶链反应法检测外周血miR-106a和miR-20a表达。所有患儿均在入组后接受CXR检查。结果:MPP患儿外周血miR-106a和miR-20a的表达水平分别为1.00(0.61,2.11)、1.06(0.73,1.67)。根据中位值分组,与miR-106a和miR-20a低表达组相比,高表达组患儿CRP水平和肺实变患儿比例明显更高(P<0.05);miR-20a高表达组患儿胸腔积液患儿比例也显著高于低表达组(P<0.05)。MPP患儿外周血miR-106a和miR-20a与CRP呈显著正相关(r值分别为0.212、0.230,均P<0.001)。肺实变组外周血miR-106a和miR-20a表达水平均显著高于非肺实变组(P<0.05)。经ROC曲线分析,外周血miR-106a和miR-20a预测MPP肺实变的曲线下面积(AUC)为0.811(95%CI:0.767~0.855)、0.807(95%CI:0.762~0.852),灵敏度分别为75.3%和77.4%,特异度分别为76.5%和76.4%,对应的截断值为1.20和1.18。Logistic回归分析显示,外周血miR-106a和miR-20a高表达是MPP肺实变的独立影响因素(P<0.05)。结论:MPP患儿外周血miR-106a和miR-20a过表达与CXR严重表现和炎症加重有关,两者可作为指示MPP严重程度和炎症进展的标志物。

贝伐珠单抗辅助PD-1抑制剂治疗胃癌对血清miR-20a-5p和miR-515-3p的影响研究

背景与目的:二线化疗方案治疗胃癌疗效欠佳,贝伐珠单抗属于抗血管生成分子靶向抗癌药物,信迪利单抗是一种国产的程序性死亡蛋白-1(programmed death-1,PD-1)抑制剂,两者结合是临床治疗胃癌的新方向。本研究旨在探究贝伐珠单抗辅助PD-1抑制剂治疗胃癌对血清miR-20a-5p和miR-515-3p的影响。方法:选取2019年1月—2021年7月于南京医科大学第四附属医院就诊的84例胃癌患者进行回顾性研究,根据治疗方案的不同将其分为观察组和对照组(每组各42例),对照组给予二线化疗方案治疗,观察组在对照组基础上给予贝伐珠单抗联合PD-1抑制剂(信迪利单抗)治疗,比较两组的客观缓解率(objective response rate,ORR)、疾病控制率(disease control rate,DCR)、血清肿瘤标志物、免疫功能指标、血清miR-20a-5p、miR-515-3p及不良反应总发生率。本研究已通过南京医科大学第四附属医院伦理委员会的伦理审批(批件号:20230531--K061)。结果:观察组的ORR(69.05%)和DCR(85.71%)均高于对照组(40.48%、64.29%)。观察组治疗后的血清糖类抗原12-5(carbohydrate antigen 12-5,CA12-5)、癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA)及细胞角蛋白19片段抗原21-1(cytokerantin-19-fragment antigen 21-1,CYFRA21-1)水平均低于对照组。观察组治疗后的CD4^(+)T淋巴细胞、CD4^(+)/CD8^(+)T淋巴细胞比值均高于对照组,CD8^(+)T淋巴细胞低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。观察组治疗后的血清miR-20a-5p、miR-515-3p水平均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。观察组(28.57%)的不良反应总发生率与对照组(38.10%)相比,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:贝伐珠单抗辅助信迪利单抗可有效地提高胃癌治疗效率,改善免疫功能,降低血清miR-20a-5p、miR-515-3p及肿瘤标志物表达量,且不会增加不良反应,效果显著。

卵巢型子宫内膜异位症患者外周血ROS、PON-1水平和miR-20a表达水平及与病情的关系

目的探究卵巢型子宫内膜异位症(EMs)患者外周血氧自由基(ROS)、氧磷酶-1(PON-1)水平和miR-20a表达水平及与病情的关系。方法回顾性选取2020年3月至2023年3月在江苏省人民医院(南京医科大学第一附属医院)进行治疗的113例卵巢型EMs患者纳入研究组,并根据美国生育协会分期标准对其进行分组:62例Ⅰ~Ⅱ期患者纳入轻度组,51例Ⅲ~Ⅳ期患者纳入重度组。另选30例在本院进行治疗的盆腔炎且子宫内膜正常患者纳入对照组。比较研究组与对照组患者、轻度组与重度组患者的ROS、PON-1水平和miR-20a相对表达水平,比较轻度组与重度组的血清炎症因子[白细胞介素(IL)-6、IL-8、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)]水平,并探究其与患者病情严重程度的相关性,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析ROS、PON-1水平和miR-20a表达水平对重度卵巢型EMs的诊断价值。结果研究组患者的ROS水平和miR-20a相对表达水平分别为(485.55±32.12)pg/mL、2.48±0.33,均高于对照组患者[(326.26±28.12)pg/mL、1.03±0.24],PON-1水平为(152.23±8.78)pg/mL,低于对照组患者[(212.26±8.23)pg/mL],差异均有统计学意义(P<0.05)。重度组患者的ROS水平和miR-20a相对表达水平分别为(498.22±18.45)pg/mL、2.64±0.37,均高于轻度组患者[(433.28±23.16)pg/mL、1.97±0.21],PON-1水平为(142.04±5.99)pg/mL,低于轻度组患者[(164.56±5.48)pg/mL],差异均有统计学意义(P<0.05)。重度组患者的血清IL-6、IL-8、MCP-1、TNF-α水平分别为(33.26±2.45)、(29.55±3.16)、(39.45±2.78)、(29.88±2.64)pg/mL,均高于轻度组患者[(17.22±2.23)、(23.66±3.15)、(32.45±2.54)、(21.02±2.37)pg/mL],差异均有统计学意义(P<0.05)。ROS水平,miR-20a相对表达水平,IL-6、IL-8、MCP-1、TNF-α水平与患者的临床分期呈正相关(r=0.847、0.751、0.862、0.685、0.830、0.859,P<0.05),PON-1水平与患者的临床分期呈负相关(r=-0.856,P<0.05)。ROS、PON-1水平,miR-20a相对表达水平诊断重度卵巢型子宫内膜异位的ROC曲线的曲线下面积(AUC)分别为0.991、0.997、0.936,具有较好诊断价值(P<0.05)。结论ROS水平、miR-20a相对表达水平在卵巢型EMs患者中升高,PON-1水平表达下调,且对其病情严重程度具有一定诊断价值,可用于临床辅助诊断。

高强度间歇训练对冠心病PCI术后病人心肌修复的影响及其与miR-20a的关联性

目的:观察高强度间歇训练(HIIT)对冠心病经皮冠状动脉介入(PCI)术后病人心肌修复的影响,并探讨心肌修复指标与血清miR-20a的相关性。方法:选取2019年1月—2022年6月在郑州市中心医院因冠心病就诊且行PCI术,并出现术后相关心肌损伤病人100例,采用随机数表法将病人分为训练组与对照组,各50例,所有病人均进行为期8周的运动训练。比较两组左室舒张末期内径(LVEDD)和左室射血分数(LVEF);采用实时定量聚合酶链式反应(PCR)检测病人外周血清miR-20a表达水平;采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)表达;分析上述指标与miR-20a的相关性。结果:干预后,训练组LVEDD低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);两组LVEF比较,差异无统计学意义(P>0.05)。干预后,训练组miR-20a表达水平高于对照组,训练组血清CK、CK-MB浓度和血清炎性因子IL-6和TNF-α水平低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。冠心病PCI术后心肌损伤病人血清CK、CK-MB含量、IL-6、TNF-α含量与miR-20a呈负相关(P<0.05)。结论:HIIT可改善冠心病PCI术后相关心肌损伤病人的心肌重构、心肌损伤程度及炎症反应,其作用机制可能与miR-20a表达增强有关。

粪便Fn与miR-20a在结直肠癌患者中的表达及对其发生的预测价值

目的 探讨粪便具核梭杆菌(Fn)与miR-20a在结直肠癌(CRC)患者中的表达及对其发生的预测价值。方法 收集2023年1月至2024年2月丽水市第二人民医院收治的CRC患者100例(CRC组),化疗疗效评估结束后入组。另选同期来院就诊的结直肠良性腺瘤患者100例(良性组)及健康体检者100例(对照组)。采用qRT-PCR检测3组受试者粪便Fn相对丰度和miR-20a的水平;3组分别随机抽取20例,采用16S rRNA对粪便肠道菌群进行测序,分析粪便肠道菌群多样性(Chao1指数、Ace指数及Shanon指数);采用酶联免疫吸附法检测3组血清肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)和IL-1β的表达水平;采用受试者工作特征曲线(ROC)分析粪便Fn和miR-20a水平对CRC发生的预测效能。结果 对照组、良性组及CRC组Chao1指数依次降低,但差异无统计学意义(P>0.05),Simpson指数依次升高(P<0.05),Shannon指数依次降低(P<0.05)。对照组有分类操作单元540个,良性组473个,CRC组841个;相对于对照组和良性组,CRC组肠道最优势菌为Fn。3组粪便总细菌含量差异无统计学意义(P>0.05),CRC组Fn含量及miR-20a水平均显著高于对照组及良性组(均P<0.05)。CRC组血清TNF-α、IL-6及IL-1β水平均显著高于对照组与良性组(均P<0.05)。ROC曲线分析显示,粪便Fn、miR-20a单独及两者联合预测CRC发生的AUC分别为0.842、0.888及0.912,两者联合预测CRC发生的价值更高。结论 CRC患者粪便肠道菌群多样性显著下降,Fn可能调控慢性炎症和miR-20a表达参与CRC发生、发展;粪便Fn含量及miR-20a水平对CRC发生预测准确率较高,两者联合有助于提高CRC早期无创诊断效率。

肺癌与癌旁组织中miR-20a的定量检测及其意义

目的探讨人肺癌与癌旁组织miR-20a定量检测的临床意义。方法 real-timePCR检测31例肺癌及其对应癌旁组织中miR-20a的表达量,分析其与肺癌组织学类型、临床分期、分化程度等临床病理特征的关系。结果肺癌组织miR-20a表达量(2-△△Ct)为3.630(1.042～7.727),与对应癌旁组织相比,有显著性差异(P<0.05)。miR-20a与肺癌临床分期、分化程度、病理类型、肿块大小和淋巴结转移均无相关性(P>0.05)。结论 miR-20a在肺癌组织高表达,可能与肺癌的发生有关。

黄芪多糖通过调控miR-20a/TGFBR2分子轴降低结直肠癌HT-29/DDP细胞的顺铂耐药性

目的:探讨黄芪多糖(APS)通过调控miR-20a/TGFBR2分子轴对结直肠癌(CRC)顺铂耐药细胞HT-29/DDP增殖、侵袭、凋亡和耐药性的影响及其机制。方法:以人CRC HT-29细胞、HT-29/DDP细胞为亲本和耐药细胞模型,将HT-29/DDP细胞随机分为4组:对照组、APS处理组、过表达miR-20a+APS组、沉默TGFBR2+APS组。用不同质量浓度的APS(0、0.5、1.0、1.5和2.0 mg/ml)处理HT-29/DDP细胞后,以qPCR和Wb实验检测细胞中miR-20a和TGFBR2的表达水平;用CCK-8、Transwell和Annexin V-FITC/PI染色流式细胞术检测对HT-29/DDP细胞增殖、侵袭和凋亡的影响;用双荧光素酶报告基因验证miR-20a与TGFBR2的靶向作用关系。构建裸鼠皮下CRC HT-29/DDP细胞移植瘤模型,观察APS对移植瘤生长的影响及其机制。结果:APS显著抑制HT-29/DDP细胞的增殖(P<0.01),且呈剂量依赖性。miR-20a在经APS处理后的HT-29/DDP细胞中低表达(P<0.01)、TGFBR2的表达水平显著上调(P<0.01)。双荧光素酶报告基因证实miR-20a靶向作用TGFBR2并下调其表达水平。体内外实验证实APS通过靶向下调miR-20a对TGFBR2的抑制作用,提高HT-29/DDP细胞的药物敏感性,进而抑制该细胞增殖、侵袭和促进凋亡(均P<0.01);同时发现,该作用与抑制PCNA、Bcl-2蛋白而促进Bax、Caspase-3蛋白表达有关联。结论:APS通过下调miR-20a对TGFBR2表达的抑制作用,从而逆转HT-29/DDP细胞对顺铂的耐药性。

血浆miR-20a和let-7a在卵巢癌中的表达及其临床意义

目的检测miR-20a和let-7a在卵巢癌患者血浆中的表达,探讨其临床意义。方法选取卵巢癌患者50例为实验组,另选择同期与其年龄性别相匹配的健康体检者20例为健康对照组,采用实时定量荧光定量酶链反应（qRT-PCR）检测血浆miR-20a和let-7a表达水平,同时采用电化学发光法测定其血浆中糖类抗原125（CA125）的含量并进行统计分析。结果卵巢癌患者血浆中miR-20a和let-7a的相对表达量分别为（4.02±3.77）、（0.42±0.34）,卵巢癌患者血浆中miR-20a和CA125的表达均高于对照组（P〈0.01）,let-7a表达低于对照组（P〈0.01）。临床病理分期Ⅰ~Ⅱ期和Ⅲ~Ⅳ期卵巢癌患者血浆let-7a相对表达量的中位数分别为0.39、0.21,差异有统计学意义（P〈0.01）,而血浆miR-20a的表达与临床病理分期无关（P〉0.05）,miR-20a和let-7a的相对表达量与年龄、淋巴结转移和组织学分类均无关（P〉0.05）。miR-20a、let-7a和CA125的ROC曲线下面积为0.898（95%CI：0.802~0.957）、0.876（95%CI：0.775~0.942）、0.819（95%CI：0.708~0.900）。结论卵巢癌患者血浆中miR-20a和let-7a均表达异常,提示能够成为辅助诊断卵巢癌的标志物。

miR-17-5p、miR-17-3p和miR-20a-5p在胃间质瘤中表达

目的探讨miR-17-5p、miR-17-3p及miR-20a-5p在胃间质瘤(gastric stromal tumor,GST)中的差异表达及其与临床病理因素的关系。方法提取正常胃组织及GST组织共72例标本的总RNA,应用Real time RT-PCR方法检测miR-17-5p、miR-17-3p及miR-20a-5p的表达,用SPSS 19.0分析其与临床病理因素的关系及3个miRNA间的相关性。结果在GST中,miR-17-3p、miR-17-5p在肿瘤组织中表达较胃正常组织低(P<0.001),但是在低危组和中高危组GST中表达差异无统计学意义(P>0.05);miR-20a-5p表达在胃正常组织、低危组和中高危组之间均有差异表达,且随着恶性度的增加而下降(P<0.001),3种miRNA的表达水平与肿瘤的侵袭、转移、年龄、肿瘤最大直径和核分裂象密切相关,而与瘤体是否破溃无关。结论 miR-17-5p、miR-17-3p、miR-20a-5p在GST中下调并相互作用可能是促进GST发生、发展因素之一。

miR-20a海绵载体构建及在白血病细胞株Jurkat中的表达

本研究构建miR-20a基因的miRNA海绵载体,建立Jurkat-S稳定细胞株,为进一步研究的miR-20a功能及应用干扰技术治疗奠定基础。设计、合成1对含有2个重复针对miR-20a成熟序列第9-12碱基错配的序列,并带有酶切位点,退火后连接到pCDNA3.0-L表达载体上;载体双酶切后再与退火产物连接,重复4次后进行酶切及荧光素酶活性鉴定;亚克隆到慢病毒表达载体,与psPAX2、PMD2G共转染HEK 293T细胞,包装产生慢病毒颗粒并测定病毒滴度,感染Jurkat细胞,建立稳定细胞株;应用实时PCR和Western blot技术分别检测Jurkat-S稳定细胞中P21及E2F1 mRNA和蛋白的表达,并与对照组进行比较。结果表明,成功构建了针对miR-20a基因的海绵载体,病毒滴度为5×107TU/ml;建立了稳定转染的Jurkat-S细胞株。有效干扰验证显示,miR-20a海绵能明显上调P21及E2F1的mRNA及蛋白表达水平,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:成功构建miR-20a基因的miRNA海绵载体,建立稳定干扰miR-20a表达的Jurkat-S细胞株。

膀胱移行细胞癌E2F3、miR-17-5p、miR-20a的表达及相关性分析

目的检测E2F3、miR-17-5p、miR-20a在膀胱癌中的表达情况,分析E2F3与miR-17-5p、miR-20a之间是否存在关联性。方法荧光定量RT-PCR法检测不同病理分级膀胱移行细胞癌组织和细胞系5637、T24中miR-17-5p、miR-20a和E2F3基因的表达,Western blot检测E2F3蛋白的表达。结果与正常膀胱黏膜比较,膀胱移行细胞癌组织及5637、T24细胞系中E2F3、miR-17-5p和miR-20a均高表达(P<0.05)。E2F3表达随着病理分级的升高逐步增多,miR-20a表达随病理分级的升高有降低趋势。5637细胞系相对T24细胞系高表达E2F3(P<0.05)。结论膀胱移行细胞癌中miR-17-5p、miR-20a和E2F3均高表达,miR-20a和miR-17-5p的表达与E2F3的增高密切相关。

雷帕霉素对RAW264.7细胞6种miRNAs表达的影响及miR-20a对ATG16L1的靶向调控作用

目的:探讨雷帕霉素对miR-17-92簇中的6种miRNAs表达的影响,及miR-20a对ATG16L1基因的靶向调控作用。方法:利用qRT-PCR检测雷帕霉素对RAW264.7细胞miR-17-92簇中的miR-20a等6种miRNAs的表达水平;通过双荧光素酶报告系统、Western blot,验证miR-20a对ATG16L1的靶向调控关系。结果:与正常组相比,雷帕霉素组RAW264.7细胞的miR-17、miR-18a、miR-20a表达水平显著上调(P<0.05);3-MA组RAW264.7细胞的miR-20a表达水平显著下调(P<0.05)。双荧光素酶报告系统结果显示,miR-20a可靶向ATG16L1-3'-UTR,抑制其表达;Western blot结果显示,miR-20a能明显抑制ATG16L1蛋白的表达,说明miR-20a可靶向抑制ATG16L1的表达,参与调控细胞自噬过程。结论:miR-20可靶向抑制Atg16L1的表达,参与调控RAW264.7细胞自噬过程。

血浆miR-20a和miR-20b对Ⅱ型糖尿病肾病的诊断价值

目的:探讨血浆miR-20a和miR-20b对Ⅱ型糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)的诊断价值。方法:选取2017年01月~2019年06月在我院就诊的327名Ⅱ型糖尿病(typeⅡdiabetes mellitus,T2DM)患者,根据Mogenson分期标准,327例T2DM患者中,213例被分到T2DM组,114例被分为Ⅱ型DN组。同时选取同时期在我院体检中心参加体检的健康人120例作为正常对照组(normal control,NC)。应用定量实时聚合酶链反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)法测定miR-20a和miR-20b的相对表达量。采用Pearson相关分析比较miRNA和临床指标的相关性。采用受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线分析miR-20a和miR-20b对Ⅱ型DN的诊断价值。采用Logistic回归分析影响Ⅱ型DN的因素。结果:miR-20a和miR-20b在DN患者中的表达量显著高于T2DM组和NC组患者(P均<0.05)。Pearson相关分析显示,miR-20a和miR-20b均与UAER呈正相关,与e GFR呈负相关(P均<0.05)。ROC分析显示miR-20a和miR-20b诊断Ⅱ型DN的ROC曲线下面积(areas under the ROC curve,AUC)分别为0.823和0.870。多因素Logistic回归分析显示较高水平的BMI、TG、TC、FPG、Hb A1C以及miR-20a和miR-20b高表达均是Ⅱ型DN的独立危险因素(P <0.05)。结论:血浆miR-20a和miR-20b在Ⅱ型DN中高表达,是诊断Ⅱ型DN潜在的生物标志物。

血清miR-20a在宫颈癌诊断中的应用

目的探讨治疗前血清miR-20a水平与宫颈癌患者临床病理特征的关系。方法对65例Ⅰ～Ⅳ期宫颈癌患者用荧光定量PCR进行治疗前血清中miR-20a检测,结合临床资料对其与临床病理特征的关系进行分析,绘制受试者工作曲线(ROC曲线),计算血清miR-20a的诊断界值,并与15例体检健康妇女作对照。结果 65例患者miR-20a的相对表达量中位数为5.89,较正常组织明显升高(P=0.000 9)。其中无淋巴结转移患者36例,中位数为5.54,有淋巴结转移患者29例,中位数为23.74,两者比较差异有统计学意义(P=0.020 9)。不同分期患者间miR-20a的相对表达量逐渐升高,差异有统计学意义(P=0.000)。而年龄、HPV感染类型的表达量比较差异均无统计学意义(P>0.05)。血清miR-20a在宫颈癌诊断中ROC下面积为0.818,最大约登指数0.576,相应敏感度95%,特异度50%,对应诊断界值3.01。血清miR-20a在宫颈癌确诊病例中诊断淋巴结转移的ROC下面积为0.698,最大约登指数0.439,相应敏感度70.4%,特异度73.5%,对应诊断界值2.96。结论miR-20a可能为宫颈癌恶性进展的重要调节因子,但是不能作为独立诊断指标。

miR-20a-5p在胰腺癌中的表达及作用机制研究

目的检测并分析胰腺癌组织和胰腺癌细胞株中miR-20a-5p的表达情况及对胰腺癌细胞发生、发展的影响。方法收集16对手术切除胰腺癌患者的癌组织及对应癌旁组织、5种胰腺癌细胞株及1株正常胰腺导管上皮细胞,通过实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative realtime polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测临床标本及胰腺癌细胞株中miR-20a-5p的表达水平;通过转染miR-20a-5p mimics及miR-20a-5p inhibitor分别上调及下调胰腺癌细胞(AsPC-1、BxPC-3)中miR-20a-5p的表达水平,采用CCK-8、EdU及流式凋亡实验检测过表达及敲低miR-20a-5p后对胰腺癌细胞活力、增殖及凋亡能力的影响。结果胰腺癌组织中miR-20a-5p的表达量显著高于癌旁组织(P<0.01),5种胰腺癌细胞系中miR-20a-5p的表达量较正常胰腺细胞也明显升高(P<0.05)。CCK-8及EdU实验结果显示,过表达miR-20a-5p促进胰腺癌细胞增殖能力,反之,干扰miR-20a-5p抑制胰腺癌细胞增殖。凋亡检测结果显示,过表达miR-20a-5p抑制胰腺癌细胞凋亡能力,反之,干扰miR-20a-5p促进胰腺癌细胞凋亡。结论胰腺癌组织和胰腺癌细胞系均高表达miR-20a-5p,上调miR-20a-5p能促进胰腺癌细胞增殖及抗凋亡能力。

EBUS-TBNA检查和血清miR-20a检测对肺癌的诊断价值

目的研究支气管内超声引导针吸活检术(EBUS-TBNA)检查和血清miR-20a检测对肺癌的诊断价值。方法选取2019年1月至2020年7月于该院确诊为肺癌的60患者纳入研究作为肺癌组;另外,选取同期于该院治疗的肺部良性病变且无肿瘤史的患者60例作为良性病变组。分别对两组患者进行EBUS-TBNA检查和血清miR-20a检测;比较两组患者的EBUS-TBNA检查以及miR-20a检测结果;比较不同病理分型及术前分期肺癌患者的EBUS-TBNA检查以及miR-20a检测结果;对两种方法单独及联合使用对肺癌诊断的效能进行分析。结果肺癌组EBUS-TBNA检查的阳性率显著高于良性病变组(P<0.05);不同病理分型及术前分期肺癌患者的EBUS-TBNA检查的阳性率比较差异均有统计学意义(P<0.05);肺癌组患者的血清miR-20a相对表达水平显著高于良性病变组(P<0.05);不同病理分型及术前分期肺癌患者的血清miR-20a相对表达水平比较差异有统计学意义(P<0.05)。EBUS-TBNA检查联合血清miR-20a检测对肺癌诊断的特异度高于两种方法单独使用。结论EBUS-TBNA检查和血清miR-20a检测有助于肺癌的诊断。