miR-223-3p通过靶向TGFBR3促进LncRNA ADAMTS9-AS2表达上调抑制肺癌细胞的增殖和迁移作用

目的:探讨miR-223-3p通过靶向转化生长因子-βⅢ型受体(TGFBR3)促进长链非编码RNA(LncRNA)ADAMTS9-AS2表达上调抑制肺癌细胞增殖和迁移的作用及可能机制。方法:采用RT-PCR检测肺癌H1299细胞中miR-223-3p和TGFBR3 mRNA表达水平,Western blotting检测TGFBR3的蛋白表达水平,RT-qPCR检测LncRNA ADAMTS9-AS2的表达水平,CCK-8检测细胞增殖能力,Transwell细胞迁移实验和划痕实验检测细胞迁移能力。采用脂质体转染miR-223-3p模拟物(过表达组)、抑制剂(抑制组)、对照质粒(对照组)于H1299细胞中,比较各组转染前后miR-223-3p、TGFBR3、LncRNA ADAMTS9-AS2表达水平、细胞增殖能力、细胞迁移能力。结果:与转染前比较,过表达组转染后的H1299细胞中miR-223-3p、LncRNA ADAMTS9-AS2表达水平均升高(P<0.05),TGFBR3蛋白和mRNA表达水平均降低(P<0.01和P<0.05),细胞增殖和迁移能力下降(P<0.05);抑制组转染后的细胞中miR-223-3p和LncRNA ADAMTS9-AS2表达水平均降低(P<0.05),TGFBR3蛋白和mRNA表达水平均升高(P<0.01和P<0.05),细胞增殖和迁移能力均增加(P<0.05)。转染72 h后,TGFBR3蛋白表达水平及mRNA的表达水平细胞增殖与迁移能力:抑制组>观察组>过表达组(P<0.01)。3组miR-223-3p、LncRNA ADAMTS9-AS2 mRNA表达水平逐渐降低,抑制组<对照组<过表达组(P<0.01)。结论:miR-223-3p抑制肺癌H1299细胞的增殖和迁移,靶向下调TGFBR3和上调LncRNA ADAMTS9-AS2表达可能为其作用机制。

miR-223-3p与ECT2表达在食管鳞状细胞癌组织中的相关性及与其预后的关系

目的探讨miR-223-3p与ECT2表达在食管鳞状细胞癌中的相关性及与其预后的关系。方法纳入85例食管鳞状细胞癌的石蜡包埋食管鳞状细胞癌组织、相应的正常食管黏膜组织。实时荧光定量PCR检测miR-223-3p与ECT2 mRNA水平,Pearson相关系数分析miR-223-3p与ECT2 mRNA表达水平的相关性。Kaplan-Meier生存分析和Cox比例风险模型分析miR-223-3p、ECT2表达对食管鳞状细胞癌预后的影响。结果ECT2高表达食管鳞状细胞癌患者46例,ECT2低表达食管鳞状细胞癌患者39例。ECT2 mRNA表达水平食管鳞状细胞癌组织高于正常食管黏膜组织,miR-223-3p表达水平食管鳞状细胞癌组织低于正常食管黏膜组织。ECT2表达水平与肿瘤大小、分化程度、TNM分期、血管侵犯相关。miR-223-3p表达水平与肿瘤大小、分化程度、TNM分期、血管侵犯相关。此外,食管鳞状细胞癌中miR-223-3p与ECT2 mRNA表达存在相关性(ρ=-0.5223,P<0.0001),miR-223-3p与ECT2蛋白表达存在相关性(χ^(2)=21.56,P<0.0001)。Kaplan-Meier生存分析显示:TNM分期、淋巴结转移、神经侵犯、miR-223-3p表达水平、ECT2表达水平对食管鳞状细胞癌患者的总生存期有影响。Cox比例风险模型发现TNM分期、淋巴结转移、神经侵犯、miR-223-3p表达水平、ECT2表达水平对总生存期有影响。结论miR-223-3p与ECT2的表达水平在食管鳞状细胞癌中存在相关性。TNM分期、淋巴结转移、神经侵犯、miR-223-3p表达水平、ECT2表达水平可作为ESCC的独立预后因素。

miR-223-3p在高糖诱导的H9c2细胞损伤中的靶基因预测及相关通路分析

[目的]通过生物信息学途径探究miR-223-3p在高糖环境下对H9c2细胞的影响,并结合转录组测序结果,分析其在糖尿病心肌病发病机制中的作用,旨在分子层面上发掘新的治疗靶点,探究miR-223-3p的具体作用机制。[方法]在高糖培养的H9c2细胞中分别转染miR-223-3p的抑制物及对照物,RT-qPCR检测两组细胞中miR-223-3p的表达差异;通过高通量测序对差异mRNA进行检测;用TopGO软件进行GO功能富集分析;DESeq2软件(v1.16.1)筛选差异表达基因,对检测结果的差异基因与miR-223-3p靶基因数据库共分析,预测miR-223-3p靶基因,并用RT-qPCR检测验证其表达变化。[结果]高糖处理的H9c2细胞活性明显降低,转录组测序结果提示对照组和miR-223-3p抑制剂组间的基因表达存在较为明显的差异。GO功能富集分析显示,预测靶基因集显著富集于G蛋白偶联受体活性、甘油基乙醚单加氧酶活性、细胞阴离子稳态和氯离子稳态等方面。KEGG通路富集分析显示,这些基因主要涉及TNF信号通路和IL-17信号通路。此外,它们还与1型糖尿病、细胞色素P450对外源性药物的代谢作用等相关疾病和生理过程有关。靶基因预测提示miR-223-3p可能与Cxcl10、Creb3l3、Mmp3和Bcl3等的表达变化有关。[结论]在高糖诱导的H9c2细胞损伤中miR-223-3p及其下游靶基因的预测可能为糖尿病心肌病的治疗提供新的靶点,对于揭示糖尿病心肌病的发病机制以及开发新的治疗策略具有重要意义。

未足月胎膜早破孕妇血清中miR-223-3p的表达水平及临床意义

目的 探讨miRNA-223-3p(miR-223-3p)在未足月胎膜早破(PPROM)孕妇血清中的表达水平及临床意义。方法 选取2023年4~9月徐州医科大学附属徐州妇幼保健院行剖宫产术分娩的孕妇91例,其中PPROM孕妇60例及同期足月正常孕妇31例(正常组)作为观察对象。根据胎膜病理结果将观察组分为:未足月胎膜早破(PPROM)未合并HCA组(PPROM组,n=37);PPROM合并HCA组(PPROM+HCA组,n=23)。收集入院治疗前孕妇血清样本,实时荧光定量(qRT)-PCR法检测血清中miR-223-3p的表达水平,酶联免疫吸附(ELISA)法检测血清IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α等炎症因子水平。结果 PPROM+HCA组血清中miR-223-3p的表达水平较PPROM组、正常组显著增加(P <0.05)。PPROM+HCA组血清中IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α的表达水平较PPROM组、正常组显著增加(P <0.05)。PPROM+HCA组孕妇血清中miR-223-3p的表达水平与IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α表达水平呈正相关(r=0.553、0.505、0438、0.656,P <0.05)。结论 miR-223-3p在PPROM+HCA孕妇血清中表达上调,与PPROM的炎症严重程度有关。

miR-223-3p调节TLR4/MyD88/NF-κB通路影响脂多糖诱导的肺癌A549细胞炎症反应

目的:探讨miR-223-3p对脂多糖诱导的肺癌A549细胞炎症反应的影响。方法:实验分成2部分,每个部分分为2组,共4组:miRNA阴性对照(mimic NC)+LPS组,miR-223-3p模拟物(miR-223-3p mimic)+LPS组;miR-223-3p mimic+BAY11-7082+LPS组,miR-223-3p mimic+等量溶剂(vehicle)+LPS组。随后利用Western blot实验检测每组TLR4/MyD88/NF-κB表达水平,酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)检测促炎细胞因子水平,CCK-8法检测细胞活力。结果:与mimic NC+LPS组相比,miR-223-3p mimic+LPS组的TLR4/MyD88/NF-κB蛋白表达水平低,促炎细胞因子分泌少以及细胞活力高。与miR-223-3p mimic+BAY11-7082+LPS组相比,miR-223-3p mimic+vehicle+LPS组的TLR4/MyD88/NF-κB蛋白表达水平低,促炎细胞因子分泌少以及细胞活力高。结论:miR-223-3p可以通过抑制TLR4/My D88/NF-κB促进A549细胞增殖、抑制促炎细胞因子的分泌,从而抑制肺癌中炎症的发生,本研究为今后临床上肺癌的治疗及药物开发提供了新策略。

酸枣仁皂苷A通过miR-223-3p/SGK1/NLRP3轴在脓毒症小鼠肺上皮细胞损伤中的保护作用

目的 探讨酸枣仁皂苷A通过miR-223-3p/血清和糖皮质激素诱导激酶1(SGK1)/NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)轴在脓毒症小鼠肺上皮细胞损伤中的保护作用及潜在机制。方法 通过盲肠结扎和穿刺(CLP)诱导脓毒症动物模型。通过酸枣仁皂苷A治疗实验动物,苏木精和伊红染色分析组织病理学变化。相应试剂盒分析肾损伤指标(血清BUN、SCr和NGAL水平)和血清炎性因子(TNF-α、IL-1β、IL-6)的水平。生信分析miR-223-3p在脓毒症患者中的表达及其与炎症反应因子的相关性,预测miR-223-3p与SGK1的结合位点。双荧光素酶实验验证miR-223-3p与SGK1的结合关系。构建脂多糖(LPS)诱导的HK2细胞的体外模型。荧光实时定量PCR(qPCR)检测miR-223-3p在患者血清或LPS处理的HK-2细胞中的表达。脱氧核苷酸末端转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)检测细胞凋亡,蛋白质免疫印迹检测中BCL2相关的X(BAX)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)和裂解的半胱氨酸蛋白酶(cleaved caspase-3)的表达,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测患者血清或细胞上清液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)的水平。qPCR和蛋白质免疫印迹法检测不同处理组HK-2细胞中SGK1的表达,蛋白质免疫印迹检测不同处理组HK-2细胞中NLRP3的表达。结果 酸枣仁皂苷A治疗可以降低脓毒症小鼠急性肾小管坏死评分,减轻肾损伤。血清血尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)和中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)水平降低,血清TNF-α、IL-1β、IL-6水平亦下降。酸枣仁皂苷A治疗可以降低脓毒症小鼠肾脏组织中miR-223-3p的表达水平。生信分析和临床样本分析显示,miR-223-3p在脓毒症患者中高表达。细胞实验结果显示,miR-223-3p在LPS处理的HK-2细胞中呈高表达。miR-223-3p促进LPS诱导的HK-2细胞凋亡和炎症反应,这种促进作用是由miR-223-3p通过负调控SGK1/NLRP3介导的。结论 酸枣仁皂苷A可能通过miR-223-3p/SGK1/NLRP3轴在脓毒症小鼠肺上皮细胞损伤中发挥保护作用,可能为脓毒症治疗提供新的治疗靶点。

miR-223-3p和FOXO3在结直肠癌中的研究进展

近年来,结直肠癌的发病率和死亡率一直居高不下,且出现年轻化趋势。结直肠癌具有异质性和隐匿性,且其在放化疗过程中可能出现药物耐受,导致结直肠癌的诊断和治疗结果一直不令人满意,患者预后较差。研究发现微RNA(microRNA,miRNA)在肿瘤的发生发展中发挥调控作用,miRNA可作为结直肠癌诊疗的生物靶点。本文就miR-223-3p和叉头框O3在结直肠癌中的研究进展作一综述。

环状RNA SAMD8调控miR-223-3p/RHOB表达抑制胰腺导管腺癌进程的分子机制

目的探讨环状RNA SAMD8(circ-SAMD8)在胰腺导管腺癌(PDAC)进展中的潜在机制。方法基于Microarray数据(GSE79634)分析PDAC组织中circRNAs的表达谱。通过实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)验证circ-SAMD8(hsa_circ_0006148)在PDAC组织和细胞(CFPAC-1和PANC-1)中的表达。采用生物信息学分析预测circ-SAMD8的靶微小RNA(miRNA)及其下游mRNA,并采用双荧光素酶报告基因实验进行鉴定。采用MTT法和集落形成法检测PDAC细胞的增殖能力。采用免疫印迹法(Western blot)检测抗凋亡蛋白Bcl-2和促凋亡蛋白Bax的表达水平。采用流式细胞术检测凋亡细胞百分比。结果circ-SAMD8在PDAC组织和细胞中的表达水平低于癌旁组织和正常细胞,差异有统计学意义(P<0.05)。过表达circ-SAMD8能有效促进PDAC细胞凋亡,抑制PDAC细胞增殖。双荧光素酶报告基因实验显示,miR-223-3p是circ-SAMD8的一个潜在相互作用分子,miR-223-3p的下游mRNA靶点是RHOB。miR-223-3p在PDAC组织和细胞中异常过表达,并伴有RHOB低表达。在转染miR-223-3p模拟物或sh-circ-SAMD8的PDAC细胞中,RHOB表达显著降低,增殖能力增强,凋亡率降低。结论circ-SAMD8通过海绵化miR-223-3p,调控下游RHOB的表达,有效抑制PDAC的发生发展。

COPD患者肺泡灌洗液来源外泌体通过miR-223-3p/FOXO3通路抑制成骨细胞成骨分化的作用

目的探索慢性阻塞性肺病患者肺泡灌洗液来源的外泌体(COPD-bronchoalveolar lavage fluid-exosome,COPD-Exo)调控成骨细胞分化的作用及机制。方法选取2023年6月于陆军军医大学第一附属医院就诊的6例COPD患者和6例非COPD患者(对照),在临床肺泡灌洗过程中收集肺泡灌洗液,提取COPD-Exo、非COPD患者肺泡灌洗液来源的外泌体(ctrl-bronchoalveolar lavage fluid-exosome,Ctrl-Exo),使用电镜和Western blot进行鉴定。使用茜素红染色、qRT-PCR检测COPD-Exo干预成骨细胞后成骨分化水平的改变。对GEO数据库数据集(GSE218571)中COPD-Exo的微小RNA(microRNA,miRNA)表达谱进行生物信息学分析,获得COPD-Exo中差异表达的miRNA,使用Antagomir阻碍MircoRNA功能,明确具有成骨分化调控功能的miRNA,使用Targetscan软件预测miRNA的下游靶基因并进行验证。结果COPD患者和非COPD患者的肺泡灌洗液内均可提取出外泌体。茜素红染色及PCR结果表明,COPD-Exo可以抑制人hFOB 1.19成骨细胞的成骨分化(P<0.05)。生物信息学分析显示,COPD-Exo中miR-223-3p表达水平显著上调。使用Antagomir阻碍miR-223-3p可减轻COPD-Exo对于人hFOB 1.19成骨细胞的成骨分化抑制(P<0.05)。Targetscan预测和Western blot结果显示miR-223-3p可能靶向抑制成骨分化相关因子FOXO3的表达(P<0.05)。结论COPD-Exo可能通过miR-223-3p抑制人hFOB 1.19成骨细胞的成骨分化,该过程与miR-223-3p抑制FOXO3表达有关。

创伤性骨折患者血清miR-92a-3p和miR-223-3p水平与临床预后的关系

目的探讨创伤性骨折患者血清miR-92a-3p和miR-223-3p水平与患者临床预后的关系。方法选择2021年8月至2022年8月收治的112例创伤性骨折患者作为创伤性骨折组,选取同期体检健康志愿者112例作为对照组。根据早期疾病预警评分(NEWS)将创伤性骨折患者分为轻中度组(n=73)和重度组(n=39);根据住院后转归情况,分为急诊手术组(n=48)、入住ICU组(n=39)、急诊死亡组(n=25)。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测血清中miR-92a-3p和miR-223-3p相对表达水平;Spearman法分析血清miR-92a-3p和miR-223-3p表达水平与NEWS评分的相关性;采用多因素Logistic回归分析创伤性骨折患者预后的影响因素;受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-92a-3p和miR-223-3p水平对创伤性骨折患者预后的预测价值。结果与对照组比较,创伤性骨折组血清miR-92a-3p表达水平降低,血清miR-223-3p表达水平升高(P<0.05)。创伤性骨折患者轻中度组血清miR-92a-3p表达水平较重度组显著升高,血清miR-223-3p表达水平较重度组明显降低(P<0.05)。血清miR-92a-3p表达水平与NEWS评分呈负相关(r=-0.692,P<0.05),血清miR-223-3p表达水平与NEWS评分呈正相关(r=0.603,P<0.05)。急诊手术组、入住ICU组、急诊死亡组创伤性骨折患者血清miR-92a-3p表达水平依次逐渐下降(P<0.05);miR-223-3p表达水平依次明显升高(P<0.05)。多因素Logistic回归分析显示,miR-223-3p是影响创伤性骨折患者预后的危险因素(P<0.05),miR-92a-3p是影响创伤性骨折患者预后的保护因素(P<0.05)。血清miR-92a-3p和miR-223-3p联合预测创伤性骨折患者预后的ROC曲线下面积(AUC)为0.824,均优于其各自单独预测(Z_(二者联合-miR-92a-3P)=2.519,P=0.012;Z_(二者联合-miR-223-3P)=2.321,P=0.020)。结论创伤性骨折患者血清miR-92a-3p水平降低,血清miR-223-3p水平升高,与创伤性骨折患者预后密切相关,二者联合可以更好评估创伤性骨折患者预后情况。

miR-223-3p靶向调控MMP16对成纤维细胞功能的影响

目的 探索新生SD大鼠心脏损伤后miR-223-3p致心肌纤维化的调控机制。方法 取新生1~2 d SD大鼠分为模型组和假手术组。模型组大鼠行手术暴露心脏后,破坏5%的心尖组织,达到心脏损伤造模效果;假手术组大鼠行手术暴露心脏后,不破坏心脏组织,达到假手术效果。术后7 d采用miRNAs高通量芯片检测两组miR-223-3p的表达差异。提取新生1~2 d SD大鼠心肌,分离并培养原代心肌细胞和心脏成纤维细胞,采用RT-qPCR检测miR-223-3p的表达差异。心脏成纤维细胞培养后分为:miR-223-3p mimics组和mimics NC组、miR-223-3p inhibitor组和inhibitor NC组。通过生物学网站预测miR-223-3p的靶基因MMP16和MEF2C,采用RT-qPCR检测靶基因MMP16、MEF2C、Ⅰ和Ⅲ型胶原基因的表达,Western blot检测MMP16蛋白、Ⅰ和Ⅲ型胶原蛋白的表达,免疫荧光检测Vimentin、α-平滑肌收缩蛋白(α-smooth muscle actin, α-SMA)的表达。为了验证miR-223-3p与MMP16靶向调控关系,培养293T细胞后分为3组:psiCheck2+rno-miR-223-3p mimics组、psiCheck2-MMP16-Wt+rnomiR-223-3p mimics组、psiCheck2-MMP16-Mut+rno-miR-233-3p mimics组,采用双荧光素酶试剂检测MMP16活性的表达。结果与假手术组比较,模型组miR-223-3p表达增加(P<0.05)。与原代心肌细胞比较,心脏成纤维细胞中miR-223-3p表达增加(P<0.001)。与mimics NC组比较,miR-223-3p mimics组MMP16基因和蛋白表达降低(P<0.001),MEF2C基因表达无统计学差异(P>0.05),Ⅰ型胶原基因和蛋白表达增加(P<0.01),Ⅲ型胶原基因和蛋白表达降低(P<0.05),Vimentin蛋白表达增加,α-SMA蛋白表达无统计学差异。与inhibitor NC组比较,miR-223-3p inhibitor组MMP16基因和蛋白表达增加(P<0.05),MEF2C基因表达无统计学差异(P>0.05),Ⅰ型胶原基因和蛋白表达降低(P<0.05),Ⅲ型胶原基因表达增加(P<0.001),Ⅲ型胶原蛋白表达无统计学差异(P>0.05),Vimentin蛋白表达降低,α-SMA蛋白表达无统计学差异。与psiCheck2-MMP16-Wt+rno-miR-223-3p mimics组比较,psiCheck2+rno-miR-223-3p mimics组和psiCheck2-MMP16-Mut+rno-miR-233-3p mimics组MMP16的活性表达均增加(P<0.01)。结论 miR-223-3p通过调控靶基因MMP16表达促进成纤维细胞增殖,导致心肌纤维化发生。miR-223-3p可能是大鼠心脏损伤后心肌纤维化发生的重要调控基因。

高分辨率磁共振成像联合血清miR-140-3p、miR-223-3p在颈动脉粥样硬化斑块易损性评价中的价值研究

目的探究高分辨率磁共振成像(高分辨率MR)联合血清微小核糖核酸-140-3p(miR-140-3p)、微小核糖核酸-223-3p(miR-223-3p)在颈动脉粥样硬化斑块易损性评价中的价值。方法选取2022年1月—2023年12月连云港市第一人民医院神经内科收治的颈动脉粥样硬化患者86例为研究对象,根据病理学确诊斑块状况将患者分为斑块易损组42例和非斑块易损组44例。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测血清miR-140-3p、miR-223-3p表达;Kappa检验分析高分辨率MR检测与金标准诊断颈动脉粥样硬化斑块易损的一致性;多因素Logistic回归分析颈动脉粥样硬化患者斑块易损的影响因素;受试者工作特征(ROC)曲线分析高分辨率MR、miR-140-3p、miR-223-3p对颈动脉粥样硬化患者斑块易损性的诊断价值。结果斑块易损组血清miR-140-3p表达低于非斑块易损组,血清miR-223-3p表达高于非斑块易损组(t/P=6.033/<0.001,6.367/<0.001);2组动脉重构类型及斑块分布位置比较,差异无统计学意义(P>0.05);Kappa检验显示,高分辨率MR检测与金标准诊断颈动脉粥样硬化斑块易损的一致性尚可(Kappa=0.603,P<0.001);多因素Logistic回归分析显示,C反应蛋白(CRP)、miR-223-3p升高为颈动脉粥样硬化患者斑块易损的独立危险因素[OR(95%CI)=1.685(1.051~2.702)、3.054(2.008~4.645)],miR-140-3p升高为独立保护因素[OR(95%CI)=0.752(0.616~0.918)];高分辨率MR、miR-140-3p、miR-223-3p及三者联合诊断颈动脉粥样硬化患者斑块易损性的曲线下面积(AUC)分别为0.800、0.860、0.884、0.981,三者联合的AUC大于高分辨率MR、miR-140-3p、miR-223-3p单独诊断的AUC(Z/P=4.537/<0.001、2.980/0.003、2.869/0.004)。结论高分辨率MR联合血清miR-140-3p、miR-223-3p检测对颈动脉粥样硬化斑块易损性有较高的诊断价值。

miR-223-3p和MMP-9联合检测在川崎病冠状动脉病变早期诊断中的临床价值

目的观察川崎病(KD)患儿血清miR-223-3p和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达水平,探讨其与小儿KD冠状动脉损伤的关系。方法选择山西省儿童医院2018年8月—2019年8月收治的80例KD患儿,将其分为心血管受累组(20例)、心血管未受累组(60例),另外随机选取30名健康儿童作为对照组。分别检测并分析3组miR-223-3p、MMP-9、C-反应蛋白(CRP)、红细胞沉降率(ESR)和白细胞计数(WBC)水平。结果心血管受累组和心血管未受累组急性期miR-223-3p、MMP-9、CRP、ESR、WBC水平均高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);心血管受累组急性期miR-223-3p血浆水平低于心血管未受累组,差异有统计学意义(P<0.05),心血管受累组急性期MMP-9、CRP、ESR、WBC水平均高于心血管未受累组,差异均有统计学意义(P<0.05);经丙种球蛋白(IVIG)治疗后心血管受累组血浆miR-223-3p和MMP-9水平明显下降,差异均有统计学意义(P<0.05),心血管未受累组血浆MMP-9水平明显降低,差异有统计学意义(P<0.05),但经IVIG治疗前后心血管未受累组血浆miR-223-3p水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论miR-223-3p、MMP-9在KD患儿急性期血浆水平明显升高,miR-223-3P联合MMP-9检测有望作为识别KD患儿冠状动脉早期损伤的指标。

桑白皮黄酮提取物通过调控miR-223-3p表达对高糖诱导的小鼠足细胞损伤的影响

目的 探讨桑白皮黄酮提取物对高糖诱导的小鼠足细胞损伤的影响及作用机制。方法 体外培养小鼠足细胞,分为对照组、高糖组、高糖+桑白皮黄酮提取物组、高糖+miR-223-3p组、高糖+miR-NC组、高糖+桑白皮黄酮提取物+anti-miR-223-3p组和高糖+桑白皮黄酮提取物+anti-miR-NC组,流式细胞术检测各组细胞凋亡率,二氯荧光素双醋酸盐(DCFH-DA)荧光定量法检测细胞内活性氧(ROS)水平,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞中丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)水平,Western印迹检测各组细胞中活化的半胱天冬酶(cleaved caspase)-3、足细胞损伤标志物去氧肾上腺素(Nephrin)、结蛋白(Desmin)和波形蛋白(Vimentin)的表达水平,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测各组细胞中miR-223-3p表达水平。结果 与对照组比较,高糖组足细胞存活率、细胞中ROS和MDA水平及cleaved caspase-3、Desmin和Vimentin蛋白水平显著升高(P<0.05),SOD活力、Nephrin蛋白和miR-223-3p水平显著降低(P<0.05)。与高糖组比较,桑白皮黄酮提取物组足细胞存活率、细胞中ROS和MDA水平及cleaved caspase-3、Desmin和Vimentin蛋白水平显著降低(P<0.05),SOD活力、Nephrin蛋白和miR-223-3p水平显著升高(P<0.05)。与miR-NC组比较,miR-223-3p组足细胞存活率、细胞中ROS和MDA水平及cleaved caspase-3、Desmin和Vimentin蛋白水平显著降低(P<0.05),SOD活力和Nephrin蛋白水平显著升高(P<0.05)。与高糖+桑白皮黄酮提取物+anti-miR-NC组比较,高糖+桑白皮黄酮提取物+anti-miR-223-3p组足细胞存活率、细胞中ROS和MDA水平及cleaved caspase-3、Desmin和Vimentin蛋白水平显著升高(P<0.05),SOD活力和Nephrin蛋白水平显著降低(P<0.05)。结论 桑白皮黄酮提取物可降低高糖引起的小鼠足细胞损伤,其作用机制可能与上调miR-223-3p表达有关。

益气活血中药对急性心肌梗死病人血浆miR-223-3p、miR-132-5p表达的影响

目的观察益气活血中药对急性心肌梗死(AMI)病人血浆miR-223-3p、miR-132-5p表达的影响。方法将AMI病人30例随机分为治疗组和对照组各15例,治疗组予常规西药联合益气活血中药治疗,对照组予常规西药治疗,疗程2周。健康志愿者10名为健康组。健康志愿者于入组时,AMI病人于入院后1 h、第3天、第7天、第14天分别抽取肘静脉血,实时定量聚合酶链反应(real-time PCR)检测miR-2 2 3-3 p、miR-1 3 2-5 p的表达情况。结果AMI病人入院早期miR-2 2 3-3 p出现高表达、miR-132-5p出现低表达,与健康志愿者比较差异有统计学意义(P<0.01);与miR-132-5p及肌钙蛋白I(c Tn I)比较,miR-223-3p显示出高表达、高敏感性的特点。与对照组比较,治疗组治疗后病人血浆miR-223-3p表达降低、miR-132-5p表达上调更显著,差异有统计学意义(P<0.01);c Tn I于24 h上升和第3天下降更为明显(P<0.05)。结论益气活血中药联合常规西药治疗AMI较单纯常规西药治疗临床疗效较好,可能与调节miR-223-3p、miR-132-5p的表达有关,miR-223-3p有望成为新的AMI早期诊断标志物。

miR-223-3p在老年结肠癌组织和癌旁组织中的表达水平及其生物学功能作用机制

目的探讨miR-223-3p在老年结肠癌组织和癌旁组织中的表达水平及其生物学功能作用机制。方法选取108例初诊为老年结肠癌患者,经手术切除的结肠癌组织标本作为研究标本,癌旁组织标本(距结肠癌组织边缘至少5 cm)作为对照标本。购置人结肠癌细胞(SW480)和人结肠癌细胞(SW620)。通过实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)测定结肠癌组织、癌旁组织、SW480及SW620细胞中miR-223-3p表达水平,通过敲低或增加SW480及SW620细胞中miR-223-3p表达观察miR-223-3p对细胞增殖、运动、侵袭、凋亡及凋亡蛋白的影响。结果结肠癌组织中miR-223-3p表达水平显著高于癌旁组织(P<0.001);SW620细胞中miR-223-3p表达水平显著高于SW480细胞(P<0.05);SW480细胞中,转染组miR-223-3p表达水平显著高于未转染组(P<0.001);SW620细胞中,转染组miR-223-3p表达水平显著低于未转染组(P<0.001);转染24、48、72 h后SW480细胞转染组细胞计数显著多于未转染组(P<0.001);转染48 h和72 h后SW620细胞转染组细胞计数显著少于未转染组(P<0.001);转染24 h后SW480细胞转染组迁移率显著高于未转染组,SW620细胞转染组显著低于未转染组(P<0.001);转染48 h后SW480细胞转染组穿过基底膜细胞数量显著多于未转染组,SW620细胞转染组显著少于未转染组(P<0.001);转染48 h后SW480细胞转染组细胞凋亡率显著低于未转染组,SW620细胞转染组显著高于未转染组(P<0.001);SW480细胞转染组B细胞瘤淋巴(Bcl)-2蛋白表达水平显著高于未转染组,SW620细胞转染组显著低于未转染组,Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达水平显著高于未转染组(P<0.001)。结论miR-223-3p参与老年结肠癌发生发展,可通过促进Bcl-2蛋白表达抑制细胞凋亡,促进细胞增殖、迁移及侵袭能力发挥原癌基因作用。

miR-637、miR-223-3p、PARP14在甲状腺癌中的表达及与临床特征的相关性

目的 探究miR-637、miR-223-3p、多聚(腺苷二磷酸核糖)聚合酶14(PARP14)在甲状腺癌中的表达及与临床特征相关性。方法 选取2018年5月至2020年5月衡水市人民医院73例甲状腺癌患者。采用PCR法检测患者癌组织及癌旁组织miR-637、miR-223-3p、PARP14表达;所有患者随访3年,根据生存情况将其分为死亡组及生存组,分析患者癌组织miR-637、miR-223-3p、PARP14表达与预后的关系及对预后的预测价值。结果 甲状腺癌组织miR-637 mRNA表达量低于癌旁组织,miR-223-3p、PARP14 mRNA表达量高于癌旁组织(P<0.05)。miR-637 mRNA在临床分期Ⅲ~Ⅳ期、包膜浸润及淋巴结转移患者中均为低表达(P<0.05),PARP14 mRNA在临床分期Ⅲ~Ⅳ期、肿瘤直径≥2 cm、包膜浸润及淋巴结转移患者中均为高表达(P<0.05),miR-223-3p mRNA在肿瘤直径≥2 cm、包膜浸润及淋巴结转移患者中均为高表达(P<0.05)。死亡组癌组织miR-637mRNA表达量低于生存组,miR-223-3p、PARP14表达mRNA表达量高于生存组(P<0.05)。多因素Cox回归显示,癌组织miR-637 mRNA表达量升高为影响甲状腺癌患者预后的危险因素,miR-223-3p、PARP14 mRNA表达量升高为保护因素(P<0.05)。癌组织miR-637、miR-223-3p、PARP14表达联合检测预测甲状腺癌患者预后的AUC值大于各指标单独检测(P<0.05)。癌组织miR-637低表达患者的累积生存率低于高表达患者(P<0.05);癌组织miR-223-3p、PARP14高表达患者的累积生存率低于低表达患者(P<0.05)。结论 甲状腺患者癌组织miR-637、miR-223-3p、PARP14 mRNA呈异常表达现象,上述指标mRNA表达量与临床分期、肿瘤直径、淋巴结转移等临床特征及预后有关,且miR-637、miR-223-3p、PARP14联合可用于评估患者预后。

解毒复正汤通过干扰miR-223-3p并靶向调控TGFBR3影响肺癌侵袭转移的实验研究

目的探讨解毒复正汤(JieduFuzhengdecoction,JDFZ)通过影响微小核糖核酸-223-3p(Mircro ribonucleic acid-223-3p,miR-223-3p)靶向调控转化生长因子β受体3(Transforming growth factorβReceptor3,TGFBR3)的表达及其对肺癌细胞迁移的影响。方法利用RT-qPCR技术检测肺腺癌患者癌组织及癌旁组织、肺腺癌患者及健康人外周血清中miR-223-3p表达水平的差异;并检测不同种类的NSCLC细胞系肺癌细胞(95D、LTEP-α-2、A549及NCI-H460)以及人肺上皮细胞BEAS-2B中miR-223-3p的本底表达量,从组织、血浆及细胞3个维度验证miR-223-3p的差异性。利用生物信息学网站重叠分析,初步预测到miR-223-3p与TGFBR33’UTR具有潜在的结合位点序列。接着运用双荧光素酶报告基因实验验证miR-223-3p与TGFBR3的靶向关系。体外培养肺癌A549细胞,采用脂质体法分别将miR-223-3p-过表达序列(miR-223-3p-mimics)及携带TGFBR3全基因的重组载体(Over-expression-TGFBR3,OE-TGFBR3)分别转染至肺癌细胞,以转入无关序列的模拟剂(Negative control-mimics,NC)作为对照组,收集各组稳转细胞,Transwell小室检测转染处理后及JDFZ作用后的细胞迁移能力;收集各组细胞蛋白,蛋白免疫印迹法(Westernblot)检测细胞中EMT相关蛋白的表达。结果肺癌组织中miR-223-3p的表达量显著低于癌旁组织;肺癌患者血浆miR-223-3p表达水平明显低于健康正常人。不同种类的NSCLC细胞系肺癌细胞(95D、LTEP-α-2、A549及NCI-H460)中的miR-223-3p表达量亦低于正常人肺上皮细胞BEAS-2B。利用生物信息学网站及荧光素酶报告基因实验证实了miR-223-3p与TGFBR3的靶向调控关系。与miR-223-3p NC组对比,miR-223-3p mimics组和miR-223-3p mimics+OE-TGFBR3组的细胞迁移能力均下降(P<0.05),上调TGFBR3和加入解毒复正汤均能有效增强miR-223-3p对A549细胞迁移的负向调节作用;Westenblot结果发现,与miR-223-3p NC组对比,miR-223-3p mimics组和miR-223-3p mimics+OE-TGFBR3组E-Cadherin的表达水平上调,NCadherin及Vimentin的表达水平下升(P<0.05),两组均在不同程度上抑制EMT的发生;上调TGFBR3和加入解毒复正汤作用能有效增加miR-223-3p对细胞迁移相关蛋白的负向调节作用(P<0.05)。结论解毒复正汤对肺癌A549细胞的侵袭迁移有抑制作用,其机制可能是通过调节miR-223-3p并靶向调控TGFBR3及其下游EMT相关指标的表达来实现的。

STAT1诱导的LINC00987调节miR-223-3p/FZD4促进人胶质母细胞瘤相关巨噬细胞向M2型极化

目的本研究旨在探讨STAT1激活的LINC00987对人胶质母细胞瘤(GBM)相关巨噬细胞向M2型极化的影响。方法通过GEO数据库分析筛选出GBM中表达失调的lncRNAs。RT-qPCR检测LINC00987、miR-223-3p、卷曲蛋白4基因(FZD4)的表达。将人单核细胞白血病细胞系THP-1分别诱导成M0、M1、M2型巨噬细胞,并将GBM细胞与THP-1细胞共培养,流式细胞测量术检测CD14^(+)/CD206^(+)巨噬细胞的占比,ELISA检测M2型巨噬细胞相关因子(VEGF、TGF-β1)的表达。结果相对于癌旁组织和人正常神经胶质细胞系HEB,GBM组织和细胞中的LINC00987、FZD4表达上调而miR-223-3p表达下调(P<0.05)。在GBM细胞中,STAT1能够激活LINC00987并影响miR-223-3p/FZD4轴。过表达LINC00987能够促进GBM相关巨噬细胞向M2型极化(P<0.05)。敲减LINC00987则能够抑制GBM相关巨噬细胞向M2型极化,但该作用能被miR-223-3p抑制剂部分挽救(P<0.05)。敲减FZD4能够抑制GBM相关巨噬细胞向M2型极化,但该作用能被过表达LINC00987部分挽救(P<0.05)。结论STAT1激活的LINC00987调节miR-223-3p/FZD4轴诱导GBM相关巨噬细胞向M2型极化。

转甲状腺素蛋白介导STAT4/miR-223-3p/FBXW7通路对高糖诱导的人视网膜内皮细胞新生血管生成的影响

目的分析转甲状腺素蛋白(TTR)介导信号转导和转录激活因子4(STAT4)/miR-223-3p/F-box WD重复蛋白7(FBXW7)通路对高糖(HG)诱导的人视网膜内皮细胞(hRECs)新生血管生成的影响。方法将hRECs分为对照组、HG组、HG+TTR组、HG+NC mimic组、HG+miR-223-3p mimic组和HG+TTR+miR-223-3p mimic组。生物信息学分析STAT4与miR-223-3p的靶向关系,并采用双荧光素酶报告实验进行验证。ELISA检测细胞中TTR水平,RT-PCR检测miR-223-3p水平,CCK-8法检测细胞增殖,血管生成实验分析血管生成率,Western blot检测血管内皮生长因子(VEGF)、TTR、STAT4和FBXW7蛋白表达。结果与对照组相比,HG组hRECs中TTR水平升高(P<0.05)。培养24 h时,与HG组相比,HG+TTR组细胞活力明显下降(P<0.05)。与HG组血管生成率(38.12±4.91)%相比,HG+TTR组hRECs血管生成率[(19.46±2.12)%]明显较小(P<0.05)。与HG+NC mimic组相比,HG+miR-223-3p mimic组hRECs中miR-223-3p表达上调,细胞活力增加(均为P<0.05);与HG+miR-223-3p mimic组相比,HG+TTR+miR-223-3p mimic组hRECs中miR-223-3p表达下调,细胞活力下降(均为P<0.05)。与HG+NC mimic组血管生成率(40.11±4.10)%相比,HG+miR-223-3p mimic组hRECs血管生成率[(61.52±6.25)%]增多(P<0.05);与HG+miR-223-3p mimic组相比,HG+TTR+miR-223-3p mimic组hRECs血管生成率[(42.24±4.33)%]减少(P<0.05),且与HG+NC mimic组比较差异无统计学意义(P>0.05)。生物信息学分析结果显示,STAT4与miR-223-3p启动子区域相互作用。与HG组相比,HG+TTR组hRECs中miR-223-3p、STAT4蛋白表达均降低,FBXW7和VEGF蛋白表达均升高(均为P<0.05);与HG+TTR组相比,HG+miR-223-3p mimic组hRECs中miR-223-3p、STAT4蛋白表达均升高,FBXW7和VEGF蛋白表达均降低(均为P<0.05);与HG+miR-223-3p mimic组相比,HG+TTR+miR-223-3p mimic组hRECs中miR-223-3p、STAT4蛋白表达均降低,FBXW7和VEGF蛋白表达均升高(均为P<0.05);与HG+TTR组相比,HG+TTR+miR-223-3p mimic组hRECs中miR-223-3p、VEGF、STAT4和FBXW7蛋白表达差异均无统计学意义(均为P>0.05)。结论TTR可能通过调节STAT4/miR-223-3p/FBXW7通路抑制HG诱导的hRECs的血管生成。